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一种葡萄耐盐性的快速鉴定方法.pdf

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文档编号：6952626

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1、(10)申请公布号 CN 103875469 A (43)申请公布日 2014.06.25 CN 103875469 A (21)申请号 201210556539.6 (22)申请日 2012.12.20 A01G 7/00(2006.01) A01G 31/00(2006.01) (71)申请人盐城工学院地址 224051 江苏省盐城市迎宾大道 9 号 (72)发明人李洪山申玉香 (54) 发明名称一种葡萄耐盐性的快速鉴定方法 (57) 摘要本发明提供了一种方法简单、成本低廉、评价直观、试验周期较短的葡萄耐盐性快速鉴定方法，其方法是：以冬春季剪伐的带芽插条为试材，。

2、将插条预处理后按生长方向将下端置入有营养液的广口瓶中，在 25， 18R:6D 的光照培养箱中促芽萌发、出叶，在葡萄芽出叶达到 3-5 个展平叶时，将带有叶片的插条分组，分别置于不同氯化钠浓度的溶液中继续培养，盐协迫生长，逐日观测记载叶的变化，叶的生长速度，以 “盐害分级标准” 为主要考查方法描述、评价葡萄的耐盐性，葡萄能够适应在某个盐浓度生长的形态指标为芽心出叶正常、出叶速度正常、展开正常、 5以下叶片有失绿斑、无盐害性落叶。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 3 页附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)。

3、发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图2页 (10)申请公布号 CN 103875469 A CN 103875469 A 1/1 页 2 1. 本发明涉及一项葡萄耐盐性的鉴定方法，其特征在于：以冬春季剪伐的带芽插条为试材，将插条预处理后按生长方向将下端置入有营养液的广口瓶中，在 25， 18R:6D 的光照培养箱中促芽萌发、出叶，在葡萄芽出叶达到 3-5 个展平叶时，将带有叶片的插条分组，分别置于不同氯化钠浓度的溶液中继续培养，盐协迫生长，逐日观测记载叶的变化，叶的生长速度，以 “盐害分级标准” 为主要考查方法描述评价葡萄的耐盐性。 2. 根据权利要求。

4、 1，冬春季剪伐的带芽插条长度要求在 15-20cm，茎径 1cm 左右，芽饱满，插条带芽数 3-5 个。 3.根据权利要求1，插条在置入培养液之前将最低位芽下3cm左右位置剪成斜面，在插条顶端用保鲜膜包裹。 4. 根据权利要求 1，营养液为含有细胞分裂素的 Hoagland 培养液，营养液中含 1/10 的 Hoagland 培养液，细胞分裂素选用下列之一， 6- 苄氨基腺嘌呤 (6-BA)0.1 1.0mg/L，或者萘乙酸 (NAA)0.01 0.02mg/L，或者吲哚乙酸 (IAA)0.2 0.5mg/L。营养液每 5 天更换一次。 5. 根据权利要求 1，。

5、促芽萌发、出叶的培养条件为 25， 18R:6D。 6.根据权利要求1，盐协迫生长之前，要求葡萄芽完整，展开叶完整，并具有3-5个展平叶。 7. 根据权利要求 1，用于协迫生长的溶液中氯化钠浓度为 0 0.6，浓度梯度 0.05 或者 0.1。 8. 根据权利要求 1，记载叶的变化，叶的生长速度的内容具体包括芽心叶叶片的颜色变化 ( 黄化、失绿、枯黄 )、已出叶片的颜色变化 ( 黄化、失绿、枯黄 )、出叶速度、以及落叶状况。 9. 根据权利要求 1，评价葡萄能够适应在某个盐浓度生长的形态指标 ( 以清水培养的葡萄性状指标为参照 ) ：芽心出叶正常、。

6、出叶速度正常、展开正常、 5以下叶片有失绿斑、无盐害性落叶。权利要求书 CN 103875469 A 2 1/3 页 3 一种葡萄耐盐性的快速鉴定方法技术领域 0001 本发明涉及一种葡萄耐盐性的快速鉴定方法。该项内容可以适用于扦插类木本植物的耐盐种质资源的快速鉴定与筛选，属于农业生物技术领域。背景技术 0002 当前全球土地沙漠化、盐碱化逐步加重，全球盐碱地正以每年100150万公顷的速度增长。我国盐碱地主要分布在 17 个省区，具有农业利用潜力的盐碱荒地、盐碱障碍耕地面积近 2 亿亩，由于我国目前环境、资源等压力不断增大，加之城镇占地、工业占地。

