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1、(10)申请公布号 CN 103431244 A (43)申请公布日 2013.12.11 CN 103431244 A *CN103431244A* (21)申请号 201310406260.4 (22)申请日 2013.09.09 A23K 1/18(2006.01) A23K 1/14(2006.01) A23K 1/16(2006.01) (71)申请人 华中师范大学 地址 430079 湖北省武汉市洪山区珞瑜路 152 号 (72)发明人 王玉凤 邵光明 (74)专利代理机构 武汉科皓知识产权代理事务 所 ( 特殊普通合伙 ) 42222 代理人 张火春 (54) 发明名称 一种提高。
2、克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲 料及添加剂 (57) 摘要 本发明公开了一种提高克氏原螯虾幼虾免疫 力的维生素饲料及添加剂, 属于水产养殖技术领 域。 提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料, 包 含如下按质量百分比计的组分 : 小麦粉 10-30%, 玉米粉10-20%, 矿物质1-2%, 鱼粉10-30%, 黄豆粉 30-50%, 鱼油 1-3%, 维生素 A0.0048-0.0060%, 维 生素 C0.02-0.08%, 维生素 E0.02-0.06%, 余量为 糊精。提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料 添加剂包含维生素 A、 维生素 C 和维生素 E。本发 明的饲料及添加剂能提高克氏。
3、原螯虾幼虾的成活 率、 体重增长率及鳃中酚氧化酶的活性, 并降低虾 肝胰腺中 MDA 含量和 SOD 活性, 提高其免疫力。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书7页 (10)申请公布号 CN 103431244 A CN 103431244 A *CN103431244A* 1/1 页 2 1. 一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料, 其特征在于包含如下按质量百分比 计的组分 : 小麦粉 10-30%, 玉米粉 10-20%, 矿物质 1-2%, 鱼粉 10-30%, 黄豆粉 30-。
4、50%, 鱼油 1-3%, 维生素 A 0.0048-0.0060%, 维生素 C 0.02-0.08%, 维生素 E 0.02-0.06%, 余量为糊 精 ; 所述的矿物质的组成如下 : KCl, 2-5% ; NaH2PO4, 8-12% ; KH2PO4, 18-25% ; Ca(H2PO4)2.2H2O, 23-30% ; CaCO3, 8-13% ; Ca-lac, 14-19% ; MgSO4.7H2O, 8-12% ; CoCl2.6H2O, 0.16-0.19% ; CuCl2, 0.04-0.06% ; KI, 0.04-0.06% ; MnSO4.4H2O, 0.13-0.。
5、15% ; 柠檬酸铁, 0.05-0.07% ; ZnSO4.7H2O, 0.04-0.06% ; AlCl.6H2O, 1-1.5%, 以上百分比为质量百分比。 2. 根据权利要求 1 所述的提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料, 其特征在于包含 如下按质量百分比计的组分 : 小麦粉 15%, 玉米粉 15%, 矿物质 1.5%, 鱼粉 20%, 黄豆粉 40%, 鱼油2%, 维生素A 0.0048-0.0060%, 维生素C 0.02-0.08%, 维生素E 0.02-0.06%, 余量为糊 精。 3. 根据权利要求 2 所述的提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料, 其特征在于包含 如下按。
