一种大花红景天的组培育苗方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101836585 B (45)授权公告日 2012.04.25 CN 101836585 B *CN101836585B* (21)申请号 200910080130.X (22)申请日 2009.03.19 A01H 4/00(2006.01) A01G 31/00(2006.01) (73)专利权人 中国科学院过程工程研究所 地址 100190 北京市海淀区中关村北二条 1 号 (72)发明人 刘春朝 赵燕 (74)专利代理机构 北京泛华伟业知识产权代理 有限公司 11280 代理人 曹津燕 (54) 发明名称 一种大花红景天的组培育苗方法 (57) 摘要 本发明。

2、提供一种大花红景天的组培育苗方 法， 其包括以下步骤 ： (1) 以大花红景天叶片作 为外植体进行出芽培养形成不定芽 ； (2) 将不 定芽进行增殖培养形成单苗 ； (3) 将丛生芽伸 长后得到的单苗进行生根培养形成生根苗 ； (4) 移栽生根苗 ； 其中， 出芽培养的培养基为添加了 10-20mol/L 的 6- 苄基氨基嘌呤和 1-5mol/L 的赤霉素的MS培养基。 本发明通过初代培养黑暗 处理及生根过程添加活性炭的组合处理强化了大 花红景天高效育苗方法， 解决了大花红景天生根 苗繁殖系数低的问题， 丛生芽 20 天的增殖系数为 2-3 倍， 生根率达到 95以上， 移栽成活率最高达 到。

3、 90以上。本发明提供的方法分化频率高， 生 长周期短， 易于大花红景天的规模化生产。 (51)Int.Cl. 审查员 荆丹丹 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 1 页 CN 101836585 B1/1 页 2 1. 一种大花红景天的组培育苗方法， 其包括以下步骤 ： (1) 以大花红景天叶片作为外植体进行出芽培养形成不定芽 ； (2) 将不定芽进行增殖培养形成丛生芽 ； (3) 将丛生芽伸长后得到的单苗进行生根培养形成生根苗 ； (4) 移栽生根苗 ； 其中， 出芽培养的培养基为添加了 10-20mol/L 的 6- 苄基氨基。

4、嘌呤和 1-5mol/L 的 赤霉素的 MS 培养基 ； 所述增殖培养的培养基为添加了 2.5-15mol/L 的 6- 苄基氨基嘌呤 的 MS 培养基 ； 所述生根培养的培养基为添加了 2.5-10mol/L 的吲哚乙酸的 MS 培养基 ； 所述出芽培养的培养基和增殖培养的培养基还包含5.5-6.5g/L的琼脂和20-30g/L的 蔗糖 ； 所述生根培养的培养基还包含 0.5-2g/L 活性炭、 7.5-8.5g/L 的琼脂和 20-30g/L 的蔗 糖。 2. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述外植体出芽培养前经过消毒处理， 所 述消毒处理为用水清洗后， 在无菌条件下用杀菌。

5、剂消毒， 再用无菌水清洗。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述出芽培养包括在温度为252的无 菌条件下， 黑暗培养 0-10 天后， 光照诱导形成不定芽， 光照强度为 2500500 勒克斯， 每日 光照时间为 14-18 小时。 4. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述增殖培养包括在诱导出芽一个月后， 在温度为 252的条件下光照培养不定芽， 每日光照时间为 14-18 小时。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述生根培养包括在温度为252的条 件下光照培养 2-3cm 的单苗达 15-45 天， 每日光照时间为 14-18 小时。 6.根据权利。

6、要求1所述的方法， 其特征在于， 所述移栽包括将根长1-2cm的生根苗移栽 在质量比为蛭石珍珠岩 1 1 的混合基质中培育， 培育温度 15-25。 权 利 要 求 书 CN 101836585 B1/7 页 3 一种大花红景天的组培育苗方法 技术领域 0001 本发明涉及一种植物的组培育苗方法， 具体涉及一种大花红景天的组培育苗方 法。 背景技术 0002 大 花 红 景 天 (Rhodiola crenulata) 为 景 天 科 (Crassulaceae) 红 景 天 属 (Rhodiola L.) 多年生草本植物， 其生长于西藏高原海拔 3500-5000 米的雪山中， 并经受 长期。

