一种解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在对虾饲料中的应用.pdf

《一种解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在对虾饲料中的应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在对虾饲料中的应用.pdf（8页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 CN 103478509 A (43)申请公布日 2014.01.01 CN 103478509 A (21)申请号 201310505342.4 (22)申请日 2013.10.24 CGMCC NO. 6249 2012.06.21 A23K 1/18(2006.01) A23K 1/17(2006.01) (71)申请人 南京农业大学 地址 210095 江苏省南京市卫岗 1 号 申请人 无锡健宏生物科技有限公司 无锡恒泽元生物科技有限公司 (72)发明人 陆兆新 赵威钢 施雨含 吕凤霞 别小妹 张充 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 。

2、代理人 张素卿 (54) 发明名称 一种解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及 其在对虾饲料中的应用 (57) 摘要 本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽的 生产方法及其在对虾饲料中的应用， 属于农业领 域中的水产养殖技术领域和生物技术领域。以保 藏号为CGMCC No.6249的解淀粉芽孢杆菌fmb-50 为菌种， 依次通过种子培养、 扩大培养和发酵生 产获得发酵液 ； 发酵液经微滤去除菌体或经膜过 滤和纳滤， 加入玉米淀粉或多孔淀粉吸附、 喷雾 干燥得所述的抗菌物质饲料添加剂抗菌效价为 40000 50000IU 或 250000IU/g。本发明利用解 淀粉芽孢杆菌 fmb-50 为原料发酵生。

3、产抗菌物质， 可大规模工业化生产， 生产周期短， 生产成本大大 降低， 用于对虾饲料中， 可以降低死亡率 , 提高对 虾的饲料利用率、 促进对虾非专一性免疫反应和 提高能量代谢水平。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书6页 (10)申请公布号 CN 103478509 A CN 103478509 A 1/1 页 2 1. 一种解淀粉芽孢杆菌抗菌物质饲料添加剂的生产方法， 其特征在于， 包含以下步 骤 ： 以保藏号为 CGMCC No.6249 的解淀粉芽孢杆菌 (。

4、Bacillus amyloliquefaciens) fmb-50 为菌种， 依次通过种子培养、 扩大培养和发酵生产获得发酵液 ； 发酵液经微滤去除 菌体， 加入 10%-15%（w/v） 玉米淀粉或多孔淀粉吸附、 喷雾干燥得所述的抗菌物质饲料添 加剂 ； 或者发酵液经微滤去除菌体后， 再经 10KD 的膜超滤和纳滤， 加入 10-15%（w/v） 玉米 淀粉或多孔淀粉吸附、 喷雾干燥得所述的抗菌物质饲料添加剂 ； 所述的抗菌物质饲料添加 剂抗菌效价为 40000250000 IU/g ； 其中， 所述的种子培养和扩大培养的培养基为 ： 葡萄糖 3.5g/L、 胰蛋白胨 10g/L、 酵母膏。

5、 5g/L、 氯化钠 5g/L， pH7.0 ； 所述的发酵生产使用的液体发 酵培养基为 ： 麦芽浸粉 1g/L , 黄豆粉 15g/L ,CaCO3 6.68g/L， FeSO4 0.4g/L ,MgCl2 2g/ L， 初始pH 7.0 ； 发酵生产中按体积比 25%接种解淀粉芽孢杆菌fmb50， 1000 L发酵罐液体 深层发酵 36 40 h， 发酵工艺参数为 ： 温度 35 37， 搅拌转速 180 r min， 通气量 80 m3/h， 罐压 0.100.12 Mpa， pH7.0。 2. 按照权利要求 1 所述的生产方法制备得到的解淀粉芽孢杆菌抗菌物质饲料添加剂。 3. 权利要求。

6、 2 所述的解淀粉芽孢杆菌抗菌物质饲料添加剂在制备鱼或虾饲料中的应 用。 4. 根据权利要求 3 所述的应用， 其特征在于， 所述的虾为凡纳滨对虾。 5. 根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于， 在凡纳滨对虾饲料中添加含抗菌物质的 解淀粉芽孢杆菌抗菌物质饲料添加剂， 添加量为每公斤饲料中添加200000400000U抗菌 物质。 权 利 要 求 书 CN 103478509 A 2 1/6 页 3 一种解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在对虾饲料 中的应用 0001 技术领域 0002 本发明属于农业领域中的水产养殖技术领域和生物技术领域， 涉及一种解淀粉芽 孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及。

