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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510880361.4 (22)申请日 2015.12.02 A01H 1/02(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (71)申请人 中国农业科学院棉花研究所 地址 455004 河南省安阳市开发区黄河大道 38 号 (72)发明人 陈伟 王红梅 赵云雷 龚海燕 桑晓慧 赵佩 崔艳利 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 王文君 (54) 发明名称 一种获得高抗虫性棉花植株的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种获得高抗虫性棉花植株的 方法， 包括在棉花出苗初期， 在棉花的第 。
2、1 片真叶 生长平展后， 用浓度为 2500-3000ppm 的硫酸卡那 霉素溶液喷洒叶面， 6-8 天后选取单株子叶和真 叶的叶片上没有出现黄色斑点的植株为第一处理 植株 ； 待第一处理植株生长至有 6 片真叶， 且倒 1 片真叶平展后， 取倒 3 片和倒 4 片叶接种棉铃虫， 每片叶片上接种棉铃虫1龄幼虫3头， 接种4-6天 后观察叶片蚕食情况， 根据叶片蚕食度和幼虫死 亡头数判断筛选出高抗、 中抗和抗类型棉株。 该方 法能有效筛选抗虫性强的棉花材料， 提高棉花的 抗虫性， 提升抗虫棉的抗虫有效性能， 避免低效抗 虫对棉铃虫的诱导耐受， 减少和杜绝棉铃虫对抗 虫棉的耐受进化进程， 减少相关。
3、农药的使用量， 减 少污染。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 CN 105494079 A 2016.04.20 CN 105494079 A 1.一种获得高抗虫性棉花植株的方法， 其特征在于， 该方法包括以下步骤： (1)在棉花出苗初期， 在棉花的第1片真叶生长平展后， 用浓度为2500-3000ppm的硫酸 卡那霉素溶液喷洒叶面， 6-8天后选取单株子叶和真叶的叶片上没有出现黄色斑点的植株 为第一处理植株； (2)待第一处理植株生长至有6片真叶， 且倒1片真叶平展后， 取倒3片和倒4片叶接种棉 铃虫， 每片叶片。
4、上接种棉铃虫1龄幼虫3头， 接种4-6天后观察叶片蚕食情况， 根据叶片蚕食 度和幼虫死亡头数判断筛选出高抗、 中抗和抗类型棉株。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 相对于每亩棉花， 硫酸卡那霉 素溶液的用量为8-9升。 3.根据权利要求1或2所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 将所述倒3片和倒4片叶放 置于高3-5cm、 直径4-6cm的圆形容器中接种棉铃虫。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)中判断筛选高抗、 中抗和抗类型棉 株的标准如表1所示： 表1 5.权利要求1-4中任意一项所述的方法在棉花育种中的应用。 6.权利要求1-4中任。
5、意一项所述的方法在棉铃虫防治中的应用。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105494079 A 2 一种获得高抗虫性棉花植株的方法 技术领域 0001 本发明属于农业生物技术领域， 具体涉及一种获得高抗虫性棉花植株的方法。 背景技术 0002 众所周知， 抗虫棉的应用推广极大地推动了我国棉花产业的发展， 对我国棉花生 产以及其相关的产业链的发展和稳定起着重要的作用。 但是由于棉花的常异花授粉的特性 以及生产管理等综合因素影响， 常常导致其抗虫性随着种植的周期加长而减弱， 造成不必 要的损失。 0003 针对以上问题， 现有技术中也采用了许多的方法， 如采用喷洒， 涂抹等手段使用卡 那。