7、扩大，因此积极改良、开发利用盐碱地资源对缓解土地压力、增加后备耕地储备、保障农业生产安全具有重要意义。 0003 葡萄是我国果树中的主栽品种之一，在农业经济中的具有重要地位，中国的葡萄栽培已有数千年历史。但葡萄属于对盐碱敏感的非盐生植物，过量的盐碱不仅影响葡萄的生长、产量和品质，还会引起叶斑、落叶、枯枝甚至死树，但因自身的遗传和栽培条件不同，不同品种间耐盐碱性存在明显的差异。 0004 葡萄对土壤的适应性较强，除了沼泽地和重盐碱地不适宜生长外，其余各类型土壤都能栽培。盐害对葡萄的伤害主要表现在渗透胁迫、离子毒害与养分不均衡、膜伤害三个方面，在葡萄。

8、的耐盐性指标评价上多采用形态指标、生长量指标、土壤含盐量指标和生理生化指标等的综合。目前对葡萄耐盐性评价多以葡萄苗为试验材料，由于葡萄苗的育成常常要 1-2 年，而且需要一定空间和时间，从而导致葡萄耐盐性评价试验周期长，花费成本高，亦阻碍了葡萄耐盐种质资源的筛选与推广进程。发明内容 0005 为高效快速鉴定葡萄的耐盐性能，本发明提供了一种方法简单、成本低廉、评价直观、试验周期较短的葡萄耐盐性快速鉴定方法。 0006 本发明通过以下技术方案实现： 0007 一种葡萄耐盐性的快速鉴定方法，包括以下步骤： 0008 (1)冬春季剪伐的带芽插条长度要求在15-20c。

9、m，茎径1cm左右，芽饱满，插条带芽数 3-5 个。 0009 (2) 插条在置入培养液之前将最低位芽下 3cm 左右位置剪成斜面，在插条顶端用保鲜膜包裹。 0010 (3) 营养液为含有细胞分裂素的 Hoagland 培养液，营养液中含 1/10 的 Hoagland 培养液，细胞分裂素选用下列之一， 6- 苄氨基腺嘌呤 (6-BA)0.1 1.0mg/L，或者萘乙酸 (NAA)0.01 0.02mg/L，或者吲哚乙酸 (IAA)0.2 0.5mg/L，营养液每 5 天更换一次。 0011 (4) 将插条预处理后按生长方向将下端置入有营养液的广口瓶中，在 25， 18。

10、R:6D 的光照培养箱中促芽萌发、出叶。 0012 (5) 在葡萄芽出叶达到 3 5 个展平叶时，将带有叶片的插条分组，分别置于不同说明书 CN 103875469 A 3 2/3 页 4 氯化钠浓度的溶液中继续培养，用于协迫生长的溶液中氯化钠浓度为 0 0.6，浓度梯度 0.05或者 0.1。 0013 (6) 逐日观测记载叶的变化，叶的生长速度，具体包括芽心叶叶片的颜色变化 ( 黄化、失绿、枯黄 )、已出叶片的颜色变化 ( 黄化、失绿、枯黄 )、出叶速度、以及落叶状况。 0014 (7) 以 “盐害分级标准” 考查方法为主要描述评价葡萄的耐盐性，评价葡。

11、萄能够适应在某个盐浓度生长的形态指标 ( 以清水培养的葡萄性状指标为参照 ) ：芽心出叶正常、出叶速度正常、展开正常、 10以下叶片有失绿斑、无盐害性枯落叶。 0015 (8) 盐害分级标准 0016 0 级：生长正常，无盐害症状； 0017 1 级：轻度盐害，有少部分叶尖、叶缘变黄枯干，盐害性枯落叶量小于总叶量的 20 ； 0018 2 级：中度盐害，有相当一部分叶尖、叶缘焦枯，盐害性枯落叶量约占总叶量的 20 50 ； 0019 3 级：重度盐害，大部分叶尖、叶缘焦枯，半数以上的叶片枯死或脱落，盐害性枯落叶量约占总叶量的 50 80 ；。

