技术领域
本发明属于保健品领域，涉及一种石斛枸杞虫草多糖复配物、制备方法及其应用。
背景技术
随着社会的发展，人们的工作和生活节奏在加快，所承受的压力也随之加重，亚健 康问题日益困扰人们，研发具有调节免疫功能，增强体质，改善亚健康状态的保健品，有着 很大的市场需求。多糖是由多个单糖分子连接而成的大分子化合物，广泛地存在于植物、真 菌和动物体内，具多种生物活性，有的还结合有肽链或其他成分，提取多糖用于人体保健已 成一个趋势。石斛多糖是从石斛的茎中提取，它所具有的调节人体免疫功能、抗衰老、抗疲 劳、降血压、辅助抗肿瘤功效等多种功能已有诸多记载。石斛常用的有铁皮石斛 （DendrobiumcandidumWallexLindl）和紫皮石斛（齿瓣石斛）（Dendrobiumdevonimum Paxt），实验结果表明两者在多糖含量和抗疲劳、调节机体免疫功能的效果方面基本一致。 虫草多糖是以冬虫夏草（蝙蝠蛾拟青霉）菌丝体为原料提取的一种高分子多糖，功效与石斛 多糖类似。枸杞多糖是从枸杞的果实中提取的一种水溶性多糖，研究表明，枸杞多糖是枸杞 子调节免疫、延缓衰老的主要活性成分，可改善易疲劳、食欲不振和视力模糊等症状，并具 有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。现有石斛多糖的提取多采用干燥后粉碎的石斛茎，这 种方法除了石斛枝茎干燥费时费工外，干枝的有效成分远没有鲜枝保持的充足。就提取方 法来说，用于内服的多糖提取受到很多条件限制，由于石斛多糖的粘性较大，现有方法中经 乙醇沉淀后直接干燥得到的多糖提取物极为坚硬，使后续的干燥和粉碎等处理极为困难， 同时由于石斛多糖不耐高温，在120℃以上会大幅降解，用喷雾干燥法来处理提取溶液，不 仅效率低，而且有效成分多糖的含量会大幅度降低，所以石斛多糖价位高除了原料因素外， 加工不易也是一个主要原因。就作用来讲，石斛味甘、性微寒，其多糖使用时会有一些忌症 限制，冬虫夏草味甘性温，枸杞性平味甘，但其多糖的单独使用效果较有限。复合配伍是常 用的一种方法，其主要原理之一就是组分之间可互补增效，增长补短，提高效能。多糖的复 合配伍应用多见于同类来源的，比如真菌多糖的复合制品等，用菌类多糖和植物多糖复合 配伍应用还鲜见有报道。将石斛多糖、虫草多糖和枸杞多糖复合在一起，使它们的性能互 补、功效增加、减少忌症是一个很好的选择。
发明内容
本发明的目的在于提供一种石斛枸杞虫草多糖复配物及其在保健方面的应用。
本发明所采取的详细技术方案介绍如下。
一种石斛枸杞虫草多糖复配物，以质量百分比计，石斛多糖30%~60%、枸杞多糖30% ~60%、虫草多糖10%；
所述石斛多糖为从紫皮石斛或铁皮石斛鲜茎中所提取多糖；
所述虫草多糖为多糖含量不低于35%的市售成品，具体是从发酵虫草（蝙蝠蛾拟青霉） 菌丝粉中提取的水溶性活性多糖；
所述枸杞多糖粉为多糖含量不低于50%的市售成品，具体为从枸杞果实中提取的一种 水溶性多糖；
所述石斛枸杞虫草多糖复配物，优选为胶囊剂型，具体规格例如为0.5g/粒，其中每粒 胶囊含石斛枸杞虫草复合纯多糖0.18g-0.20g。
