技术领域
本发明属于医药技术领域，更具体地说，涉及胡椒酸保肝护肝的应用。
背景技术
我国现有乙肝病毒感染者约1亿多人，有慢性肝炎病人2000万人，是名副其实的 “肝炎大国”。我国现有的肝硬化、肝癌等严重疾病，80%以上都是由肝炎发展而来。由于目前 尚无彻底的一次性治愈肝炎的特效药物问世，肝炎治疗的难度较大，其诊疗过程注定是一 场漫长的“马拉松战役”，应该采取预防为主、治疗为辅的防治策略。
黑胡椒是药食同源植物，是国内外常用的食品调料，收载于《中国药典》（2010年版 227页）和《中华本草》（蒙药卷287页）。黑胡椒，英文名：FRUCTUSPIPERIS，本品为胡椒科植 物胡椒PipernigrumL.的干燥近成熟或成熟果实。秋末至次春果实呈暗绿色时采收，晒 干，为黑胡椒。性状：黑胡椒呈球形，直径3.5～5mm。表面黑褐色，具隆起网状皱纹，顶端有细 小花柱残迹，基部有自果轴脱落的疤痕。质硬，外果皮可剥离，内果皮灰白色或淡黄色。断面 黄白色，粉性，中有小空隙。气芳香，味辛辣。性味与归经：辛，热。归胃、大肠经。功能与主治： 温中散寒，下气，消痰。用于胃寒呕吐，腹痛泄泻，食欲不振，癫痫痰多。
2002年开始，博日吉汗格日勒图、金桩、赵睿国、包兰兰、吴勇、麻春杰、韩景芬等， 对胡椒科植物荜茇乙醇提取物及其衍生物做了大量的研究工作，首次分离出足量的胡椒基 酰胺天然物质：荜茇啉Pipernonaline,C21H27NO3,荜茇宁Piperlonguminine,C16H19NO3和胡 椒碱Piperine,C17H19NO3。
发明内容
发明人经大量的研究令人惊奇地发现胡椒酸具有优异的保肝护肝作用。
本发明的目的是提供胡椒酸保肝护肝的应用。
在本发明的技术方案中，胡椒酸，或GB-H，是指下列结构的化合物：
本发明提供了一种胡椒酸在制备保肝护肝药物中的应用。
本发明提供了一种胡椒酸在制备降低血清谷丙转氨酶的药物中的应用。
本发明提供了一种胡椒酸在制备降低谷草转氨酶的药物中的应用。
本发明提供了一种胡椒酸在制备保肝护肝保健品中的应用。
本发明提供了一种胡椒酸在制备降低血清谷丙转氨酶的保健品中的应用。
本发明提供了一种胡椒酸在制备降低谷草转氨酶的保健品中的应用。
本发明提供了一种胡椒酸在制备保肝护肝药物中的应用，其中所述药物，其单位 剂量中的胡椒酸含量为0.5mg-2000mg，更优选地为1mg-1000mg。
在本发明的实施方案中，本发明胡椒酸的给药途径包括口服给药、或非胃肠道给 药。对于本领域普通技术人员而言，本发明胡椒酸可根据现有技术来制备成口服药物制剂、 注射剂、保健食品，例如，根据崔德福主编的《药剂学》（第6版），人民卫生出版社，2007年8 月，制备成液体制剂（如口服溶液、注射液等）、固体制剂（片剂、胶囊剂等）。对于本领域普通 技术人员而言，本发明胡椒酸每日的用量可以为10mg至5g，可采用每日一次，或者每日二至 三次。
本发明的胡椒酸可以通过中国发明专利ZL20041009611.7中公开的方法制备：采 用乙醇提取黑胡椒，其提取液与氢氧化钾反应，得到GB-K（即胡椒酸钾），GB-K的水溶液与稀 盐酸反应得到GB-H。该反应路线如下所示：
本发明试验结果表明：胡椒酸在降低血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）方 面等同于对照药肝得健，因此，胡椒酸具有降低血清谷丙转氨酶，降低谷草转氨酶，保肝护 肝的用途。
附图说明
图1表示的是胡椒酸的500MHz1H-NMR谱图。
图2表示的是胡椒酸（GB-H）的125MHz13C-NMR核磁共振谱图。
图3、5均表示的是各组大鼠血清ALT值的比较■为与模型组比较有极显著差异（P ＜0.01）●为与模型组比较有极显著差异(P＜0.05)
图4、6均表示的是各组大鼠血清AST值的比较■为与模型组比较有极显著差异（P ＜0.01）●为与模型组比较有极显著差异(P＜0.05)
具体实施方式
实施例1
胡椒酸（GB-H）的制备
1.将100g黑胡椒加入无水乙醇中，在75℃下加热回流，回流提取三次，加入无水乙 醇的量和回流时间为：第一次300ml、6h；第二次200ml、2h；第三次100ml、1h。
2.合并三次黑胡椒提取液，35℃水浴中减压蒸馏进行浓缩。
3.在浓缩液中加入14.20g氢氧化钾，在89℃进行回流10h，然后静置冷却15h，此时 反应液呈黄色。
4.把反应液进行抽滤，得到的滤饼就是GB-K的粗品。
5.将GB-K粗品倒入烧瓶中，再加入去离子水500ml，搅拌使其溶解，得到棕黄色溶 液。
6.将棕黄色溶液倒入烧瓶中，搅拌情况下滴加稀盐酸（1：1、pH=1～2）。
