一种山药离体繁殖方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101637125 B (45)授权公告日 2011.05.25 CN 101637125 B *CN101637125B* (21)申请号 200910066051.3 (22)申请日 2009.09.03 A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人 河南师范大学 地址 453007 河南省新乡市建设路东段 46 号 (72)发明人 李明军 赵喜亭 邓丽 张晓丽 李海兵 赵娇 陈明霞 (74)专利代理机构 新乡市平原专利有限责任公 司 41107 代理人 毋致善 CN 1653888 A,2005.08.17, 全文 . 唐君等 . 怀山药离体繁殖的研究。

2、 .江西农 业学报 .2008, 第 20 卷 ( 第 9 期 ),49-50. 洪森荣等 .PP333 对怀山药试管苗生长及生 理特性的影响 .河南农业科学 .2006,( 第 3 期 ),80-84. 李明军等 .NAA、 IBA 和 PP333 对怀山药试管 苗生长发育的影响 .广西植物 .2004, 第 24 卷 ( 第 4 期 ),376-379. Hajime Araki 等 .Effects of Auxin， Cytokinin and Nitrogen Concentration on Morphogenesis of Tissue-cultured Shoot Apex o。

3、f Chinese Yam(Dioscorea opposita Thunb.).J. Japan. Soc. Hort. Sci. .1992, 第 60 卷 ( 第 4 期 ),851-857. (54) 发明名称 一种山药离体繁殖方法 (57) 摘要 本发明公开了一种山药离体繁殖方法， 本发 明的目的是提供一种遗传稳定性好、 繁殖占用空 间小、 保存和运输方便的怀山药离体繁殖方法。 本 发明的技术解决方案要点有以下步骤 ： (1) 怀山 药类原球茎的诱导形成 ； (2) 怀山药类原球茎的 增殖 ； (3) 怀山药类原球茎的分化 ； (4) 怀山药类 原球茎再生植株的生根 ； (5) 怀山。

4、药类原球茎再 生植株的炼苗移栽。本发明用于山药繁殖。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 吴涛 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 2 页 CN 101637125 B1/1 页 2 1. 一种山药离体繁殖方法， 其特征在于 ： 有以下步骤 ： (1) 怀山药类原球茎的诱导形 成， 将怀山药试管苗切成带腋芽茎段接种于 MS+TDZ0.1 6mg/L+KT 1 4mg/L 的培养基 上， 在培养室进行培养3040d， 诱导形成类原球茎 ； (2)怀山药类原球茎的增殖， 将上述类 原球茎的小块在无菌条件下接种于 MS+TDZ 1 4mg。

5、/L+KT 1 4mg/L 的培养基上， 在培养 室进行培养， 得到大量增殖的类原球茎 ； (3) 怀山药类原球茎的分化， 将诱导形成或增殖的 类原球茎转接于MS+2， 4-D 0.050.1mg/L+6-BA 12mg/L+KT 24mg/L+TDZ 02mg/ L+ 活性炭 0.1 0.2g/L 的培养基上， 在培养室进行培养， 类原球茎可分化出大量的芽 ； (4) 怀山药类原球茎再生植株的生根， 挑选顶芽长度为23cm的类原球茎再生植株， 从其基部 分开， 转入液体的 MS+PP3330.5 1.0mg/L+NAA 0.05 1.0mg/L 培养基上， 在培养室进行培 养， 7d 开始有。

6、根的形成， 15 20d 即可形成大量的根 ； 以上各步骤中的工作台为超净工作 台， 各步骤培养室的培养条件为 ： 温度 20 25， 光照每天 12 16h， 光强为 2000lx ； (5) 怀山药类原球茎再生植株的炼苗移栽， 将上述生根的怀山药类原球茎的培养瓶盖打开， 将 培养瓶移自然光下炼苗 3 5d， 使其逐渐适应外界自然环境， 移栽时将根部的培养基洗净， 去除褐化的老根， 移栽入装有蛭石的营养钵中， 15d 后即成活。 权 利 要 求 书 CN 101637125 B1/2 页 3 一种山药离体繁殖方法 技术领域 ： 0001 本发明涉及一种繁殖的方法， 特别是一种山药离体繁殖方法。

7、。 背景技术 ： 0002 山药既有食用价值， 还有药用价值。怀山药因其独特的产地和品种所具有的独特 口感和营养价值及药效而著称于世。然而传统的块茎繁殖方法不能适应生产需要。对其离 体繁殖进行了广泛的研究， 目前， 在怀山药的研究中认为怀山药可以通过腋生枝途径、 多芽 体诱导途径和微型块茎诱导途径等方式进行离体繁殖。 其中腋生枝是将带腋芽的茎段扦插 在培养基中， 其腋芽分化成苗， 基部分化出根而成一完整植株 ； 多芽体诱导型是通过调整培 养基中的激素浓度， 去除顶端优势的抑制使腋芽发育出多个小芽 ； 微型块茎既是山药的一 种变态器官， 同时也是山药的储藏器官和繁殖器官， 而微型块茎诱导途径则是。

