一种羟乙基淀粉阿霉素键合药的制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103768081 A (43)申请公布日 2014.05.07 CN 103768081 A (21)申请号 201410029643.9 (22)申请日 2014.01.22 A61K 31/704(2006.01) A61K 47/48(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) (71)申请人 东北师范大学 地址 130024 吉林省长春市南关区人民大街 5268 号 (72)发明人 陈莉 姚雪梅 栗迪 (54) 发明名称 一种羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药的制备方法 (57) 摘要 本发明提供了一种羟乙基淀。

2、粉 - 阿霉素键合 药的制备方法， 所述羟乙基淀粉 - 键合药结构式 如式 （I） ； 所述羟乙基淀粉 - 键合药的制备方法包 括 ：（1） 将羟乙基淀粉、 对硝基苯基氯甲酸苄酯、 三乙胺在有机溶剂中反应， 得到甲酸对硝基苯酯 修饰的羟乙基淀粉 （HES-NPC） ；（2） 将 HES-NPC 与 水和肼在有机溶剂中反应， 得到肼键修饰的羟乙 基淀粉 （HES-NHNH2） ；（3） 将 HES-NHNH2， 盐酸阿霉 素、 三乙胺在有机溶剂中反应， 得到如式 （I） 结构 的羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药。本发明提供的羟 乙基淀粉 - 阿霉素键合药具有良好的生物相容 性， 同时引入的腙键具有很。

3、好的 pH 响应性， 通过 腙键键合在高分子药物上的阿霉素在肿瘤组织或 肿瘤细胞内的 pH 值条件下可以快速释放， 从而增 强药物效果。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 5 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书5页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103768081 A CN 103768081 A 1/2 页 2 1. 一种如式 （I）所示的羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药 （HES-Hyd-DOX） ， 其特征在于， 羟乙基淀粉的平均分子量 Mw为 60,000-600,000， 摩尔取代 MS为 0.15。

4、-0.5， 取代度 DS 为 0.15-0.5。其中优选比例为 ： Mw为 130,000， DS 为 0.4 和 Mw为 200,000， DS 为 0.5。所述键 合药中阿霉素的质量含量为 0.5%-45%。 2. 一种羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药的制备方法， 其特征在于， 包括 ： （1） 将羟乙基淀粉、 对硝基苯基氯甲酸苄酯、 三乙胺在有机溶剂中反应， 得到如式 （II） 结构的甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉 （HES-NPC） ； （2） 将甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉 （HES-NPC） 、 水合肼在有机溶剂中反应， 得到 如式 （III） 结构的肼键修饰的羟乙基淀粉 （HES-。

5、NHNH2） ； （3） 将肼键修饰的羟乙基淀粉 （HES-NHNH2） 、 盐酸阿霉素、 三乙胺在有机溶剂中反应得 到羟乙基淀粉阿霉素键合药。 权 利 要 求 书 CN 103768081 A 2 2/2 页 3 3. 根据权利要求 2 所述的制备方法， 其特征在于羟乙基淀粉的葡萄糖单元数、 阿霉素、 三乙胺的摩尔比为 1:（0.05 0.4） ：（0.05 0.4） 。 权 利 要 求 书 CN 103768081 A 3 1/5 页 4 一种羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及高分子药物制备技术领域， 尤其涉及一种羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药 的制备方法。

6、。 背景技术 0002 阿霉素， 又名羟柔红霉素、 强正定霉素、 多柔比星或 ADR， 是一种蒽环抗生素广谱抗 肿瘤药物， 是细胞周期非特异性药， 对 S 期作用最强， 对 M、 G1 和 G2 期也有作用， 其作用机制 是嵌入 DNA 分子、 破坏核酸结构从而抑制生物大分子的合成。阿霉素主要用于治疗急性白 血病、 恶性淋巴瘤、 肝癌、 肺癌、 胃癌、 食道癌、 宫颈癌、 膀胱癌、 睾丸癌、 甲状腺癌、 软组织肿 瘤、 骨肉瘤和神经母细胞癌等。目前， 阿霉素是最主要的临床给药方式是静脉滴注， 然而静 脉滴注后药物会迅速分布全身， 从而缺少对肿瘤组织的靶向， 能到达肿瘤部位并发挥疗效 的阿霉素比。

7、例很低， 致使其生物利用度不高， 效率低下。 因此， 临床需频繁给药， 从而对身体 的正常组织和器官造成较大的毒副作用。 0003 为解决阿霉素在临床上存在的问题， 阿霉素新剂型的开发一直是研究者研究的热 点。其中纳米尺度的药物传输系统的研究发展较为迅速， 包括脂质体、 聚合物纳米颗粒、 胶 束等。 其中， 由两亲性嵌段共聚物或接枝共聚物制备而成的胶束成为药物载体的研究重点。 胶束包载药物的方式主要分为两种， 一种是物理包载， 一种是化学键合。其中， 化学键合由 于药物包载方式更稳定、 药物释放过程更持续以及药物释放时间更长久而获得了更广泛的 研究。 0004 公开号为 CN101234204。

