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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201180050321.7 (22)申请日 2011.08.17 61/374,881 2010.08.18 US A01K 61/00(2006.01) A01K 63/02(2006.01) A01K 63/04(2006.01) C02F 3/34(2006.01) (73)专利权人 诺维信生物股份有限公司 地址 美国弗吉尼亚州 专利权人 诺维信公司 (72)发明人 D德拉霍思 C芒奇 (74)专利代理机构 北京坤瑞律师事务所 11494 代理人 史悦 CN 101039692 A,2007.09.19, CN 101039692。
2、 A,2007.09.19, US 2003188695 A1,2003.10.09, CN 1509991 A,2004.07.07, CN 1500749 A,2004.06.02, CN 1544355 A,2004.11.10, US 2004101944 A1,2004.05.27, (54) 发明名称 用于处理水生生物和液体的方法 (57) 摘要 本公开提供了维持或调整液体中氨和亚硝酸 盐的水平的工艺。所述工艺利用能够氧化氨和亚 硝酸盐的细菌组合物。所述工艺可用于拯救或保 护水生生物。 (30)优先权数据 (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2013.04.18 (86)PCT国。
3、际申请的申请数据 PCT/US2011/048118 2011.08.17 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2012/024425 EN 2012.02.23 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 朱金龙 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书11页 CN 103228129 B 2016.03.23 CN 103228129 B 1/1 页 2 1.一种用于在含有氨、 亚硝酸盐或其组合的液体中拯救水生生物的方法， 其包括 ： 将细菌组合物导入该液体， 其中所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化 细菌， 其中所述液体的温度低于或等于。
4、 10， 其中所述细菌组合物包括作为氨氧化细菌 的 Nitrosomonas eutropha 和作为亚硝酸盐氧化细菌的维氏硝化杆菌 (Nitrosomonas winogradskyi)， 且其中在导入之后， 所述细菌组合物开始氧化所述液体中存在的任何氨和 亚硝酸盐。 2.权利要求 1 的方法， 其中所述液体是盐水或淡水。 3.权利要求 1 的方法， 其中所述液体的温度低于或等于 5。 4.权利要求 1 的方法， 其中所述液体的 pH 为 6.8 至 8.5。 5.权利要求 1 的方法， 其中所述液体呈现至少 40的氧饱和。 6.权利要求 1 的方法， 进一步包括将至少一种缓冲化合物添加至所。
5、述液体的步骤。 7.权利要求 1 的方法， 其中所述细菌组合物包含作为氨氧化细菌的亚硝化球菌属和作 为亚硝酸盐氧化细菌的硝化球菌属。 8.一种水生生物资源化的方法， 其包括 ： 调节水生生物环境中铵和亚硝酸盐的水平， 其中水生生物环境的温度低于或等于 10， 其中调节铵和亚硝酸盐的水平的步骤包括将细菌组合物导入所述环境， 其中所述细菌 组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌。 权 利 要 求 书 CN 103228129 B 2 1/11 页 3 用于处理水生生物和液体的方法 0001 对相关申请的交叉引用 0002 本申请要求2010年8月18日提交的美国临时申请号61/374,881在35。
6、U.S.C.119 下的权益， 其内容通过全文提述并入本文。 技术领域 0003 本发明一般地涉及可用于处理、 拯救或保护水生生物的工艺 / 方法。更具体而言， 本公开涉及利用硝化细菌组合物以维持或调整水生生物环境中有害组分的水平的工艺 / 方法。 0004 发明背景 0005 水生动物为主要的食物来源， 并在科学探索中起重要作用。水生动物通常必须在 运输过程中保持存活， 由此造成对于供维持水生动物在囚禁(in captivity)下存活一段时 间的有效手段的需要。用于水生动物如海鲜的运输系统通常组成为 (consist of) 具有充 满冷的淡水或海水的罐的容器。长距离运输水生动物呈现为巨大。
