一种酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102144796 A (43)申请公布日 2011.08.10 CN 102144796 A *CN102144796A* (21)申请号 201010106212.X (22)申请日 2010.02.05 A23L 2/38(2006.01) A23L 1/29(2006.01) (71)申请人 洪湖市晨光实业有限公司 地址 433200 湖北省洪湖市文泉大道经济开 发区特 1 号 (72)发明人 王清章 杨凌唐 李洁 陈刚 丁士勇 严守雷 张亮 (54) 发明名称 一种酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺 (57) 摘要 一种酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺， 工艺 步骤如。

2、下 ： 首先 ： 称取一定量的荷叶粉， 加入水调 匀， 荷叶粉和水的重量比例为0.5-1.280-100， 在 60-100水浴条件下浸提 20-60min， 提取过 程中每隔 5min 搅动一次 ； 其次， 浸提完成后， 经 6 层纱布过滤， 除渣 ； 再次， 采用 80-95常压脱气， 趁热过滤除渣 ； 然后， 用 Vc 和碳酸氢钠调 pH 值 为 3.0-6.0， 加入酶活力为 2-13U 的莲子风味酶， 在40-60下水浴酶解反应0.5-1.5h趁热过滤除 渣 ； 调味 ： 在荷叶饮料中加入0.02-0.10维生 素 C 和 1 -5的蔗糖。继续完成过滤， 灭菌， 冷 却等常规操作 ；。

3、 最后， 进行感官评定和指标检测 ； 本技术方案有利于荷叶饮料中功能物质浸提， 通 过香气形成机理改善饮料品质， 经过风味酶处理 后的荷叶饮料香气更浓， 嗅感却更柔和， 并且经济 效益明显。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 CN 102144797 A1/1 页 2 1. 一种酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺， 其特征在于 ： 工艺步骤如下 ： 首 先 ： 称 取 一 定 量 的 荷 叶 粉，加 入 水 调 匀，荷 叶 粉 和 水 的 重 量 比 例 为 0.5-1.2 80-100， 在 60-100水浴条件。

4、下浸提 20-60min， 提取过程中每隔 5min 搅动一 次 ； 其次， 浸提完成后， 经 6 层纱布过滤， 除渣 ； 再次， 采用 80-95常压脱气， 趁热过滤除渣 ； 然后， 用 Vc 和碳酸氢钠调 pH 值为 3.0-6.0， 加入酶活力为 2-13U 的莲子风味酶， 在 40-60下水浴酶解反应 0.5-1.5h 趁热过滤除 渣 ； 调味 ： 在荷叶饮料中加入 0.02 -0.10维生素 C 和 1 -5的蔗糖。 继续完成过滤， 灭菌， 冷却等常规操作 ； 最后， 进行感官评定和指标检测 ； 所述的莲子风味酶是从莲子中提取对睡莲科植物莲专一底物起催化作用的风味酶。 2. 如权利要。

5、求 1 所述的酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺， 其特征在于 ： 所述的莲子风 味酶是从莲子中提取的 - 葡萄糖苷酶。 3. 如权利要求 2 所述的酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺， 其特征在于 ： 所述-葡萄糖苷酶的提取过程是 ： 使用pH4.0-6.0的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液， 在 酶的提取过程中样品与 PVPP 的最适比为 3-6 0.6-1.2。 4.如权利要求3所述的酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺， 其特征在于 ： -葡萄糖苷酶 的分离纯化过程是 ： -葡萄糖苷酶的硫酸铵盐析范围为50-70的饱和度， 选用DEAE-5纤 维素进行离子交换柱层析， 再经 Sephadex G-100 纯化。 。