7、缺氧、 干燥及强紫外线等恶劣环境的影响， 形成了独特的营养成分， 其中含有丰富的甙 类、 黄酮、 多种维生素和微量元素， 还含有机体必需的 17 种氨基酸， 被誉为 “高原人参” ， 是 国家 2005 版药典中唯一收录的红景天类药材。研究表明， 大花红景天具有抗缺氧、 抗疲劳、 抗辐射、 延缓机体衰老等多种功能。 0003 大花红景天大多为天然资源， 其生存环境恶劣， 生长缓慢且年产量低。 种子繁殖因 其结实率低， 果内种子量少且多败育， 萌发率仅为 5 -10， 自然更新困难， 加上需求量日 益增大， 以至原本就稀少的野生资源面临严重匮乏。 目前， 人们通过多种途径如引种栽培来 解决其需求。

8、问题， 但是收效甚微。 0004 采用组织培养方法是探索大花红景天快速无性繁殖的主要途径， 国外关于大花 红景天组培再生尚无报道， 国内已有一些对大花红景天组织培养的研究工作， 如尹文兵等 ( “大花红景天的组织培养和快速繁殖” ， 尹文兵等， 植物生理学通讯， 第 41 卷第 4 期， 第 493 页， 2005 年 ) 通过诱导叶片产生愈伤组织， 产生幼芽， 再诱导幼芽生根形成生根苗， 但是这 种方法培养的不同阶段必须采用不同的培养基和激素， 耗时耗力， 愈伤组织产生变异的可 能性也较大。由于生根过程产生褐化， 其处理方法是不断转接， 这样就无法实现规模化 ； 晏 婴才等 ( “云南野生红。

9、景天的组织培养与快速繁殖” ， 晏婴才等， 植物生理学通讯， 第 41 卷第 3 期， 第 341 页， 2005 年 ) 对大花红景天的再生也做了研究， 其继代培养基为 6- 苄氨基腺嘌 呤 (6-BA)+ 吲哚乙酸 (IAA)， 但是其继代增殖周期长， 增殖系数低， 不定芽 40 天增殖 3 倍。 由此可见， 目前大花红景天的组织培养尚有新芽启动慢， 繁殖系数不高的缺点， 不能进行规 模种植生产。 发明内容 0005 因此， 本发明的目的在于提供一种繁殖系数高、 生根容易、 成本低、 简便高效的大 花红景天的组培育苗方法。 0006 本发明的目的是采用以下技术方案来实现的 ： 0007 一。

10、种大花红景天的组培育苗方法， 其包括以下步骤 ： 0008 (1) 以大花红景天叶片作为外植体进行出芽培养形成不定芽 ； 0009 (2) 将不定芽进行增殖培养形成丛生芽 ； 0010 (3) 将丛生芽伸长后得到的单苗 ( 有茎无根的苗 ) 进行生根培养形成生根苗 ； 0011 (4) 移栽生根苗 ； 说 明 书 CN 101836585 B2/7 页 4 0012 其 中， 出 芽 培 养 的 培 养 基 为 添 加 了 10-20mol/L 的 6- 苄 基 氨 基 嘌 呤 (benzylaminopurine， 以下简称 6-BA) 和 1-5mol/L 的赤霉素 (gibberelli。

11、cacid， 以下简 称 GA3) 的 MS 固体培养基。 0013 在上述方法中， 出芽培养的培养基还可以包含 5.5-6.5g/L 的琼脂和 20-30g/L 的 蔗糖， 培养基 pH 为 5.8。增殖培养的培养基优选为添加了 2.5-15mol/L 的 6- 苄基氨基 嘌呤的 MS 固体培养基， 其中还可以包含 5.5-6.5g/L 的琼脂和 20-30g/L 的蔗糖， 培养基 pH 为 5.8。生根培养的培养基优选为添加了 2.5-10mol/L 的吲哚乙酸 (indole-3-acetic acid， 以下简称 IAA) 的 MS 固体培养基， 其中还可以包含 0.5-2g/L 的活。