7、的挑战， 因为储藏水变得 受含氮废物污染， 而氧含量减少。氨和亚硝酸盐可通过有机物质 ( 例如粪便物质 ) 和过量 饲料的降解而生成。温度、 pH 和氧水平亦影响氨生成。在缺乏天然存在的细菌 ( 即在储藏 容器或罐中 ) 时， 增加的氨水平造成毒性环境， 增加血 pH， 减少血中氧的传导率， 影响鳃健 康， 并增加水生生物的死亡率。因此， 不仅存在对硝化含水生生物的液体经济的、 可行的手 段的需求， 还存在对于对有在特别低温度条件下需要长期存活的活水生动物的运输和储藏 而言， 经济的、 可行的手段的需求。 发明内容 0006 在一个方面， 本公开提供了用于硝化含水生生物的液体的工艺 / 方法，。
8、 其包括将 细菌组合物导入该液体。所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌。液体的温 度低于或等于 10。 0007 在一个方面， 本公开提供了用于在液体中维持亚硝酸盐或氨水平的工艺 / 方法， 其中液体的温度低于或等于 10， 该工艺 / 方法包括将细菌组合物导入所述液体， 所述细 菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌。 0008 在另一个方面， 本公开提供了用于在含氨或含亚硝酸盐的液体中保护水生生物的 工艺 / 方法， 其包括将所述水生生物在细菌组合物的存在下储藏， 所述细菌组合物含有氨 氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌。 0009 在一个方面， 本公开提供了用于在含有氨、 亚硝酸盐或。
9、其组合的液体中拯救水生 生物的工艺 / 方法， 即将细菌组合物导入该液体。所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝 酸盐氧化细菌。在导入之后， 所述细菌组合物立即开始氧化液体中存在的任何氨和亚硝酸 盐。 0010 在另一个方面， 本公开提供了用于在含液体的罐中运输活的水生生物的工艺 / 方 法， 其包括将所述水生生物导入所述含液体的罐和将细菌组合物导入所述液体。所述细菌 说 明 书 CN 103228129 B 3 2/11 页 4 组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌。 所述液体的温度处于或高于所述液体的凝固 点。 0011 还在另一个方面， 本公开提供了水生生物资源化 (resourcing)。
10、 的工艺 / 方法， 其 包括调节水生生物环境中铵和亚硝酸盐的水平。 0012 还在另一个方面， 本公开涉及处理有此需要的水生生物的方法， 其包括使其中含 有水生生物的液体与有效量的细菌组合物相接触， 其中所述细菌组合物含有氨氧化细菌和 亚硝酸盐氧化细菌， 且其中所述液体的温度低于或等于 10。液体的合适温度的非限定性 实例为等于或低于 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2或 1的温度。其它合适的温度包 括液体温度处于 1至 10， 1 至 5或 1 至 3。在实施方案中， 将细菌组合物以能够去 除 0.25-25mg N-NH3/L/hr 的量添加至所述液体中。在实施方案中， 添加至。
11、所述液体的氨 氧化细菌的量为足以去除 0.25-25mg N-NH3/L/hr 的量。在实施方案中， 添加至所述液体 的亚硝酸盐氧化细菌的量为足以去除 0.25-25mg N-NH3/L/hr 的量。在实施方案中， 所述 细菌组合物含有 Nitrosomonas eutropha 作为氨氧化细菌和维氏硝化杆菌 (Nitrobacter winogradskyi)作为亚硝酸盐氧化细菌。 在实施方案中， 所述细菌组合物含有Nitrosomonas eutropha 与维氏硝化杆菌的组合。在实施方案中， 所述细菌组合物含有作为氨氧化细菌的 Nitrosomonas eutropha 与作为亚硝酸盐氧。
