大花型兰花的培育与快速繁殖方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102726288 A (43)申请公布日 2012.10.17 CN 102726288 A *CN102726288A* (21)申请号 201210253074.7 (22)申请日 2012.07.22 A01H 1/02(2006.01) A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 云南农业大学 地址 650000 云南省昆明市北郊黑龙潭云南 农业大学 (72)发明人 李枝林 杨根华 王有国 唐敏 张小平 张爱玲 李叶芳 (74)专利代理机构 昆明正原专利商标代理有限 公司 53100 代理人 金耀生 (54) 发明名称 大花型兰花的培育与快速繁殖方。

2、法 (57) 摘要 本发明是大花型兰花的培育与快速繁殖方 法。将碧玉兰、 独占春、 文山红柱兰及大花蕙兰等 兰株在资源圃内进行杂交育种和果实培育， 待培 育至兰花果实到九成熟， 果皮略显黄色时摘取进 行杂交育种， 经外植体处理、 种子无菌萌发培养， 种子萌发长出幼根， 转接到改良培养基中培养， 4 6 个月后逐渐成为具有根系并可炼苗和移栽 的试管苗 ； 经增殖、 分化诱导与生根培养， 根长达 1cm 左右时可出瓶在温室炼苗， 1-2 个月后在大棚 利用设施栽培。本发明的方法不但培育出了新品 种， 还能进行快速繁殖， 以满足 “花香色艳” 的产业 化需求。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1。

3、 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 大花型兰花的培育与快速繁殖方法， 其特征在于按以下步骤进行 ： （1） 材料 ： 将采得的碧玉兰、 独占春、 文山红柱兰及大花蕙兰等兰株在资源圃内进行杂 交育种和果实培育， 待培育至兰花果实到九成熟， 果皮略显黄色时摘取 ； （2） 培养方法 选取自然花期接近一致的大花型兰花， 待父母本花序 1/2 花蕾开放时陆续进行授 粉育种操作 ； 外植体处理 ： 90% 成熟度果实经 75% 酒精消毒 40 秒后， 转入 0.1% 氯化汞表面消毒 812分钟， 用无。

4、菌水冲洗34次， 在无菌室取出种子， 用纱布包好种子后， 以少量无菌水 润洗 5 次， 然后用 0.1mol/L KOH 溶液浸泡 8 12 分钟， 再用无菌水冲洗 3 次， 在饱和漂白 粉上清液中消毒 10 20 分钟， 再用无菌水冲洗 5 次后接种到固体培养基中 ； 种子无菌萌发培养 ： 筛选出改良 MS（即 1/2MS） 为较适宜的基本培养基， 加生长调 节剂的配方为 ： 改良 MS+6-BA0.5 3.0mg.L-1+NAA1.0 1.5mg.L-1 ， 用暗箱培养， 温度 242， 光照18002500勒克斯 （lx） ， 每天光照12小时， 培养基 pH5.8 ； 琼脂7g/L， 。

5、3个 月后发芽 ； 种子萌发后先长出芽， 随后长出幼根， 转接到改良 MS+6-BA0.3mg.L-1+NAA0.5mg. L-1培养基中培养 ,4 6 个月后逐渐成为具有根系并可炼苗和移栽的试管苗 ； （3） 增殖、 分化诱导与生根培养 原球茎增殖培养 ： 种子萌发后， 多形成原球茎， 可进行增殖培养， 培养基及配方是 ： 改良 MS + 6-BA1.0-3.0 mg.L-1 + NAA 0.3-0.8 mg.L-1， 培养 30 45 天 ； 原球茎分化培养 ： 原球茎进行分化培养后能形成试管苗， 其培养基及配方为 ： 改良 MS + 6-BA2.0-3.5 mg.L-1 + NAA0.3。

6、-0.8 mg.L-1 + 香蕉泥 80g/L， 培养 35 55 天 ； 试管苗生根培养 ： 生根培养配方为 ： 改良 MS + 6-BA0.3- 0.8mg.L-1 + NAA0.5-2.5 mg.L-1， 通过 26 36 天诱导出的根长达 1cm 左右时可出瓶在温室炼苗， 1-2 个月后在大棚 利用设施栽培 ； 增殖、 分化诱导与生根培养条件 ： 增殖、 分化诱导与生根培养过程中， 均采用光照培养， 温度 242， 光照 1800 2500 勒克斯 （lx） ， 每天光照 12 小时， 培养基 pH5.8。 权 利 要 求 书 CN 102726288 A 2 1/4 页 3 大花型兰。