7、其在对虾饲料中的应用。 背景技术 0003 水产养殖业在生产和加工过程使用抗生素， 主要是预防 （预防剂） 和治疗 （治疗药） 细菌病。饲料中添加抗生素可以防治水产疾病、 促进水产产量增加和节约饲料。但是， 经常 使用抗生素会在养殖环境中的菌群中形成耐药性， 一旦致病力强的细菌对人畜共用的抗生 素获得了耐药性， 人类感染后， 有可能本来有效的抗生素疗效会减小甚至无效。另外， 残留 在水产品中的抗生素进入人体， 直接影响人类的健康。 0004 食品和饲料在美国属于同一管理范围， 适用于同一部法律。丹麦政府为了保证食 品安全， 制定了饲料生产中禁止使用抗生素的规定 ； 2006 年欧盟已禁止在动物。

8、饲养中使用 抗生素作为饲料促进剂。 随着人民生活水平的提高， 对动物产品的需求量越来越大， 对绿色 食品的呼声越来越高。 我国的一些农副产品由于农药、 抗生素等药物残留， 重金属含量等技 术指标超过欧盟及主要进口国的质量标准， 被拒收、 扣留和终止合同等。近年来 , 动物产 品中的抗生素药物残留问题越来越受到人们的重视， 我国已严格限制将某些抗生素作为保 健和促生长剂用于饲料。2002 年， 农业部发布了 动物性食品中兽药最高残留限量 公告， 农业部最近表示， 为提升消费者对畜牧产品的信赖， 拟计划全面禁止在动物饲料中添加抗 生素。 我国是水产养殖生产大国， 但水产品的出口常常遇到抗生素残留而。

9、导致出口被拒， 影 响了我国的对外贸易。这表明传统抗生素必将逐渐淡出历史舞台， 寻找安全高效的抗生素 替代品就显得十分重要， 鉴于抗生素的不利影响， 开发通过调整动物胃肠道平衡而达到促 进生长、 维持动物健康、 无毒副作用的绿色饲料添加剂已成为人们研究的热点。 特别是在我 国未来养殖业的发展中， 政府将进一步加大对饲料、 兽药与畜产品卫生安全的监管力度， 积 极推动发展绿色养殖业。因此， 应用现代高科技手段研究和开发安全、 高效、 环保的抗菌添 加剂， 保障动物和人类自身的健康与安全， 才能使我国由养殖生产大国成为养殖生产强国， 实现养殖业的现代化。而目前针对养殖业， 市场上可用于替代抗生素类。

10、饲料添加剂几乎处 于空白状态。 0005 本发明即是针对上述问题， 开发一种基于解淀粉芽孢杆菌产生的抗菌物质的水产 饲料添加剂。抗菌肽 (Antibacterial Peptides) 是生物体产生的一种具有抗菌作用的多 肽类分子 , 一般分子量比较小， 通常小于 5kD, 是宿主防御病原微生物入侵的重要分子屏 障。迄今为止 , 已在许多生物包括昆虫、 鸟类、 动物、 植物及原核生物中发现 600 多种内源 性抗菌活性肽。 这些抗菌物质不仅有广谱抗细菌能力， 而且有的对真菌、 病毒及癌细胞也有 一定的抑杀作用。 此外， 还具有稳定性好、 水溶性好、 抗菌机理独特、 对高等动物正常细胞无 说 明。

11、 书 CN 103478509 A 3 2/6 页 4 害等特点， 属无毒副作用、 无残留、 无致细菌耐药性的一类环保型制剂。国外对抗菌肽已有 较多研究， 在动物生产实际中也已开始应用， 其作为饲料添加剂的使用效果已被实验证实， 并已形成一定的市场需求。 但动物源抗菌物质的抗菌谱窄， 通常只能抑制革兰氏阳性菌， 限 制了在饲料中的大规模使用。芽孢杆菌来源的抗菌脂肽是抗菌脂肽家族中的重要一员， 它 能特异性杀死竞争菌而对宿主本身无害， 其种类包括环形肽、 糖肽和脂肽， 如短杆菌肽、 杆 菌肽、 多黏菌素等。水产养殖动物终身生活在养殖水环境中， 养殖水体、 水产动物体表和肠 道内均有大量微生物， 。

