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1、(10)授权公告号 CN 102283014 B (45)授权公告日 2013.01.02 CN 102283014 B *CN102283014B* (21)申请号 201110173067.1 (22)申请日 2011.06.24 CGMCC No. 4908 2011.06.01 A01G 1/04(2006.01) (73)专利权人 莆田市农业科学研究所 地址 351144 福建省莆田市荔城区黄石镇莆 田市农科所 (72)发明人 陈政明 姚一建 彭建平 李碧琼 林俊扬 邱春锦 (74)专利代理机构 福州元创专利商标代理有限 公司 35100 代理人 蔡学俊 CN 101878719 A。
2、,2010.11.10, 全文 . 王谦 等 . 黄白侧耳栽培条件优化 .食用菌 学报 .2010,( 第 4 期 ), 第 26-29 页 . 郭惠东 等 . 白灵侧耳优质高效栽培关键技 术研究. 中国食用菌 .2006,第25卷(第3期), 第 23-25 页 . (54) 发明名称 一种野生食用菌人工栽培菌种及其栽培方法 (57) 摘要 本发明提供了一种野生食用菌人工栽培菌 种及其栽培方法, 所述野生食用菌人工栽培菌种 为侧耳 (Pleurotussp.) P26297, 保藏号为 CGMCC No.4908。栽培方法为以侧耳 (Pleurotussp.) P26297 为母种进行培育,。
3、 发菌、 出菇管理、 最后到 摘菇。 本发明的野生食用菌人工栽培菌种, 采集自 野生腐生菌, 通过人工驯化而成, 保护了该物种的 种质资源, 开发了食用菌新品种, 调整了食用菌品 种结构, 丰富了食用菌市场品种供应, 有较高的经 济和社会效益。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 李皴宇 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 2 页 1/1 页 2 1. 一种野生食用菌人工栽培菌种, 其特征在于 : 所述野生食用菌人工栽培菌种为侧耳 (Pleurot。
4、us sp.) P26297, 保藏号为 CGMCC No.4908。 2. 一种如权利要求 1 所述的野生食用菌人工栽培菌种的栽培方法, 其特征在于 : 以侧 耳 (Pleurotus sp.) P26297 为母种进行培育, 发菌、 出菇管理、 最后到摘菇 ; 其配套培养基 配方, 试管培养基为 : 4g K2PO4, 2g MgSO4, 琼脂 20g, 1% 蛋白胨, 水 1000mL, pH 自然 ; 液体培 养基 : 玉米粉 40g, 蔗糖 20g, 4g K2PO4, 2g MgSO4, 琼脂 2g, 水 1000mL, pH 自然 ; 袋料栽培培养 基 : 棉子壳 48%、 麦麸。
5、 18%、 木屑 30%、 轻质碳酸钙 2%、 石灰 2% ; 含水量 68%。 权 利 要 求 书 CN 102283014 B 2 1/3 页 3 一种野生食用菌人工栽培菌种及其栽培方法 技术领域 0001 本发明涉及一种野生食用菌人工栽培菌种及其栽培方法。 背景技术 0002 野生食用菌是生长在天然树林中、 在自然界完全处于野生状态的野生菌, 主要分 为两类, 腐生菌和菌根菌, 菌根菌目前为止还无法进行人工培养, 而腐生菌是可以经过人工 驯化, 人工栽培的, 也可工厂化栽培。本申请人自天然林场采集到一株野生菌, 在经过多次 驯化后, 现可以进行人工栽培。栽培菌种根据形态学特征, 初步断定。
