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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610468943.6 (22)申请日 2016.06.25 (71)申请人 合肥隆扬农业科技有限公司 地址 230000 安徽省合肥市经开区桃花工 业园桥湾路舒尔环保科技 （合肥） 有限 公司办公楼职工宿舍 (72)发明人 岳朝雷 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称 一种蝴蝶兰的组织培养方法 (57)摘要 本发明公开了一种蝴蝶兰的组织培养方法， 所述步骤接种的密度， 播种密度可以产生 “群体 效应” ， 从而使种子的发芽增快， 。
2、所述无菌萌发培 养基的组成包括胰蛋白胨、 香蕉汁、 活性炭和琼 脂以及配比可以提供种子生长所需要的营养， 促 进种子的萌发， 所述萌发的同时添加激素， 可以 使成苗数量增加， 所述萌发的同时添加有机添加 物， 所述有机添加物为蔗糖， 所述蔗糖的浓度为 2-4%， 可以对蝴蝶兰种子发芽、 原球茎形成以及 叶片生长具有促进作用。 采用此种组织培养方法 培养出来的蝴蝶兰具有发芽率高以及生长优良 的优点， 市场潜力巨大， 前景广阔。 权利要求书1页 说明书4页 CN 105941161 A 2016.09.21 CN 105941161 A 1.一种蝴蝶兰的组织培养方法， 其特征在于， 包括如下步骤：。
3、 （1） 采种 首先选取授粉后95-105天的的蝴蝶兰果荚， 所选取的果荚为外部光滑饱满， 颜色由绿 转黄； （2） 接种 先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面， 然后冲洗， 再用8-12%NaClO浸泡10-20min， 然 后在超净工作台上， 用75%酒精消毒1-3min， 并用0.05-0.15%升汞消毒3min， 用无菌水冲洗 2-4遍， 取出蒴果放在无菌的培养皿中， 切开蒴果将种子移入有无菌水的培养瓶中， 轻轻摇 动使之分散均匀； （3） 萌发 采用种子无菌萌发培养基对种子进行萌发， 接种后10-20天， 胚萌发， 20天后转入半母 瓶培养， 分初代、 继代和生根培养3阶段形成带根小苗；。
4、 （4） 炼苗与移栽 当小苗出现3-5片叶、 2-4条根时即可出瓶移栽 ； （5） 移栽介质的选择 移栽的介质为水苔、 椰糠、 砖块和木炭的混合体为基质， 所述水苔、 椰糠、 砖块和木炭的 比例为0.5:0.5:0.3:1-1:1:0.5:2； （6） 温度管理 在播种期、 育苗期的温度控制在 20-24 ， 幼苗期的温度控制在 16-18 。 2.按照权利要求1所述的一种蝴蝶兰的组织培养方法， 其特征在于： 所述步骤 （2） 中接 种的密度为200-300粒/m2。 3.按照权利要求1所述的一种蝴蝶兰的组织培养方法， 其特征在于： 所述步骤 （3） 中无 菌萌发培养基的组成包括胰蛋白胨、 香。
5、蕉汁、 活性炭和琼脂。 4.按照权利要求3所述的一种蝴蝶兰的组织培养方法， 其特征在于： 所述胰蛋白胨、 香 蕉汁、 活性炭和琼脂的含量分别为1-3g/l、 50-150g/l、 0.5-1.5g/l、 8-10g/l。 5.按照权利要求1所述的一种蝴蝶兰的组织培养方法， 其特征在于： 所述步骤 （3） 中萌 发的同时添加激素， 所述激素的组成为细胞分裂素BA与NAA， 所述BA与NAA的配比为4-6mg/l 和0.04-0.06mg/l。 6.按照权利要求1所述的一种蝴蝶兰的组织培养方法， 其特征在于： 所述步骤 （3） 中萌 发的同时添加有机添加物， 所述有机添加物为蔗糖， 所述蔗糖的浓度。
6、为2-4%。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105941161 A 2 一种蝴蝶兰的组织培养方法 技术领域 0001 本发明属于花卉栽培领域， 更具体地说， 本发明涉及一种蝴蝶兰的组织培养方法。 背景技术 0002 蝴蝶兰， 兰科蝴蝶兰属， 是单茎性热带附生兰， 分布于亚洲、 大洋洲热带和亚热带 地区， 多生长在阴湿多雾高温森林中的树干和湿石上， 因其花形别致， 花色艳丽， 开花期长， 成为当今国际、 国内花卉市场上最受欢迎的花卉之一， 素有 “兰花皇后” 之美称。 通过无菌播 种与组织培养， 获得大量优良植株， 可以保持优良品质特征， 是进行大规模商品生产和新品 种选育的关键。 。