7.此过程中，棕黄色溶液中产生绿黄色固体。
8.静置抽滤。
9.把混合酸粗品用去离子水清洗至pH=6～7；
10.抽滤，滤饼在烘箱内进行烘干24小时。
11.得到绿黄色混合酸粉末，即胡椒酸（GB-H）。
GB-H的分子式C12H9KO4，ESI-MSm/z:217.0[M-K]-。具体的反应条件如下：
实施例2
胡椒酸（GB-H）的结构确定
使用500MHz布鲁克核磁共振仪，用氘代水做溶剂，测定胡椒酸的500MHz1H-NMR谱 图（见图1）和胡椒酸（GB-H）125MHz13C-NMR核磁共振谱图（见图2）。
胡椒酸1H-NMR谱图化学位移数据表，单位ppm
GB-H的氢原子编号 化学位移，ppm H-2 5.923，5.953 H-3 7.341，7.335，7.321，7.311，7.306，7.296 H-4 6.945，6.939，6.923 H-5 6.976，6.971 H-7 7.023，7.020，7.007，7.004 H-10 6.986 H-11 7.245，7.243 H-12 12.251
胡椒酸13C-NMR谱图化学位移数据表，单位ppm
实施例3
胡椒酸保肝护肝预防性实验
1.实验动物及材料
实验动物：二级雄性Wistar大鼠，体重180±10g，许可证号：SCXK（京）2006-2009， 级别SPF/AF，由北京维通利华实验动物中心提供。
实验试剂：
胡椒酸由内蒙古大学高分子化学及蒙药研究所根据本发明实施例1制备；
ALT、AST试剂盒由中生北控生物科技股份有限公司生产；
肝得健（essentiale,EssentialeForte）：赛诺菲安万特（北京）制药有限公司生 产；
实验仪器：意大利产PRONTOEVOLUTION（奔腾加强型）全自动生化分析仪；
TDL-5-A离心机（上海产）；
高脂饲料的制备：
胆固醇3%，猪油10%，胆酸钠0.5%，
基础饲料86.5%（配方：面粉20%，米粉10%，玉米20%，麸皮25%，豆料20%，骨粉2%，鱼 粉2%，食盐0.9%，维生素0.1%）
2试验方法
分组及给药:取雄性Wistar大鼠60只，体重180±10g，实验前在实验环境下(室温 20～24℃，湿度50%～60%，自由饮水)饲喂3天后，按体重随机分成6组，每组10只，1组为空白 对照组；2组为肝炎模型组；3组为阳性对照（肝得健）组；4组为胡椒酸高剂量组；5组为胡椒 酸中剂量组；6组为胡椒酸低剂量组；于第四天开始，除空白组外其余各组每天早晨以52度 白酒灌胃（7ml/kg），每天下午5:30灌胃给予受试药和阳性对照组药（0.4mL/100g），连续灌 胃5周，每日给药前对大鼠进行体重测定，肝炎模型组和空白对照组灌胃同体积的0.5%CMC- Na。分组情况及各组给药量见表1。
测定与观察方法：继续给药至第35天，于第36天从股动脉取血，离心，分离血清供 测定ALT、AST等生化指标，对所得数据进行统计学处理，与均数±标准差表示，差异显著性 以T检验判定。
3试验结果:
实验结果列入表1、2、3、4、5，结果图示如图3、4。
表1分组情况及各组给药量
表2给药后第35天的大鼠ALT含量测定结果（单位U/L）
各组大鼠血清ALT值的比较（见图3）
表3对大鼠血清ALT的影响（均值±标准差）分析（U/L）
组别 动物例数（只） ALT P值 空白对照组 10 43.75±6.55 **1.1×10-10 肝炎模型组 10 151.93±26.31 肝得健组 10 106.56±16.42 **6.6×10-5 高剂量组 10 108.43±19.55 **0.0002 中剂量组 10 116.42±29.43 **0.0047 低剂量组 10 127.41±28.55 *0.0285
P值是指各组与对照组比较：*P＜0.05，有显著差异；**P＜0.01，有极显著差异。
表4给药后第35天大白鼠AST含量测定结果（单位U/L）
各组大鼠血清AST值的比较（见图4）
表5对大白鼠血清AST的影响（均值±标准差）分析（U/L）
组别 动物例数（只） AST P值 空白对照组 10 166.28±16.68 **1.6×10-11 肝炎模型组 10 449.33±45.44 肝得健组 10 294.44±72.12 **4.4×10-5 高剂量组 10 301.08±77.52 **0.00013 中剂量组 10 315.31±70.52 **0.00020 低剂量组 10 345.41±101.60 *0.01163
P值是指各组与对照组比较：*P＜0.05，有显著差异；**P＜0.01，有极显著差异。