12、 0020 4 级：极重度盐害，超过 80的叶片枯死甚至脱落，仅有少量绿色，甚至全株死亡。附图说明 0021 图 1. 藤稔葡萄插条与盆栽苗脯氨酸含量变化 0022 图 2. 不同品种葡萄插条 SOD 酶活性 0023 图 3. 不同品种葡萄插条 MDA 含量变化 0024 图 4. 不同品种葡萄插条脯氨酸含量具体实施方式 0025 本发明的实施例体现了本专利保护范围，但本专利保护范围不局限以下实施例。 0026 实例一： 2011 年冬在大丰盐土大地葡萄园中取带芽插条和苗，品种为藤稔，带芽插条，长度在 15-20cm，茎粗 1cm 左右，藤稔苗根系完整，茎高。

13、35-40cm，冬季砂贮保存，翌年春，带芽插条经预处理后，在含有萘乙酸 (NAA)0.01浓度的 Hoagland 培养液中促芽生长， 5d 左右芽萌发， 7-10d 有叶展开，在 25-30d 时有 3-4 张叶片。第 35d 时选择叶片数 3-4 个、生长势一致的插条， 3 枝为一组，每组分别插入含有氯化钠浓度为 0、 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5的溶液中继续培养，藤稔苗盆栽， 15-20d时芽萌发，在40-50d时有3-4张叶片。第 60d 时选择茎叶完整，生长基本一致的盆栽苗， 3 盆为一组，每组分别用含有氯化钠浓度为 0、 0.1、 0.。

14、2、 0.3、 0.4、 0.5的溶液中 500ml 浇灌，隔日一次，连续三次之后转入正常管理。逐日观测表明，在不同盐浓度中培养 1d 时，外部性状没有明显变化，第 3d 时，不同浓度中插条叶片颜色有差异， 0.2、 0.3浓度培养的插条上叶色变淡， 5d 时 0.3浓度培养的插条叶片部分叶缘变褐、枯卷， 0.4浓度以上培养的插条上叶缘枯卷、变脆、逐渐向叶片中部扩展、部分严重的整张叶片枯萎。盆栽苗用0.1、 0.2氯化钠浓度浇灌的葡萄苗生长正常， 0.3氯化钠浓度浇灌的葡萄苗除叶色略淡、个别叶片叶缘有枯斑外，其余生长正常， 0.4以上浓度的葡萄苗叶片整片枯。

15、萎、芽心变黑。生理生化测定数据也表明了葡萄说明书 CN 103875469 A 4 3/3 页 5 插条叶片与葡萄苗叶片中耐盐相关物质的含量转折点基本一致(图1)。藤稔葡萄适宜生长的盐分含量不超过 0.3。 0027 实例二： 2012 年春，从盐城市仰徐葡萄园剪取带芽插条，长度在 15-20cm，茎粗 1cm 左右，葡萄品种为夏黑、白罗莎里奥和新美人指，带芽插条经预处理后，在含有萘乙酸 (NAA)0.01浓度的 Hoagland 培养液中促芽生长， 5d 左右芽萌发， 7-10d 有叶展开，在 25-30d 时有 3-4 张叶片。第 35d 时选择叶片数 3-。

16、4 个、生长势一致的插条， 3 枝为一组，每组分别插入含有氯化钠浓度为 0、 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5的溶液中继续培养，逐日观测表明，在不同盐浓度中培养1d时，外部性状没有明显变化，第2d时，不同浓度中插条叶片颜色有差异，随着培养时间的延续，主要表现在两个方面，一种是整张叶片叶色变淡，变黄，严重的整张叶片黄化掉落。一种是部分叶缘枯卷、变脆、逐渐向叶片中部扩展，严重的整张叶片枯萎。夏黑葡萄插条在 0.2 0.3浓度氯化钠溶液中培养 2 3d 时，个别叶片叶缘出现枯卷，叶片生长正常。在0.4、 0.5浓度氯化钠溶液中培养的夏黑插条上叶片全部出现叶缘枯卷， 23d后部分叶片整片枯萎、芽心变黑。白罗莎里奥插条出现上述现象的浓度在 0.2，新美人指插条出现上述现象的浓度在 0.1。生理生化测定数据也表明了在上述浓度条件下，葡萄插条叶片中耐盐相关物质的含量发生了转折(图2、图3、图4)。测定表明夏黑、白罗莎里奥和新美人指葡萄的适宜生长的盐分含量分别不超过 0.3、 0.2和 0.1。说明书 CN 103875469 A 5 1/2 页 6 图 1 图 2 说明书附图 CN 103875469 A 6 2/2 页 7 图 3 图 4 说明书附图 CN 103875469 A 7 。

