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1、(10)授权公告号 CN 102657240 B (45)授权公告日 2014.04.30 CN 102657240 B (21)申请号 201210118981.0 (22)申请日 2012.04.21 A01N 65/10(2009.01) A01P 3/00(2006.01) (73)专利权人 中国农业科学院生物技术研究所 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 12 号 专利权人 黄其满 (72)发明人 黄其满 都晓伟 王英姿 (74)专利代理机构 北京法思腾知识产权代理有 限公司 11318 代理人 高宇 CN 101091734 A,2007.12.26, CN 101091。
2、734 A,2007.12.26, CN 101805347 A,2010.08.18, WO 2010061938 A2,2010.06.03, 聂诗明 等 . 正交试验法优选独活提取工 艺 .湖北中医杂志 .2004, 第 26 卷 ( 第 9 期 ),51-52. 张知侠 . 短毛独活精油提取及抑菌作用研 究 .咸阳师范学院学报 .2007, 第 22 卷 ( 第 2 期 ),33-34. (54) 发明名称 一种具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质 及其应用 (57) 摘要 本发明涉及生物农药领域， 具体地， 本发明涉 及一种具抑制轮纹病菌活性的生物活性物质及其 应用。根据本发明的具有抑。
3、制轮纹病菌活性的生 物活性物质， 通过包括以下步骤的方法制备 ： 1) 称取独活干燥根粗粉， 先用6倍量石油醚浸泡1小 时， 45回流脱脂 1 小时 ； 2) 然后用 7-10 倍量的 75乙醇回流 1-2 小时， 回收至干 ； 3) 用水转移 出提取物， 萃取得干膏。根据本发明的生物活性 物质， 其中， 在步骤 2) 中， 乙醇回流三次， 过滤， 合 并滤液。本发明的具抑制轮纹病菌活性的生物活 性物质具有重要的经济效益和生态效益的双重意 义。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 江笑丹 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (1。
4、2)发明专利 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 (10)授权公告号 CN 102657240 B CN 102657240 B 1/1 页 2 1. 独活提取物用于抑制轮纹病菌活性的用途， 其特征在于， 所述独活提取物通过包括 以下步骤的方法制备 ： 1） 称取独活干燥根粗粉， 先用 6 倍量石油醚浸泡 1 小时， 45回流脱脂 1 小时 ； 2） 然后用 7-10 倍量的 75% 乙醇回流 1-2 小时， 回收至干 ； 3） 用水转移出提取物， 萃取得干膏。 2. 根据权利要求 1 所述的独活提取物用于抑制轮纹病菌活性的用途， 其特征在于， 在 步骤 2) 中， 乙醇回流三次， 过滤， 。
5、合并滤液。 3. 根据权利要求 1 所述的独活提取物用于抑制轮纹病菌活性的用途， 其特征在于， 在 步骤 3) 中， 加氯仿萃取两次， 回收氯仿， 得干膏。 权 利 要 求 书 CN 102657240 B 2 1/3 页 3 一种具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质及其应用 技术领域 0001 本发明涉及生物农药领域， 具体地， 本发明涉及一种具抑制轮纹病菌活性的生物 活性物质及其应用。 背景技术 0002 我国的苹果种植面积很大， 轮纹病菌 (Botryosphaeria dothidea) 引起的苹果轮 纹病是危害苹果生产的一种最为严重的病害之一， 且难以防治， 目前仍以化学防治为主。 苹。
6、 果轮纹病在我国主要苹果产区都有发生， 严重时可对果园造成毁灭性破坏， 给苹果产业造 成重大损失。苹果的整个生长期均可被轮纹病菌侵染。轮纹病菌还危害苹果树的树体， 夺 取树体营养， 分泌毒素毒害果树， 减弱苹果树势， 影响树体正常生长， 严重的造成枝干枯死， 甚至导致整树死亡。不仅如此， 患轮纹病的枝干将成为产生再次侵染新生苹果枝条和苹果 果实的菌源， 导致轮纹病危害的再次发生。 轮纹病菌对苹果果实的危害也很大， 苹果果实从 接近成熟开始发病， 储藏期继续发病， 造成大量烂果， 导致严重的直接经济损失。据专家报 道我国每年因轮纹病危害造成的直接经济损失就达 30 亿到 50 亿元人民币。 00。