8、A 的中国专利公开了一种高分子阿霉素键合药， 以聚乙二 醇为大分子引发剂， 在溶剂和催化剂的作用下引发脂肪族环酯的开环聚合， 得到聚乙二 醇 - 聚乳酸嵌段共聚物 ； 再将该嵌段共聚物的端羟基转化为端羧基， 在缩合剂的作用下与 阿霉素进行酰胺化反应， 得到高分子阿霉素键合药。但上述阿霉素键合药存在连结的化学 键过于稳定、 载药量低、 阿霉素释放缺乏智能性等问题。 发明内容 0005 本发明的目的在于克服现有技术的不足， 提供一种制备高分子键合药的方 法， 本 发明提供的羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药的制备过程简单， 键合药具有很好的生物相容性、 同时具有 pH 敏感性， 可以实现药物在肿瘤部位的。

9、有效聚集和 pH 触发智能性地控制释放。 0006 本发明提供了一种如式 （I） 所示的羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药 （HES-Hyd-DOX） ， 其 特征在于， 羟乙基淀粉的平均分子量 Mw为 60,000-600,000， 摩尔取代 MS为 0.15-0.5， 取代 度 DS 为 0.15-0.5。其中优选比例为 ： Mw为 130,000， DS 为 0.4 和 Mw为 200,000， DS 为 0.5。 所述键合药中阿霉素的质量含量为 0.5%-45%。 0007 说 明 书 CN 103768081 A 4 2/5 页 5 0008 一种羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药的制备方法， 。

10、其特征在于， 包括 ： 0009 （1） 将羟乙基淀粉、 对硝基苯基氯甲酸苄酯、 三乙胺在有机溶剂中反应， 得到如式 （II） 结构的甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉 （HES-NPC） ； 0010 （2） 将甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉 （HES-NPC） 、 水合肼在有机溶剂中反应， 得到如式 （III） 结构的肼键修饰的羟乙基淀粉 （HES-NHNH2） ； 0011 0012 （3） 将肼键修饰的羟乙基淀粉 （HES-NHNH2） 、 盐酸阿霉素、 三乙胺在有机溶剂中反 应得到羟乙基淀粉阿霉素键合药。 0013 其中， 得到的羟乙基淀粉阿霉素键合药中羟乙基淀粉的葡萄糖单元数、 阿霉素。

11、、 三乙胺的摩尔比为 1:（0.05 0.4） ：（0.05 0.4） 。 0014 说 明 书 CN 103768081 A 5 3/5 页 6 0015 有益效果 ： 与现有技术相比， 本发明以羟乙基淀粉为原料， 利用腙键得到阿霉素键 合药。 本发明提供的阿霉素键合药可以通过增强的渗透和滞留效应实现药物在肿瘤部位的 聚集。同时， 本发明提供的羟乙基淀粉阿霉素键合药具有 pH 响应性， 通过腙键键合在羟乙 基淀粉上的阿霉素在肿瘤组织和肿瘤细胞内的 pH 值条件下可以快速释放， 从而增强药物 效果。 此外， 本发明以羟乙基淀粉为原料， 不仅具有良好的生物相容性， 易于进一步修饰， 而 且简单易。

12、购， 有利于阿霉素键合药的深入利用。 附图说明 0016 附图 1 羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药的核磁谱图 0017 附图 2 羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药的红外谱图 0018 附图 3 羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药在不同 pH 值的释放曲线 具体实施方式 0019 本发明中羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药 （HES-Hyd-DOX） 的结构式如式 （I） 所示， 其主 链为羟乙基淀粉， 所述键合药中阿霉素质量含量为 0.5%-45%， 具体制备步骤如下 ： 0020 将肼键修饰的羟乙基淀粉 （HES-NHNH2） 、 盐酸阿霉素、 三乙胺加入氮气保护的安瓶 中， 并加入有机溶剂中反应， 得到羟乙。

13、基淀粉 - 阿霉素键合药。在本 发明中， 所述肼基修饰 的羟乙基淀粉中的肼基、 盐酸阿霉素和三乙胺的摩尔比优选为 1 ：（0.5-2:） ：（0.5-2） ， 更优 选为 1 ：（1-1.4） ：（1-1.4） 。所述羟乙基淀粉的分子量优选为 60,000-600,000， 摩尔取代 MS 为 0.15-0.5， 更优选为 70， 000-500,000， 摩尔取代 Ms 为 0.2-0.4 ； 所述有机溶剂优选为二 甲基亚砜 ； 所述反应优选在无水搅拌的条件下进行。所述反应温度为室温 ； 所述反应时间 为 1-3 天， 更优选为 1.5-2 天。反应完毕后， 将反应液装入透析袋中透析， 冻干。

