一种德国鸢尾的组织培养方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103734020 A (43)申请公布日 2014.04.23 CN 103734020 A (21)申请号 201410038236.4 (22)申请日 2014.01.26 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 上海上房园艺有限公司 地址 201114 上海市闵行区浦江镇浦江村 申请人 上海上房园林植物研究所有限公司 (72)发明人 黄建荣 张浪 陈建华 沈勤 (74)专利代理机构 上海科盛知识产权代理有限 公司 31225 代理人 蒋亮珠 (54) 发明名称 一种德国鸢尾的组织培养方法 (57) 摘要 本发明涉及一种德国鸢尾的组织培养方法， 该。

2、方法包括以下步骤 ： (1) 培养基的配制， 包括 组培各阶段培养基的组分和含量 ： 1) 芽诱导培 养基 ： MS+6-BA(1.0-5.0)mg/L+NAA(0.1-0.5) mg/L ； 2) 不定芽增殖培养基 ： MS+6-BA(1.0-3.0) mg/L+NAA(0.1-0.3)mg/L ； 3) 壮 苗 培 养 基 ： MS+6-BA(0.5-2.0)mg/L+NAA(0.1-0.2)mg/L ； 4) 生根培养基 ： MS+NAA(0.05-0.2)mg/L ； 上述各种 情况培养基的 ph5.8， 加入蔗糖 30g/.L， 琼脂 6g/ L， 培养温度为 (251)， 光照为 。

3、80mol ms 左 右。 与现有技术相比， 本发明具有极大提高繁殖速 度和苗的整齐度， 更好地保持原有的母本性状等 优点。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书4页 (10)申请公布号 CN 103734020 A CN 103734020 A 1/2 页 2 1. 一种德国鸢尾的组织培养方法， 其特征在于， 该方法包括以下步骤 ： (1) 培养基的配制， 包括组培各阶段培养基的组分和含量 ： 1) 芽诱导培养基 ： MS+6-BA(1.0-5.0)mg/L+NAA(0.1-0.5)mg。

4、/L ； 2) 不定芽增殖培养基 ： MS+6-BA(1.0-3.0)mg/L+NAA(0.1-0.3)mg/L ； 3) 壮苗培养基 ： MS+6-BA(0.5-2.0)mg/L+NAA(0.1-0.2)mg/L ； 4) 生根培养基 ： MS+NAA(0.05-0.2)mg/L ； 上述各种情况培养基的ph5.8， 加入蔗糖30g/.L， 琼脂6g/L， 培养温度为(251)， 光 照为 70-90mol ms ： (2) 德国鸢尾的组织培养 1) 无菌材料的获得 摘取德国鸢尾小芽， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 用 75的乙醇浸泡 30s， 1 升汞浸泡 15min， 无菌水冲。

5、洗 5-6 次， 无菌滤纸吸干表面水份， 取小芽基部切成 1cm 长， 接种 于芽诱导培养基上 ； 2) 芽的分化和增殖 小芽接种于小芽诱导培养基上 3 周后， 小芽开始膨大， 出现黄绿色突起， 2 周后可见明 显的小芽出现 ； 培养 1 个月， 切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基培养， 在该培养中生 长发育良好 ； 3) 不定芽壮苗培养 在不定芽增殖培养基上， 诱导出的丛生芽每丛只有 2-3 株可以伸长， 其余处于矮化状 态， 分成小丛或单芽后， 放入壮苗培养基上， 不定芽迅速伸长， 20 天后可以长到 2-3cm ； 4) 生根培养 取 2-3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根。

6、 ； 10 天后幼苗基部分化出许多白色 的根原基， 30 天后可以长至 4-6cm ； 5) 炼苗与移栽 生根培养 20-30 天， 根系长至 1-2cm 时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶炼 苗3天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理， 移栽成 活率为 95。 2. 根据权利要求 1 所述的一种德国鸢尾的组织培养方法， 其特征在于， 所述的各阶段 培养基优选以下组分和含量 ： 1) 芽 诱 导 培 养 基 ： MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L， MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L， MS+6-BA5mg/。