12、这种体内外的微生态环境对水产养殖动物健康均有直接或间接的影 响。同时， 由于不同类型的动物体内外微生物环境不同， 因此， 对于抗菌饲料添加剂的需求 也不同。 例如适用于哺乳动物的抗菌饲料添加剂， 未必适用于水产动物， 而水产动物由于物 种的不同， 使用的饲料添加剂也有可能有很大不同。 0006 发明内容 0007 技术问题 本发明的目的是针对现有技术的上述不足， 提供淀粉芽孢杆菌来源的一种抗菌物质饲 料添加剂。 0008 本发明的另一目的是提供该抗菌物质饲料添加剂的制备方法。 0009 本发明的又一目的是提供该抗菌物质饲料添加剂的应用。 0010 技术方案 本发明的目的可通过如下技术方案实现 。

13、： 一种解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens) 抗菌物质饲料添加剂的制备方 法， 包含以下步骤 ： 以保藏号为 CGMCC No.6249 的解淀粉芽孢杆菌 fmb-50 为菌种， 依次通过种子培养、 扩 大培养和发酵生产获得发酵液 ； 发酵液经微滤去除菌体， 加入 10%-15%（g/100ml） 玉米淀粉 或多孔淀粉吸附、 喷雾干燥得所述的抗菌物质饲料添加剂， 所述的抗菌物质饲料添加剂抗 菌效价为 4000050000 IU/g ； 或者发酵液经微滤去除菌体后， 再经 10KD 的膜超滤和纳滤， 加入 10%-15% 玉米淀粉或多孔淀粉吸附、 喷雾干燥得所。

14、述的抗菌物质饲料添加剂 ； 所述的 抗菌物质饲料添加剂抗菌效价为 250000 IU/g 左右 ； 其中， 所述的种子培养和扩大培养的 培养基为 ： 葡萄糖 3.5g/L、 胰蛋白胨 10g/L、 酵母膏 5g/L、 氯化钠 5g/L， pH7.0 ； 115高压蒸 汽灭菌 30min ； 所述的发酵生产使用的液体发酵培养基为 ： 麦芽浸粉 1g/L , 黄豆粉 15g/L ,CaCO3 6.68g/L， FeSO4 0.4g/L ,MgCl2 2g/L， 初始pH 7.0 ； 发酵生产中按体积比 25%接种 解淀粉芽孢杆菌 fmb-50 （CGMCC No.6249） ， 1000 L 发酵。

15、罐液体深层发酵 36 40 h， 发酵工 艺参数为 ： 温度 33 37， 搅拌转速 180 r min， 通气量 80 m3/h， 罐压 0.100.12 Mpa， pH7.0。 0011 按照所述的制备方法制备得到的解淀粉芽孢杆菌抗菌物质饲料添加剂。 0012 本发明所述的解淀粉芽孢杆菌抗菌物质饲料添加剂在制备鱼或虾饲料中的应用 ； 优选在制备虾饲料中的应用， 进一步优选在制备凡纳滨对虾饲料中的应用。 0013 在凡纳滨对虾饲料中添加含抗菌物质的解淀粉芽孢杆菌抗菌物质饲料添加剂， 添 加量为每公斤饲料中添加 200000 400000IU 抗菌物质。 说 明 书 CN 103478509 。

16、A 4 3/6 页 5 0014 有益效果 : 1. 本发明中的微生物抗菌物质和动物源抗菌物质相比， 具有广谱高效抗菌的优势。 0015 2. 本发明利用保藏号为 CGMCC No.6249 的解淀粉芽孢杆菌 fmb-50 为原料发酵生 产抗菌物质脂， 可大规模工业化生产， 生产周期短， 生产成本大大降低， 且不受季节和气候 变化等外在环境的影响， 是克服抗菌物质实际应用技术瓶颈的最佳途径。 0016 3. 本发明解淀粉芽孢杆菌抗菌物质添加剂用于凡纳滨对虾饲料中， 可以降低死亡 率 , 提高凡纳滨对虾的饲料利用率、 促进凡纳滨对虾非专一性免疫反应和提高能量代谢水 平。 0017 4. 将本发明。