6、5. 如权利要求 4 所述的酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺， 其特征在于 ： 采用 PNPG 法 测定风味酶的活性， 最佳酶活测定条件为 ： 测定波长 ： 400nm ； 反应 PH 值 ： 5.0 ； 反应温度 ： 56 ； 反应时间 ： 60min。 6. 如权利要求 3 所述的酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺， 其特征在于 ： 在莲子风味酶 的提取过程中， 样品与 PVPP 的最适比为 5 1。 权 利 要 求 书 CN 102144796 A CN 102144797 A1/5 页 3 一种酶法生产增香去苦荷叶饮料工艺 技术领域 0001 本发明涉及一种从莲子中提取风味酶生产优质荷叶汁饮料的。

7、方法， 属于风味化学 以及荷叶饮料技术领域。 背景技术 0002 荷叶， 睡莲科植物莲的叶， 质脆、 微有清香气、 味淡微涩。莲在中国分布极广， 主产 于湖南、 湖北、 浙江、 江苏等地。无论是花莲、 藕莲或子莲， 收获后均留余大量荷叶。荷叶营 养丰富， 含有蛋白质、 碳水化合物、 维生素 C、 脂肪、 尼克酸、 硫胺素、 胡萝卜素等物质， 除此之 外， 还含有钙、 磷、 铁等微量元素， 及多种生物碱和黄酮类化合物， 它们均具有明显的生物活 性和生理功能。其中生物碱包括荷叶碱、 原荷叶碱、 前荷叶碱、 去甲基荷叶碱。具有清暑利 湿、 升发清阳、 生津止渴、 化瘀止血等功效， 可治眩晕、 水气浮。

8、肿、 吐血等症。1991 年 11 月， 荷叶被我国列为第二批 “既是食品又是药品” 的名单之中。长期饮用荷叶茶汁， 具有降脂减 肥、 预防动脉硬化等作用。 0003 新鲜荷叶具有令人愉快的清香气味， 香气淡雅， 带有田园气息， 荷叶风味食品将颇 受崇尚自然健康的现代人的欢迎， 荷叶饭即是利用荷叶使米饭清香四溢， 将荷叶制作成清 凉饮料亦具有广阔的前景， 也可以将其作为香料资源加以开发。 0004 一直以来， 在荷叶饮料开发中面临香气较淡的问题难以解决。大量研究表明风味 酶是植物中香气形成的关键酶类， 它能够水解植物中的糖苷类香气前体物质从而释放出香 气物质。 经研究发现， 荷叶中不存在目标风。

9、味酶， 通过大量研究分析， 莲仁(子)中含有目标 酶 - 葡萄糖苷酶 ( 属于水解酶类 )， 能够水解结合于未端、 非还原性的 -D- 糖苷键， 同 时释放 -D- 葡萄糖和相应的配基， 莲子与荷叶都来自同一种植物莲， 将它用于荷叶饮料 的增香 ； 其次， 使用酶技术降低了荷叶汁的苦涩感， 替代了化学物质掩蔽苦涩感的弊端。可 以最大限度的保持和增强荷叶的特有风味。 0005 荷叶风味食品的研究多集中于采用护色和掩涩或采用复配料的方式。比如 ： 本领 域研究者黄阿根等人以荷叶为主要原料， 通过适当的护色和掩涩工艺， 制得色香味俱佳的 理想饮料 ； 本领域研究者彭凌等人将荷叶浸提物脱苦后与菠萝汁复。

10、配， 生产出来的产品具 有荷叶、 菠萝特有混合香气、 口感清凉、 酸甜适口 ； 本领域研究者陈海光等人以荷叶为主要 原料， 再配以绿茶、 山楂、 甘草、 菊花等原料， 制得一种新型保健袋泡茶， 其口感醇和， 香味浓 郁， 具备显著的降脂保健功能。 这些研究着重护色和掩涩脱苦工艺， 香气形成机理和增香技 术方面的研究尚未见报道。 0006 天然芳香植物中糖苷化合物的研究， 一直是香料化学家们感兴趣的研究课题之 一， 并将这类物质纳入 “香味前驱体” (flavorprecursors)。 法国的Cordonnier等人1974年 首次提出葡萄中可能存在键合态的不挥发的萜烯类化合物。80 年代澳大。