7、花的培育与快速繁殖方法 0001 技术领域 0002 本发明涉及植物培植技术领域， 具体地说是大花型兰花新品种的育种与快速繁殖 方法。 背景技术 0003 大花型兰花是指兰属 （Cmbidium） 中大花亚属植物， 主要特点是花型较大。兰花花 期差异， 必须控制花期或保存花粉才能按时授粉。 兰花杂交种子很小， 内含一些发育不完全 的胚， 无胚乳， 自然状态下很难萌发。虽有人作过兰属植物的育种和种子的萌发研究， 但大 花型兰花杂交育种和快速繁殖未见报道。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种为兰花育种和产业化生产奠定重要技术基础的大花型 兰花的育种与快速繁殖方法。 0005 本发明对四种大。

8、花型兰花种子进行了无菌萌发研究， 成功地培育出大量试管苗。 0006 碧 玉 兰 （Cmbidium lowianum） 、独 占 春 （C. eburneum） 、文 山 红 柱 兰 （C. wenshanense） 及大花蕙兰 （C.hyridus） 是兰科兰属中大花亚属不同种植物， 以这四种兰花 为亲本培育杂交种兰花， 具体的育种与繁殖方法为 ： 1、 材料来源 ： 兰株采自云南文山、 保山、 普洱等不同地区， 大花蕙兰购置于昆明斗南花 卉市场。将采集的野生兰株在温室内栽培驯化， 选取花期相近的类型进行杂交育种和果实 培育 （现有技术） ， 待培育至兰花果实到九成熟， 果皮略显黄色时摘取。

9、。 0007 2、 培养方法 ： （1） 杂交育种 ： 选取自然花期接近一致的大花型兰花， 待父母本花序 1/2 花蕾开放时陆续进行授 粉育种操作 ； 外植体处理 ： 90% 成熟度果实经 75% 酒精消毒 40 秒后， 转入 0.1% 氯化汞表面消毒 812分钟， 用无菌水冲洗34次， 在无菌室取出种子， 用纱布包好种子后， 以少量无菌水 润洗 5 次， 然后用 0.1mol/L KOH 溶液浸泡 8 12 分钟， 再用无菌水冲洗 3 次， 在饱和漂白 粉上清液中消毒 10 20 分钟， 再用无菌水冲洗 5 次后接种到固体培养基中。 0008 （2） 种子无菌萌发培养 ： 筛选出改良 MS（。

10、即 1/2MS） 为较适宜的基本培养基， 加生 长调节剂的配方为 ： 改良MS+6-BA0.53.0mg.L-1+NAA1.01.5mg.L-1 ， 用暗箱培养， 温度 242， 光照18002500勒克斯 （lx） ， 每天光照12小时， 培养基 pH5.8 ； 琼脂7g/L， 3个 月后发芽 ； 种子萌发后先长出芽， 随后长出幼根， 转接到改良 MS+6-BA0.3mg.L-1+NAA0.5mg. L-1培养基中培养 ,4 6 个月后逐渐成为具有根系并可炼苗和移栽的试管苗 ； （3） 增殖、 分化诱导与生根培养 说 明 书 CN 102726288 A 3 2/4 页 4 原球茎增殖培养 。

11、： 种子萌发后， 多形成原球茎， 可进行增殖培养， 培养基及配方是 ： 改良 MS + 6-BA1.0-3.0 mg.L-1 + NAA 0.3-0.8 mg.L-1， 培养 30 45 天 ； 原球茎分化培养 ： 原球茎进行分化培养后能形成试管苗， 其培养基及配方为 ： 改良 MS + 6-BA2.0-3.5 mg.L-1 + NAA0.3-0.8 mg.L-1 + 香蕉泥 80g/L， 培养 35 55 天 ； 试管苗生根培养 ： 生根培养配方为 ： 改良 MS + 6-BA0.3- 0.8mg.L-1 + NAA0.5-2.5 mg.L-1， 通过 26 36 天诱导出的根长达 1cm 。