7、目前蝴蝶兰的组织培养方法存在着发芽缓慢以及成苗数量不高的问题。 发明内容 0003 本发明所要解决的问题是提供一种蝴蝶兰的组织培养方法。 0004 为了实现上述目的， 本发明采取的技术方案为： 一种蝴蝶兰的组织培养方法， 包括如下步骤： （1） 采种 首先选取授粉后95-105天的的蝴蝶兰果荚， 所选取的果荚为外部光滑饱满， 颜色由绿 转黄； （2） 接种 先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面， 然后冲洗， 再用8-12%NaClO浸泡10-20min， 然 后在超净工作台上， 用75%酒精消毒1-3min， 并用0.05-0.15%升汞消毒3min， 用无菌水冲洗 2-4遍， 取出蒴果放在无菌的。
8、培养皿中， 切开蒴果将种子移入有无菌水的培养瓶中， 轻轻摇 动使之分散均匀； （3） 萌发 采用种子无菌萌发培养基对种子进行萌发， 接种后10-20天， 胚萌发， 20天后转入半母 瓶培养， 分初代、 继代和生根培养3阶段形成带根小苗； （4） 炼苗与移栽 当小苗出现3-5片叶、 2-4条根时即可出瓶移栽 ； （5） 移栽介质的选择 移栽的介质为水苔、 椰糠、 砖块和木炭的混合体为基质， 所述水苔、 椰糠、 砖块和木炭的 比例为0.5:0.5:0.3:1-1:1:0.5:2； （6） 温度管理 在播种期、 育苗期的温度控制在 20-24 ， 幼苗期的温度控制在 16-18 。 0005 优选的。
9、， 所述步骤 （2） 中接种的密度为200-300粒/m2。 0006 优选的， 所述步骤 （3） 中无菌萌发培养基的组成包括胰蛋白胨、 香蕉汁、 活性炭和 琼脂。 0007 优选的， 所述胰蛋白胨、 香蕉汁、 活性炭和琼脂的含量分别为1-3g/l、 50-150g/l、 说 明 书 1/4 页 3 CN 105941161 A 3 0.5-1.5g/l、 8-10g/l。 0008 优选的， 所述步骤 （3） 中萌发的同时添加激素， 所述激素的组成为细胞分裂素BA与 NAA， 所述BA与NAA的配比为4-6mg/l和0.04-0.06mg/l。 0009 优选的， 所述步骤 （3） 中萌发的。
10、同时添加有机添加物， 所述有机添加物为蔗糖， 所 述蔗糖的浓度为2-4%。 0010 有益效果： 本发明提供了一种蝴蝶兰的组织培养方法， 所述步骤接种的密度， 播种 密度可以产生 “群体效应” ， 从而使种子的发芽增快， 所述无菌萌发培养基的组成包括胰蛋 白胨、 香蕉汁、 活性炭和琼脂以及配比可以提供种子生长所需要的营养， 促进种子的萌发， 所述萌发的同时添加激素， 可以使成苗数量增加， 所述萌发的同时添加有机添加物， 所述有 机添加物为蔗糖， 所述蔗糖的浓度为2-4%， 可以对蝴蝶兰种子发芽、 原球茎形成以及叶片生 长具有促进作用。 采用此种组织培养方法培养出来的蝴蝶兰具有发芽率高以及生长优。
11、良的 优点， 市场潜力巨大， 前景广阔。 具体实施方式 0011 实施例1： 一种蝴蝶兰的组织培养方法， 包括如下步骤： （1） 采种 首先选取授粉后95天的的蝴蝶兰果荚， 所选取的果荚为外部光滑饱满， 颜色由绿转黄； （2） 接种 先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面， 然后冲洗， 再用8%NaClO浸泡10min， 然后在超净 工作台上， 用75%酒精消毒1min， 并用0.05%升汞消毒3min， 用无菌水冲洗2遍， 取出蒴果放在 无菌的培养皿中， 切开蒴果将种子移入有无菌水的培养瓶中， 轻轻摇动使之分散均匀， 接种 的密度为200粒/m2； （3） 萌发 采用种子无菌萌发培养基对种子进行萌。
12、发， 接种后10天， 胚萌发， 20天后转入半母瓶培 养， 分初代、 继代和生根培养3阶段形成带根小苗， 所述无菌萌发培养基的组成以及配比为 胰蛋白胨、 香蕉汁、 活性炭和琼脂的含量分别为1g/l、 50g/l、 0.5g/l、 8g/l， 所述萌发的同时 添加激素， 所述激素的组成为细胞分裂素BA与NAA， 所述BA与NAA的配比为4mg/l和0.04mg/ l， 所述萌发的同时添加有机添加物， 所述有机添加物为蔗糖， 所述蔗糖的浓度为2%； （4） 炼苗与移栽 当小苗出现3片叶、 2条根时即可出瓶移栽 ； （5） 移栽介质的选择 移栽的介质为水苔、 椰糠、 砖块和木炭的混合体为基质， 所述。
13、水苔、 椰糠、 砖块和木炭的 比例为0.5:0.5:0.3:1； （6） 温度管理 在播种期、 育苗期的温度控制在 20 ， 幼苗期的温度控制在 16 。 0012 实施例2： 一种蝴蝶兰的组织培养方法， 包括如下步骤： （1） 采种 说 明 书 2/4 页 4 CN 105941161 A 4 首先选取授粉后100天的的蝴蝶兰果荚， 所选取的果荚为外部光滑饱满， 颜色由绿转 黄； （2） 接种 先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面， 然后冲洗， 再用10%NaClO浸泡15min， 然后在超 净工作台上， 用75%酒精消毒2min， 并用0.10%升汞消毒3min， 用无菌水冲洗3遍， 取出蒴果。