12、性炭 (activated charcoal， 以下简称 AC)、 7.5-8.5g/L 的琼脂和 20-30g/L 的蔗糖， 培养基 pH 为 5.8。 0014 在上述方法中， 优选地， 外植体出芽培养前经过消毒处理， 例如用水清洗后， 在无 菌条件下用杀菌剂消毒， 再用无菌水清洗。 0015 优选地， 上述出芽培养包括在温度为 252的无菌条件下， 黑暗培养 0-10 天后 光照诱导形成不定芽， 光照强度为 2500500 勒克斯 (Lux)， 每日光照时间为 14-18 小时。 0016 优选地， 上述增殖培养包括在诱导出芽一个月后， 在温度为 252的条件下光照 培养不定芽， 每日光。

13、照时间为 14-18 小时。 0017 优选地， 上述生根培养包括在温度为 252的条件下光照培养 2-3cm 的单苗达 15-45 天， 每日光照时间为 14-18 小时。 0018 优选地， 上述移栽包括将根长 1-2cm 的生根苗移栽在质量比为蛭石珍珠岩 1 1 的混合基质中培育， 培育温度 15-25。 0019 本发明的一个具体技术方案如下 ： 0020 (1) 选择大花红景天优良单株的叶片作为外植体， 在进行外植体的消毒时， 先用自 来水清洗 30 分钟后， 在无菌超净台中再用 10的 84 消毒液消毒 25 分钟， 然后用无菌水清 洗 3 次 ； 0021 (2) 经消毒的外植体。

14、， 在无菌条件下诱导出芽培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为 10-20mol/L 的 6-BA 和 1-5mol/L 的 GA3， 还包含 5.5-6.5g/L 的琼脂和 20-30g/L 的蔗糖。 0022 (3)外植体在诱导出芽培养基上暗处理0-10天， 然后在光强度为2500500Lux条 件下培养， 诱导不定芽培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时 ； 0023 (4) 诱导出芽一个月后， 进入继代培养进行不定芽增殖， 继代培养的培养基为 MS 培养基， 附加的植物激素为 5mol/L 的 6-BA， 还包含 6g/L 的琼脂和 。

15、30g/L 的蔗糖， 培养温 度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时 ； 0024 (5) 剪取生长健壮， 长 2-3cm 的单苗进行生根培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为 2.5-10mol/L 的吲哚乙酸， 还包含 1.0g/L 活性炭， 8.0g/L 琼脂和 30g/L 的 蔗糖， 培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时 ； 0025 (6) 大花红景天生根苗在生根培养基中培养 10 天左右开始生根， 到 20 天左右待 根长至 1-2cm 时进行生根苗移栽。在生根苗培养阶段， 培养温度为 252， 培养。

16、基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。 0026 (7) 在生根培养基上培养好的生根苗移栽到蛭石珍珠岩 1 1 混合基质中培 育， 培育前用 0.1多菌灵浇透基质， 移栽培育的温度控制在 15-25， 过高过底不利于生 说 明 书 CN 101836585 B3/7 页 5 根苗的成活， 在温度适宜的条件下， 20 天后， 生根苗即开始生长。 0027 综上所述， 本发明提供的大花红景天的组培育苗方法， 通过黑暗预处理外植体， 克 服了大花红景天组培过程中产生的褐化问题， 提高了出芽率和出芽数 ； 改变出芽阶段和继 代培养的激素种类， 提高繁殖系数 ； 在生根过程中添加活性炭， 吸附。

17、褐化产生的色素， 解决 生根困难的不足， 并起到壮苗作用。 本发明的组培育苗方法具有启动早， 出苗快， 同步性好， 分化频率高， 生长周期较其他培养基短， 生长良好， 基本上无畸形苗的优点。 具体而言， 本发 明的有益效果如下 ： 0028 首先， 在诱导出芽阶段进行暗培养， 克服了培养过程中由于褐化造成的细胞死亡， 在诱导阶段一般 15 天左右就可出现分化， 解决了繁殖系数低的难题。 0029 其次， 出芽诱导阶段应用 6-BA 和 GA3激素组合可以不经过愈伤组织培养阶段， 直 接诱导出芽。 0030 第三， 在继代阶段， 只用一种激素 6-BA 培养 12 天左右就可出现丛生芽， 使丛生。