14、后得到阿霉 素键合药。所述透析袋的截留分子量优选为 3500Dalton ； 所述透析时间优选为 3-5 天， 更 优选为 3.5-4 天 ； 所述透析过程中优选每隔 3-5h 换水一次， 更优选为 3.5-4h 换水一次 ； 所 述透析过程中透析用水的 pH 优选为 7-9， 更优选 pH 为 8-8.5 ； 本发明对于冷冻干燥并无限 制， 本领域技术人员熟知的冷冻干燥即可。 0021 本发明对所述羟乙基淀粉的来源没有限制， 市场上购买即可。 0022 所述的肼基修饰的羟乙基淀粉 （HES-NHNH2） 具有式 （III） 结构， 优选按照以下方法 说 明 书 CN 103768081 A 。

15、6 4/5 页 7 制备 ： 0023 将甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉 （HES-NPC） 、 水合肼溶于有机溶剂中发生反 应， 得到肼基修饰的羟乙基淀粉。 所述有机溶剂优选为二甲基亚砜 ； 所述甲酸对硝基苯酯修 饰的羟乙基淀粉中甲酸对硝基苯酯、 水合肼的摩尔比优选为 1 ：（1-4） ， 更优选为 1 ：（2-3） 。 所述反应在搅拌的条件下反应， 所述反应温度优选为 20 -40， 更优选为 25 -30， 时 间优选为 5h-50h, 更优选为 10h-20h。反应完毕后， 将反应液装入透析袋中透析， 冻干后得 到肼基修饰的羟乙基淀粉。所述透析袋的截留分子量优选为 3500Dalton。

16、 ； 所述透析时间优 选为3-5天， 更优选为3.5-4天 ； 所述透析过程中优选每隔3-5h换水一次， 更优选为3.5-4h 换水一次 ； 本发明对于冷冻干燥并无限制， 本领域技术人员熟知的冷冻干燥即可。 0024 所述的甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉 （HES-NPC） 具有式 （II） 的结构， 优选按 照以下方法制备 ： 0025 在无水条件下， 将羟乙基淀粉、 氯甲酸对硝基苯酯、 三乙胺溶于有机溶剂中发生反 应， 得到甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉。所述有机溶剂优选为二甲基亚砜 ； 所述羟乙 基淀粉中糖环、 氯甲酸对硝基苯酯、 三乙胺的摩尔比优选 为 1 ：（0.1-0.5） ：（0。

17、.1-0.5） ， 更 优选为 1 ：（0.15-0.3） ：（0.15-0.3） 。所述反应在搅拌的条件下反应， 所述反应温度优选为 20 -40， 更优选为 25 -30， 时间优选为 5h-50h， 更优选为 20h-40h。反应完毕后， 将 反应液装入透析袋中透析， 冻干后得到甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉。所述透析袋的 截留分子量优选为3500Dalton ； 所述透析时间优选为3-5天， 更优选为3.5-4天 ； 所述透析 过程中优选每隔 3-5h 换水一次， 更优选为 3.5-4h 换水一次 ； 本发明对于冷冻干燥并无限 制， 本领域技术人员熟知的冷冻干燥即可。 0026 为了进。

18、一步说明本发明， 一下结合实施例对本发明提供的阿霉素键合药及其制备 方法进行详细描述。 0027 实施例 1 0028 将 0.4g 的羟乙基淀粉、 0.1ml 的三乙胺置于干燥的反应瓶中， 加入 10ml 无水二甲 基亚砜溶解， 将 0.07g 的氯甲酸对硝基苯酯溶于 5ml 无水二甲基亚砜中， 在 25、 搅拌子搅 拌的条件下滴加到反应瓶中， 滴加完后继续反应 24h， 反应结束后将混合液装入透析袋中透 析， 冻干， 得到甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉。 对得到的甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基 淀粉进行核磁共振分析、 红外分析， 由核磁共振分析和红外分析， 本发明实施例制备的甲酸 对硝基苯酯修。

19、饰的羟乙基淀粉具有式 （III） 结构。 0029 将所得的甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉、 0.03ml 的水合肼置于反应瓶中， 加 入 10ml 无水二甲基亚砜溶解在 25、 搅拌子搅拌的条件下反应 24h， 反应结束后将混合液 装入透析袋中透析， 冻干， 得到肼基修饰的羟乙基淀粉。 对得到的肼基修饰的羟乙基淀粉进 行核磁共振分析、 红外分析， 由核磁共振分析和红外分析， 本发明实施例制备的肼基修饰的 羟乙基淀粉具有式 （II） 结构。 0030 将得到的肼基修饰的羟乙基淀粉、 0.4g 盐酸阿霉素、 0.2ml 的三乙胺置于干燥的 反应瓶中， 加入 10ml 无水二甲基亚砜溶解， 在 2。