6、质量百分比计的组分 : 小麦粉 15%, 玉米粉 15%, 矿物质 1.5%, 鱼粉 20%, 黄豆粉 40%, 鱼油 2%, 维生素 A 0.0060%, 维生素 C 0.02%, 维生素 E 0.04%, 余量为糊精。 4. 根据权利要求 3 所述的提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料, 其特征在于 : 所述的矿物质的组成如下 : KCl, 2.8% ; NaH2PO4, 10% ; KH2PO4, 21.5% ; Ca(H2PO4)2.2H2O, 26.5% ; CaCO3, 10.5% ; Ca-lac, 16.5% ; MgSO4.7H2O, 10% ; CoCl2.6H2O, 0.。
7、176% ; CuCl2, 0.051% ; KI, 0.058% ; MnSO4.4H2O, 0.143% ; 柠檬酸铁, 0.061% ; ZnSO4.7H2O, 0.511% ; AlCl.6H2O, 1.2%。 5. 一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料添加剂, 其特征在于 : 包含维生素 A、 维生素 C 和维生素 E, 其添加量分别为饲料总质量的 0.0048-0.0060%、 0.02-0.08% 和 0.02-0.06%。 6. 根据权利要求 5 所述的提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料添加剂, 其特征在 于 : 维生素 A 添加量为 0.006%, 维生素 C 添加量为。
8、 0.02%, 维生素 E 添加量为 0.04%。 权 利 要 求 书 CN 103431244 A 2 1/7 页 3 一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料及添加剂 技术领域 0001 本发明属于水产养殖技术领域, 涉及促进克氏原螯虾健康养殖的方法, 特别涉及 一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料及添加剂。 背景技术 0002 克氏原螯虾 (Procambarus clarkii) 属节肢动物门、 甲壳纲、 十足目, 又名红色沼 泽螯虾, 俗称淡水龙虾或小龙虾。目前人们对克氏原螯虾的科学养殖方法还知之较少, 加 上一些宣传资料的误导, 认为克氏原螯虾对环境要求低、 病害少等, 忽视了。
9、对其病害的防 治工作, 导致克氏原螯虾养殖过程中出现重大病害, 使克氏原螯虾养殖业遭受巨大损失。 2007 年, 在江苏省的盱眙、 金湖、 泗阳、 江都、 南京等地先后发生了克氏原螯虾重大病害, 死 亡率最高达 50%(张修旺 , 严维辉 . 克氏原螯虾疾病产生原因分析及防治对策 . 水产养 殖 ,2009,(7):35) 。2008 年, 在湖北省荆州等地也发生了克氏原螯虾暴发性疾病, 造成了大 面积养殖克氏原螯虾的死亡 (陈昌福 . 克氏原螯虾的病原生物与养殖方式对疾病控制的关 系 . 渔业致富指南 ,2008,(21):53-60) 。从发病的克氏原螯虾体内已经检测到致病的细菌 和病毒,。
10、 而且发现这些细菌和病毒确实具有很强的传染性。对克氏原螯虾养殖过程中出现 的疾病还没有非常有效的治疗方法, 病害的出现成为当前克氏原螯虾养殖业持续发展的瓶 颈问题。 大量渔用杀虫药和抗生素的滥用, 虽然对疾病有一定的控制作用, 但往往会造成致 病微生物的耐药性以及药物残留等问题, 甚至引起整个水体生态环境的失衡。目前对提高 克氏原螯虾免疫力的维生素饲料添加剂还没有研究报道。 发明内容 0003 本发明的首要目的在于提供一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料。 0004 本发明的目的还在于提供一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料添加剂。 0005 本发明的目的通过下述技术方案实现 : 00。
11、06 一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料, 包含如下按质量百分比计的组 分 : 小麦粉10-30%, 玉米粉10-20%, 矿物质1-2%, 鱼粉10-30%, 黄豆粉30-50%, 鱼油1-3%, 维 生素 A0.0048-0.0060%, 维生素 C0.02-0.08%, 维生素 E0.02-0.06%, 余量为糊精。 0007 所述的幼虾为 2-4 月龄的幼虾。 0008 所述的矿物质的组成 (质量 %)如下 : KCl, 2-5% ; NaH2PO4, 8-12% ; KH2PO4, 18-25% ; Ca(H2PO4)22H2O, 23-30% ; CaCO3, 8-13% ;。