12、左右时可出瓶在温室炼苗， 1-2 个月后在大棚 利用设施栽培 ； 增殖、 分化诱导与生根培养条件 ： 增殖、 分化诱导与生根培养过程中， 均采用光照培养， 温度 242， 光照 1800 2500 勒克斯 （lx） ， 每天光照 12 小时， 培养基 pH5.8 ； 一些种子萌发后经一定时间会直接形成苗， 并长出幼根， 转接到改良 MS+6-BA0.2 0.5mg.L-1+NAA0.3 0.8mg.L-1+ 香蕉泥 80gL-1培养基中培养 ,4 6 个月后逐渐成为具有 根系并可炼苗和移栽的试管苗。 0009 本发明的方法具有以下特点 ： 1、 引种驯化 ： 必须引种驯化野生兰花和建立种质资源。

13、圃， 用能调控环境的温室培育父 母本植株以便进行杂交育种。 0010 2、 花期调控 ： 用设施按兰花生理生态要求条件下的环境调控使父母本花期一致， 或在低温下保存花粉。 0011 3、 根据花器官特点正确进行杂交技术操作。 0012 4、 不同培养基对杂交种子萌发的影响 ： 将种子分别接种在多种改良 MS 培养基 上， 从播种到发芽形成圆球茎需 3 6 个月， 改良 MS+BA0.5 3.0mg.L-1+NAA0.8 2.5mg. L-1更有利于杂交种子萌发。 0013 5、 不同激素对圆球茎生长的影响 ： 由于兰花种子非常细小， 播种时有些种子聚集 在一起， 致使长出的圆球茎较拥挤,因此，。

14、 将圆球茎从原来母瓶中取出， 转接到11个不同激 素浓度的培养基中作对比试验， 且培养基中加入了 80gL-1香蕉泥。经过 25 天培养观察时， 培养基中均观察到圆球茎上已全长出新绿叶， 一般为 2 3 片， 有些球状茎已长出根， 植株 35cm。 研究表明， 改良MS+KT0.5-2.5mg.L-1+NAA0.5-1.5mg.L-1培养圆球茎生长的效果最 佳。 0014 本发明从实验中找到了适宜大花型杂交兰花的育种和快速增殖方法， 为这类兰花 的杂交育种培育了创新材料和奠定了技术基础。 0015 经过多年努力， 突破了种种技术难关， 已培育出 BHL-1( 碧蕙兰 )、 BCL-1 （碧春兰。

15、） 、 WHL-1（文虎兰） 和 WBL-1（文碧兰） 四个杂交种 （或新种质） ， 可以进行试管繁殖。 0016 本发明与现有技术比较具有的优点 ： 兰花的杂交育种已有一些报道， 但采用碧玉兰 （Cmbidium lowianum ） 、 独占春 （C. eburneum） 、 文山红柱兰 （C. wenshanense） 及大花蕙兰 （C.hyridus） 四种兰花作亲本进 行杂交育种， 突破一系列技术难关培育新品种还未见报道。 此种方法不但培育出了新品种， 还能进行快速繁殖， 以满足 “花香色艳” 的产业化需求。 具体实施方式 0017 实施例 1 ： BCL-1（碧春兰） 的育种与繁殖。

16、 说 明 书 CN 102726288 A 4 3/4 页 5 1、 材料来源 ： 两种亲本兰株碧玉兰 （Cmbidium lowianum）及独占春 （C. eburneum） 采 自云南山区， 碧玉兰与独占春互为父母本。 0018 2、 培养方法 (1) 杂交育种 建立兰花资源圃， 资源圃内的环境能人工调控， 创造最适合兰花生长发育的最佳环 境。 0019 这几种兰花的自然花期接近一致， 待父母本花序 1/2 花蕾开放时进行育种操 作。 0020 育种操作 ： 清洁手和镊子， 用手轻轻摘除父母本药帽 （花药顶端帽状物） ， 用镊 子摘下父本花粉块， 送入母本合蕊柱的腔 （柱头） 内即可 ；。

17、 加强温、 光和肥水管理， 注意防治病虫危害， 直到兰花果实发育到九成熟， 1/3 果皮 显黄色时摘取。 0021 外植体处理 ： 90% 成熟度果实经 75% 酒精消毒 40 秒后， 转入 0.1% 氯化汞表面 消毒 8 12 分钟， 用无菌水冲洗 3 4 次， 在无菌室取出种子， 用纱布包好种子后， 以少量 无菌水润洗 5 次， 然后用 0.1mol/L KOH （氢氧化钾） 溶液浸泡 8 12 分钟， 再用无菌水冲洗 3 次， 在饱和漂白粉上清液中消毒 10 20 分钟， 再用无菌水冲洗 5 次后接种到固体培养基 中。 0022 （2） 种子无菌萌发 种子萌发培养 ： 筛选出改良 MS（。