7、03 轮纹病菌除危害苹果外， 还能危害梨、 桃、 李、 杏、 葡萄、 栗树、 海棠、 山楂等果树， 为 上述果品生产的重大威胁。轮纹病近年有蔓延加重趋势， 2006 年首次报道轮纹病菌能够引 起 bark dieback of European hop hornbean ； 2010 年首次报道轮纹病菌能够感染 Sweet Osmanthus Leaf Dieback。 0004 一直以来， 苹果轮纹病都以化学防治为主。由于苹果的整个生长期均可被轮纹病 菌侵染， 因此需要频繁的施药。因为长期连续用药， 轮纹病菌已经产生了明显的抗药性， 使 轮纹病的发生越来越重。 现在的轮纹病菌已经对常用的多种。
8、杀菌剂产生了不同程度的抗药 性或耐药性， 例如甲基托布津、 代森锰锌、 炭疽福美、 大生 M-45 等药剂对轮纹病的防治效果 均已显著下降了。 长期连续用药， 不仅引起病菌抗药性， 同时可造成果实中农药的残留和生 态环境的污染。 0005 化学农药对农产品的污染问题已经成为我国农产品质量安全的绊脚石。 我们必须 清醒地认识到该问题的严重性， 切实保障农产品质量安全和环境生态安全。所以亟待研制 开发生物药剂。 发明内容 0006 本发明从伞形科植物独活 (Angelica pubescens Maxim.f.biserrata) 的干燥根 中提取纯化了生物活性物质。 0007 本发明的目的是提供。
9、一种具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质。 0008 本发明的再一目的是提供上述生物活性物质的应用。 0009 本发明的再一目的是提供一种生物农药。 0010 根据本发明的具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质， 通过包括以下步骤的方法 制备 ： 说 明 书 CN 102657240 B 3 2/3 页 4 0011 1) 称取独活干燥根粗粉， 先用 6 倍量石油醚浸泡 1 小时， 45回流脱脂 1 小时 ； 0012 2) 然后用 7-10 倍量的 75乙醇回流 1-2 小时， 回收至干 ； 0013 3) 用水转移出提取物， 萃取得干膏。 0014 根据本发明的生物活性物质， 其中， 在步骤 2。
10、) 中， 乙醇回流三次， 过滤， 合并滤液。 0015 根据本发明的生物活性物质， 其中， 在步骤 3) 中， 加氯仿萃取两次， 回收氯仿， 得 干膏。 0016 根据本发明的生物农药， 其中， 包含通过以下步骤制备的具有抑制轮纹病菌活性 的生物活性物质 ： 0017 1) 称取独活干燥根粗粉， 先用 6 倍量石油醚浸泡 1 小时， 45回流脱脂 1 小时 ； 0018 2) 然后用 7-10 倍量的 75乙醇回流 1-2 小时， 回收至干 ； 0019 3) 用水转移出提取物， 萃取得干膏。 0020 根据本发明的具体实施方式， 生物活性物质的提取纯化过程如下 ： 0021 称取独活干燥根粗。
11、粉， 先用 6 倍量石油醚浸泡 1 小时， 45回流脱脂 1 小时， 然后 用 7-10 倍量的 75乙醇回流 1-2 小时， 共三次， 过滤， 合并滤液， 回收至干。用水转移出提 取物， 加氯仿萃取两次， 回收氯仿， 得干膏。 0022 根据以上所述的苹果轮纹病菌的危害特点， 应用来源于天然中药材， 对人、 畜安 全， 不污染环境的生物药剂防治更有其突出的优势。因此本发明的具抑制轮纹病菌活性的 生物活性物质具有重要的经济效益和生态效益的双重意义。 附图说明 0023 图 1 显示了本发明的生物活性物质对苹果轮纹病菌室内毒力测定结果。 具体实施方式 0024 实施例 1 提取生物活性物质 00。
12、25 称取独活干燥根粗粉， 先用 6 倍量石油醚浸泡 1 小时， 45回流脱脂 1 小时， 然后 用 7-10 倍量的 75乙醇回流 1-2 小时， 共三次， 过滤， 合并滤液， 回收至干。用水转移出提 取物， 加氯仿萃取两次， 回收氯仿， 得干膏。 0026 实施例 2 生物活性物质抗轮纹病菌活性检测 0027 经山东烟台农业科学研究院植物保护研究所 ( 农业部认证的国内外农药登记田 间药效试验承担单位 ) 专家鉴定， 上述生物活性物质对苹果轮纹病菌具有抑制作用。试验 结果如下 ： 0028 表 1 结果表明， 生物活性物质对苹果轮纹病菌菌丝生长具有一定的抑制作用， 其 500gmL-1实测抑制生长率达 87以上 ； 最小二乘法统计结果表明， 生物活性物质对苹 果轮纹病菌毒力回归方程为 y 4.1687+0.6748x， EC50和 EC90值分别为 17.0536g mL-1、 1344.4308gmL-1。 0029 表 1SC 对苹果轮纹病菌菌丝生长毒力 0030 说 明 书 CN 102657240 B 4 3/3 页 5 0031 生物活性物质对苹果轮纹病菌室内毒力测定如图 1 所示。 说 明 书 CN 102657240 B 5 1/1 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 102657240 B 6 。