12、 Ca-lac(乳 酸 钙) , 14-19% ; MgSO47H2O, 8-12% ; CoCl26H2O, 0.16-0.19% ; CuCl2, 0.04-0.06% ; KI, 0.04-0.06% ; MnSO44H2O, 0.13-0.15% ; 柠 檬酸铁, 0.05-0.07% ; ZnSO47H2O, 0.04-0.06% ; AlCl6H2O, 1-1.5%。 0009 优选为, 所述的提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料, 包含如下按质量百 分比计的组分 : 小麦粉 15%, 玉米粉 15%, 矿物质 1.5%, 鱼粉 20%, 黄豆粉 40%, 鱼油 2%, 维 生素 。
13、A0.0048-0.0060%, 维生素 C0.02-0.08%, 维生素 E0.02-0.06%, 余量为糊精。更优选 的, 维生素 A0.0060%, 维生素 C0.02%, 维生素 E0.04% ; 矿物质的组成 (质量 %)如下 : KCl, 说 明 书 CN 103431244 A 3 2/7 页 4 2.8% ; NaH2PO4, 10% ; KH2PO4, 21.5% ; Ca(H2PO4)22H2O, 26.5% ; CaCO3, 10.5% ; Ca-lac, 16.5% ; MgSO47H2O, 10% ; CoCl26H2O, 0.176% ; CuCl2, 0.051%。
14、 ; KI, 0.058% ; MnSO44H2O, 0.143% ; 柠 檬酸铁, 0.061% ; ZnSO47H2O, 0.511% ; AlCl6H2O, 1.2%。 0010 一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料添加剂, 包含维生素 A、 维生素 C 和 维生素E, 其添加量分别为饲料总质量的0.0048-0.0060%、 0.02-0.08%和0.02-0.06% ; 优选 的, 维生素 A 添加量为 0.006%, 维生素 C 添加量为 0.02%, 维生素 E 添加量为 0.04%。 0011 本发明相对于现有技术具有如下优点和效果 : 提高克氏原螯虾幼虾的免疫力。 001。
15、2 本发明揭示了维生素 A、 维生素 C 和维生素 E 对克氏原螯虾生长及免疫力的影响。 本发明的饲料及添加剂能提高克氏原螯虾幼虾的成活率、 体重增长率及鳃中酚氧化酶的活 性, 并降低虾肝胰腺中 MDA 含量和 SOD 活性。 具体实施方式 0013 下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述, 但本发明的实施方式不限于此。 0014 实验开始前, 随机选取约 2 月龄大的克氏原螯虾, 平均体重 0.5g, 体形相近, 体色 相似, 健康活泼, 将 3 个因子 : 维生素 A、 C、 E(VA、 VC、 VE) 各设 3 个水平, 根据正交旋转设 计 L18(37) 表设计了 18 种组合 (表。
16、 1) , 将其分别添加到基础饲料中, 安排了 18 种饲料配 方 (表 2) , 分别投喂 18 组虾 (每组 25 只) 。每日喂食二次, 分别为早上 8:00-9:00 与傍晚 17:00-18:00, 喂食量以第二次喂食时略有剩余为准。每日吸去水族箱内残饵与排泄物, 并 换水。 充氧泵持续充氧, 水温19左右 (由于要检测幼虾的免疫力, 对不良环境的抵抗力, 所 以饲养条件偏差) 。50 天后测定生长指标 (成活率、 体重增长率) 以及免疫相关指标 (丙二醛 (MDA) 含量、 超氧化物歧化酶 (SOD) 活性、 酚氧化酶 (PO) 活性) 。 0015 实施例 1 0016 提高克氏。
17、原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料配方试验 0017 试验饲料具体配方见表 2。饲料通过混合均匀, 用压面机压制成长条, 再切成 2mm 左右长的沉性颗粒状, 于 60的烘箱内烘干 8 小时而成, 密封贮存在 4冰箱内。饲料在实 验用水中 3 小时内不分散。糊精用来补平差额部分。 0018 表 1 不同处理组合中维生素 A、 C 和 E 的含量 (% 干重) 0019 说 明 书 CN 103431244 A 4 3/7 页 5 0020 表 1 中括号内的 1、 2、 3 代表各因子的三个水平。 0021 表 2 饲料配方 (% 干重) 0022 0023 说 明 书 CN 103431244 A。