6、霉素鉴定筛选抗虫棉， 剔除不抗卡那的棉株， 保留抗卡那植株。 但其在使用的过程中由于 浓度标准不同， 喷洒时机的差异， 以及棉花材料本身的耐受程度， 甚至人为的喷施习惯等原 因， 会得到抗性不纯， 也就是有假阳性的植株， 从而导致结果的准确性有所偏差， 影响棉花 材料抗虫性的稳定。 目前还有通过生物接虫来鉴定筛选抗虫棉， 如转Bt基因棉花抗棉铃虫 性评价方法(CN201210339761)就是通过接虫由幼虫的死亡程度来判定是否是抗虫棉。 以上 各种方法仅仅是对抗虫性的有无进行判断， 这样的判断固然能维持抗虫棉的一致性， 但由 于没有进一步对抗虫性的强弱进行判定， 会导致对材料的后续利用， 乃至。
7、其实际生产应用 管理等的有效性和准确性有所偏差。 因此如何获得高抗虫性棉花植株并加以有效的改造和 利用是值得研究和探索的课题。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种能够有效提高棉花育种亲本材料抗虫性的方法， 从而 获得高抗虫性的棉花材料。 0005 为达到以上目的， 本发明提供了一种获得高抗虫性棉花植株的方法， 该方法包括 以下步骤： 0006 (1)在棉花出苗初期， 在棉花的第1片真叶生长平展后， 用浓度为2500-3000ppm的 硫酸卡那霉素溶液喷洒叶面， 6-8天后选取单株子叶和真叶的叶片上没有出现黄色斑点的 植株为第一处理植株； 0007 (2)待第一处理植株生长至有6片真叶。
8、， 且倒1片真叶平展后， 取倒3片和倒4片叶接 种棉铃虫， 每片叶片上接种棉铃虫1龄幼虫3头， 接种4-6天后观察叶片蚕食情况， 根据叶片 蚕食度和幼虫死亡头数判断筛选出高抗、 中抗和抗类型棉株。 0008 其中， 进入蕾花期后， 可以将高抗的植株和中抗的植株的花朵全部做自交， 按照编 号每株单收自交铃， 年底将自交铃进行南繁， 每株的自交铃种植成行， 每行继续做自交， 分 单株收取并编号， 第二年按照高抗自交铃种植2行， 中抗自交铃种植1行， 进行2:1:2:1比例 行数交叉进行种植， 收获时混收， 第三年将混收种进行大田种植便可进一步利用。 0009 其中， 步骤(1)中相对于每亩棉花， 。
9、硫酸卡那霉素溶液的用量为8-9升。 0010 其中， 步骤(2)中将叶片分别放在专用接虫容器中， 优选的将所述倒3片和倒4片叶 说 明 书 1/4 页 3 CN 105494079 A 3 放置于高3-5cm、 直径4-6cm的圆形容器中接种棉铃虫。 0011 其中， 步骤(2)中判断筛选高抗、 中抗和抗类型棉株的标准如表1所示： 0012 表1 0013 0014 本发明的一个方面还提供了所述方法在棉花育种中的应用。 0015 本发明的另一个方面还提供了所述方法在棉铃虫防治中的应用。 0016 本方法提供了一种筛选和提高棉花抗虫性(主要是抗棉铃虫)的方法， 运用该方法 能够有效剔除不抗虫以及。
10、抗虫性较弱的棉花材料， 筛选抗虫性强的棉花材料， 从而提高棉 花的抗虫性， 提升抗虫棉的抗虫有效性能， 避免低效抗虫对棉铃虫的诱导耐受， 减少和杜绝 棉铃虫对抗虫棉的耐受进化进程， 同时减少相关农药的使用量， 减少污染， 有着积极的生产 和社会意义。 具体实施方式 0017 下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。 0018 以下实施例用于说明本发明， 但不用来限制本发明的范围。 若未特别指明， 实施例 中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段， 所用原料均为市售商品。 0019 实施例1 0020 2009年对材料中5017(中棉所41中棉所17)， 中6416(中棉所52中棉所43。
11、)进行 连续观测时， 发现田间叶片有蚕食， 蕾铃期蕾铃也有蚕食损失， 2010年利用常规技术方法， 通过浓度3000ppm卡纳霉素筛选鉴定后， 对不反应植株进行田间毒蛋白含量检测时， 发现效 果不理想， 检测结果低于抗虫对照， 由于两个材料耐病优质， 利用价值较高， 需要进一步筛 选提高， 2010年底收获不反应植株进行南繁种植， 2011年种植繁殖的不反应植株， 在棉花的 第1片真叶生长平展后， 用浓度为3000ppm的喷硫酸卡那霉素溶液进行卡那霉素筛选， 喷洒 量为8-9升/亩， 7天后选取单株子叶和真叶的叶片上没有出现黄色斑点的植株为第一处理 植株； 待第一处理植株生长至有6片真叶， 且。