11、利亚的 Williams 等人对葡萄做了比较深入细致的工作， 发现葡萄中的一些风味物质如萜烯醇和芳香醇等不 但以游离的形式存在， 而且还以糖苷键合态的形式存在， 并指出， 糖苷键合态化合物的含量 大大超过其游离态的含量。Engel 何 Tressl 等经研究指出， 许多水果中含有单萜烯糖苷， 说 明 书 CN 102144796 A CN 102144797 A2/5 页 4 C(13) 降异类萜糖苷、 倍半萜烯糖苷以及其它的糖苷。这些物质本身无香味， 不挥发， 但若 用酶水解， 即可产生浓郁的具有天然特征风味的物质。风味酶在风味物质前体的释放过程 中起到重要作用。 以单萜烯醇和芳香族醇等为配。

12、基的糖苷类物质物质在内源糖苷酶的作用 下， 水解而释放出挥发性配基， 这是各类茶叶花果香气的重要来源。工业上， 利用风味酶作 为水果风味增香酶增强果酒、 果汁的香气。Shoseyov 等报道分离到一株产内切风味酶的黑 曲霉， 用该酶来处理玫瑰红葡萄酒及西番莲果汁， 通过 GC-MS 分析及感官评定， 结果表明 ： 葡萄酒中的单萜、 苹果醇、 苯乙醛等风味物质有明显提高。 J.L.Iborra等则研究了甜杏风味 酶水解苦藏花素， 产生藏花醛 ( 可作食品风味添加剂 ) 的过程。国内也有很多学者在香气 形成机理方面进行了研究。 屠幼英等人运用气相色谱分析龙井茶加工过程中游离香气和醇 系香气前驱体变。

13、化， 同时用比色法检测相应的风味酶的活性， 结果表明， 摊放过程当中叶酶 活性增加 45以上， 醇系香气前驱体释放量和酶活性趋势一致。 0007 因此， 通过研究相应荷叶清香形成和释放机理， 分离荷叶中的香气前体物质和相 应的酶， 为荷叶风味食品饮料的开发、 增香及荷叶香精香料的生产提供理论参考有着充分 的科学依据。 发明内容 0008 本发明的目的提供一种从荷叶清香形成和释放机理入手， 为荷叶风味食品的开 发、 增香及荷叶香精香料的生产提供有效地解决方案。该方案能够使用风味酶技术提高荷 叶汁的风味香气成分， 并且降低荷叶汁的苦涩感， 替代了化学物质掩蔽苦涩感的弊端。 0009 本发明技术方案。

14、的生产工艺是 ： 0010 首先 ： 称取一定量的荷叶粉， 加入水调匀， 荷叶粉和水的重量比例为 ( 简称为料液 比 )0.5-1.2 80-100， 在 60-100水浴条件下浸提 20-60min， 提取过程中每隔 5min 搅动 一次 ； 0011 其次， 浸提完成后， 经 6 层纱布过滤 ； 0012 除渣 ； 0013 再次， 采用 80-95常压脱气， 0014 趁热过滤除渣 0015 然后， 用 Vc 和碳酸氢钠调 pH 值为 3.0-6.0， 0016 加入酶活力为 2-13U 的莲子风味酶， 在 40-60下水浴酶解反应 0.5-1.5h 0017 趁热过滤除渣 0018 调。

15、味 ： 在荷叶饮料中加入 0.02 -0.10维生素 C 和 1 -5的蔗糖。 0019 继续完成过滤， 灭菌， 冷却等常规操作 ； 0020 最后， 进行感官评定和指标检测。 0021 如前所述的莲子风味酶是从莲子中提取的 - 葡萄糖苷酶 ； 一般的， 凡影响食品 风味的酶都可以称为风味酶， 莲子风味酶是风味酶中的一种。 由于酶催化作用特点， 风味酶 对底物具有专一性， 因此其他类型 - 葡萄糖苷酶可能达不到莲子中提取的 - 葡萄糖苷 酶改善荷叶汁风味效果。 0022 在莲子风味酶的提取过程中， 缓冲液的种类和 pH 值对酶活有着很大的影响， 本技 术方案在提取莲子风味酶时使用 PH6.0 。