6、为侧耳属。因其菌柄中 生, 又属于侧耳属的大型真菌, 所以本发明中将其命名为中柄侧耳, 自发现中柄侧耳后, 经 过多年寻找, 未见有该菌的发现报道, 且人工栽培方法亦未见同类研究的文献报道。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供一种以野生腐生菌为标本, 经人工培育、 驯化而成的野生 食用菌人工栽培菌种及栽培方法。 0004 本发明的侧耳 (Pleurotus sp.) P26297, 已经于 2011 年 6 月 1 日保藏在中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心, 其简称 CGMCC, 地址为北京市朝阳区北辰西路 1 号 院 3 号, 保藏编号为 : CGMCC No. 4908。。
7、 0005 该菌种的子实体成熟后有明显的海鲜味, 经检索食用菌图鉴及中科院微生物研 究所的 DNA 检测, 确认该菌株为国内外首次发现的侧耳属的一个新物种。 0006 所述的野生食用菌人工栽培菌种的栽培方法, 以侧耳 (Pleurotus sp.) P26297 为 母种进行培育, 发菌、 出菇管理、 最后到摘菇。 0007 当采用试管培养进行培育时, 将母种接种到试管培养基 : 4g K2HPO4, 2g MgSO4, 20g 琼脂, 10g 蛋白胨, 加水至 1000mL, pH 自然。 0008 采用液体培养时, 将母种培育出原种或栽培种, 再将原种或栽培种播种到配制好 的栽培料上, 原。
8、种或栽培种使用的培养基为液体培养基 : 玉米粉 40g, 蔗糖 20g, 4g K2PO4, 2g MgSO4, 琼脂 2g, 加水至 1000mL, pH 自然 ; 栽培料碳氮比为 20-35。 0009 采用袋料培养时, 将母种培育出原种和栽培种, 再将栽培种播种到配制好的栽培 料上, 所述栽培料为袋料培养基 : 棉子壳 48%、 麦麸 18%、 木屑 30%、 轻质碳酸钙 2%、 石灰 2% ; 上述培养基含水量 65-68% ; 原种和栽培种所使用的培养基为常规培养基。 0010 本发明的侧耳 (Pleurotus sp.) P26297 具有以下特性 : 0011 1、 毒理测定 :。
9、 0012 毒理测定采用生、 熟中柄侧耳喂食鸡、 鸭, 狗等小动物, 初步判断出中柄侧耳为无 毒的可使用的食用菌。 0013 2、 风味 0014 中柄侧耳鲜菇清香, 煮熟有一股海鲜味, 菇盖口感爽滑, 与香菇相比更有韧劲, 菇 柄外表皮可食用, 纤维较多, 菇柄海绵状, 口感比菇盖淡, 比较有韧劲, 干菇有一股浓重的海 说 明 书 CN 102283014 B 3 2/3 页 4 鲜味, 用于炖汤口感甜美。 0015 3、 产品 0016 中柄侧耳直接烘干可用于上市销售, 菇品金黄色, 菇体较大, 卖相较好, 口感上乘 ; 该菌含有八中人体必需氨基酸, 其中苯丙氨酸和酪氨酸含量超过香菇 2 。
10、倍多, 可作为工业 原料来源 ; 该菌还可以作为与其他侧耳类杂交的一种优质的种质资源。 0017 本发明的有益效果 : 0018 本发明的野生食用菌人工栽培菌种, 采集自野生腐生菌, 通过人工驯化而成, 保护 了该物种的种质资源, 开发了食用菌新品种, 调整了食用菌品种结构, 丰富了食用菌市场品 种供应, 有较高的经济和社会效益。 附图说明 0019 图 1 为菌丝及试管中现蕾 ; 0020 图 2 为瓶栽出菇及菇体形态 ; 0021 图 3 为孢子电镜扫描 ; 0022 图 4 为覆土出菇及不同时期的菇体特点。 具体实施方式 0023 本发明的侧耳 (Pleurotus sp.) P2629。