8、诱导试管苗 腋芽形成地上变态块茎， 形成的块茎可萌发成苗亦可进行保存。前两种繁殖方式遗传稳定 性较高， 但占用空间大， 第三种目前仅有微型块茎的初步诱导， 在块茎萌发成苗及应用方面 未见更深入的研究。本实验室以带腋芽的茎段为外植体， 首次离体诱导出了怀山药的类原 球茎， 这些类原球茎占用空间小， 且在适宜条件下能够大量分化为新的植株， 可作为怀山药 离体繁殖的新途径。 发明内容 ： 0003 本发明的目的是提供一种遗传稳定性好、 繁殖占用空间小、 保存和运输方便的怀 山药离体繁殖方法。本发明的技术解决方案是， 其特征在于有以下步骤 ： (1) 怀山药类原球 茎的诱导形成， 将怀山药试管苗切成带。

9、腋芽茎段接种于MS+TDZ 0.16mg/L+KT 14mg/L 的培养基上， 在培养室进行培养3040d， 诱导形成类原球茎 ； (2)怀山药类原球茎的增殖， 将上述类原球茎的小块在无菌条件下接种于 MS+TDZ 1 4mg/L+KT 1 4mg/L 的培养基 上， 在培养室进行培养， 得到大量增殖的类原球茎 ； (3) 怀山药类原球茎的分化， 将诱导形 成或增殖的类原球茎转接于MS+2， 4-D0.050.1mg/L+6-BA 12mg/L+KT 24mg/L+TDZ 0 2mg/L+ 活性炭 0.1 0.2g/L 的培养基上， 在培养室进行培养， 类原球茎分化出大量的 芽 ； (4) 怀。

10、山药类原球茎再生植株的生根， 挑选顶芽长度为 2 3cm 的类原球茎再生植株， 从其基部分开， 转入液体的 MS+PP333 0.5 1.0mg/L+NAA0.05 1.0mg/L 培养基上， 在培养 室进行培养7d开始有根的形成， 15-20d即可形成大量的根。 以上各步骤中的工作台为超净 工作台， 各步骤培养室的培养条件为 ： 温度 20 25， 光照每天 12 16h， 光强为 2000lx ； (5) 怀山药类原球茎再生植株的炼苗移栽， 将上述生根的怀山药类原球茎的培养瓶盖打开， 将培养瓶移自然光下炼苗 3 5d， 使其逐渐适应外界自然环境， 移栽时将根部的培养基洗 净， 去除褐化的老。

11、根， 移栽入装有蛭石的营养钵中， 15d后即成活。 本发明与现有技术比较具 有遗传稳定性好、 繁殖占用空间小且保存及运输方便的显著优点。 说 明 书 CN 101637125 B2/2 页 4 具体实施方式 ： 0004 本发明有以下实施例 ： 0005 1、 怀山药类原球茎的诱导形成 0006 在超净工作台上将怀山药试管苗切成长度为 1cm 左右的带腋芽茎段接种于 MS+TDZ 0.1 6mg/L+KT 1 4mg/L 的培养基上， 在培养室条件下进行培养， 30 40d 即可 诱导形成类原球茎。 0007 2、 怀山药类原球茎的增殖 0008 在超净工作台上， 将诱导出的怀山药类原球茎切成。

12、直径 0.5cm 左右的小块在无菌 条件下接种于 MS+TDZ 1 4mg/L+KT 1 4mg/L 培养基上， 在培养室条件下进行培养， 类原 球茎可以大量增殖。 0009 3、 怀山药类原球茎的分化 0010 在超净工作台上， 将诱导形成或继代增殖的类原球茎转接于 MS+2， 4-D 0.05 0.1mg/L+6-BA 1 2mg/L+KT 2 4mg/L+TDZ 0 2mg/L+ 活性炭 0.1 0.2g/L 的培养基 上， 在培养室条件下进行培养， 类原球茎可以分化出大量的芽。 0011 4、 怀山药类原球茎再生植株的生根 0012 挑选顶芽长度为 2 3cm 的类原球茎再生植株， 从基部分开， 转入液体的 MS+PP333 0.5 1.0mg/L+NAA 0.05 1.0mg/L 培养基上， 在培养室条件下进行培养， 7d 开始有根的 形成， 15 20d 即可形成大量的根。 0013 以上各步培养条件均为 ： 温度 20 25， 每天光照 12 16h， 光强为 20001x。 0014 5、 怀山药类原球茎再生植株的炼苗移栽 0015 当类原球茎生根后， 打开培养瓶盖， 将培养瓶移至自然光下炼苗35d。 让类原球 茎植株逐渐适应外界自然条件， 移栽时将根部的培养基洗净， 去除褐化的老根， 移栽入装有 蛭石的营养钵中， 15d 后即可成活。 说 明 书 。