12、化细菌的维氏硝化杆菌的组合。 0013 本公开包括本文中所述的方面和实施方案的组合。 0014 发明详述 0015 术语 “水生生物” 包括但不限于海鱼 (marine fish)， 贝类 / 甲壳类 (shellfish)， 和所有水生动物， 其包括但不限于海水鱼， 淡水鱼， 甲壳类， 软体动物和爬行类。 水生生物亦 包括商业上重要的动物， 其包括但不限于虾， 鳗鱼， 龙虾， 牡蛎， 蛤和饵料鱼 (bait fish)。 0016 本文中所述的工艺 / 方法的细菌组合物能够以环境安全的方式促进对于水生生 物为健康的环境， 即减少氨和亚硝酸盐毒性， 减少废物或淤泥蓄积， 去除过量的营养物， 降。
13、 解有机化合物如过量的水生生物食物和废物， 以及增加水澄清度。细菌组合物利用至少两 种硝化细菌的组合， 其彼此合作以将有害的氨首先转化为亚硝酸盐， 然后转化为无害的硝 酸盐。随着氨和亚硝酸盐水平增加， 所述细菌组合物能够以允许有效硝化的速率生长。无 论在将所述细菌组合物导入水生生物环境之前由水生生物消耗的食物水平， 本文中所述的 细菌组合物能够进一步氧化氨和亚硝酸盐。 0017 提供了用于硝化含水生生物的液体的工艺 / 方法。在一个实施方案中， 用于硝 化含水生生物的液体的工艺 / 方法包括将细菌组合物导入所述液体的步骤。所述细菌组 合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌。所述细菌组合物能够在当。
14、液体温度低于或等 于 10时， 氧化可存在于液体中的氨和亚硝酸盐。所述液体的合适温度的非限定性实例为 等于或低于 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2或 1的温度。在实施方案中， 所述液体 的温度为 1至 10， 1 至 5或 1 至 3。细菌组合物的合适组合的非限定性实例包括 Nitrosomonas eutropha 与维氏硝化杆菌的组合， 和亚硝化球菌属 (Nitrosococcus) 与硝 化球菌属 (Nitrococcus) 的组合。 0018 在一个实施方案中， 以低于或等于 10的温度维持液体中亚硝酸盐或氨水平。所 述工艺 / 方法包括将细菌组合物导入液体的步骤， 所述细。
15、菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝 酸盐氧化细菌。在所述工艺 / 方法的一个实施方案中， 所述液体含有至少一种水生生物。 说 明 书 CN 103228129 B 4 3/11 页 5 在实施方案中， 所述液体含有多种生物， 如两种或多种， 三种或多种， 四种或多种， 五种或多 种， 六种或多种， 七种或多种， 八种或多种， 九种或多种， 或十种或多种， 如 20、 30、 40、 50 种 或更多种。 0019 含氨或含亚硝酸盐的液体中的水生生物可根据工艺 / 方法保护， 所述工艺 / 方法 包括将水生生物在细菌组合物存在下储藏的步骤， 所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝 酸盐氧化细菌。 0020。
16、 困苦中(in distress)或另外呈现一种或多种作为污染的储藏条件的结果的物理 损伤的迹象的水生生物可在含氮或含亚硝酸盐的液体中通过工艺 / 方法拯救， 所述工艺 / 方法包括将细菌组合物导入含水生生物的液体。 所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸 盐氧化细菌。在导入之后， 所述细菌组合物开始以立即或基本上立即的方式氧化任何存在 于液体中的氨或亚硝酸盐， 其提供了从硝化的快速恢复， 由此防止水生生物的死亡或永久 性物理损伤。在实施方案中， 在如 1 至 10 小时的时间之后， 所述细菌组合物开始氧化液体 中存在的任何氨或亚硝酸盐。在实施方案中， 在如 5、 6、 7、 8、 9 或 10。
17、 个小时的时间之后， 所 述细菌组合物开始氧化液体中存在的任何氨或亚硝酸盐。 0021 亦提供了用于运输含液体的罐中的活的水生生物的工艺 / 方法。所述工艺 / 方法 包括将水生生物导入含液体的罐， 并将细菌组合物导入所述液体的步骤。所述细菌组合物 含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌。将液体的温度维持在所述液体的凝固点或以上。在 一个实施方案， 所述液体包含用于降低液体标准凝固点的组分， 其包括但不限于乙醇、 碳酸 氢钠、 硫酸铵、 氯化钙、 乙酸钙镁 (calcium magnesium acetate)、 氯化镁、 氯化钾和氯化钠。 0022 提供了水生生物资源化的工艺。 所述工艺包括调节水。