7、L+NAA0.5mg/L ； 2) 不 定 芽 增 殖 培 养 基 ： MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L， MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L， MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ； 3) 壮苗培养基 ： MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L， MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L， MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L ； 4) 生根培养基 ： MS+NAA0.05mg/L， MS+NAA0.1mg/L， MS+NAA0.2mg/L。 3.根据权利要求1或2所述的一种德国鸢尾的组织培养方法， 其特征在于， 所述的芽。

8、诱 导培养基优选 ： MS+6-BA5.0-mg/L+NAA0.5mg/L ； 不定芽增殖培养基优选 ： MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ； 权 利 要 求 书 CN 103734020 A 2 2/2 页 3 壮苗培养基优选 ： MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L ； 生根培养基优选 ： MS+NAA0.1mg/L， 在 MS+NAA0.1mg/L 中， 根系粗壮， 须根众多， 生根率 为 100。 权 利 要 求 书 CN 103734020 A 3 1/4 页 4 一种德国鸢尾的组织培养方法 技术领域 0001 本发明涉及一种植物的培养， 尤其是涉及一种德。

9、国鸢尾的组织培养方法。 背景技术 0002 德国鸢尾为鸢尾科鸢尾属多年生草本， 原产欧洲中部和南部。现在全世界各地广 泛栽植。株高 50CM。具有粗壮肥大的根状茎， 剑形叶丛生， 略带灰绿色， 花紫色带白色， 花 期 5-6 月。德国鸢尾花朵硕大， 色彩幽雅。喜温暖、 稍湿润和阳光充足环境。耐寒， 耐干燥 和半阴， 怕积水。宜疏松、 肥沃和排水良好的含石灰质土壤。鸢尾类植物耐寒性强， 生长健 壮， 叶丛美观， 花大色艳， 是极好的观花地被， 本品种在园林中广泛应用， 适用于盆栽、 花坛、 花境观赏， 也是重要的切花材料， 多片植做林下地被， 或丛植于花境或庭院， 是优秀的疏林 地被植物， 也是。

10、良好的花镜与庭院材料。 做为国外引进的品种引种数量较少， 分株繁殖速度 慢， 播种易变异， 市场需求量大， 种苗供应受限制。 通过组培技术， 极大提高繁殖速度和苗的 整齐度， 更好地保持原有的母本性状。德国鸢尾的组培报道尚未见。 发明内容 0003 本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种德国鸢尾的组 织培养方法。 0004 本发明的目的可以通过以下技术方案来实现 ： 一种德国鸢尾的组织培养方法， 其 特征在于， 该方法包括以下步骤 ： 0005 (1) 培养基的配制， 包括组培各阶段培养基的组分和含量 ： 0006 1) 芽诱导培养基 ： MS+6-BA(1.0-5.0)mg。

11、/L+NAA(0.1-0.5)mg/L ； 0007 2) 不定芽增殖培养基 ： MS+6-BA(1.0-3.0)mg/L+NAA(0.1-0.3)mg/L ； 0008 3) 壮苗培养基 ： MS+6-BA(0.5-2.0)mg/L+NAA(0.1-0.2)mg/L ； 0009 4) 生根培养基 ： MS+NAA(0.05-0.2)mg/L ； 0010 上述各种情况培养基的 ph5.8， 加入蔗糖 30g/.L， 琼脂 6g/L， 培养温度为 (251)， 光照为 70-90mol ms ： 0011 (2) 德国鸢尾的组织培养 0012 1) 无菌材料的获得 0013 摘取德国鸢尾小芽。

12、， 用自来水冲洗2h后于超净工作台上， 用75的乙醇浸泡30s， 1升汞浸泡15min， 无菌水冲洗5-6次， 无菌滤纸吸干表面水份， 取小芽基部切成1cm长， 接 种于芽诱导培养基上 ； 0014 2) 芽的分化和增殖 0015 小芽接种于小芽诱导培养基上 3 周后， 小芽开始膨大， 出现黄绿色突起， 2 周后可 见明显的小芽出现 ； 培养 1 个月， 切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基培养， 在该培养 中生长发育良好 ； 0016 3) 不定芽壮苗培养 说 明 书 CN 103734020 A 4 2/4 页 5 0017 在不定芽增殖培养基上， 诱导出的丛生芽每丛只有 2-3 株可以伸。