16、的柠檬酸 - 磷酸氢二钠缓冲液 ( 优选 ) 效果较好， 说 明 书 CN 102144796 A CN 102144797 A3/5 页 5 在酶的提取过程中样品与 PVPP( 聚乙烯聚吡咯烷酮 ) 的最适比为 5 1。 0023 聚乙烯聚吡咯烷酮 (PVPP) 是常见的多酚吸附剂， 它是 N- 乙烯基吡咯烷酮 (NVP) 在特定条件下聚合而成的能吸水溶胀但不溶于水的交联聚合物。 PVPP能吸附与之形成氢键 的物质， 尤其对多酚类物质具有极高的选择性吸附且对人体无毒、 副作用， 目前已广泛应用 于去除食品中多酚物质。 0024 植物组织中存在着大量的酚类物质， 在提取蛋白酶液时， 多酚类物质。

17、的存在往往 会导致酶蛋白的不可逆性沉淀。 故在研磨提取酶液时， 需加入多酚吸附剂， 以得到高活性的 酶。 0025 所述 - 葡萄糖苷酶的提取过程是 ： 使用 pH4.0-6.0 的柠檬酸 - 磷酸氢二钠缓冲 液， 在酶的提取过程中样品与 PVPP 的最适比为 3-6 0.6-1.2。 0026 采用 PNPG 法测定风味酶的活性。特征吸收波长、 反应时间、 温度和缓冲液 PH 值都 会对风味酶活性的测定产生一定的影响。 通过实验确定的最佳酶活测定条件为 ： 测定波长 ： 400nm ； 反应 PH 值 ： 5.0 ； 反应温度 ： 56 ； 反应时间 ： 60min。按此方法测得新鲜莲子的酶。

18、活 为 1.78U/g， 而干燥后的莲子酶活仍然有 1.26U/g( 两者均为折算为每克新鲜莲子酶活 )。 0027 所述 - 葡萄糖苷酶的分离纯化过程是 ： 0028 莲子 - 葡萄糖苷酶的硫酸铵盐析范围为 50-70的饱和度， 选用 DEAE-5 纤维 素进行离子交换柱层析， 再经 Sephadex G-100 纯化， 此时 - 葡萄糖苷酶的比酶活力达到 510.8310-3U/mg. 0029 本发明技术方案带来的有益效果 0030 1、 加酶对有利于荷叶饮料中功能物质浸提， 特别是黄酮类物质含量比对照高。如 下表 0031 0032 注 ： 感官评分结果为20颜色得分+30香气得分+3。

19、0滋味得分+20苦涩感得 分 0033 通过表可知， 感官评分结果是四个感官指标乘以各自所占权重相加的结果。例 说 明 书 CN 102144796 A CN 102144797 A4/5 页 6 如， 样品 1 的颜色、 香气、 滋味、 苦涩感评分分别为 3.5、 7.2、 6.5、 5.5， 则感官评分结果为 20 3.5+30 7.2+30 6.5+20 5.5 5.9 分。按以上方法计算其他样品的感 官评分结果。 0034 加酶处理后荷叶饮料中功能物质浸提率有所增加， 但增加量不大 ； 感官指标也有 所提高且风味改善明显， 产品颜色变浅而成淡黄色、 香气柔和， 苦涩感降低了。 0035。

20、 加酶有利于荷叶饮料中香气物质提高 0036 通过检索 NIST 标准谱图库对 GC-MS 分析报告中含量较高或匹配度较高的成分加 以鉴定， 结果如下 ： 0037 从未经酶处理的荷叶饮料中的香气成分中鉴定出了 42 种主要成分， 这些成分占 总香气成分的 55.54。从经过莲子风味酶处理的荷叶饮料中鉴定出了 50 种主要成分， 占 总香气成分的 58.76。 0038 从表中可以看出来， 未经酶处理的荷叶饮料的香气成分主要为醛类、 酮类、 醇类， 他们占总香气成分的比例分别为19.69、 16.24、 6.25。 经过莲子风味酶处理的荷叶饮 料中， 这三类成分分别占到 17.18、 16.5。