18、芽 20 天的增殖系数达到 2-3 倍， 并且节约了成本。 0031 第四， 在生根阶段添加活性炭， 吸附褐化产生的酚类色素并起到壮苗作用， 约 10 天左右， 可见白色短根， 在最优条件下， 生根率可达到 95以上， 再过 20 天左右， 便可移栽， 移栽成活率最高达到 90以上， 可周年繁殖， 一次可繁殖上千株， 而常规的分檗繁殖方法一 般只能一年繁殖一次。 附图说明 0032 以下， 结合附图来详细说明本发明， 其中 ： 0033 图 1 显示使用本发明的组培育苗方法诱导出的大花红景天不定芽。 0034 图 2 显示使用本发明的组培育苗方法增殖的大花红景天丛生芽。 0035 图 3 显示。

19、使用本发明的组培育苗方法培育的大花红景天生根苗。 0036 图 4 显示使用本发明的组培育苗方法移栽的大花红景天苗。 具体实施方式 0037 以下结合实施例进一步阐述本发明， 但这些实施例仅限于说明本发明， 而不能限 制本发明的范围。 0038 以下各实施例将详细说明本发明大花红景天的组培育苗方法的具体操作步骤， 其 中所使用的 MS 培养基 (Murashige and Skoog 培养基 )， 其配方如下 ： 说 明 书 CN 101836585 B4/7 页 6 0039 0040 实施例 1 0041 本实施例中大花红景天的组培育苗方法的具体步骤如下 ： 0042 (1)选择大花红景天。

20、优良单株(采自西藏多年生野生植株)的叶片作为外植体， 在 进行外植体的消毒时， 先用自来水清洗30分钟后， 在无菌超净台中再用10的84消毒液消 毒 25 分钟， 然后用无菌水清洗 3 次。 0043 (2) 经消毒的外植体， 在无菌条件下诱导出芽培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附 加的植物激素为 15mol/L 的 6-BA 和 2.5mol/L 的 GA3， 还包含 5.5g/L 的琼脂和 26g/ L 的蔗糖， 培养基 pH 为 5.8。外植体在诱导出芽培养基上暗处理 10 天， 然后在光强度为 2500500Lux条件下培养， 诱导不定芽培养温度为252， 光照时间为16小时， 。

21、12天出现 分化。30 天统计出芽率达到 88， 每个外植体的平均出芽数为 5.3 个芽。 0044 (3) 诱导出芽一个月后， 进入继代培养进行不定芽增殖， 继代培养的培养基为 MS 培养基， 附加的植物激素为 5mol/L 的 6-BA， 还包含 6g/L 的琼脂和 30g/L 的蔗糖， 培养温 度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时， 12 天出现丛生芽， 增殖周期为 20 天， 增殖系数 3 倍。 说 明 书 CN 101836585 B5/7 页 7 0045 (4) 剪取生长健壮， 长 2-3cm 的单苗进行生根培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加。

22、 的植物激素为 5mol/L 的 IAA， 还包含 1.0g/L AC， 8.0g/L 琼脂和 30g/L 的蔗糖， 培养温度 为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。大花红景天生根苗在生根培养基中培 养 10 天左右开始生根， 20 天后统计， 生根率达 98.4， 每个苗的平均生根数为 5.2。 0046 (5)到20天左右待根长至1-2cm时， 开瓶炼苗2天左右， 将在生根培养基上培养好 的生根苗移栽到质量比为蛭石珍珠岩11混合基质中培育， 培育前用0.1多菌灵浇 透基质， 移栽培育的温度控制在 15-25， 过高过底不利于生根苗的成活， 20 天后， 生根苗 。

23、即开始生长， 成活率达到 92。 0047 实施例 2 0048 本实施例中大花红景天的组培育苗方法的具体步骤如下 ： 0049 (1) 选择大花红景天优良单株的叶片作为外植体， 在进行外植体的消毒时， 先用自 来水清洗 30 分钟后， 在无菌超净台中再用 10的 84 消毒液消毒 25 分钟， 然后用无菌水清 洗 3 次。 0050 (2) 经消毒的外植体， 在无菌条件下诱导出芽培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为 15mol/L 的 6-BA 和 2.5mol/L 的 GA3， 还包含 6g/L 的琼脂和 20g/L 的蔗 糖。外植体在诱导出芽培养基上暗处理 5 天， 。