4、分析
以上结果表明，肝炎模型组与空白对照组比较，AST、ALT值升高，而且两组比较有 极显著差异，说明造模成功。各组比较模型组都有一定的降AST、ALT作用。上述结果证明了 胡椒酸具有降低AST、ALT的作用。
实施例4
胡椒酸治疗脂肪肝实验
1实验动物及材料
实验动物：二级雄性Wistar大鼠，体重170±10g，许可证号：SCXK（京）2006-2009， 级别SPF/AF，由北京维通利华实验动物中心提供。
实验试剂：
胡椒酸由内蒙古大学高分子化学及蒙药研究所按照实施例1制备；
ALT、AST试剂盒由中生北控生物科技股份有限公司生产；
肝得健：赛诺菲安万特（北京）制药有限公司生产；
实验仪器：意大利产PRONTOEVOLUTION（奔腾加强型）全自动生化分析仪；
TDL-5-A离心机（上海产）；
高脂饲料的制备：
胆固醇3%，猪油10%，胆酸钠0.5%，
基础饲料86.5%（配方：面粉20%，米粉10%，玉米20%，麸皮25%，豆料20%，骨粉2%，鱼 粉2%，食盐0.9%，维生素0.1%）
2试验方法
分组及给药:取雄性Wistar大鼠90只，体重170±10g，实验前在实验环境下(室温 20～24℃，湿度50%～60%，自由饮水)饲喂3天后，于第四天开始，留15只鼠为空白组饲喂普 通饲料，其余鼠每天饲喂高脂饲料，早晨以52度白酒灌胃（7ml/kg），每天下午5:30连续灌胃 4周。各组称体重，眼眶取血，测定ALT，见表6。空白组淘汰5只。模型组淘汰25只ALT过高或过 低的大鼠，按ALT水平随机分成5组见表7，每组10只，分别为酒精性脂肪肝肝炎模型组；阳性 对照（肝得健）组；胡椒酸高剂量组；胡椒酸中剂量组；胡椒酸低剂量组。灌胃给予受试药和 阳性对照组药（0.4mL/100g），模型组和空白对照组灌胃同体积的0.5%CMC-Na。分组情况及 各组给药量见表8。
测定与观察方法：继续给药2周，于第15天从股动脉取血，离心，分离血清供测定 ALT、AST等生化指标，对所得数据进行统计学处理，与均数±标准差表示，差异显著性以T检 验判定。
3试验结果：
实验结果列入表6、7、8、9、10、11、12，结果图示如图5、6。
表6第4W的大鼠ALT含量测定结果（单位U/L）
注：红色斜体的数据弃掉。
表7去除ALT过高或过低大鼠以ALT水平随机分组情况（单位U/L）
表8分组情况及各组给药量
表9给药后第15天的大鼠ALT含量测定结果（单位U/L）
各组大鼠血清ALT值的比较（见图5）
表10对大鼠血清ALT的影响（均值±标准差）分析（U/L）
组别 动物例数（只） ALT P值 空白对照组 10 55.73±8.99 **5.6×10-14
肝炎模型组 10 174.29±19.26 肝得健组 10 140.05±9.11 **8.8×10-6 高剂量组 10 144.47±12.82 **0.0002 中剂量组 10 150.80±15.93 **0.0032 低剂量组 10 147.33±15.83 **0.0011
P值是指各组与对照组比较：*P＜0.05，有显著差异；**P＜0.01，有极显著差异。
表11给药后第15天大白鼠AST含量测定结果（单位U/L）
各组大鼠血清AST值的比较（见图6）
表12对大白鼠血清AST的影响（均值±标准差）分析（U/L）
组别 动物例数（只） AST P值 空白对照组 10 172.05±12.41 **2.7×10-10 肝炎模型组 10 561.92±101.90 肝得健组 10 408.11±84.10 **0.0018 高剂量组 10 427.76±99.93 **0.0071 中剂量组 10 449.73±79.72 *0.0116 低剂量组 10 520.36±101.8 0.3632
P值是指各组与对照组比较：*P＜0.05，有显著差异；**P＜0.01，有极显著差异。
4、分析
血清ALT、AST活性升高明显，可作为急性期肝功能损害的主要诊断指标，以上结果 表明，酒精性脂肪肝肝炎模型组与空白对照组比较，AST、ALT值升高，而且两组比较有极显 著差异，说明造模成功。各组比较模型组都有一定的降AST、ALT作用。除胡椒酸低剂量组对 AST项无显著性以外，其余各组比较模型组都有显著性降低。
试验结果与结论
在降低谷丙转氨酶方面，实验结果表明GB-H组、酒精性脂肪肝肝炎模型组与空白 对照组比较有极显著差异。GB-H治疗效果更加显著。
在降低谷草转氨酶方面，GB-H组、酒精性脂肪肝肝炎模型组与空白对照组比较有 极显著差异。GB-H治疗高谷草转氨酶作用十分明显。
总之，GB-H具有保肝护肝作用。