12、倒1片真叶平展后， 将倒3片和倒4片叶放置于高 4cm、 直径5cm的圆形容器中进行接虫筛选， 每片叶子上接3头1龄幼虫， 接虫4天后结合抗虫 与不抗虫对照样品的情况(抗虫对照样品叶片有蚕食， 3头幼虫全部死亡， 不抗虫对照样品 叶片蚕食面积较大超过一半以上， 2头幼虫以上幼虫存活)就可展开调查记录， 按照记载表 进行结果分类(参见表1)， 结合分类的结果对高抗， 中抗植株进行自交， 2011年底每个植株 种植成行， 2012年按照高抗自交铃种植2行， 中抗自交铃种植1行的原则， 进行2:1:2:1比例 行数交叉进行种植， 收获时混收， 2013年将混收种进行大田种植。 与抗虫对照同样管理的条。
13、 说 明 书 2/4 页 4 CN 105494079 A 4 件， 在田间进行目测， 植株器官受虫危害大幅减少， 同时抽样进行田间毒蛋白含量检测， 表 达量比对照有了明显提高， 收到了很好的实际效果。 (见下表2) 0021 表2 0022 0023 实施例2 0024 2009年组配的棉花杂交一代种中棉0913(中棉所35中棉所69)豫棉11号， 在 2010年的田间多点测产过程中， 表现出抗病稳产， 平均增产效果明显， 但是在部分试验试点 增产增效效果不理想， 经过试验承担人反应并结合其田间表现发现主要原因是抗虫性较弱 不稳定， 该材料是一个杂交一代种， 其父本为非抗虫棉， 其抗虫基因来。
14、源于其母本， 因此提 高其母本的抗虫性就能直接有效的提高其抗虫性。 0025 首先对其父本进行常规的复壮保纯工作， 其次在保持母本优良性状同时着重对其 母本抗虫性按照本方法进行筛选提高， 具体为： 0026 首先在棉花的出苗初期， 在棉花的第1片真叶生长平展后， 对试验材料进行卡那霉 素鉴定， 使用的是硫酸卡那霉素纯粉剂， 使用的浓度3000ppm(每10000ml水配用30克粉剂)， 充分搅匀后， 人工喷洒， 喷洒量为8-9升/亩， 施药7天后参照抗虫与不抗虫对照的反应情况 (抗虫对照100无反应， 不抗虫对照100反应)展开田间调查， 拔除叶片上出现黄色斑点 的植株， 对于叶片上没有出现黄。
15、色斑点的植株保留并进行编号挂牌处理， 编号植株长到有6 片真叶， 且倒1片真叶平展后， 对其进行采样， 每个棉株采取倒3片和倒4片叶， 将倒3片和倒4 片叶放置于高4cm、 直径5cm的圆形容器中进行接虫筛选， 在每片叶子接上棉铃虫1龄幼虫3 头， 等到接虫的第5天后开始观测， 具体参照抗虫与不抗虫对照样品的情况(抗虫对照样品 叶片有蚕食， 3头幼虫全部死亡， 不抗虫对照样品叶片蚕食面积较大超过一半以上， 2头幼虫 以上幼虫存活)就可展开调查， 具体标准参照表1。 对已有的棉株进行分类后， 保留高抗和中 抗类型的棉株并编号， 同时拔除耐及感类型的植株。 0027 进入了蕾花期， 将高抗和中抗的。
16、植株花朵全部做自交， 按照编号每株单收自交铃， 年底将自交铃种植于海南进行南繁， 每株的自交铃种植成行， 每行继续做自交， 分单株收取 并编号， 第二年按照高抗自交铃种植2行， 中抗自交铃种植1行， 进行2:1:2:1比例行数交叉 进行种植， 收获时混收， 第三年将混收种进行大田种植收获时再混收， 利用混收种作为母本 并进行制种， 其杂交一代在同样的试点， 棉铃虫幼虫校正死亡率较高， 强于对照， 而且其平 均Bt杀虫蛋白表达量(ng/g鲜重)也高于对照， 表现了很好的抗虫性， 同时其产量水平也有 了较好的提高。 (见下表3)。 说 明 书 3/4 页 5 CN 105494079 A 5 0028 表3 0029 0030 虽然， 上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述， 但在 本发明基础上， 可以对之作一些修改或改进， 这对本领域技术人员而言是显而易见的。 因 此， 在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进， 均属于本发明要求保护的范围。 说 明 书 4/4 页 6 CN 105494079 A 6 。