技术领域：
本发明属于饲料领域，尤其涉及饲料添加剂。
背景技术：
现代畜禽养殖过程中，为了预防和治疗动物疾病，常使用过量抗生素产品来确保动物健康，但过量抗生素的使用常导致动物肉制品及其产物的品质下降和抗生素耐性增强，通过食物链的传递导致人类健康也受到抗生素问题的严重影响。
源自自然界的一些天然物质不仅具有良好的营养特性，同时还具有抗病毒、消炎、抗氧化、调节机体免疫功能等作用，具有广阔的应用前景。
大豆多肽易消化吸收性，促进能量代谢，从而显现出抗肥胖作用；促过度疲劳恢复精神、体力的效果；增加肌肉的耐力，促进肌红蛋白恢复；有低抗原、低过敏性等作用。
灵芝[Ganoderema lucidum(Leyss ex Fr.)karst]，又称灵芝草，属担子菌亚门、多孔菌目、灵芝科、灵芝属。历代的医典把灵芝归位于“上上药”，其排位在人参之前。《神农本草经》、《本草纲目》记载，灵芝可明目、补肝气、安神、益精、益心气、益脾气、益肺气、益肾气、通九窍、耳聪、目明、利关节、利尿、养颜美容，是上好的滋补佳品。灵芝多糖能促进蛋白质、核酸的合成，对血清、肝脏及骨髓细胞蛋白质或核酸的更新、合成有促进作用，它是灵芝扶正固本的主要有效成分之一。灵芝多糖主要存在于灵芝真菌子实体、菌核、菌丝体或发酵液中；存在于灵芝中的灵芝酸有止痛、镇静、抑制组织胺释放、解毒、保肝、毒杀肿瘤细胞的功用，是灵芝的主要有效成分之一。
如何有效开发以天然植物或真菌获得绿色饲料添加剂产品对饲料添加剂行业发展具有重要意义。
发明内容：
本发明提供一种饲料添加剂产品；
组成如下：
低聚果糖10-15％，大豆多肽10-20％，枯草芽孢杆菌冻干菌粉15-30％，灵芝菌固体发酵培养物20-40％；活性干酵母10-15％；鼠李糖乳杆菌冻干菌粉10-20％、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为CGMCC6012，上述比例为质量百分比。
灵芝菌固体发酵培养物制备方法如下：
斜面菌种活化培养：将保藏的灵芝斜面菌种转接到斜面培养基上，22-28℃培养96-120小时左右，至菌丝长满斜面即可；最佳培养温度25℃。
1.液体一级种子培养：将上述灵芝斜面菌种挑取一块接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行一级种子培养，培养条件：旋转式摇床80-180转/分，22-28℃培养96-130小时左右；旋转式摇床150转/分为宜，培养温度以25℃为宜。
2.液体二级种子培养：将一级摇瓶种子以5-20％接种量接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行二级种子培养，培养条件：旋转式摇床80-180转/分，22-28℃培养96-130小时左右；合适接种量为10％，旋转式摇床150转/分为宜，培养温度以25℃为宜。
3.固体发酵培养：将二级摇瓶种子以5-10％接种量接入装有灭菌后固体发酵培养基的500L固体发酵罐中，培养条件：装料量50％，培养温度20-27℃，湿度75-90％，通风量0.3-1.0(V/V)，培养时间15-40天。每隔3-10天开启搅拌10分钟。采用SGF固体发酵罐。
4.发酵培养结束，选择流化床等多种干燥方法，将物料干燥到水分含量在7％以下。对固体发酵物料进行粉碎。
本发明固体发酵培养基的碳源主要选择麸皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯(粉碎后)等常用原料，氮源可以选择花生饼粉、蛋白胨、脱脂大豆蛋白粉、豆饼粉、酵母粉等；需要添加的无机盐有磷酸二氢钾，硫酸镁。
在上述固体发酵培养基中添加有质量比为2-6％粉碎后，过40-50目的当归、3-8％的粉碎后，过40-50目的板蓝根，2-5％粉碎后，过40-50目的麝香草。
所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌CGMCC6012，冻干菌粉中活菌数量为4-8×108个/g。所述复合饲料添加剂由以下方法制得：
粉碎后灵芝菌培养物、低聚果糖、大豆多肽和枯草芽孢杆菌冻干菌粉等按照比例混合得到饲料添加剂。
大豆多肽采用市售大豆多肽产品，分子量在500Da～700Da之间。