18、生生物环境中铵和亚硝酸盐 的水平。在实施方案中， 在 7.0 至 8.5 的 pH， 将铵和硝酸盐维持或调节至 0 至 10ppm N-NH3。 在实施方案中， 在7.0至8.5的pH， 将铵和亚硝酸盐维持或调节至1至10ppm N-NH3。 在实施 方案中， 在 7.0 至 8.5 的 pH， 将铵和硝酸盐维持或调节至 1 至 5ppm N-NH3。在实施方案中， 在 7.0 至 8.5 的 pH， 将铵和硝酸盐维持或调节至 1 至 3ppm N-NH3。在一个实施方案中， 调节 铵和亚硝酸盐的水平通过将细菌组合物导入所述环境而实现。 所述细菌组合物含有氨氧化 细菌和亚硝酸盐氧化细菌。所述工。
19、艺 / 方法可作为资源化方案的一部分整合于用于在控制 条件下培育、 培养或维持水生生物的水产养殖 (aquaculture)、 海水养殖 (mariculture) 或 养耕共生 (aquaponics) 项目中。 0023 本文中提供的工艺 / 方法的细菌组合物包括至少一种氨氧化细菌和至少一种亚 硝酸盐氧化细菌的聚生体 (consortium)。合适的氨氧化细菌包括但不限于亚硝化球菌属， Nitrosomonas eutropha， 及其组合。合适的亚硝酸盐氧化细菌包括但不限于， 维氏硝化杆 菌， 硝化球菌属， 及其组合。 0024 在一个实施方案中， 所述细菌组合物包括聚生体， 所述聚生体。
20、包括作为氨氧化细 菌的亚硝化球菌属和作为亚硝酸盐氧化细菌的硝化球菌属。在一个优选实施方案中， 所 述细菌组合物包括聚生体， 所述聚生体包括作为氨氧化细菌的 Nitrosomonas eutropha 和作为亚硝酸盐氧化细菌的维氏硝化杆菌。所述氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌可彼此 组合或与其它细菌 ( 例如芽孢杆菌属 (Bacillus)， 如商品 Prawn Bac PB-628(Novozymes Biologicals 的产物 )， 肠杆菌属 (Enterobacter) 或假单胞菌属 (Pseudomonas) 一同使 用。 说 明 书 CN 103228129 B 5 4/11 页 6 。
21、0025 所述细菌组合物可作为液体、 冻干粉、 或生物膜(例如在麸皮或玉米谷蛋白上)配 制。在一个优选实施方案中， 所述细菌组合物作为可即用 (ready-to-use) 的液体配制。在 一个实施方案中， 将氨氧化细菌接种至 0.01-20mg N-NH3/L/hr 的 NH3氧化速率。在一个优 选实施方案中， 将氨氧化细菌接种至 0.3-6mg N-NH3/L/hr 的 NH3氧化速率。在一个实施方 案中， 将亚硝酸盐氧化细菌接种至 0.003-6mg N-NO2/L/hr 的 NO2氧化速率。在一个优选实 施方案中， 将亚硝酸盐氧化细菌接种至 0.01-3mg N-NO2/L/hr 的 N。
22、O2氧化速率。 0026 所 述 细 菌 组 合 物 可 通 过 本 领 域 中 已 知 方 法 ( 参 见 例 如 H Koops,U Purkhold,A Pommerening-Roser,G Timmermann 和 M Wagner,“The Lithoautotrophic Ammonia-Oxidizing Bacteria,“ 于 M.Dworkin 等编 ,The Prokaryotes:An Evolving Electronic Resource for the Microbiological Community,第3版,release3.13,2004, Springe。
23、r-Verlag,New York) 在分批培养中进行培养。 0027 在硝化含水生生物的液体的条件下， 本公开的细菌组合物可为硝化聚生体浓缩 物， 将其以 16 升每 1500 升待处理的液体的起始比率添加至所述液体。在一个优选实施方 案中， 将本公开的浓缩物以 8 升每 1500 升待处理的液体的起始比率添加至所述液体。在一 个实施方案中， 可任选地以2升每1500升待处理的液体的比率将本公开的细菌聚生体的维 持剂量添加至所述液体， 例如每两周一次。 在一个优选实施方案中， 可任选地以1升每1500 升待处理的液体的比率将本公开的细菌聚生体的维持剂量添加至所述液体， 例如每两周一 次。 0。
24、028 在水生生物拯救的条件下， 本公开的细菌组合物可为硝化聚生体浓缩物， 将其以 24升每1500升待处理的液体的起始比率添加至所述液体。 在一个优选实施方案中， 将本公 开的浓缩物以 12 升每 1500 升待处理的液体的起始比率添加至所述液体。在一个实施方案 中， 可任选地以 12 升每 1500 升待处理的液体的比率将本公开的细菌聚生体的维持剂量添 加至所述液体， 例如每两周一次。在一个优选实施方案中， 可任选地以 1.5 升每 1500 升待 处理的液体的比率将本公开的细菌聚生体的维持剂量添加至所述液体， 例如每两周一次。 0029 在一个实施方案中， 本公开的细菌组合物所导入的液体。