13、长， 其余处于矮 化状态， 分成小丛或单芽后， 放入壮苗培养基上， 不定芽迅速伸长， 20 天后可以长到 2-3cm ； 0018 4) 生根培养 0019 取 2-3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根 ； 10 天后幼苗基部分化出许多 白色的根原基， 30 天后可以长至 4-6cm ； 0020 5) 炼苗与移栽 0021 生根培养 20-30 天， 根系长至 1-2cm 时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开 瓶炼苗3天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理， 移 栽成活率为 95。 0022 所述的各阶段培养基优选以下组分和含量 ：。

14、 0023 1) 芽诱导培养基 ： MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L， MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L， MS+6-BA5mg/L+NAA0.5mg/L ； 0024 2) 不定芽增殖培养基 ： MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L， MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L， MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ； 0025 3) 壮 苗 培 养 基 ： MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L， MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L， MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L ； 0026 4)。

15、 生根培养基 ： MS+NAA0.05mg/L， MS+NAA0.1mg/L， MS+NAA0.2mg/L。 0027 所述的芽诱导培养基优选 ： MS+6-BA5.0-mg/L+NAA0.5mg/L ； 0028 不定芽增殖培养基优选 ： MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ； 0029 壮苗培养基优选 ： MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L ； 0030 生根培养基优选 ： MS+NAA0.1mg/L， 在 MS+NAA0.1mg/L 中， 根系粗壮， 须根众多， 生 根率为 100。 0031 与现有技术相比， 本发明组培方法， 极大提高繁殖速度和苗的整齐度，。

16、 更好地保持 原有的母本性状。 具体实施方式 0032 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。 0033 实施例 1 0034 一种德国鸢尾的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0035 (1) 培养基的配制， 包括组培各阶段培养基的组分和含量 ： 0036 1) 芽诱导培养基 ： MS+6-BA5mg/L+NAA5mg/L ； 0037 2) 不定芽增殖培养基 ： MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ； 0038 3) 壮苗培养基 ： MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L ； 0039 4) 生根培养基 ： MS+NAA0.1mg/L ； 0040 上述各种情。

17、况培养基的 ph5.8， 加入蔗糖 30g/.L， 琼脂 6g/L， 培养温度为 (251)， 光照为 80mol ms 左右 ： 0041 (2) 德国鸢尾的组织培养 0042 1) 无菌材料的获得 0043 摘取德国鸢尾小芽， 用自来水冲洗2h后于超净工作台上， 用75的乙醇浸泡30s， 说 明 书 CN 103734020 A 5 3/4 页 6 1升汞浸泡15min， 无菌水冲洗5-6次， 无菌滤纸吸干表面水份， 取小芽基部切成1cm长， 接 种于芽诱导培养基上 ； 0044 2) 芽的分化和增殖 0045 小芽接种于小芽诱导培养基上 3 周后， 小芽开始膨大， 出现黄绿色突起， 2 。

18、周后可 见明显的小芽出现 ； 培养 1 个月， 切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基培养， 在该培养 中生长发育良好 ； 0046 3) 不定芽壮苗培养 0047 在不定芽增殖培养基上， 诱导出的丛生芽每丛只有 2-3 株可以伸长， 其余处于矮 化状态， 分成小丛或单芽后， 放入壮苗培养基上， 不定芽迅速伸长， 20 天后可以长到 2-3cm ； 在 MS+6-BA0.1+NAA0.1 培养基上芽粗壮 ； 0048 4) 生根培养 0049 取 2-3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根 ； 10 天后幼苗基部分化出许多 白色的根原基， 30 天后可以长至 4-6cm ； 在 MS+N。

19、AA0.1mg/L 中， 根系粗壮， 须根众多， 生根率 为 100。 0050 5) 炼苗与移栽 0051 生根培养25天左右， 根系长至1-2cm左右时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室 内开瓶炼苗 3 天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化 40 天后， 即可移栽室外， 给予肥水管 理， 移栽成活率为 95。 0052 实施例 2 0053 一种德国鸢尾的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0054 (1) 培养基的配制， 包括组培各阶段培养基的组分和含量 ： 0055 1) 芽诱导培养基 ： MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L ； 0056 2) 不定芽增殖培。