24、然后在光强度为 2500500Lux 条件下培养， 诱导不定芽培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时， 12 天出现分化。30 天统计出芽率达 98.8， 每个外植体的平均出芽数为 9.1 个芽。 0051 (3) 诱导出芽一个月后， 进入继代培养进行不定芽增殖， 继代培养的培养基为 MS 培养基， 附加的植物激素为 5mol/L 的 6-BA， 还包含 6g/L 的琼脂和 30g/L 的蔗糖， 培养温 度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时， 12 天出现丛生芽， 增殖周期 20 天， 增 殖系数 3 倍。 0052 (4) 剪取。

25、生长健壮， 长 2-3cm 的单苗进行生根培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为 2.5mol/L 的 IAA， 还包含 1.0g/L AC， 8.0g/L 琼脂和 30g/L 的蔗糖， 培养温 度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。20 天后统计生根率为 76.2， 每个 苗的平均生根数为 4.0。大花红景天生根苗在生根培养基中培养 10 天左右开始生根， 在生 根苗培养阶段， 培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。 0053 (5)到20天左右待根长至1-2cm时， 开瓶炼苗2天左右， 将在生根培养基上培养。

26、好 的生根苗移栽到质量比为蛭石珍珠岩11混合基质中培育， 培育前用0.1多菌灵浇 透基质， 移栽培育的温度控制在 15-25， 过高过底不利于生根苗的成活， 在温度适宜的条 件下， 20 天后， 生根苗即开始生长， 成活率为 92。 0054 实施例 3 0055 本实施例中大花红景天的组培育苗方法的具体步骤如下 ： 0056 (1) 选择大花红景天优良单株的叶片作为外植体， 在进行外植体的消毒时， 先用自 来水清洗 30 分钟后， 在无菌超净台中再用 10的 84 消毒液消毒 25 分钟， 然后用无菌水清 洗 3 次。 0057 (2) 经消毒的外植体， 在无菌条件下诱导出芽培养， 基本培养。

27、基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为 15mol/L 的 6-BA 和 2.5mol/L 的 GA3， 还包含 6.5g/L 的琼脂和 30g/L 的 蔗糖。 外植体在诱导出芽培养基上暗处理0天， 然后在光强度为2500500Lux条件下培养， 说 明 书 CN 101836585 B6/7 页 8 诱导不定芽培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时， 15 天出现分化。30 天统计出芽率为 67.5， 每个外植体的平均出芽数为 3.7 个芽。 0058 (3) 诱导出芽一个月后， 进入继代培养进行不定芽增殖， 继代培养的培养基为 MS 培养基， 附加的植物。

28、激素为 5mol/L 的 6-BA， 还包含 6g/L 的琼脂和 30g/L 的蔗糖， 培养温 度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时， 12 天出现丛生芽， 增殖周期 20 天， 增 殖系数 3 倍。 0059 (4) 剪取生长健壮， 长 2-3cm 的单苗进行生根培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为 2.5mol/L 的 IAA， 还包含 1.0g/L AC， 8.0g/L 琼脂和 30g/L 的蔗糖， 培养温 度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。20 天后统计生根率为 76.2， 每个 苗的平均生根数为 4.。

29、0。大花红景天生根苗在生根培养基中培养 10 天左右开始生根， 在生 根苗培养阶段， 培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。 0060 (5)到20天左右待根长至1-2cm时， 开瓶炼苗2天左右， 将在生根培养基上培养好 的生根苗移栽到质量比为蛭石珍珠岩11混合基质中培育， 培育前用0.1多菌灵浇 透基质， 移栽培育的温度控制在 15-25， 过高过底不利于生根苗的成活， 在温度适宜的条 件下， 20 天后， 生根苗即开始生长， 成活率为 92。 0061 实施例 4 0062 本实施例中大花红景天的组培育苗方法的具体步骤如下 ： 0063 (1) 选择大花。