18、即 1/2MS） 为较适宜的基本培养基， 加生长调节剂 的配方为 ： 改良 MS+6-BA1.0mg.L-1+NAA1.0mg.L-1 ， 用暗箱培养， 温度 242， 光照 1800 2500 勒克斯 （lx） ， 每天光照 12 小时， 培养基 pH5.8 ； 琼脂 7g/L， 3 个月后发芽。 0023 种子萌发后先长出芽， 随后长出幼根， 转接到改良MS+6-BA0.3mg.L-1+NAA0.5mg. L-1培养基中培养 ,4 6 个月后逐渐成为具有根系并可炼苗和移栽的试管苗。 0024 （3） 增殖、 分化诱导与生根培养 原球茎增殖培养基 ： 改良 MS + 6-BA1.0mg.L-。

19、1 + NAA 0.3mg.L-1， 培养 30 天。 0025 原球茎分化为试管苗培养基 ： 改良 MS + 6-BA2.0mg.L-1 + NAA0.3mg.L-1 + 香 蕉泥 80g/L， 培养 36 天。 0026 生根培养基 ： 改良 MS + 6-BA0.3mg.L-1 + NAA0.5mg.L-1， 培养 28 天。 0027 增殖、 分化诱导与生根培养条件 ： 增殖、 分化诱导与生根培养过程中， 均采用光照 培养， 温度 242， 光照 1800 2500 勒克斯 （lx） ， 每天光照 12 小时， 培养基 pH5.8 ； 实施例 2 ： BHL-1( 碧蕙兰 ) 的育种与。

20、繁殖 母本 ： 碧玉兰 （C.lowianum）； 父本 ： 大花蕙兰 （C.hyridus） (1) 杂交育种与实施例 1 相同。 0028 （2） 种子无菌萌发 种子萌发培养基 ： 筛选出改良 MS （即 1/2MS） 为较适宜的基本培养基， 加生长调节剂 的配方为 ： 改良 MS+6-BA2.0mg.L-1+NAA0.5mg.L-1。培养条件 ： 与实施例 1 相同。 0029 种子萌发后先长出芽， 随后长出幼根， 转接到改良MS+6-BA0.3mg.L-1+NAA0.5mg. L-1培养基中培养 ,4 6 个月后逐渐成为具有根系并可炼苗和移栽的试管苗。 0030 （3） 增殖、 分化诱。

21、导与生根培养 说 明 书 CN 102726288 A 5 4/4 页 6 原球茎增殖培养基 ： 改良 MS + 6-BA2.0mg.L-1 + NAA 0.5mg.L-1， 培养 38 天。 0031 原球茎分化为试管苗培养基 ： 改良 MS + 6-BA 3.5mg.L-1 + NAA0.5 mg.L-1 + 香蕉泥 80g/L， 培养 48 天。 0032 生根培养基 ： 改良 MS + 6-BA0.5mg.L-1 + NAA1.5mg.L-1， 培养 32 天。 0033 增殖、 分化诱导与生根培养条件与实施例 1 相同。 0034 实施例 3 ： WHL-1（文虎兰） 的育种与繁殖 。

22、母本 : 文山红柱兰 （C.wenshanense） ； 父本 ： 虎雪兰 （C.tracyanum var huanghuaC. mastersii） ， 杂交育种和种子无菌萌发与实施例 1 或实施例 2 相同。 0035 增殖、 分化诱导与生根培养 ： 原球茎增殖培养基 ： 改良 MS + 6-BA3.0mg.L-1 + NAA 0.8mg.L-1， 培养 42 天。 0036 原球茎分化为试管苗培养基 ： 改良MS + 6-BA2.5mg.L-1 + NAA 0.8mg.L-1 + 香 蕉泥 80g/L， 培养 53 天。 0037 生根培养基 ： 改良 MS + 6-BA0.8mg.L-1 + NAA 2.5mg.L-1， 培养 36 天。 0038 增殖、 分化诱导与生根培养条件与实施例 1 相同。 0039 实施例 4 ： WBL-1（文碧兰） 的育种与繁殖 母本 : 文山红柱兰 （C.wenshanense） ， 父本 ： 碧玉兰 （C. lowianum ） ， 杂交育种、 种子 无菌萌、 增殖、 分化诱导与生根培养与实施例 1 或实施例 2 或实施例 3 相同。 说 明 书 CN 102726288 A 6 。