摘要
申请专利号：	CN201210556539.6	申请日：	20121220
公开号：	CN103875469A	公开日：	20140625
当前法律状态：		有效性：	失效
法律详情：
IPC分类号：	A01G7/00,A01G31/00	主分类号：	A01G7/00,A01G31/00
申请人：	盐城工学院
发明人：	李洪山,申玉香
地址：	224051 江苏省盐城市迎宾大道9号
优先权：	CN201210556539A
专利代理机构：		代理人：
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内容摘要

本发明提供了一种方法简单、成本低廉、评价直观、试验周期较短的葡萄耐盐性快速鉴定方法，其方法是：以冬春季剪伐的带芽插条为试材，将插条预处理后按生长方向将下端置入有营养液的广口瓶中，在25℃，18R:6D的光照培养箱中促芽萌发、出叶，在葡萄芽出叶达到3-5个展平叶时，将带有叶片的插条分组，分别置于不同氯化钠浓度的溶液中继续培养，盐协迫生长，逐日观测记载叶的变化，叶的生长速度，以“盐害分级标准”为主要考查方法描述、评价葡萄的耐盐性，葡萄能够适应在某个盐浓度生长的形态指标为芽心出叶正常、出叶速度正常、展开正常、5％以下叶片有失绿斑、无盐害性落叶。

权利要求书

1.本发明涉及一项葡萄耐盐性的鉴定方法，其特征在于：以冬春季剪伐的带芽插条为试材，将插条预处理后按生长方向将下端置入有营养液的广口瓶中，在25℃，18R:6D的光照培养箱中促芽萌发、出叶，在葡萄芽出叶达到3-5个展平叶时，将带有叶片的插条分组，分别置于不同氯化钠浓度的溶液中继续培养，盐协迫生长，逐日观测记载叶的变化，叶的生长速度，以“盐害分级标准”为主要考查方法描述评价葡萄的耐盐性。 2.根据权利要求1，冬春季剪伐的带芽插条长度要求在15-20cm，茎径1cm左右，芽饱满，插条带芽数3-5个。 3.根据权利要求1，插条在置入培养液之前将最低位芽下3cm左右位置剪成斜面，在插条顶端用保鲜膜包裹。 4.根据权利要求1，营养液为含有细胞分裂素的Hoagland培养液，营养液中含1/10的Hoagland培养液，细胞分裂素选用下列之一，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.1～1.0mg/L，或者萘乙酸(NAA)0.01～0.02mg/L，或者吲哚乙酸(IAA)0.2～0.5mg/L。营养液每5天更换一次。 5.根据权利要求1，促芽萌发、出叶的培养条件为25℃，18R:6D。 6.根据权利要求1，盐协迫生长之前，要求葡萄芽完整，展开叶完整，并具有3-5个展平叶。 7.根据权利要求1，用于协迫生长的溶液中氯化钠浓度为0～0.6％，浓度梯度0.05％或者0.1％。 8.根据权利要求1，记载叶的变化，叶的生长速度的内容具体包括芽心叶叶片的颜色变化(黄化、失绿、枯黄)、已出叶片的颜色变化(黄化、失绿、枯黄)、出叶速度、以及落叶状况。 9.根据权利要求1，评价葡萄能够适应在某个盐浓度生长的形态指标(以清水培养的葡萄性状指标为参照)：芽心出叶正常、出叶速度正常、展开正常、5％以下叶片有失绿斑、无盐害性落叶。