30、红景天优良单株的叶片作为外植体， 在进行外植体的消毒时， 先用自 来水清洗 30 分钟后， 在无菌超净台中再用 10的 84 消毒液消毒 25 分钟， 然后用无菌水清 洗 3 次。 0064 (2) 经消毒的外植体， 在无菌条件下诱导出芽培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为 10mol/L 的 6-BA 和 1mol/L 的 GA3， 还包含 6.5g/L 的琼脂和 25g/L 的蔗 糖， 外植体在诱导出芽培养基上暗处理 10 天， 然后在光强度为 2500500Lux 条件下培养， 诱导不定芽培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时， 15。

31、 天出现分化。30 天统计， 出芽率为 55.3， 每个外植体的平均出芽数为 3.7 个芽。 0065 (3) 诱导出芽一个月后， 进入继代培养进行不定芽增殖， 继代培养的培养基为 MS 培养基， 附加的植物激素为 5mol/L 的 6-BA， 还包含 6g/L 的琼脂和 30g/L 的蔗糖， 培养温 度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时， 12 天出现丛生芽。增殖周期 20 天， 增 殖系数 3 倍。 0066 (4) 剪取生长健壮， 长 2-3cm 的单苗进行生根培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为 2.5mol/L 的 IAA， 还包含 。

32、1.0g/L AC， 8.0g/L 琼脂和 30g/L 的蔗糖， 培养温 度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。20 天后统计生根率为 76.2， 每个 苗的平均生根数为 4.0。大花红景天生根苗在生根培养基中培养 10 天左右开始生根， 在生 根苗培养阶段， 培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。 0067 (5)到20天左右待根长至1-2cm时， 开瓶炼苗2天左右， 将在生根培养基上培养好 的生根苗移栽到质量比为蛭石珍珠岩11混合基质中培育， 培育前用0.1多菌灵浇 透基质， 移栽培育的温度控制在 15-25， 过高过底不利。

33、于生根苗的成活， 在温度适宜的条 件下， 20 天后， 生根苗即开始生长， 成活率为 92。 0068 实施例 5 说 明 书 CN 101836585 B7/7 页 9 0069 本实施例中大花红景天的组培育苗方法的具体步骤如下 ： 0070 (1) 选择大花红景天优良单株的叶片作为外植体， 在进行外植体的消毒时， 先用自 来水清洗 30 分钟后， 在无菌超净台中再用 10的 84 消毒液消毒 25 分钟， 然后用无菌水清 洗 3 次。 0071 (2) 经消毒的外植体， 在无菌条件下诱导出芽培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为 20mol/L 的 6-BA 和 5mol。

34、/L 的 GA3， 还包含 6g/L 的琼脂和 20g/L 的蔗糖， 外植体在诱导出芽培养基上暗处理10天， 然后在光强度为2500500Lux条件下培养， 诱导 不定芽培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时， 12 天出现分化。30 天 统计出芽率 43.0， 每个外植体的平均出芽数为 2.3 个芽。 0072 (3) 诱导出芽一个月后， 进入继代培养进行不定芽增殖， 继代培养的培养基为 MS 培养基， 附加的植物激素为 5mol/L 的 6-BA， 还包含 6g/L 的琼脂和 30g/L 的蔗糖， 培养温 度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时。

35、间为 16 小时， 12 天出现丛生芽。增殖周期 20 天， 增 殖系数 3 倍。 0073 (4) 剪取生长健壮， 长 2-3cm 的单苗进行生根培养， 基本培养基为 MS 培养基， 附加 的植物激素为10mol/L的IAA， 还包含1.0g/L AC， 8.0g/L琼脂和30g/L的蔗糖， 培养温度 为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。20 天后统计生根率为 77.9， 每个苗 的平均生根数为 4.3。大花红景天生根苗在生根培养基中培养 10 天左右开始生根， 在生根 苗培养阶段， 培养温度为 252， 培养基 pH 为 5.8， 光照时间为 16 小时。 0074 (5)到20天左右待根长至1-2cm时， 开瓶炼苗2天左右， 将在生根培养基上培养好 的生根苗移栽到质量比为蛭石珍珠岩11混合基质中培育， 培育前用0.1多菌灵浇 透基质， 移栽培育的温度控制在 15-25， 过高过底不利于生根苗的成活， 在温度适宜的条 件下， 20 天后， 生根苗即开始生长， 成活率为 92。 说 明 书 CN 101836585 B1/1 页 10 图 1 图 2 图 3 图 4 说 明 书 附 图 。