11、7 是采集天然林场的野生腐生菌作标本, 采 用组织分离法经驯化而成。 0024 在驯化过程中, 将分离的菌种放在各种不同的环境下 (不同 C/N 比、 温度、 pH、 光照 等) 发菌培养、 出菇, 从而筛选出菌丝生长浓密、 后期呈线条状, 遗传性能较稳定的菌株作母 种。具体筛选过程如下 : 0025 将组织分离得到的稀疏菌丝, 在不同的温度下进行多代培养, 发现在 22条件下, 菌丝生长速度最快, 菌丝粗壮。通过多种碳源、 氮源的筛选, 以蛋白胨 1% 加入基础培养基。 供试碳源为 : 麦芽糖、 淀粉、 乳糖、 果糖、 蔗糖、 葡萄糖。它们在 1000mL 培养基中的添加量相 当于 20g 。
12、葡萄糖的全碳量。以葡萄糖 2% 加入基础培养基。供试氮源为 : 酵母膏、 牛肉膏、 蛋 白胨、 NH4NO3、 NH4Cl、 KNO3。它们在 1000mL 培养基中的添加量相当于 10g 蛋白胨的全氮量。 将供试的 6 种碳源和氮源分别与基础培养基组合各制成 6 种培养基, 置于 22恒温培养箱 中连续培养 10d, 测菌落直径, 发现该菌在以葡萄糖为碳源, 以蛋白胨为氮源的培养基中生 长最为理想 ; 以葡萄糖为碳源、 蛋白胨为氮源加入基础培养基, 将 C/N 调节为 10/1、 15/1、 20/1、 25/1、 30/1、 35/1、 40/1、 45/1、 50/1、 60、 1共13。
13、种配方, 置于22恒温培养箱中连续培 养 10d, 测菌落直径、 观察菌丝长势。C/N 为 30 时, 菌丝量达到最大值。通过对青霉、 绿霉、 木霉等常见的杂菌进行抗逆性试验, 筛选出其中抗性强的菌株。 对筛选出来的菌株与香菇、 平菇、 猪肚菇进行拮抗试验, 发现该菌与试验的侧耳类食用菌均产生拮抗现象。 在不同的光 照强度和光照时间下, 诱导菌丝扭结形成菇蕾, 如图 1 所示, 菇蕾随着生长, 形成细条状的 菇体。在 150mL 三角瓶中加入 30mL 培养基 (为上述筛选出来的培养基) 制成平板, 用无菌打 孔器取直径 5mm 的菌落 1 块接入, 置于 22恒温黑暗培养 25d。当菌丝完全。
14、长满平板后, 分 别置于完全黑暗、 12h 光 (3000lx) 暗交替、 连续光照 (3000lx) 条件下连续培养 15d, 观察记 载现蕾数目, 发现 12h 以上的光照下, 试管出现小菇蕾。对小菇蕾进行组织分离, 获得新的 说 明 书 CN 102283014 B 4 3/3 页 5 菌株。采用传统的分类方法与 DNA 分子标记技术相结合的方法, 根据形态学特征为依据, 包 括子实体的形态学特征、 菌丝的类型和结构、 孢子的显微结构, 子实体的显微结构等, 初步 断定为侧耳属。再通过 DNA 分子标记, 确定为侧耳属。中柄侧耳命名的依据是根据菌柄中 生, 又属于侧耳属的大型真菌, 所以。
15、命名为中柄侧耳, 并对其进行菌种保藏。 0026 用上述菌种作母种, 培育出原种和栽培种, 再将栽培种播种到配制好的栽培料 上, 经过发菌、 出菇管理、 最后到摘菇。在用母种培育原种和栽培种时所使用的采用棉籽 壳、 牛粪粉、 木屑等原料, 通过不同的比例配比, 筛选中柄侧耳菌丝生长好的原种、 栽培种 及优质高产栽培的栽培料配方。发现中柄侧耳配套培养基配方, 试管培养基为 : 4g K2PO4, 2g MgSO4, 琼脂 20g, 1% 蛋白胨, 水 1000mL, pH 自然 ; 液体培养基 : 玉米粉 ,40g, 蔗糖 20g, 4g K2PO4, 2g MgSO4, 琼脂 2g, 水 10。