20、5、 搅拌子搅拌的条件下滴加到反应瓶 中， 滴加完后继续反应 24h， 反应结束后将混合液装入透析袋中透析， 冻干， 得到羟乙基淀 粉 - 阿霉素键合药。附图 1 为羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药的核磁共振谱图， 附图 2 为羟乙 基淀粉 - 阿霉素键合药的红外谱图， 对得到的羟乙基淀粉 - 阿霉素键合药进行核磁共振分 说 明 书 CN 103768081 A 7 5/5 页 8 析、 红外分析， 本发明实施例制备的羟乙基淀粉阿霉素键合药具有式 （I） 结构。 0031 实施例 2 0032 将0.4g的羟乙基淀粉、 0.13ml的三乙胺置于干燥的反应瓶中， 加入10ml无水二甲 基亚砜溶解， 。

21、将 0.09g 的氯甲酸对硝基苯酯溶于 5ml 无水二甲基亚砜中， 在 25、 搅拌子搅 拌的条件下滴加到反应瓶中， 滴加完后继续反应 24h， 反应结束后将混合液装入透析袋中透 析， 冻干， 得到甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉。 对得到的甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基 淀粉进行核磁共振分析、 红外分析， 由核磁共振分析和红外分析， 本发明实施例制备的甲酸 对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉具有式 （III） 结构。 0033 将所得的甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉、 0.05ml 的水合肼置于反应瓶中， 加 入 10ml 无水二甲基亚砜溶解在 25、 搅拌子搅拌的条件下反应 24h， 反应结束后将混合液。

22、 装入透析袋中透析， 冻干， 得到肼基修饰的羟乙基淀粉。 对得到的肼基修饰的羟乙基淀粉进 行核磁共振分析、 红外分析， 由核磁共振分析和红外分析， 本发明实施例制备的肼基修饰的 羟乙基淀粉具有 （II） 结构。 0034 将所得的肼基修饰的羟乙基淀粉、 0.539g 盐酸阿霉素、 0.270ml 的三乙胺置于干 燥的反应瓶中， 加入 10ml 无水二甲基亚砜溶解， 在 25、 搅拌子搅拌的条件下滴加到反应 瓶中， 滴加完后继续反应 24h， 反应结束后将混合液装入透析袋中透析， 冻干， 得到羟乙基淀 粉阿霉素键合药。 对得到的羟乙基淀粉阿霉素键合药进行核磁共振分析、 红外分析， 由核磁 共振分。

23、析和红外分析， 本发明实施例制备的羟乙基淀粉阿霉素键合药具有式 （I） 结构。 0035 实施例 3 0036 将0.4g的羟乙基淀粉、 0.15ml的三乙胺置于干燥的反应瓶中， 加入10ml无水二甲 基亚砜溶解， 将 0.12g 的氯甲酸对硝基苯酯溶于 5ml 无水二甲基亚砜中在 25、 搅拌子搅 拌的条件下滴加到反应瓶中， 滴加完后继续反应 24h， 反应结束后将混合液装入透析袋中透 析， 冻干， 得到甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉。 对得到的甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基 淀粉进行核磁共振分析、 红外分析， 由核磁共振分析和红外分析， 本发明实施例制备的甲酸 对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉具有式。

24、 （I） 结构。 0037 将所得的甲酸对硝基苯酯修饰的羟乙基淀粉、 0.07ml 的水合肼置于反应瓶中， 加 入10ml无水二甲基亚砜溶解在25、 搅拌子搅拌的条件下反应24h， 反 应结束后将混合液 装入透析袋中透析， 冻干， 得到肼基修饰的羟乙基淀粉。 对得到的肼基修饰的羟乙基淀粉进 行核磁共振分析、 红外分析， 由核磁共振分析和红外分析， 本发明实施例制备的肼基修饰的 羟乙基淀粉具有 （II） 结构。 0038 将所得的肼基修饰的羟乙基淀粉、 0.6733g 盐酸阿霉素、 0.335ml 的三乙胺置于干 燥的反应瓶中， 加入 10ml 无水二甲基亚砜溶解， 在 25、 搅拌子搅拌的条件下滴加到反应 瓶中， 滴加完后继续反应 24h， 反应结束后将混合液装入透析袋中透析， 冻干， 得到羟乙基淀 粉阿霉素键合药。 对得到的羟乙基淀粉阿霉素键合药进行核磁共振分析、 红外分析， 由核磁 共振分析和红外分析， 本发明实施例制备的羟乙基淀粉阿霉素键合药具有式 （I） 结构。 说 明 书 CN 103768081 A 8 1/2 页 9 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103768081 A 9 2/2 页 10 图 3 说 明 书 附 图 CN 103768081 A 10 。