所述石斛枸杞虫草多糖复配物的制备方法，过程为：首先提取制备石斛多糖：石斛 多糖由石斛的鲜茎经“清洗切段—打浆粉碎—过滤—减压浓缩—醇沉离心甩干—醇洗及二 次离心甩干—烘干—粉碎”后制得，最后将石斛多糖、虫草多糖粉和枸杞多糖粉按比例混匀 即可；具体包括以下步骤：
（1）将石斛鲜茎预处理：取石斛鲜茎，洗净，切成0.5~1.0cm的段；所述鲜茎为生长期超 过一年、采摘后置于冷藏环境中、未经干燥处理、没有霉菌污染、含水量60%~85%的茎条；
（2）打浆粉碎：将上述石斛鲜茎段加入乳化均质机，按1:10的比例加入纯净水，充分粉 碎打浆；
（3）过滤：将打好的浆静置8~10h后离心、过滤出滤液备用；
（4）减压浓缩：将滤液置于80℃下进行减压浓缩至相对密度为1.25~1.30的浓缩滤液；
（5）醇沉离心甩干：在浓缩滤液里加入95%的乙醇至溶液乙醇浓度大于70%，搅拌，沉淀 后离心甩干，得粗多糖；
（6）醇洗及二次甩干：将粗多糖中加入乙醇至乙醇浓度≥90%，搅拌洗涤后进行第二次 离心甩干；
（7）烘干：将二次离心甩干后的多糖置于60℃条件下进行烘干；
（8）粉碎：将烘干后的多糖加入粉碎机粉碎，过200目筛，得到石斛多糖干粉；
（9）复配混合：将石斛多糖、枸杞多糖和虫草多糖三种干粉进行复配混合，三者的重量 百分比为，石斛多糖:枸杞多糖:虫草多糖=30%~60%:30%~60%:10%，加入混合机中充分混和 均匀即得石斛枸杞虫草多糖复配物。
本发明中，制取石斛多糖选用的石斛品种为紫皮石斛或铁皮石斛，取用鲜枝茎可 最大程度的保留其有效成分，紫皮石斛的单位产量大，原料成本低，铁皮石斛因目前组培技 术的完善，已经可以进行工厂化生产，二者的多糖含量和功效也都相近，。
打浆粉碎时优选使用乳化均质机，将乳化均质机的固定齿外侧进行切削处理，扩 大其外侧的开口，解决了石斛鲜枝茎打浆粉碎时经常出现的堵塞和粉碎度不够的问题。
制备石斛多糖时，醇洗及二次离心甩干环节将粗多糖中加入乙醇至乙醇浓度≥ 90%，其目的是，再次洗涤多糖沉淀物，充分置换其中的水分，使得多糖沉淀物蓬松、色浅，易 于干燥、粉碎。
三种多糖干粉的混合使用混合机搅拌混合即可。
所述石斛枸杞虫草多糖复配物在保健品领域的应用，可抗疲劳、增强免疫力。
本发明中，石斛多糖的制取选用石斛的鲜枝茎，最大程度的保留了有效成分，减少 了老工艺前期鲜枝茎干燥、干茎打粉和干粉浸泡三个环节，大大缩短了加工工期，降低了生 产成本，制取石斛多糖选用的石斛品种为紫皮石斛和铁皮石斛，紫皮石斛的单位产量大，原 料成本低，铁皮石斛因目前组培技术的完善，已经可以进行工厂化生产，二者的多糖含量和 功效也都相近；固定齿外侧进行过切削处理的乳化均质机，扩大了开口，解决了石斛鲜枝茎 打浆粉碎时经常出现的堵塞和粉碎度不够的问题；醇洗及二次离心甩干环节用高浓度的乙 醇再次洗涤多糖沉淀物，充分置换其中的水分，使得多糖沉淀物蓬松、色浅，使后面的干燥、 粉碎过程变得容易，处理后的乙醇溶液还可用于提取石斛碱等成分。动物实验结果显示，石 斛枸杞虫草复合多糖具有抗疲劳、调节免疫功能的功效，适用于易疲劳和体质虚弱者，可有 效消除工作和学习所致的神疲乏力和免疫力低下引起的亚健康症状，三种多糖的复合配伍 可性味互补，有效地减少服用禁忌，实验证实三种多糖复配使用增效作用明显，综合功效大 于单成分多糖，其制作成本低于单成分的铁皮石斛多糖和虫草多糖，受众群体大大增加。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步地解释说明，介绍具体实施例前，对下述实施 例中部分物料情况简要说明如下：
