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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410503303.5 (22)申请日 2014.09.26 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104221717 A (43)申请公布日 2014.12.24 (73)专利权人 桂林丰茂源农业技术开发有限公 司 地址 541200 广西壮族自治区桂林市灵川 县青狮潭甘草村桂林丰茂源农业技术 开发有限公司 专利权人 王运凤 (72)发明人 王运凤 (74)专利代理机构 桂林市持衡专利商标事务所 有限公司 45107 代理人 汤凌志 (51)Int.Cl. A0。
2、1G 1/04(2006.01) (56)对比文件 CN 102870600 A,2013.01.16, CN 103609329 A,2014.03.05, CN 1546645 A,2004.11.17, CN 102630490 A,2012.08.15, US 2010/0021426 A1,2010.01.28, 审查员 李勇 (54)发明名称 一种提高蛹虫草子实体中虫草素含量的方 法 (57)摘要 本发明公开了一种提高蛹虫草子实体中虫 草素含量的方法， 本发明通过对虫草素采用锌离 子胁迫， 同时结合光照条件的调整， 在虫草子实 体的特定生长阶段喷洒葡萄糖酸锌溶液， 可以带 来强烈的。
3、胁迫效果， 子实体虫草素含量可达 0.25-0.35， 同时相比现有技术， 可以缩短一周 以上的培养时间。 权利要求书1页 说明书3页 CN 104221717 B 2016.09.21 CN 104221717 B 1.一种提高蛹虫草子实体中虫草素含量的方法， 其特征在于： 包括如下步骤： 1)、 菌丝培养： 将接完种的瓶子放于15-18、 严格避光环境中培养40-45天； 当菌丝将 要长透培养基时， 在培养基表层喷洒一层质量浓度为0.05-0.10的葡萄糖酸锌溶液， 喷洒 量以刚好将培养基覆盖为准； 白天控温18-25， 夜间降至12-18， 夜间给予光照， 光照不 少于4小时， 照度40。
4、0-500Lx； 2)、 子实体培养： 培养基表层形成微小子实体时， 在培养基表层再次喷洒一层质量浓度 为0.05-0.1的葡萄糖酸锌溶液， 喷洒量以刚好将培养基覆盖为准； 调整温度为18-20， 每天光照不少于12小时， 照度1500-2000Lx， 培养8-12天； 3)、 将步骤2)中的培养至第8-12天的培养物的培养温度调至培养温度18-25， 其它条 件不变， 进行常规培养， 直到收获。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 104221717 B 2 一种提高蛹虫草子实体中虫草素含量的方法 技术领域 0001 本发明涉及蛹虫草人工栽培技术领域， 尤其涉及一种人工控制培养条件以提。
5、高蛹 虫草子实体中虫草素含量的方法。 背景技术 0002 蛹虫草(Cordyceps mi1itaris， 又名北冬虫夏草， 在真菌分类学上属子囊菌亚门， 核菌纲， 麦角菌目， 麦角菌科， 虫草属， 与冬虫夏草(Cordyceps sinensis)同为虫草属真菌 的一种。 虫草属真菌是寄生于昆虫、 蜘蛛或大团囊属植物的地下子实体上形成的一类虫菌 复合物的统称。 蛹虫草是虫草属真菌的模式种， 在野外主要寄主于鳞翅目、 鞘翅目和双翅目 的一些昆虫的幼虫和蛹上， 中医典籍记载它的功效为 “味甘、 性平， 有益肺肾， 补精髓， 止血 化痰” ， 与冬虫夏草的功能基本一致。 0003 虫草素是蛹虫草中。
6、主要的有效成份之一， 虫草素(cordycepin)又名3 一脱氧腺 苷， 是Cuningham于1951年分离得到的一种腺苷类活性物质， 分子式为C10H13N503， 分子量为 251.24， 熔点230-231。 虫草素是蛹虫草中主要的有效成份之一， 具有抗菌抗病毒、 抗肿 瘤、 以及抗疲劳、 抗衰老、 抗炎提高人体免疫能力， 抑制单胺氧化酶活性， 具有较高的药用价 值和广泛的药理作用。 临床上主要应用治疗癌症、 白血病、 扩张支气管、 显著增强肾素、 抗衰 老等作用。 0004 过去， 由于蛹虫草在野外产量稀少， 其开发利用并没有被人们所重视。 但自上世纪 九十年代末， 其大规模人工培。