本发明提供一种饲料生产用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌种，该菌株已经于2012年4月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，(邮编100101)，保藏编号为CGMCC No.6012。
本发明所提供的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.4429，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。保藏日期2010年12月08日。
该菌株特点如下：
在显微镜下观察，该菌株的细胞为卵形，一端芽殖，大小约为1×5μm；在固体培养基上，该菌菌落为乳白色，表面光滑，湿润，粘稠，边缘较整齐且中等偏大。与原始菌相比，该诱变菌株在形态上明显小于出发菌株。
出发菌株酿酒酵母CICC31481购于中国工业微生物菌种保藏管理中心。
本发明酵母菌株采用下述流程进行选育：
原始出发菌种→试管活化→硫酸二乙酯(DES)诱变→高渗平板筛选→亚硝基胍(NTG)诱变筛选→高渗平板初筛→摇瓶复筛→传代稳定性试验→7L发酵罐试验
本发明先采用DES对出发菌株进行诱变，诱变后通过麦芽汁高渗平板(150g/L KCl)培养基初筛，接着对选育出来的菌株继续进行NTG诱变，通过麦芽汁高渗平板(200g/L KCl)培养基初筛，然后采用250mL三角瓶复筛，选育优良的酵母菌株，然后做传代实验，评价其遗传稳定性，并用液相色谱、气相色谱仪、气质联用测定发酵液中的代谢物含量，最后采用7L发酵罐进行实验效果的评价。
菌株CGMCC No.4429遗传稳定性结果表明：经过连续传代十次，各项性能指标都比较稳定，遗传性较好，性状没有回复，因此把菌株CGMCC No.4429作为选育得到的目的菌株。
将目的菌株CGMCC No.4429做7L发酵罐实验，结果表明：与出发菌株相比，CGMCC No.4429初始葡萄糖耐受浓度可以达到300g/L，与原始菌相比提高了50％；发酵结束后，残糖为0.5g/L、甘油含量为1g/L，与原始菌相比提高了10％；乙酸含量为0.8g/L、乳酸含量为0.4g/L，基本和原始菌相当；乙醇浓度为175g/L，与原始菌相比提高了108％。
鼠李糖乳杆菌制备工艺为：
鼠李糖乳杆菌粉状菌粉生产步骤如下：将斜面菌种转接到液体培养基并逐级扩培到要求
的体积；将扩培得到的菌液进行离心分离，收集沉淀菌体；向沉淀菌体中加入保护剂并
进行稀释；利用干燥设备制备粉状菌剂，鼠李糖乳杆菌为1-9*109个/克
鼠李糖乳杆菌所用培养基如下：斜面培养基(g/L)：20葡萄糖，5酵母粉，10大豆蛋白胨，10牛肉膏，5NaCl，10乙酸钠，2柠檬酸铵，0.2MgSO4·7H2O，0.05MnSO4·7H2O，15琼脂，pH 6.5。
发酵培养基(g/L)：40葡萄糖，10酵母粉，10大豆蛋白胨，无机盐(0.01NaCl，0.5乙酸钠，0.2柠檬酸铵，0.2KH2PO4，0.2MgSO4·7H2O，0.05MnSO4·7H2O)，pH 6.5。
活性干酵母采用常规生产工艺制备，活性干酵母粉中活性酵母为1～10*109个/克。
有益效果：
本发明通过科学复配，将枯草芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌、酵母和灵芝菌实现了有机组合，特别是灵芝菌培养中添加了中药成分，本发明产品可以有效降低抗生素类药物在饲养动物中的使用量，提高动物肉制品的安全性，提高动物的饲料利用效率，增强动物的免疫力，提高饲养效益。
具体实施方法：
本发明中灵芝菌培养物生产过程如下：
(1)斜面菌种活化培养：
(2)液体一级种子培养：
(3)液体二级种子培养：
(4)固体发酵培养：
(5)发酵培养结束，选择流化床等多种干燥方法，将物料干燥到水分含量在7％以下。
对固体发酵物料进行粉碎。
本发明所用灵芝菌种购于中国工业微生物菌种保藏中心，菌号CICC14080。
本发明中斜面培养基组成可以为PDA斜面培养基或其他合适培养基。