25、是淡水。在另一个实施 方案中， 所述液体是盐水。在一个替代实施方案中， 所述液体是淡水和盐水的组合。可 将水生生物储藏在罐或容器中所容纳的液体中。合适的罐或容器的非限定性实例可从 Aqualife(Hoersholm,Denmark) 获得。 0030 本文中提供的工艺 / 方法允许在维持在低于或等于 10的温度的液体中处理、 拯 救、 维持或保护水生生物。 在另一个实施方案中， 本文中提供的工艺允许在维持在低于或等 于5的温度的液体中处理、 拯救、 维持或保护水生生物。 还在另一个实施方案中， 本文中提 供的工艺允许在维持在低于或等于 4的温度的液体中处理、 拯救、 维持或保护水生生物。 0。
26、031 在实施方案中， 本公开涉及处理有此需要的水生生物的方法， 包括将其中含有水 生生物的液体与有效量的细菌组合物相接触， 其中所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝 酸盐氧化细菌， 且其中所述液体的温度低于或等于10。 在实施方案中， 有效量的细菌组合 物为对于有益作用为充分的量。有益作用的非限定性实例包括改善生物质的品质， 造成非 毒性条件， 降低血pH， 增加血中的氧传导率， 改善鳃健康， 和减少水生生物的死亡率。 所述有 益作用亦可观察为生物质或容纳生物质的水的改善外观。在实施方案中， 将所述细菌组合 物以能够去除 0.25-25mg N-NH3/L/hr 的量添加至液体中。在实施方案中。
27、， 将所述细菌组合 说 明 书 CN 103228129 B 6 5/11 页 7 物以能够去除 1-10mg N-NH3/L/hr 的量添加至液体中。在实施方案中， 添加至所述液体的 氨氧化细菌的量为足以去除 0.25-25mg N-NH3/L/hr 的量。在实施方案中， 添加至所述液体 的亚硝酸盐氧化细菌的量为足以去除 0.25-25mg N-NH3/L/hr 的量。在实施方案中， 所述细 菌组合物含有作为氨氧化细菌的Nitrosomonas eutropha和作为亚硝酸盐氧化细菌的维氏 硝化杆菌。在实施方案中， 所述细菌组合物含有 Nitrosomonas eutropha 与维氏硝化杆。
28、菌 的组合。在实施方案中， 所述细菌组合物含有作为氨氧化细菌的亚硝化球菌属与作为亚硝 酸盐氧化细菌的硝化球菌属的组合。 0032 在实施方案中， 本文中提供的工艺 / 方法进一步允许在液体中处理、 拯救、 维持或 保护水生生物， 即将所述液体中存在的铵或亚硝酸盐氧化至少 14 日的连续期间。在一个优 选实施方案中， 所述连续期间为至少 28 日。在一个特别优选的实施方案中， 所述连续期间 为至少 45 日。在实施方案中， 所述连续期间为 1 日、 2 日、 3 日、 4 日、 5 日、 6 日、 1 周或更久， 1 个月或更久， 2 个月或更久， 3 个月或更久。 0033 在一个实施方案中，。
29、 将至少一种缓冲化合物添加至液体以稳定液体的 pH 和碱度。 在一些实施方案中， 所述至少一种缓冲化合物是 NaHCO3， K2CO3， 或其组合。将液体的 pH 维 持在约 6.8 至约 8.5 的范围， 具有 20 至 200ppm 的碱度。在一个优选实施方案中， 将液体的 pH 维持在约 7.2 至约 8.2 的范围， 具有 50 至 150ppm 的碱度。在一个特别优选的实施方案 中， 将液体的 pH 维持在约 7.8， 具有 100ppm 的碱度。 0034 在一个实施方案中， 本文中列出的工艺 / 方法可在罐中或容器中进行。可使用罐 或容器内的提袋(totes)， 盒， 桶或其它装。
30、置以容纳(contain or hold)水生生物。 罐或容器 内的温度优选维持恒定。可对所述罐或容器提供多种维持液体温度的手段， 如例如在罐或 容器额内侧或外侧的隔热层， 和任选地， 热交换器。 所述罐或容器可在其底部包含一个或多 于一个下水口 (drain) 和一个或多于一个收集用接收容器 (receptacle)， 其优选地安装在 容器之下。可使用任何已知的下水口， 其任选地与所述接收容器中用于收集 / 泵送 (pump) 来自容器的液体的装置组合。 0035 在一个实施方案中， 所述罐或容器任选地配置有至少一个生物过滤器。所述生物 过滤器通过将有害的氨转化为无害的硝酸盐而起减少或消除水。