17、添加剂添加于凡纳滨对虾复合饲料中， 不使用抗生素， 也能较好地促 进生长和调节免疫， 对取代饲料抗生素添加和保障食品的安全具有重要意义。 0018 生物保藏 Fmb-50 为解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)， 2013 年 6 月 21 日保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 地址 北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号， 中国科学院微生物研究所， 保藏号为 CGMCC NO.6249。 0019 具体实施方式 0020 实施例 1 解淀粉芽孢杆菌 （Bacillus amyloliquefaciens） fmb-50 是Bacillus。

18、 amyloliquefaciens ES-2-4 经 N+离子诱变选育的高产突变株和亚硝基胍诱变获得的 高产突变株等经原生质体融合选育获得的高产抗菌脂肽的菌株， 命名为 fmb-50。B. amyloliquefaciensfmb-50 以玉米粉为碳源能获得最高的抗菌脂肽产量， 其产量是亲本菌 株 ES-2-4 的 3.4 倍。 姚树林， 陆兆新等， Taguchi 法优化B. amyloliquefaciens fmb-50 产 surfactin 工业发酵培养基 , 北京化工大学学报， 2012,39（4） ： 77-83。以 fmb-50 的 原始菌B. amyloliquefacie。

19、nsES-2-4、 B. subtilis 168和 B. subtilis fmbJ （所述菌株 均为公知公用， 见黄现青等， 枯草芽孢杆菌 fmbJ 产脂肽抑制点青霉效果及其桃防腐试验， 2008， 农业工程学报 ； 孙力军等， 培养基对解淀粉芽孢杆菌 ES-2 菌株产抗菌脂肽的影响， 2008， 中国农业科学 ； 中国科学院上海生物化学研究所遗传工程组， 应用转化方法从枯草杆 菌 168 中选育高产 - 淀粉酶产生菌， 1979， 生物化学与生物物理学报） 在同样的发酵条件 发酵， 分别取 100ml 的发酵液， 经离心除菌体、 酸沉， 沉淀物用甲醇溶解， 得到抗菌物质， 然 后对表 1。

20、 的菌株进行抗菌实验。采用 TSA（胰蛋白胨大豆琼脂培养基） 培养基 37培养副 溶血弧菌、 哈维弧菌、 溶藻弧菌和无乳链球菌， 在琼脂平板上打 5mm 孔在空中加入上述抗菌 物质 50L， 24h 后测定抑菌直径 （表 1） 。 0021 表 1 芽孢杆菌对水产病原菌的抑制效果 （抑菌圈 mm） 说 明 书 CN 103478509 A 5 4/6 页 6 nd: 未见抑菌圈 以解淀粉芽孢杆菌 （Bacillus amyloliquefaciens） fmb-50， 种子培养基扩大培养 ； 种 子培养基 ： 葡萄糖 3.5g/L、 胰蛋白胨 10g/L、 酵母膏 5g/L、 氯化钠 5g/L。

21、、 水 1000ml， pH7.0， 115高压蒸汽灭菌 30min， 经 10-16h 培养进入对数生长期， 接种到发酵罐。液体发酵培养 基 ： 发酵培养基 ： 麦芽浸粉 1g/L , 黄豆粉 15g/L ,CaCO3 6.68g/L， MnSO4 0.4g/L ,MgCl2 2g/L， 初始pH 7.0 ； 体积比 25%接种， 1000 L发酵罐液体深层发酵3640 h， 发酵工艺参数 为 ： 温度 33 37， 搅拌转速 180 r min， 通气量 80 m3/h， 罐压 0.100.12 Mpa， pH7.0。 发酵液采用孔径为 0.1m 的微孔滤膜微滤去除菌体， 以去除菌体以后的。

22、发酵液上清为基 准， 加入 10-15%（g/100ml） 玉米淀粉或多孔淀粉吸附、 喷雾干燥得抗菌物质添加剂。以E. coli为测定菌株， Nisin 为抗菌物质基准， 采用牛津杯法测定抗菌物质的效价， 干燥产品抗 菌效价为 40000 IU/g 左右。 0022 采用膜过滤设备 （江苏久吾高科技股份有限公司） 对发酵液处理， 获得抗菌物质 的组分。具体操作如下 ： 第一步用陶瓷微滤膜除去发酵液中解淀粉芽孢杆菌菌体和大于 0.1m 的杂质， 同时加 10L 清水洗涤微滤的截留部分 , 洗涤液再经过微滤 , 合并两次微滤 滤液。第二步用超滤膜 （10 KDa 的超滤膜） 除去微滤滤液中分子量大。