18、 5 4/7 页 6 0024 其 中,矿 物 质 的 组 成 (质 量 %)如 下 : KCl, 2.8% ; NaH2PO4, 10% ; KH2PO4, 21.5% ; Ca(H2PO4)22H2O, 26.5% ; CaCO3, 10.5% ; Ca-lac, 16.5% ; MgSO47H2O, 10% ; CoCl26H2O, 0.176% ; CuCl2, 0.051% ; KI, 0.058% ; MnSO44H2O, 0.143% ; 柠檬酸铁, 0.061% ; ZnSO47H2O, 0.511% ; AlCl.6H2O, 1.2%。 0025 实施例 2 0026 不同维。
19、生素添加量对克氏原螯虾成活率的影响试验 0027 表 3 各因素及其水平对克氏原螯虾成活率及体重增长率的极差分析 0028 说 明 书 CN 103431244 A 6 5/7 页 7 0029 0030 不同维生素添加量组合下, 克氏原螯虾的成活率不同。根据表 3 的极差可以发现, C 因子 (维生素 E 的添加量) 的极差最大, 说明其对克氏原螯虾的成活率的影响最大, 其次 是 B 因子 (维生素 C 添加量) 。而 A 因子 (维生素 A 添加量) 的极差值 (4) 小于空列的极差值 (5.4) , 说明其对克氏原螯虾的成活率的影响没有达到显著水平。由表 3 分析可以发现, 因 子水平组。
20、合为 A3B1C2或 A3B3C2时成活率最高, 但由于 A 因子对克氏原螯虾的成活率的影响 没有达到显著水平, B 因子在水平 1 和 3 条件下的成活率相同, 考虑到成本因素, A 因子和 B 因子都可选水平 1, 即 : 要想获得最高成活率, 可选 A1B1C2作为最优组合方案, 即 A 因子的水 平 1, B 因子的水平 1, C 因子的水平 2, 也就是维生素 A 添加量为 0.0048%, 维生素 C 添加量 为 0.02%, 维生素 E 添加量为 0.04%。 0031 实施例 3 0032 不同维生素添加量对克氏原螯虾体重增长率的影响试验 0033 不同维生素添加量组合下, 克。
21、氏原螯虾的生长情况也不同。克氏原螯虾体重增长 率 ( 终体重 - 起始体重 )/ 起始体重 的极差分析结果见表 3。由表 3 可知, C 因子 (维生 素 E 的添加量) 的极差最大, 说明其对克氏原螯虾的体重增长率的影响最大。其次是 A 因 子, 而 B 因子的极差值 (5.6) 小于空列的极差值 (11.8) , 说明其对克氏原螯虾体重增长率的 影响没有达到显著水平。由表 3 分析可以发现, 因子水平组合为 A3B2C2时体重增长率最高。 但由于 B 因子对克氏原螯虾体重增长率的影响没有达到显著水平, 考虑到成本因素, B 因子 可选水平 1, 即可选择 A3B1C2作为最优组合方案, 即。
22、 A 因子的水平 3, B 因子的水平 1, C 因子 的水平 2, 也就是维生素 A 添加量为 0.0060%, 维生素 C 添加量为 0.02%, 维生素 E 添加量为 0.04%。 0034 实施例 4 0035 不同维生素添加量对克氏原螯虾肝胰腺 MDA 含量的影响试验 0036 生物体内, 自由基作用于脂质发生过氧化反应, 丙二醛 (MDA) 是脂质过氧化反应的 最主要的产物之一, 其在体内过多积累会对细胞产生毒害。 因此其在体内含量越低, 说明机 体免疫力越高, 清除这些毒害物质的能力越强。 不同维生素添加量组合下, 克氏原螯虾肝胰 腺中 MDA 含量也不同。克氏原螯虾肝胰腺中 M。
23、DA 含量的极差分析结果见表 4。由表 4 可知, 三个因子都对克氏原螯虾肝胰腺中 MDA 含量有显著影响, 其中 B 因子影响最大, A 因子影响 最小。由表 4 分析可以发现, 因子水平组合为 A2B1C1时 (维生素 A 添加量为 0.0054%, 维生素 C 添加量为 0.02%, 维生素 E 添加量为 0.02%) , 克氏原螯虾肝胰腺中 MDA 含量最低。 0037 表 4 各因素及其水平对克氏原螯虾免疫相关指标的极差分析 0038 说 明 书 CN 103431244 A 7 6/7 页 8 0039 实施例 5 0040 不同维生素添加量对克氏原螯虾肝胰腺 SOD 活力的影响试。