31、交换的作用， 由此允许闭环 系统。 使用的生物过滤器的类型可为， 例如可扩展的介质过滤器(media filter)， 其包含填 充水的生物过滤器罐， 塑料生物过滤器珠， 并接种本文中所述的细菌组合物。 可使用任何其 它类型的本领域技术人员已知的生物过滤器。 0036 所述罐或容器可通过常规手段如桨轮或喷射泵。在一个实施方案中， 氧饱和维持 在约 40% 至约 100% 的水平。在一个优选实施方案中， 氧饱和维持在约 70% 至约 100% 的水 平。 在一个特别优选的实施方案中， 氧饱和维持在约100%的水平。 在一个替代实施方案中， 所述罐或容器亦可通过非机械、 自然的手段而未通气。水生生。
32、物受保护的罐或容器亦可配 置有液体过滤系统 ( 例如过滤管 )( 可从 Aqualife(Hoersholm,Denmark) 获得 )。 0037 亦可对所述罐或容器提供针对温度、 湿度、 压力、 氨、 二氧化碳、 pH 或其它任何视为 对于保护水生生物必需的参数的探针 / 传感器。所述罐或容器可进一步包括生物储备池 (bio-reservoir tank)， 一个或多个蛋白质撇渣器 (protein skimmer)， 一个或多个转鼓过 滤器， 任何相关的用于排干和再循环液体的管道 ( 例如阀门 )， 紫外单元， 和用于处理传回 罐的水的毒性的臭氧单元 ( 若对于某些应用需要 )。可将对于。
33、本领域技术人员已知的其它 说 明 书 CN 103228129 B 7 6/11 页 8 组分添加至所述容器。 可将抗生素如亚胺环己酮添加至液体以抑制原生生物如阿米巴原虫 的生长。 0038 下述实施例仅就说明目的包含于本文， 且不旨在限制本公开的范围。 实施例 0039 说明实施例 1 0040 进行实验以验证细菌在 4的罐中控制氨水平的能力。使用了具有 1.500 升容量 的海水罐(可从Aqualife(Hoersholm,Denmark)获得)， 和用于冷却、 通气和水循环的系统。 0041 准备了两个对照组的罐 ( 组 A ： 罐 1 和罐 2) 和两个实验组的罐 ： ( 组 B ： 。
34、罐 1 和罐 2)， 其内容总结于表 1。 0042 表 1 0043 0044 将每个罐充以大约 1.100 升淡水， 并将温度降低至 4。以 100% 氧饱和将 pH 维 持在 7.8。制备六升细菌聚生体 (PTA-6232) 并将其添加至组 B 中的每个罐 ( 处理罐 )， 其 中所述聚生体含有 Nitrosomonas eutropha(1500mg NH3/L/Hr 的平均氨氧化细菌 (AOB) 活 性 ) 和维氏硝化杆菌 (1238mg NO2/L/Hr 的亚硝酸盐氧化细菌 (NOB) 活性 )。将组 B 中的两 个罐 ( 处理罐 ) 用 200 克的 NaHCO3和 12 克的 。
35、K 2CO3处理。接着， 将生物质 ( 鳗鲡 ) 添加至 每个罐 ( 参见表 1)。定期测量铵、 硝酸盐和亚硝酸盐的水平。对于每个罐的试验结果列于 表 2-5。 0045 表 2 0046 0047 表 3 0048 说 明 书 CN 103228129 B 8 7/11 页 9 0049 表 4 0050 0051 表 5 0052 0053 在对照组(组A)的罐1中， 鳗鲡显示中等的痛苦迹象， 且一些死亡在第13日发生。 当刺激时， 鳗鲡显示行为迟缓。水呈现油腻的感觉， 且显得浑浊。实验在第 13 日终止。在 对照组 ( 组 A) 的罐 2 中， 鳗鲡显示明显的痛苦迹象， 表现为红色的鳃和。
36、迟缓的行为和运动。 记录了一些死亡， 且报道水具有油腻的感觉并显得浑浊。实验在第 13 日终止。 0054 在实验组 ( 组 B) 的罐 1 中， 鳗鲡未显示任何应激迹象， 且在第 22 日未发生任何死 亡。水报道为 “清澈透明” ， 且鳗鲡当刺激时是完全活跃的。在实验组 ( 组 B) 的罐 2 中， 鳗 说 明 书 CN 103228129 B 9 8/11 页 10 鲡未显示任何应激迹象， 且未发生任何死亡。 水报道为 “清澈透明” ， 且鳗鲡当刺激时是完全 活跃的。实验在第 13 日终止。这些结果说明在低温施用硝化细菌可在否则造成致死或有 害水平的氨和亚硝酸盐的条件下保护水生动物的生命。。