紫皮石斛鲜茎为生长期1年半、采摘后置于冷藏环境中、未经干燥处理、没有霉菌污染、 含水量75%的茎条，来自拱棚人工栽培；
铁皮石斛鲜茎为生长期2年、采摘后置于冷藏环境中、未经干燥处理、没有霉菌污染、含 水量85%的茎条，来自温室人工栽培；
虫草多糖为杭州众芝康菇生物技术有限公司生产的虫草多糖粉，为从发酵虫草（蝙蝠 蛾拟青霉）菌丝粉中提取的水溶性活性多糖，其多糖含量为35%；
枸杞多糖为杭州众芝康菇生物技术有限公司生产的枸杞多糖粉，为枸杞果实中提取的 一种水溶性多糖，其多糖含量为50%。
实施例1
1.石斛鲜茎处理：取3月份采摘的紫皮石斛鲜茎50kg，洗净，切成0.5~1.0cm的段。
2.打浆粉碎：将上述紫皮石斛鲜茎段加入乳化均质机，按1:10的比例加入纯净水， 充分粉碎打浆。
3.过滤：将打好的浆静置8~10h后离心、过滤。
4.减压浓缩：将滤液置于80℃下进行减压浓缩至浓缩液的相对密度为1.25~1.30。
5.醇沉离心甩干：在浓缩后的滤液里加入95%的乙醇至溶液乙醇浓度大于70%，搅 拌，沉淀后离心甩干，得粗多糖。
6.醇洗及二次甩干：粗多糖加入乙醇至乙醇浓度≥90%，搅拌洗涤后进行第二次离 心甩干。
7.烘干：将二次离心甩干后的多糖置于60℃条件下进行烘干。
8.粉碎：将烘干后的多糖加入粉碎机粉碎，过200目筛，得到石斛多糖粉，多糖含量 30%，制得石斛多糖干粉4.50公斤。
9.复配混合：选用多糖含量为50%的枸杞多糖、多糖含量为35%的虫草多糖，与石斛 多糖干粉进行复配混合，三者的重量百分比为石斛多糖:枸杞多糖:虫草多糖=45:45:10（按 纯多糖计），即紫皮石斛多糖4.50kg（以纯多糖计，紫皮石斛多糖用量为1.35Kg）、枸杞多糖 2.70kg（以纯多糖计，枸杞多糖用量为1.35Kg）、虫草多糖0.85kg（以纯多糖计，虫草多糖用 量为0.2975Kg），加入混合机中充分搅拌混匀即得石斛枸杞虫草复合多糖粉。
10.取市售医用胶囊，按0.5g/粒的量填入复合多糖粉，得成品石斛枸杞虫草复合 多糖胶囊16000粒，每粒胶囊含0.19g石斛枸杞虫草复合纯多糖。
实施例2
取11月份采摘的铁皮石斛鲜茎50kg，以实施例1的方法处理，得到铁皮石斛多糖 4.25kg，多糖含量30%。
将上述方法得到的石斛多糖，枸杞多糖和虫草多糖按纯多糖含量50:40:10的比 例，即石斛多糖4.25kg（以纯多糖计，石斛多糖用量为1.275Kg）、枸杞多糖2.04kg（以纯多糖 计，枸杞多糖用量为1.02Kg）、虫草多糖0.73kg（以纯多糖计，虫草多糖用量为0.2555Kg），在 混合机中充分搅拌混匀，按0.5g/粒装量进行胶囊填充，得胶囊14040粒，每粒胶囊含0.18g 石斛枸杞虫草复合纯多糖。
实施例3
本实施例主要就本发明所提供的石斛枸杞虫草多糖复配物在保健领域的具体应用情 况简要介绍如下。
下述试验中所用实验动物均由河南省实验动物中心提供。
一、抗疲劳功能实验