23、于 10 KDa 的可溶性杂 质 , 同上加 10L 清水洗涤超滤截留部分 洗涤液再经过超滤 , 收集两次超滤滤液。然后， 将超滤滤液经纳滤膜 （200Da） 除去小分子量的可溶性杂质和大部分水分， 收集含有抗菌物 质的组分。加入适量的玉米淀粉或多孔淀粉 , 喷雾干燥 , 得到高活性的抗菌物质添加剂 粉末。 以E. coli为测定菌株， Nisin为抗菌物质基准， 采用牛津杯法测定抗菌物质的效价， 抗菌活性达到大约 250000IU/g 干粉左右。 0023 实施例 2 将活化好的致病菌副溶血弧菌、 哈维氏弧菌、 溶藻弧菌、 无乳链球菌 （所述菌株均为公 知公用， 见陈吉祥等， 致病性哈维氏弧。

24、菌溶血素基因克隆及其检测， 2005， 中国水产科学 ； 翟 秀梅等， 副溶血弧菌对南美白对虾生理生化指标的影响， 2007， 上海水产大学学报 ； 鄢庆枇 等， 不同环境条件对溶藻弧菌粘附大黄鱼肠粘液的影响， 2006， 水产学报 ； 吴颖瑞等， 153 种 中草药对罗非鱼无乳链球菌和海豚链球菌的抑制活性研究， 西北农林科技大学学报， 2013） 分别接到 TSB（胰蛋白胨大豆液体培养基） 中， 361培养 46 h， 用 TSB 培养基调整细菌 OD600值， 至细菌浓度为 1108， 经 100 倍稀释后备用 （1106） 。鱼血清制备 ： 市场购买约 2 斤重红笛鲷活鱼， 从脊椎动脉抽。

25、血， 3000 rpm 离心 5 min 后取上清， 4冷藏备用。 0024 取 40000IU/g 抗菌物质添加剂 （实施例 1 第一种方法制备） 2 g， 分别倍比稀释， 然 后依次取 50L 加入 96 微孔板 111 孔中， 第 12 孔不加抗菌物质。然后在 112 孔中分别加 入细菌 10L （每孔终浓度 1105 CFU） ， 40 L 稀释液 （蒸馏水、 海水、 生理盐水、 2% 氯化钠或 说 明 书 CN 103478509 A 6 5/6 页 7 鱼血清） ， 第 12 孔为对照， 补加 50L 的稀释液代替抗菌物质添加剂， 每孔总体积为 100L。 将上述加样后酶标版放入无。

26、菌空盒中， 置于培养箱中， 28培养24 h。 然后用酶标仪测定各 微孔 OD600值， 结果见表 1。 0025 表 1. 解淀粉芽孢杆菌抗菌物质添加剂对几种海产鱼类致病菌的最低抑菌浓度 由表 1 可见， 淀粉芽孢杆菌抗菌物质对海水鱼类常见致病菌副溶血弧菌、 哈维氏弧菌、 溶藻弧菌、 无乳链球菌都有较好的抗菌作用。对海水中致病性哈维氏弧菌、 副溶血弧菌、 溶 藻弧菌和无乳链球菌等抗性 MIC50分别达到 25 g/kg、 30g /kg、 35g /kg、 38g /kg （表 1） 。 0026 解淀粉芽孢杆菌抗菌物质在鱼血清中对致病性哈维氏弧菌、 副溶血弧菌、 溶藻弧 菌和无乳链球菌的抗。

27、菌性作用更强， MIC50分别达18、 28、 30、 30g /kg， 说明芽孢杆菌抗菌物 质在血清中能更好地发挥抗菌作用。 0027 解淀粉芽孢杆菌抗菌物质在海水中仍然保持较高抗菌活性， 而蒸馏水中活性显著 低于其它组， 表明一定浓度的盐溶液有利于保持抗菌物质的活性。 0028 实施例 3 挑选外观正常， 体质健壮， 尾均体质量为1. 02 0.10 g的凡纳滨对虾作为试验用虾。 以鱼粉、 豆粕、 花生粕和啤酒酵母为蛋白源， 鱼油和豆油 (1 1) 为脂肪源， 面粉为碳源， 并 添加适当的矿物质和维生素等作为凡纳滨对虾复合饲料 （表 2） 。按照每公斤复合饲料中添 加 6g（A 组） 、 。