37、 0055 预测实施例 1 0056 将在低温下容纳于含液体的罐或容器的多种生物质用根据本公开的聚生体处理。 添加该聚生体以处理、 维持、 保护或拯救水生生物， 如例如贝类 / 甲壳类、 海水鱼、 淡水鱼、 甲壳动物、 软体动物或爬行类。 0057 预测实施例 2 0058 使用作为氨氧化细菌的亚硝化球菌属和作为亚硝酸盐氧化细菌的硝化球菌属的 聚生体以根据说明实施例 1 中列出的步骤处理在低温容纳于含液体的罐或容器的多种生 物质。添加该聚生体以处理、 维持、 保护或拯救水生生物， 如例如贝类 / 甲壳类、 海水鱼、 淡 水鱼、 甲壳动物、 软体动物或爬行类。 0059 预测实施例 3 0060。
38、 根据说明实施例 1 中列出的步骤用聚生体处理在低温容纳于含液体的罐或容器 的多种生物质来源。 添加所述聚生体以将存在于所述液体中的水生生物维持或保护至少30 日的期间。所述水生生物包括但不限于贝类 / 甲壳类、 海水鱼、 淡水鱼、 甲壳动物、 软体动物 或爬行类。 0061 预测实施例 4 0062 可根据本公开用聚生体处理容纳于含液体的罐或容器的多种生物质来源。然而， 将温度从32的起始温度在11日的期间持续降低至1的中间温度。 当达到1的中间温 度时， 将温度在测试期的剩余11日中持续回升至32。 在整个温度变化过程中添加聚生体 以维持或保护水生生物。所述水生生物包括但不限于贝类 / 甲。
39、壳类、 海水鱼、 淡水鱼、 甲壳 动物、 软体动物或爬行类。 0063 说明实施例 2 0064 Nitrosomonas eutropha 和维氏硝化杆菌的低温硝化 0065 准备含有三个组， 每组三次重复测试试管的试验设定。将每个试管准备以 100mL 的 35ppt 盐水， pH8.0 和碱度 100ppm。在整个实验过程中， 通过使用空气扩散将溶解氧维 持在 4.0ppm。使用温度控制的水浴进行温度控制， 所述温度控制提供 +/-0.1的准确度。 0066 对于所有组， 在实验的起始日添加 20ppm 的氨。然后， 将 4000ppm 的硝化聚生体在 实验第 0 日添加至处理试管， 所。
40、述聚生体含有 Nitrosomonas eutropha(1500mg N-NH3/L/ hr 的平均氨氧化细菌 (AOB) 活性 ) 和维氏硝化杆菌 (1238N-NO2/L/hr 的亚硝酸盐氧化细菌 (NOB) 活性 )。 0067 在实验过程中定时读取氨读数 ( 表 6)。 0068 表 6 说 明 书 CN 103228129 B 10 9/11 页 11 0069 0070 实验说明含有高水平氨的水性溶液可在低温处理。 0071 说明实施例 3 0072 亚硝化球菌属和硝化球菌属进行的冷硝化 0073 如与说明实施例 2 中所述相同地准备含有三组， 每组三个重复试管的试验设定。 现在。
41、， 将 4000ppm 的硝化聚生体 ( 含有具有类似氨和亚硝酸盐氧化速率水平的亚硝化球菌 属和硝化球菌属 ) 在实验第 0 日添加至处理试管。 0074 在实验过程中定时读取氨读数 ( 表 7)。 0075 表 7 0076 0077 本发明通过下述编号段落描述 ： 0078 1. 一种用于硝化含水生生物的液体的方法， 其包括 ： 说 明 书 CN 103228129 B 11 10/11 页 12 0079 将细菌组合物导入该液体， 其中所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化 细菌， 且其中液体的温度低于或等于 10。 0080 2. 一种用于在液体中维持或降低亚硝酸盐或氨水平的方法，。
42、 其中液体的温度低于 或等于 10， 该方法包括将细菌组合物导入所述液体， 所述细菌组合物含有氨氧化细菌和 亚硝酸盐氧化细菌。 0081 3. 段 2 的方法， 其中所述液体进一步包含至少一种水生生物。 0082 4. 一种用于在含氨或含亚硝酸盐的液体中保护水生生物的方法， 其包括 0083 将所述水生生物在细菌组合物的存在下储藏， 所述细菌组合物含有氨氧化细菌和 亚硝酸盐氧化细菌。 0084 5. 一种用于在含有氨、 亚硝酸盐或其组合的液体中拯救水生生物的方法， 其包 括 ： 0085 将细菌组合物导入该液体， 其中所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化 细菌， 且其中在导入之后， 所述。
43、细菌组合物开始氧化液体中存在的任何氨和亚硝酸盐。 0086 6. 段 5 的方法， 其中所述液体的温度低于或等于 10。 0087 7. 一种用于在含液体的罐中运输活的水生生物的方法， 其包括 0088 将所述水生生物导入所述含液体的罐 ； 和 0089 将细菌组合物导入所述液体， 其中所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧 化细菌， 且其中所述液体的温度等于或高于所述液体的凝固点。 0090 8. 段 7 的方法， 其中所述液体含有用于降低所述液体的标准凝固点的组分。 0091 9. 段 7 的方法， 其中所述罐包含用于容纳水生生物的装置， 用于维持所需温度的 装置， 和用于通气的装置。 。