说明书

技术领域

本发明涉及一种葡萄耐盐性的快速鉴定方法。该项内容可以适用于扦插类木本植物的耐盐种质资源的快速鉴定与筛选，属于农业生物技术领域。

背景技术

当前全球土地沙漠化、盐碱化逐步加重，全球盐碱地正以每年100～150万公顷的速度增长。我国盐碱地主要分布在17个省区，具有农业利用潜力的盐碱荒地、盐碱障碍耕地面积近 2亿亩，由于我国目前环境、资源等压力不断增大，加之城镇占地、工业占地扩大，因此积极改良、开发利用盐碱地资源对缓解土地压力、增加后备耕地储备、保障农业生产安全具有重要意义。

葡萄是我国果树中的主栽品种之一，在农业经济中的具有重要地位，中国的葡萄栽培已有数千年历史。但葡萄属于对盐碱敏感的非盐生植物，过量的盐碱不仅影响葡萄的生长、产量和品质，还会引起叶斑、落叶、枯枝甚至死树，但因自身的遗传和栽培条件不同，不同品种间耐盐碱性存在明显的差异。

葡萄对土壤的适应性较强，除了沼泽地和重盐碱地不适宜生长外，其余各类型土壤都能栽培。盐害对葡萄的伤害主要表现在渗透胁迫、离子毒害与养分不均衡、膜伤害三个方面，在葡萄的耐盐性指标评价上多采用形态指标、生长量指标、土壤含盐量指标和生理生化指标等的综合。目前对葡萄耐盐性评价多以葡萄苗为试验材料，由于葡萄苗的育成常常要1-2年，而且需要一定空间和时间，从而导致葡萄耐盐性评价试验周期长，花费成本高，亦阻碍了葡萄耐盐种质资源的筛选与推广进程。

发明内容

为高效快速鉴定葡萄的耐盐性能，本发明提供了一种方法简单、成本低廉、评价直观、试验周期较短的葡萄耐盐性快速鉴定方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种葡萄耐盐性的快速鉴定方法，包括以下步骤：

(1)冬春季剪伐的带芽插条长度要求在15-20cm，茎径1cm左右，芽饱满，插条带芽数 3-5个。

(2)插条在置入培养液之前将最低位芽下3cm左右位置剪成斜面，在插条顶端用保鲜膜包裹。

(3)营养液为含有细胞分裂素的Hoagland培养液，营养液中含1/10的Hoagland培养液，细胞分裂素选用下列之一，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.1～1.0mg/L，或者萘乙酸(NAA)0.01～ 0.02mg/L，或者吲哚乙酸(IAA)0.2～0.5mg/L，营养液每5天更换一次。

(4)将插条预处理后按生长方向将下端置入有营养液的广口瓶中，在25℃，18R:6D的光照培养箱中促芽萌发、出叶。

(5)在葡萄芽出叶达到3～5个展平叶时，将带有叶片的插条分组，分别置于不同氯化钠浓度的溶液中继续培养，用于协迫生长的溶液中氯化钠浓度为0～0.6％，浓度梯度0.05％或者0.1％。

(6)逐日观测记载叶的变化，叶的生长速度，具体包括芽心叶叶片的颜色变化(黄化、失绿、枯黄)、已出叶片的颜色变化(黄化、失绿、枯黄)、出叶速度、以及落叶状况。

(7)以“盐害分级标准”考查方法为主要描述评价葡萄的耐盐性，评价葡萄能够适应在某个盐浓度生长的形态指标(以清水培养的葡萄性状指标为参照)：芽心出叶正常、出叶速度正常、展开正常、10％以下叶片有失绿斑、无盐害性枯落叶。