14、放 在无菌的培养皿中， 切开蒴果将种子移入有无菌水的培养瓶中， 轻轻摇动使之分散均匀， 接 种的密度为250粒/m2； （3） 萌发 采用种子无菌萌发培养基对种子进行萌发， 接种后15天， 胚萌发， 20天后转入半母瓶培 养， 分初代、 继代和生根培养3阶段形成带根小苗， 所述无菌萌发培养基的组成以及配比为 胰蛋白胨、 香蕉汁、 活性炭和琼脂的含量分别为2g/l、 100g/l、 1.0g/l、 9g/l， 所述萌发的同 时添加激素， 所述激素的组成为细胞分裂素BA与NAA， 所述BA与NAA的配比为5mg/l和 0.05mg/l， 所述萌发的同时添加有机添加物， 所述有机添加物为蔗糖， 所述。
15、蔗糖的浓度为 3%； （4） 炼苗与移栽 当小苗出现4片叶、 3条根时即可出瓶移栽 ； （5） 移栽介质的选择 移栽的介质为水苔、 椰糠、 砖块和木炭的混合体为基质， 所述水苔、 椰糠、 砖块和木炭的 比例为0.75:0.75:0.4:1.5； （6） 温度管理 在播种期、 育苗期的温度控制在22 ， 幼苗期的温度控制在 18 。 0013 实施例3： 一种蝴蝶兰的组织培养方法， 包括如下步骤： （1） 采种 首先选取授粉后105天的的蝴蝶兰果荚， 所选取的果荚为外部光滑饱满， 颜色由绿转 黄； （2） 接种 先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面， 然后冲洗， 再用12%NaClO浸泡20min，。
16、 然后在超 净工作台上， 用75%酒精消毒3min， 并用0.15%升汞消毒3min， 用无菌水冲洗4遍， 取出蒴果放 在无菌的培养皿中， 切开蒴果将种子移入有无菌水的培养瓶中， 轻轻摇动使之分散均匀， 接 种的密度为300粒/m2； （3） 萌发 采用种子无菌萌发培养基对种子进行萌发， 接种后1020天， 胚萌发， 20天后转入半母瓶 培养， 分初代、 继代和生根培养3阶段形成带根小苗， 所述无菌萌发培养基的组成以及配比 为胰蛋白胨、 香蕉汁、 活性炭和琼脂的含量分别为3g/l、 150g/l、 1.5g/l、 10g/l， 所述萌发的 同时添加激素， 所述激素的组成为细胞分裂素BA与NAA。
17、， 所述BA与NAA的配比为6mg/l和 0.06mg/l， 所述萌发的同时添加有机添加物， 所述有机添加物为蔗糖， 所述蔗糖的浓度为 4%； （4） 炼苗与移栽 说 明 书 3/4 页 5 CN 105941161 A 5 当小苗出现5片叶、 4条根时即可出瓶移栽 ； （5） 移栽介质的选择 移栽的介质为水苔、 椰糠、 砖块和木炭的混合体为基质， 所述水苔、 椰糠、 砖块和木炭的 比例为1:1:0.5:2； （6） 温度管理 在播种期、 育苗期的温度控制在 24 ， 幼苗期的温度控制在 18 。 0014 经过以上方法后， 分别取出样品， 测量结果如下： 检测项目实施例1实施例2实施例3现有。
18、指标 发芽 （d）3125 种子萌发率 （%）97999690 叶片生长快快快较快 根据上述表格数据可以得出， 当实施例2参数时组织培养后的蝴蝶兰比现有技术组织 培养后的蝴蝶兰的种子萌发率高， 且发芽时间短， 叶片生长比现有技术组织培养的快， 此时 更有利于蝴蝶兰的组织培养。 0015 本发明提供了一种蝴蝶兰的组织培养方法， 所述步骤接种的密度， 播种密度可以 产生 “群体效应” ， 从而使种子的发芽增快， 所述无菌萌发培养基的组成包括胰蛋白胨、 香蕉 汁、 活性炭和琼脂以及配比可以提供种子生长所需要的营养， 促进种子的萌发， 所述萌发的 同时添加激素， 可以使成苗数量增加， 所述萌发的同时添加有机添加物， 所述有机添加物为 蔗糖， 所述蔗糖的浓度为2-4%， 可以对蝴蝶兰种子发芽、 原球茎形成以及叶片生长具有促进 作用。 采用此种组织培养方法培养出来的蝴蝶兰具有发芽率高以及生长优良的优点， 市场 潜力巨大， 前景广阔。 0016 以上所述仅为本发明的实施例， 并非因此限制本发明的专利范围， 凡是利用本发 明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换， 或直接或间接运用在其他相关的技术领 域， 均同理包括在本发明的专利保护范围内。 说 明 书 4/4 页 6 CN 105941161 A 6 。