本发明固体发酵培养基的碳源主要选择麸皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯(粉碎后)等常用原料，氮源可以选择花生饼粉、蛋白胨、脱脂大豆蛋白粉、豆饼粉、酵母粉等；需要添加的无机盐有磷酸二氢钾，硫酸镁。
在发酵培养基中还添加有质量比为2-6％粉碎后过40-50目的当归、3-8％的粉碎后过40-50目的板蓝根，2-5％粉碎后过40-50目的麝香草；
本发明中液体发酵种子培养基组成：淀粉2-3％，蔗糖3-5％，葡萄糖1-3％，蛋白胨0.5％，脱脂大豆蛋白粉2-3％，磷酸二氢钾0.13-0.2％，硫酸镁0.1-0.15％，维生素B12PPm，PH6-7。
本发明中灵芝培养方法适合同属其它菌种通过发酵法进行大规模发酵培养。
菌种诱变
采取紫外诱变方法：以CICC10023为出发菌株，制成菌悬液，涂布于培养基平皿上，紫外照射90s后37℃培养箱中培养。
菌种筛选
从90s平皿上挑30个长得强壮的单菌落，接种于斜面上，37℃培养箱中，培养24小时，0--4℃冷藏保存；以原始菌种作为对照，采用常规选育条件，羧甲基纤维素钠作为碳源和蛋白水解圈方法筛选产纤维素酶和蛋白酶强的菌株，筛选获得产纤维素酶和蛋白酶强的菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)L1，此菌株产纤维素酶能力比原始菌株提高了25％，产蛋白酶能力比原始菌株提高了52％。将该菌种在中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No 6012。
本产品所用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌种，该菌株已经于2012年4月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，(邮编100101)，保藏编号为CGMCC No6012。
鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CGMCC No.4430菌株特点如下：在显微镜下观察，该菌株为杆状，宽度小于1μm，2到3个杆菌易于连成连接在一起；在固体培养基上，该菌菌落为乳白色，表面光滑，湿润，粘稠，边缘较整齐。与原始菌相比，该诱变菌株在形态上明显小于出发菌株。出发菌株鼠李糖乳杆菌CGMCC No.1.2134购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明鼠李糖乳杆菌采用下述流程进行选育：原始出发菌种→试管活化→高温驯化→硫酸二乙酯(DES)诱变→高糖平板筛选→亚硝基胍(NTG)诱变筛选→高温菌筛选→摇瓶复筛→传代稳定性试验→5L发酵罐试验。将目的菌株CGMCC No.4430做5L乳酸发酵罐实验，结果表明：与出发菌株相比，CGMCC No.4430葡萄糖耐受浓度可以达到270g/L，与原始菌相比提高了95％；发酵结束后，乳酸含量为60g/L，与原始菌相比提高了158％。
鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CGMCC No.4430保藏单位是中国普通微生物菌种保藏管理中心。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。保藏日期：2010年12月8日。
本发明产品的性能稳定，使用安全，与其它饲料添加剂均无配合禁忌。本发明产品在饲料中的添加量为1-2％，它完全可以替代抗生素药物，且无残留，不污染环境。饲用后，可显著增强动物机体的免疫力和抗病力，促进生长，提高日增重和饲料转化率，并有抗应激、抗氧化效果；同时对肠道细菌性疾病有较强的预防作用。据试验，饲用本发明饲料添加剂的水产品，品质得到改善，符合动物性食品的绿色化生产要求，社会效益和经济效益十分显著。
本发明产品以生物发酵法生产的中国传统食用菌为原料，产品质量稳定可控，产品在体内无残留、无环境污染、无抗药性，而且可以提高免疫力、具有强的抑菌作用，能够提高养殖效益。产品完全符合绿色饲料添加剂的要求。
由于灵芝具有较高的营养价值和抑菌功能，能够增强动物的免疫力，而且无残留，对环境无污染。通过生物发酵技术生产灵芝并将其加工为饲料添加剂，完全符合当今饲料添加剂的发展方向，是一种绿色饲料添加剂。