(8)盐害分级标准

0级：生长正常，无盐害症状；

1级：轻度盐害，有少部分叶尖、叶缘变黄枯干，盐害性枯落叶量小于总叶量的20％；

2级：中度盐害，有相当一部分叶尖、叶缘焦枯，盐害性枯落叶量约占总叶量的20％～ 50％；

3级：重度盐害，大部分叶尖、叶缘焦枯，半数以上的叶片枯死或脱落，盐害性枯落叶量约占总叶量的50％～80％；

4级：极重度盐害，超过80％的叶片枯死甚至脱落，仅有少量绿色，甚至全株死亡。

附图说明

图1.藤稔葡萄插条与盆栽苗脯氨酸含量变化

图2.不同品种葡萄插条SOD酶活性

图3.不同品种葡萄插条MDA含量变化

图4.不同品种葡萄插条脯氨酸含量

具体实施方式

本发明的实施例体现了本专利保护范围，但本专利保护范围不局限以下实施例。

实例一：2011年冬在大丰盐土大地葡萄园中取带芽插条和苗，品种为藤稔，带芽插条，长度在15-20cm，茎粗1cm左右，藤稔苗根系完整，茎高35-40cm，冬季砂贮保存，翌年春，带芽插条经预处理后，在含有萘乙酸(NAA)0.01％浓度的Hoagland培养液中促芽生长，5d左右芽萌发，7-10d有叶展开，在25-30d时有3-4张叶片。第35d时选择叶片数3-4个、生长势一致的插条，3枝为一组，每组分别插入含有氯化钠浓度为0、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、 0.5％的溶液中继续培养，藤稔苗盆栽，15-20d时芽萌发，在40-50d时有3-4张叶片。第60d 时选择茎叶完整，生长基本一致的盆栽苗，3盆为一组，每组分别用含有氯化钠浓度为0、0.1％、 0.2％、0.3％、0.4％、0.5％的溶液中500ml浇灌，隔日一次，连续三次之后转入正常管理。逐日观测表明，在不同盐浓度中培养1d时，外部性状没有明显变化，第3d时，不同浓度中插条叶片颜色有差异，0.2％、0.3％浓度培养的插条上叶色变淡，5d时0.3％浓度培养的插条叶片部分叶缘变褐、枯卷，0.4％浓度以上培养的插条上叶缘枯卷、变脆、逐渐向叶片中部扩展、部分严重的整张叶片枯萎。盆栽苗用0.1％、0.2％氯化钠浓度浇灌的葡萄苗生长正常，0.3％氯化钠浓度浇灌的葡萄苗除叶色略淡、个别叶片叶缘有枯斑外，其余生长正常，0.4％以上浓度的葡萄苗叶片整片枯萎、芽心变黑。生理生化测定数据也表明了葡萄插条叶片与葡萄苗叶片中耐盐相关物质的含量转折点基本一致(图1)。藤稔葡萄适宜生长的盐分含量不超过0.3％。

实例二：2012年春，从盐城市仰徐葡萄园剪取带芽插条，长度在15-20cm，茎粗1cm 左右，葡萄品种为夏黑、白罗莎里奥和新美人指，带芽插条经预处理后，在含有萘乙酸(NAA) 0.01％浓度的Hoagland培养液中促芽生长，5d左右芽萌发，7-10d有叶展开，在25-30d时有 3-4张叶片。第35d时选择叶片数3-4个、生长势一致的插条，3枝为一组，每组分别插入含有氯化钠浓度为0、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％的溶液中继续培养，逐日观测表明，在不同盐浓度中培养1d时，外部性状没有明显变化，第2d时，不同浓度中插条叶片颜色有差异，随着培养时间的延续，主要表现在两个方面，一种是整张叶片叶色变淡，变黄，严重的整张叶片黄化掉落。一种是部分叶缘枯卷、变脆、逐渐向叶片中部扩展，严重的整张叶片枯萎。夏黑葡萄插条在0.2～0.3％浓度氯化钠溶液中培养2～3d时，个别叶片叶缘出现枯卷，叶片生长正常。在0.4％、0.5％浓度氯化钠溶液中培养的夏黑插条上叶片全部出现叶缘枯卷，2～ 3d后部分叶片整片枯萎、芽心变黑。白罗莎里奥插条出现上述现象的浓度在0.2％，新美人指插条出现上述现象的浓度在0.1％。生理生化测定数据也表明了在上述浓度条件下，葡萄插条叶片中耐盐相关物质的含量发生了转折(图2、图3、图4)。测定表明夏黑、白罗莎里奥和新美人指葡萄的适宜生长的盐分含量分别不超过0.3％、0.2％和0.1％。