44、0092 10. 段 9 的方法， 其中所述罐进一步包括生物过滤器。 0093 11. 段 1、 2 或 7 任一项的方法， 其中将所述细菌组合物以 1 至 16 升的细菌组合物 每 1500 升液体的比率导入所述液体。 0094 12.段1的方法， 其中所述细菌组合物具有50-2000mg N-NH3/L/Hr的氨氧化能力。 0095 13. 段 1、 2、 4、 5 或 7 任一项的方法， 其中所述液体是盐水， 淡水， 或其组合。 0096 14. 段 1、 2、 4、 5 或 7 任一项的方法， 其中所述液体的温度低于或等于 5。 0097 15. 段 1、 2、 4、 5 或 7 任一。
45、项的方法， 其中所述液体的温度等于或低于 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2或 1。 0098 16.段1、 2、 4、 5或7任一项的方法， 其中所述液体的温度为1至10， 1至5或 1 至 3。 0099 17. 段 1、 2、 4、 5 或 7 任一项的方法， 其中所述液体的 pH 为 6.8 至 8.5。 0100 18. 段 1、 2、 4、 5 或 7 任一项的方法， 其中所述液体呈现至少 40% 的氧饱和。 0101 19.段1、 2、 4、 5或7任一项的方法， 其进一步包括将至少一种缓冲化合物添加至液 体的步骤。 0102 20. 段 19 的方法， 其中所述至少一。
46、种缓冲化合物为 NaHCO3， K2CO3， 或其组合。 0103 21.段1、 2、 4、 5或7任一项的方法， 其中将所述水生生物维持在液体中至少14日。 0104 22. 段 1、 2、 4、 5 或 7 任一项的方法， 其中所述细菌组合物包含作为氨氧化细菌的 Nitrosomonas eutropha 和作为亚硝酸盐氧化细菌的维氏硝化杆菌。 说 明 书 CN 103228129 B 12 11/11 页 13 0105 23.段1、 2、 4、 5或7任一项的方法， 其中所述细菌组合物包含作为氨氧化细菌的亚 硝化球菌属和作为亚硝酸盐氧化细菌的硝化球菌属。 0106 24. 权利要求 1。
47、、 2、 4、 5 或 7 任一项的液体。 0107 25. 一种水生生物资源化的方法， 其包括 0108 调节水生生物环境中铵和亚硝酸盐的水平。 0109 26. 权利要求 25 的方法， 其中调节铵和亚硝酸盐的水平的步骤包括将细菌组合物 导入环境， 其中所述细菌组合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌。 0110 27. 段 26 的方法， 其中所述细菌组合物包含作为氨氧化细菌的 Nitrosomonas eutropha 和作为亚硝酸盐氧化细菌的维氏硝化杆菌。 0111 28. 一种处理有此需要的水生生物的方法， 其包括使其中含有水生生物的液体与 有效量的细菌组合物相接触， 其中所述细菌组。
48、合物含有氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌， 且其中所述液体的温度低于或等于 10。 0112 29. 段 28 的方法， 其中所述液体的温度等于或低于 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2或 1。 0113 30. 段 28 的方法， 其中所述液体的温度为 1至 10， 1 至 5或 1 至 3。 0114 31. 段 28 的方法， 其中添加至所述液体的细菌组合物能够去除 0.25-25mg N-NH3/ L/hr。 0115 32.段28的方法， 其中添加至所述液体的氨氧化细菌能够去除至少0.25mg N-NH3/ L/hr。 0116 33.段28的方法， 其中添加至所述液体的亚硝酸盐氧化细菌能够去除至少0.25mg N-NH3/L/hr。 0117 应理解的是可对本文中公开的实验方案进行多种修饰。因此， 上述描述不应视作 对实施方案的限制， 而仅仅为其示例。本领域技术人员可预见所附权利要求的范围和精神 之内的其他修饰。 说 明 书 CN 103228129 B 13 。