受试样品：紫皮石斛多糖粉（实施例1）、铁皮石斛多糖粉（实施例2）、枸杞多糖粉、虫草 多糖粉、紫皮石斛枸杞虫草复合多糖粉（以实施例1所制备的多糖计）。
试验对象：SPF级昆明小鼠（18-20g，雌雄兼用）；
剂量设计：依据人体使用多糖的剂量约为每日3g/60kg进行换算，小鼠实验剂量为 0.5g/kg。
实验方法：本实验以小鼠游泳时间为指标观察受试药物的抗疲劳作用。实验小鼠 随机分为6组，分别为铁皮石斛多糖组、紫皮石斛多糖组、枸杞多糖组、虫草多糖组和紫皮石 斛枸杞虫草复合多糖组，蒸馏水空白对照组喂饲蒸馏水。
空白对照组:蒸馏水。
铁皮石斛多糖组:铁皮石斛多糖粉3.33g加蒸馏水至50ml，充分溶解备用。
紫皮石斛多糖组:紫皮石斛多糖粉3.33g加蒸馏水至50ml，充分溶解备用。
枸杞多糖组：取枸杞多糖粉2.00g加蒸馏水至50ml，充分溶解备用。
虫草多糖组：取虫草多糖粉2.86g加蒸馏水至50ml，充分溶解备用。
紫皮石斛枸杞虫草多糖组：紫皮石斛多糖粉1.50g+枸杞多糖粉0.90g+虫草多糖粉 0.29g，加蒸馏水至50ml，充分溶解备用。
以上各组动物等容灌胃（0.5ml/20g），连续12天，末次灌胃后一小时内，各组小鼠 标记，每只小鼠尾部5%负重后放入水池中游泳并计时，以小鼠头部沉入水中不能再浮出水 面沉底死亡为体力耗竭，计算出小鼠游泳时间，进行组间均值比较。
统计学处理：实验数据采用SPSS.16.0软件统计分析，计量资料用单因素方差分析 F检验，检验水准a=0.05，以P<0.05为差异。
各组小鼠游泳时间统计结果显示，与空白对照组比较，各给药组均可不同程度延 长小鼠负重游泳时间，其中紫皮石斛多糖组、铁皮石斛多糖组、和紫皮石斛枸杞虫草复合多 糖组具有显著性意义，显示紫皮石斛多糖、铁皮石斛多糖、紫皮石斛枸杞虫草复合多糖均具 有抗疲劳作用，紫皮石斛枸杞虫草复合多糖的效果优于单组份的多糖，表明三种多糖的复 合使用具有增效效果，对比结果见表1。
表1不同受试物小鼠游泳时间的影响（秒，S）
注:与空白对照组对比,※P<0.05，n为每组小鼠数量。
二、增强免疫力功能实验
实验动物：SPF级KM小鼠530只，雄性。
动物分组与受试样品配制
空白对照组：25ml/kg蒸馏水灌胃。
复方多糖组：实施例1所制备的石斛枸杞虫草多糖复配物，以小鼠实验用多糖剂量 0.5g/kg计，将石斛枸杞虫草多糖复配物加蒸馏水至50ml，微加热充分溶解备用。
统计学方法：所有实验数据采用SPSS.16.0软件统计分析，计量资料用单因素方差 分析F检验,检验水准a=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。
1.对小鼠血清溶血素水平以及免疫器官重量的影响
比色法改良检测血清溶血素：将实验小鼠随机分为空白对照组和复方多糖组（石斛多 糖：枸杞多糖：虫草多糖为4.5:4.5:1），每组12只，各组动物等容灌胃，空白对照组动物灌胃 等体积蒸馏水。