实施例1(饲料添加剂产品)
本发明提供一种饲料添加剂产品组成如下：
低聚果糖10％，大豆多肽20％，枯草芽孢杆菌冻干菌粉20％，灵芝菌固体发酵培养物30％；活性干酵母10％；鼠李糖乳杆菌冻干菌粉10％、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为CGMCC6012，上述比例为质量百分比。鼠李糖乳杆菌为CGMCC No.4430，活性干酵母为CGMCCNo.4429。
低聚果糖为市售产品。
灵芝菌固体发酵培养物制备方法如下：
斜面菌种活化培养：将保藏的灵芝斜面菌种转接到斜面培养基上，25℃培养110小时左右，至菌丝长满斜面即可；
1.液体一级种子培养：将上述灵芝斜面菌种挑取一块接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行一级种子培养，培养条件：旋转式摇床100转/分，25℃培养100小时左右；培养温度25℃。
2.液体二级种子培养：将一级摇瓶种子以10％接种量接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行二级种子培养，培养条件：旋转式摇床100转/分，25℃培养130小时左右；培养温度25℃。
3.固体发酵培养：将二级摇瓶种子以8％接种量接入装有灭菌后固体发酵培养基的500L固体发酵罐中，培养条件：装料量50％，培养温度25℃，湿度85％，通风量0.5(V/V)，培养时间25天。每隔4天开启搅拌10分钟。采用SGF固体发酵罐。
4.发酵培养结束，选择流化床干燥方法，将物料干燥到水分含量在7％以下。对固体发酵物料进行粉碎。
本发明中固体发酵培养基组成如下：60％麸皮、1.4％蔗糖、10％玉米粉、16％玉米芯(粉碎后)，0.1％蛋白胨、2％脱脂大豆蛋白粉、0.5％酵母粉；3％粉碎后过50目的当归、4％的粉碎后过40目的板蓝根，3％粉碎后过40目的麝香草；培养基pH自然。灭菌条件：121℃，2小时。
所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌CGMCC6012，冻干菌粉中活菌数量为6×108个/g。
所述复合饲料添加剂由以下方法制得：
粉碎后灵芝菌培养物、低聚果糖、大豆多肽、和枯草芽孢杆菌冻干菌粉等按照比例混合得到饲料添加剂。
大豆多肽采用黑龙江冰泉多多保健食品有限责任公司售大豆多肽产品。
实施例2(饲料添加剂产品)
本发明提供一种饲料添加剂产品组成如下：
低聚果糖15％，大豆多肽15％，枯草芽孢杆菌冻干菌粉15％，灵芝菌固体发酵培养物20％；活性干酵母15％；鼠李糖乳杆菌冻干菌粉20％、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为CGMCC6012，上述比例为质量百分比。鼠李糖乳杆菌为CGMCC No.4430，活性干酵母为CGMCCNo.4429。
产品使用效果
本发明例1饲料添加剂在断奶仔猪中的使用效果试验
试验方法：
试验动物选择宁夏某饲料有限公司下属养殖场平均体重为(7.16±0.15)kg的健康断奶仔猪120头，经统计分析体重差异不显著。采用单因子随机化设计，将120头健康断奶仔猪，按公母各半，分成2组(对照组和试验组)，每组6个重复，每个重复10头猪。试验组添加实施例1制得的本发明产品，对照组不添加本发明产品。连续饲喂30天，与对照组相比，使用发明饲料添加剂可获得如下效果：试验结果表明，在断奶仔猪日粮中添加本产品，仔猪的日增重比对照组有较大提高；料肉比有明显降低；腹泻率降低了70.7％。
本发明例1饲料添加剂在哺乳母猪中的使用效果试验
在宁夏某饲料有限公司下属猪场进行了为期21天的饲喂试验。试验采用单因素对比设计，随机选取30头健康的、产仔头数与出生均重相近的、胎次均为2或3胎的哺乳母猪，随机分为2组(即试验组和对照组)，每组15个重复。其中：试验组日粮添加由实施例2制备得的本产品，对照组不添加本发明产品。记录仔猪断奶重、腹泻率、死亡率。试验表明：试验组比对照组断奶窝重可以提高42.5％，仔猪头日增重提高31.6％，腹泻率减少51.3％，死亡率降低60.3％。
上述结果表明本发明产品可改善母猪和仔猪机体免疫能力，减少抗生素用量，增加养殖质量和效益。