20、养基 ： MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L ； 0057 3) 壮苗培养基 ： MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L ； 0058 4) 生根培养基 ： MS+NAA0.05mg/L ； 0059 上述各种情况培养基的 ph5.8， 加入蔗糖 30g/.L， 琼脂 6g/L， 培养温度为 (251)， 光照为 70mol ms 左右 ： 0060 (2) 德国鸢尾的组织培养 0061 1) 无菌材料的获得 0062 摘取德国鸢尾小芽， 用自来水冲洗2h后于超净工作台上， 用75的乙醇浸泡30s， 1升汞浸泡15min， 无菌水冲洗5-6次， 无菌滤纸吸干表面水份， 。

21、取小芽基部切成1cm长， 接 种于芽诱导培养基上 ； 0063 2) 芽的分化和增殖 0064 小芽接种于小芽诱导培养基上 3 周后， 小芽开始膨大， 出现黄绿色突起， 2 周后可 见明显的小芽出现 ； 培养 1 个月， 切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基培养， 在该培养 中生长发育良好 ； 0065 3) 不定芽壮苗培养 0066 在不定芽增殖培养基上， 诱导出的丛生芽每丛只有 2-3 株可以伸长， 其余处于矮 化状态， 分成小丛或单芽后， 放入壮苗培养基上， 不定芽迅速伸长， 20 天后可以长到 2-3cm ； 说 明 书 CN 103734020 A 6 4/4 页 7 0067 4)。

22、 生根培养 0068 取 2-3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根 ； 10 天后幼苗基部分化出许多 白色的根原基， 30 天后可以长至 4-6cm ； 0069 5) 炼苗与移栽 0070 生根培养20天左右， 根系长至1-2cm左右时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室 内开瓶炼苗 3 天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化 40 天后， 即可移栽室外， 给予肥水管 理， 移栽成活率为 95。 0071 实施例 3 0072 一种德国鸢尾的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0073 (1) 培养基的配制， 包括组培各阶段培养基的组分和含量 ： 0074 1) 芽诱导培养。

23、基 ： MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L ； 0075 2) 不定芽增殖培养基 ： MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L ； 0076 3) 壮苗培养基 ： MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L ； 0077 4) 生根培养基 ： MS+NAA0.2mg/L ； 0078 上述各种情况培养基的 ph5.8， 加入蔗糖 30g/.L， 琼脂 6g/L， 培养温度为 (251)， 光照为 90mol ms 左右 ： 0079 (2) 德国鸢尾的组织培养 0080 1) 无菌材料的获得 0081 摘取德国鸢尾小芽， 用自来水冲洗2h后于超净工作台上， 用75的乙。

24、醇浸泡30s， 1升汞浸泡15min， 无菌水冲洗5-6次， 无菌滤纸吸干表面水份， 取小芽基部切成1cm长， 接 种于芽诱导培养基上 ； 0082 2) 芽的分化和增殖 0083 小芽接种于小芽诱导培养基上 3 周后， 小芽开始膨大， 出现黄绿色突起， 2 周后可 见明显的小芽出现 ； 培养 1 个月， 切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基培养， 在该培养 中生长发育良好 ； 0084 3) 不定芽壮苗培养 0085 在不定芽增殖培养基上， 诱导出的丛生芽每丛只有 2-3 株可以伸长， 其余处于矮 化状态， 分成小丛或单芽后， 放入壮苗培养基上， 不定芽迅速伸长， 20 天后可以长到 2-3cm ； 0086 4) 生根培养 0087 取 2-3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根 ； 10 天后幼苗基部分化出许多 白色的根原基， 30 天后可以长至 4-6cm ； 0088 5) 炼苗与移栽 0089 生根培养30天左右， 根系长至1-2cm左右时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室 内开瓶炼苗 3 天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化 40 天后， 即可移栽室外， 给予肥水管 理， 移栽成活率为 95。 说 明 书 CN 103734020 A 7 。