各组动物连续灌胃12天，于给受试样品第7天各鼠腹腔注射2%的鸡RBC悬液0.2ml/ 只,末次给受试物后1h，内眦静脉丛取血20μl/只,加于1ml生理盐水中摇匀,再加5%鸡RBC悬 液0.5ml,冰浴中加进补体0.5ml(1∶10的新鲜豚鼠血清)置37℃水浴中温箱30min,冰箱中终 止反应,取上清液0.5ml,加进1.5ml都氏试剂中,静置10min。每样品取样200ul加入96孔板 中，在全功能酶标仪540nm中比色,读取OD值。另取血后迅速解剖小鼠，摘取胸腺、脾脏，万 分之一天平称重，按照公式计算出胸腺指数，脾脏指数。
脾（胸腺）指数=脾（胸腺）重量（mg）/体重（g）
实验结果显示,复方多糖组光密度值均高于空白对照组,并具有显著性差异（P<0. 01），提示复方多糖具有提高血清溶血素水平的作用，对比结果见表2。
表2.各组小鼠血清溶血素水平检测结果(n=12，S)
注:与空白对照组对比,△△P<0.01（下同）
表3.各组小鼠免疫器官重量比较(mg/g，S)
注：n=12
2.对2,4-二硝基氟苯（BNFB）诱导小鼠迟发型超敏反应（DTH）的影响(耳肿胀法)
实验小鼠随机分为空白对照组和复方多糖组，每组12只，多糖的组分比例为紫皮石斛 多糖：枸杞多糖：虫草多糖为4.5:4.5:1。各组动物等容灌胃，多糖组小鼠连续灌胃给复方多 糖14天，空白对照组小鼠灌胃等体积蒸馏水，于实验第8天对每只小鼠腹部进行脱毛剂脱 毛，范围约3cm×3cm，次日在脱毛的皮肤上均匀涂1%DNFB丙酮麻油溶液50ul致敏，致敏5天 后，再用1%DNFB丙酮麻油溶液10ul均匀涂于小鼠右耳（两面）进行攻击，24小时后，脱颈椎处 死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm的耳片称重，用左、右耳重量差表示DTH的程 度。实验结果见表4。
表4.对2,4-二硝基氯苯诱导小鼠DTH影响(mg，S)
注：n=12
表4结果显示复方多糖组小鼠耳肿胀差值高于空白对照组，与空白对照组相比具有显 著性差异（P<0.01），复方多糖对提高小鼠细胞免疫功能的作用明显。
3.对小鼠单核巨噬系统吞噬功能的影响
实验小鼠随机分为空白对照组和复方多糖组，每组12只，多糖的组分比例为紫皮石斛 多糖:枸杞多糖:虫草多糖为4.5:4.5:1，两组按表5剂量分别以复方多糖和蒸馏水等容灌 胃，连续灌胃14天，于末次后1h每鼠尾静脉注射1:5稀释的印度墨汁0.1ml/10g，即刻计时， 注射后2分钟、10分钟时分别以微量吸管从小鼠内眦静脉丛取血20μl/只,并立刻吹入2ml 0.1%的Na2CO3溶液中，混匀，每管取样200ul，置全功能酶标仪600nm处读取光密度（OD）值， 然后脱颈椎处死小鼠，摘取肝脏，脾脏，滤纸擦干表面血污，称重，以吞噬指数表示小鼠碳廓 清的能力，按照下式计算吞噬指数(K)和吞噬系数(α)。
实验结果显示复方多糖组吞噬指数高于空白对照组，P<0.01，具有显著差异。
表5.对小鼠RES吞噬功能的影响(mg，S)
注:与空白对照组对比,△△P<0.01n=12
表5结果显示复方多糖有提高机体非特异免疫功能的功效。
综上实验结果表明：
1.石斛枸杞虫草复合多糖均可显著提高小鼠血清循环抗体溶血素水平，具有提高机体 体液免疫功能的作用。
2.石斛枸杞虫草复合多糖可以提高DNFB诱导小鼠的DTH反应，具有提高细胞免疫 功能的功效。
3.石斛枸杞虫草复合多糖可提高小鼠网状内皮系统的碳廓清能力，对非特异免疫 功能具有增强作用。