21、4、 8.82。经过莲子风味酶处理的荷叶饮料的 香气成分总量比未经酶处理的荷叶饮料多约 12， 酮类、 醇类物质的总量均有一定程度的 增加。除此之外， 经过酶处理后， 荷叶饮料中的酯类成分有很明显的增加。在未经酶处理的 荷叶饮料中， 酯类物质总含量约占样品总香气成分的 3.21， 而在经过莲子风味酶处理的 中， 其比例上升至 7.64。 0039 经过风味酶处理后的荷叶饮料香气更浓， 嗅感却更柔和， 这与香气成分中酮类、 醇 类物质尤其是酯类成分的增加是有着密不可分的关系的。 0040 3 具有明显经济和社会效益 0041 本技术方案瞄准国内外同类研究的学术前沿， 补充和丰富了这一领域的研究。。

22、本 适用于湖北、 湖南、 江苏等莲藕产区， 可在长江流域各省莲藕产区推广应用。可以合理开发 利用自然资源， 使其变废为宝。必将取得很好的经济和社会效益。比如 ： 按建厂生产规模为 年产荷叶汁 10000 吨， 并以每吨 3600 元销售价格计算其年产值可达 3600 万元扣除生产成 本 2600 万元， 可年创利税 1000 万元以上， 经济效益十分可观。 具体实施方式 0042 请对照发明内容中的工艺步骤， 提供一个个具体的实施例对本发明技术方案进一 步说明 ： 0043 实施例1 ： 首先 ： 称取一定量的荷叶粉， 加入水调匀， 荷叶粉和水的重量比例为(简 称为料液比 )0.5 80， 在。

23、 80水浴条件下浸提 50min， 提取过程中每隔 5min 搅动一次 ； 0044 其次， 浸提完成后， 经 6 层纱布过滤 ； 0045 除渣， 0046 再次， 采用 90常压脱气， 0047 趁热过滤除渣 0048 然后， 用 Vc 和碳酸氢钠调 pH 值为 4.0， 0049 加入酶活力为 5U 的莲子风味酶， 在 50下水浴酶解反应 1h 0050 趁热过滤除渣 说 明 书 CN 102144796 A CN 102144797 A5/5 页 7 0051 调味 ： 在荷叶饮料中加入 0.05维生素 C 和 3的蔗糖。 0052 继续完成过滤， 灭菌， 冷却等常规操作 ； 0053。

24、 感官评定和指标检测。 0054 在莲子风味酶的提取过程中， 缓冲液的种类和 pH 值对酶活有着很大的影响， 本技 术方案在提取莲子风味酶时使用 PH6.0 的柠檬酸 - 磷酸氢二钠缓冲液， 在酶的提取过程中 样品与 PVPP 的最适比为 5 1。 0055 采用 PNPG 法测定风味酶的活性。特征吸收波长、 反应时间、 温度和缓冲液 PH 值都 会对风味酶活性的测定产生一定的影响。 通过实验确定的最佳酶活测定条件为 ： 测定波长 ： 400nm ； 反应 PH 值 ： 5.0 ； 反应温度 ： 56 ； 反应时间 ： 60min。按此方法测得新鲜莲子的酶活 为 1.78U/g， 而干燥后的莲子酶活仍然有 1.26U/g( 两者均为折算为每克新鲜莲子酶活 )。 0056 所述 - 葡萄糖苷酶的分离纯化过程是 ： 莲子 - 葡萄糖苷酶的硫酸铵盐析范围 为50-70的饱和度， 选用DEAE-5纤维素进行离子交换柱层析， 再经Sephadex G-100纯化， 此时 - 葡萄糖苷酶的比酶活力达到 510.8310-3U/mg。 说 明 书 CN 102144796 A 。