24、验 0041 超氧化物歧化酶 (SOD) 是生物体内重要的抗氧化酶, 能够清除体内自由基, 对抗与 阻断因氧自由基对细胞造成的损害。现有研究发现, 在虾、 蟹等甲壳动物中, 饲料中添加适 当的维生素提高了机体的抗氧化能力, 使得机体内过氧化产物较少, 而较低水平的过氧化 产物 (如MDA) 不能刺激SOD活性, 所以免疫力增高时会出现MDA含量和SOD活性都比较低的 现象 (Wang TT,Wang MY,Wang YF.Dietary reduction of fish meal,supplementation of vitamin C and fish oil may promote ov。
25、ary maturation by improving digestibility and immunity in Procambarus clarkii(Crustacea:Decapoda).Aquaculture Research, 2012,43:1669-1676 ; 艾春香香, 陈立侨, 刘晓玲, 高露姣, 温小波.维生素C对中华绒螯蟹非 特异性免疫的影响 . 水产学报 ,2008,32(2):249-256) 。本试验中不同维生素添加量组合 下, 克氏原螯虾肝胰腺中 SOD 活性也不同。克氏原螯虾肝胰腺中 SOD 活性的极差分析结果 见表 4。由表 4 可知, 三个因子中只有 B。
26、 因子对克氏原螯虾肝胰腺中 SOD 活性有显著影响, 而 A 因子和 C 因子对克氏原螯虾肝胰腺中 SOD 活性的影响都不显著。由表 4 分析可以发 现, 因子水平组合为 A2B1C1时, 克氏原螯虾肝胰腺中 SOD 活性最低。但由于 A 因子对克氏原 螯虾肝胰腺中 SOD 活性的影响不显著, 考虑到成本因素, 可以选 A1B1C1(维生素 A 添加量为 0.0048%, 维生素 C 添加量为 0.02%, 维生素 E 添加量为 0.02%) 作为最优组合方案。 0042 实施例 6 0043 不同维生素添加量对克氏原螯虾鳃组织 PO 活性的影响试验 0044 酚氧化酶 (PO) 是在氧分子存。
27、在下, 能把酚类氧化成醌的酶, 进而形成黑色素, 在机 说 明 书 CN 103431244 A 8 7/7 页 9 体免疫过程中起重要作用。已有研究表明, 克氏原螯虾肝胰腺中 PO 活性较低, 而鳃组织中 PO 活性较强 (王建国 , 陆宏达 . 硫酸锌胁迫对克氏原螯虾非特异性免疫因子的影响 . 江苏 农业学报 ,2011,27(1):129-136) , 所以本实验测定了不同维生素添加量对克氏原螯虾鳃中 PO 活性的影响。结果发现, 不同维生素添加量组合下, 克氏原螯虾鳃中 PO 活性也不同。克 氏原螯虾鳃中 PO 活性的极差分析结果见表 4。由表 4 可知, 三个因子中只有 C 因子对克。
28、氏 原螯虾鳃中 PO 活性有显著影响, 而 A、 B 因子的影响都未达到显著水平。由表 4 分析可以 发现, 因子水平组合为 A3B2C1时, 克氏原螯虾鳃中 PO 活性最高。但由于 A、 B 因子的影响都 未达到显著水平, 考虑成本因素, 可以选择 A1B1C1作为最优组合方案, 即维生素 A 添加量为 0.0048%, 维生素 C 添加量为 0.02%, 维生素 E 添加量为 0.02%。 0045 上述结果表明, 在这三个影响因子中, 维生素E的作用最大, 其次是维生素C。 添加 一定量的维生素 E 能显著提高克氏原螯虾幼虾的成活率、 体重增长率及鳃中酚氧化酶的活 性。添加一定量的维生素。
29、 C 显著降低虾肝胰腺中 MDA 含量和 SOD 活性。然而过多地添加维 生素 C 和 E 对克氏原螯虾的成活、 生长和免疫力都有负面影响。综合考虑成活率、 体重增长 率、 免疫相关指标及成本因素, 最终选定 A3B1C2(维生素 A 添加量为 0.0060%, 维生素 C 添加 量为 0.02%, 维生素 E 添加量为 0.04%) 作为最优组合方案。 0046 上述实施例为本发明较佳的实施方式, 但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制, 其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化, 均应为等效的置换方式, 都包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 103431244 A 9 。