7、养获得成功以来， 其开发利用价值便越来越被人们认识， 特别 是针对虫草素的研究越来越多。 人工培养中提高虫草素含量的生产应用主要分为提高液体 发酵培养物中虫草素含量、 提高固体发酵培养物中虫草素含量和提高子实体中虫草素含量 三种途径， 其中液体发酵培养和固体发酵培养主要以获取虫草素纯品为目标。 而提高子实 体中虫草素含量则是以提高蛹虫草子实体的商品质量为目标。 在提高虫草素含量的方法 上， 目前已有的技术主要可概括为以下几个方面:1、 通过菌种诱变和选育提高虫草素含量； 2、 通过对培养基中营养成分优化提高虫草素含量； 3、 通过在培养基中添加前体物提高虫草 素含量； 4、 通过真菌激发子提高。
8、虫草素含量。 目前， 所开发的虫草产品越来越多， 市场需求 也越来越大， 蛹虫草子实体的人工栽培正成为一个具有极大经济价值的新兴产业， 如何提 高蛹虫草子实体中虫草素含量具有很好的市场前景。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种提高蛹虫草子实体中虫草素含量的方法， 它主要是通过 人工控制以提高虫草素含量， 该方法与现有技术中已使用的蛹虫草子实体的培养方法以及 提高虫草素含量的方法可同时使用。 0006 本发明是通过如下技术方案来实现的： 0007 1)、 菌丝培养： 将接完种的瓶子放于15-18、 严格避光环境中培养40-45天； 当菌 丝将要长透培养基时， 在培养基表层喷洒一层质量浓度。
9、为0.05-0.10的葡萄糖酸锌溶液， 说 明 书 1/3 页 3 CN 104221717 B 3 喷洒量以刚好将培养基覆盖为准； 白天控温18-25， 夜间降至12-18， 夜间给予光照， 光 照不少于4小时， 照度400-500Lx； 0008 2)、 子实体培养： 培养基表层形成微小子实体时， 在培养基表层再次喷洒一层质量 浓度为0.05-0.1的葡萄糖酸锌溶液， 喷洒量以刚好将培养基覆盖为准； 调整温度为18-20 ， 每天光照不少于12小时， 照度1500-2000Lx， 培养8-12天； 0009 3)、 将步骤2)中的培养至第8-12天的培养物的培养温度调至培养温度18-25，。
10、 其 它条件不变， 进行常规培养， 直到收获。 0010 与现有技术相比， 本发明具有如下优点： 0011 1、 虫草菌丝体对锌离子有极强的富集能力， 在锌离子胁迫下， 菌丝体内虫草素含 量会增加， 现有技术对锌离子的应用， 一般采用在培养基配方中添加锌离子， 这样做的好处 是操作方便， 不足之处是菌丝体在初始阶段就接触锌离子， 已经慢慢适应， 等到需要刺激虫 草素增加的阶段， 锌离子胁迫的效果不好。 未加锌离子胁迫的所获得的子实体的虫草素含 量为0.05-0.10； 采用在培养基中添加锌离子， 子实体虫草素含量可达0.15-0.25； 本发 明通过在特定的阶段培养基表层喷洒锌离子溶液， 可以。
11、带来强烈的胁迫效果， 子实体虫草 素含量可达0.25-0.35。 0012 2、 现有技术， 采用锌离子胁迫， 锌离子溶液的浓度比较高， 比如采用醋酸锌， 醋酸 锌占培养基质量比的2-9， 而本发明的采用的喷洒的葡萄糖酸锌的溶液浓度为0.05- 0.10， 且用量少， 节约成本， 而且葡萄糖酸锌可以提供发酵需要的葡萄糖。 0013 3、 本发明通过对虫草素采用锌离子胁迫， 同时结合光照条件的调整， 相比现有技 术， 可以缩短一周以上的培养时间。 具体实施方式 0014 下面以实施例对本发明作进一步说明， 但本发明并不局限于这些实施例。 0015 实施例1-10： 0016 为了验证本发明的技术。
12、效果， 2013年至2014年， 使用本发明技术生产10个批次的 产品， 每个批次的方法如下: 0017 1)、 菌丝培养： 将接完种的瓶子放于15-18、 严格避光环境中培养40-45天； 当菌 丝将要长透培养基时， 在培养基表层喷洒一层质量浓度为0.05-0.1的葡萄糖酸锌溶液， 喷洒量以刚好将培养基覆盖为准； 白天控温18-25， 夜间降至12-18， 夜间给予光照， 光 照不少于4小时， 照度400-500Lx； 0018 2)、 子实体培养： 培养基表层形成微小子实体时， 在培养基表层再次喷洒一层质量 浓度为0.05-0.1的葡萄糖酸锌溶液， 喷洒量以刚好将培养基覆盖为准； 调整温度为18-20 ， 每天光照不少于12小时， 照度1500-2000Lx， 培养8-12天； 0019 3)、 将步骤2)中的培养至第8-12天的培养物的培养温度调至培养温度18-25， 其 它条件不变， 进行常规培养， 直到收获。 0020 每个批次随机抽取其中的一瓶， 经检测， 结果见下表： 说 明 书 2/3 页 4 CN 104221717 B 4 0021 0022 从上表可以看出， 虫草素含量范围为0.289-0.371， 平均含量为0.335。 说 明 书 3/3 页 5 CN 104221717 B 5 。