16、00mL, pH 自然 ; 袋料栽培培养基 : 棉子壳 48%、 麦麸 18%、 木屑 30%、 轻质碳酸钙 2%、 石灰 2% ; 含水量 68%。根据中柄侧耳菌丝生产发育对温度的要求及本 地区的气候特点, 选择中柄侧耳合理的栽培季节, 春季播种时间安排在 2 月 15 日、 2 月 28 日、 3 月 15 日、 3 月 31 日 ; 夏季播种时间安排在 7 月 15 日、 7 月 31 日、 8 月 15 日、 8 月 31 日。 菇体不同生长时期的表现如图 4 所示, 中柄侧耳干品经国家加工食品质量监督检验中心检 测, 结果如下 : 总糖 43.1%, 总脂肪酸 1.2%, 天门冬氨酸。
17、 17.0g/kg, 丝氨酸 8.1 g/kg, 谷氨酸 23.7%, 甘氨酸 7.1 g/kg, 组氨酸 2.8 g/kg, 精氨酸 6.4 g/kg, 苏氨酸 7.4 g/kg, 丙氨酸 9.5 g/kg, 脯氨酸 5.8 g/kg, 胱氨酸 0.9 g/kg, 酪氨酸 4.3 g/kg, 缬氨酸 7.2 g/kg, 蛋氨酸 1.7 g/kg, 赖氨酸 7.8 g/kg, 异亮氨酸 5.7 g/kg, 亮氨酸 9.3 g/kg, 苯丙氨酸 6.0 g/kg, 并与香 菇等常见优质食用菌比较。发现中柄侧耳的的人体必需氨基酸中的苯丙氨酸、 酪氨酸超过 香菇 2 倍多。并通过对该食用菌对四种主要。
18、重金属吸附能力进行检测, 发现该食用菌对四 种重金属残留量都都达到无公害水平。 0027 侧耳 (Pleurotus sp.) P26297 菌丝在培养基上的形态、 生物学特性 : 0028 菌丝形态如图 1 所示, 与平菇相似, 在琼脂培养基上呈洁白、 浓密、 气生菌丝。中柄 侧耳子实体粗壮, 散生, 菌盖直径518厘米, 初为伞形, 逐渐成边缘波浪形最后为平展, 如 图 4 所示。 0029 中柄侧耳的人工驯化培育可采用如下培养基 : 以 4g K2PO4, 2g MgSO4, 20g 琼脂, 1000mL 水, pH 自然作为基础培养基, 每升培养基中含有 : 20g 麦芽糖、 淀粉、 。
19、乳糖、 果糖、 蔗 糖、 葡萄糖作为碳源, 每升培养基中含有 : 10g 酵母膏、 牛肉膏、 蛋白胨、 NH4NO3、 NH4Cl、 KNO3 作为氮源, 优选采用如下培养基 : 20g 葡萄糖、 10g 牛肉膏、 4g K2PO4, 2g MgSO4, 20g 琼脂, 1000mL 水, pH 自然。中柄侧耳的碳氮比可在 10-60 之间正常生产, 优选 25-40, 最适宜的碳 氮比为 30。中柄侧耳菌丝可在 5-35温度下培养, 致死温度为 45 20min, 优选 22, 在 22培养10d, 菌丝量达到最大。 中柄侧耳菌丝可在pH4-10条件下培养, 优选pH5-6, 最适宜 值为 。
20、6.0。中柄侧耳孢子可在 10-30萌发, 优选 15-25, 最适宜的萌发温度为 25。中 柄侧耳可在 8-24h 光照下现蕾, 完全黑暗无法现蕾, 最适宜为连续光照 12h。中柄侧耳的栽 培可以木屑、 稻草、 五节芒等秸秆或木质加工厂下脚料作为碳源, 以牛粪、 棉籽壳、 麦麸、 花 生饼等作为碳源, 碳氮比为 20-35, 优选 30, 加入少量的石灰、 轻质碳酸钙等。最适宜的培养 基培养为 : 棉子壳 48%、 麦麸 18%、 木屑 30%、 轻质碳酸钙 2%、 石灰 2% ; 含水量 68%。中柄侧耳 栽培出菇可以在 16-35正常出菇, 优选 20-28, 最适宜的出菇温度为 25。 说 明 书 CN 102283014 B 5 1/2 页 6 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 102283014 B 6 2/2 页 7 图 4 说 明 书 附 图 CN 102283014 B 7 。