28、8g（B 组） 、 10g（C 组） 所述的抗菌物质饲料添加剂 ( 实施例 1 中第一种方法 制备， 效价 40000 IU/g)， 不加抗菌物质的 CK 组 （附表 2） 。每个处理设 3 个重复， 每个玻璃 钢桶放养凡纳滨对虾30尾， 玻璃钢桶水容量为0. 3 m3 。 水温为(27. 5 1. 5) ， 海水 比重为1. 012 0. 002， 养殖试验持续6周。 试验用虾先暂养7天后， 称初始体质量， 然后 平均分组， 采用定量投喂。投喂量初期按虾体重的 10 %， 后期按 8 % 投喂。投喂时间分别为 06 :00、 10 :00、 15 :00、 19 :00 和 23 :00 时。

29、， 早 6 点和晚 19 点的投喂量较多， 占日投喂量 的 70 %。称终末体质量前 24 小时停止投喂。 0029 添加 6g/kg 的 A 组养殖 6 周后的平均增重较 CK 组提高 12.3 % ； 成活率比 CK 提高 了 7.5% ； 饲料效率比 CK 提高了 14.5%。添加 8g/kg 的 B 组养殖 6 周后的平均增重较 CK 组 提高 21.3 % ； 成活率比 CK 提高了 20.8% ； 饲料效率比 CK 提高了 44.1%。添加 10g/kg 的 C 组养殖 6 周后的平均增重较 CK 组提高 26.2 % ； 成活率比 CK 提高了 13.8% ； 饲料效率比 CK 。

30、提高了 39.2%。 0030 每组取810尾对虾， 用1 mL 注射器从心脏取血， 置于Eppendorf 管中， 在4 冰 箱中静置 24 h 后离心， 取上清液备用。超氧化物歧化酶活力 （SOD） 按邓碧玉等改良的连苯 三酚自氧化法测定。酚氧化酶 （PO） 活力参照 Ashida 以 L-dopa 为底物比色的方法测定。 说 明 书 CN 103478509 A 7 6/6 页 8 血清 ACP、 AKP 活性， 采用南京建成生产的试验盒测定。采用管华诗的方法测定过氧化物酶 ( POD) 和溶菌酶 (LSZ) 的活力。 0031 添加 6g/kg 的试验 A 组与能量代谢和营养有关的碱性。

31、磷酸酶 （AKP） 比 CK 组提高 了 104% ； 与抗菌作用有关的溶菌酶 （LSZ） 比 CK 提高了 37.4% ； 与甲壳动物的非专一性免疫 反应有关酚氧化酶 （PO） 比 CK 组提高了 113% ； 与抗氧化、 抗病有关的超氧化物歧化酶 （SOD） 比 CK 组提高了 24.1% ； 但是酸性磷酸酶 （ACP） 和过氧化物酶 （POD） 没有显著差异。 0032 添加 8g/kg 的试验 B 组与能量代谢和营养有关的碱性磷酸酶 （AKP） 比 CK 组提高 了 158% ； 与抗菌作用有关的溶菌酶 （LSZ） 比 CK 提高了 72.1% ； 与甲壳动物的非专一性免疫 反应有关酚。

32、氧化酶 （PO） 比 CK 组提高了 152% ； 与抗氧化、 抗病有关的超氧化物歧化酶 （SOD） 比 CK 组提高了 72.3% ； 但是酸性磷酸酶 （ACP） 和过氧化物酶 （POD） 没有显著差异。 0033 试验C组与能量代谢和营养有关的碱性磷酸酶 （AKP） 比CK组提高了110% ； 与抗菌 作用有关的溶菌酶 （LSZ） 比 CK 提高了 79.5% ； 与甲壳动物的非专一性免疫反应有关酚氧化 酶 （PO） 比 CK 组提高了 138% ； 与抗氧化、 抗病有关的超氧化物歧化酶 （SOD） 比 CK 组提高了 25.8% ； 但是酸性磷酸酶 （ACP） 和过氧化物酶 （POD） 没有显著差异。 0034 表 2. 对虾试验饲料配方和试验设计 * 表 2 中各原料单位为 g。 说 明 书 CN 103478509 A 8 。