技术领域
本发明涉及能提高乳酸菌和双歧杆菌属细菌的增殖性以及双歧杆菌属细菌的存活性、不影响风味、容易制造、粉末化的甜茶提取精华及其用途。
背景技术
乳酸菌具有改善肠内菌群、改善粪便性状、改善肠道功能、抵御感染、激活免疫、预防癌症等各种效果，因此被用于作为药品的乳酸菌制剂的制造、发酵乳、乳酸菌饮料、乳酪等饮食品中。用于这些用途时，以动物乳汁作为培养基来进行乳酸菌的培养的情况最为普遍。但是，通常乳酸菌种类不同则对营养要求性也不同，因此在仅含动物乳汁的培养基中不怎么增殖，即使是增殖活性相对优异的菌株，用仅含动物乳汁的培养基制造发酵乳、乳酸菌饮料等时，为了得到具有足够酸度的发酵物，也必需进行数天的培养。
然而，长期的乳酸菌培养将成为导致活菌数减少的原因，对用于制造期待各种生理效果、重视活菌数的乳酸菌饮料、发酵乳等的培养而言，并不能称之为优选的方法。此外，对于以培养乳酸菌而得到的发酵物的风味为课题的各种饮食品的制造而言，不能仅从增殖性角度来选择所使用的菌株，因此，也有时选择、使用增殖性虽然差但可提供良好风味的发酵物的乳酸菌。
因此，在乳酸菌的培养中，常见的做法是出于提高培养效率的目的而将各种增殖促进物质预先添加到培养基中。通常，如果例示作为增殖促进物质有效的物质，则可以列举小球藻提取物、铁盐、维生素类；含有氨基酸/肽的蛋白水解物、酵母提取物等。本申请人还报道了如下技术：在乳酸菌的培养中，为了提高增殖性等而添加甜茶提取物等(专利文献1)。
此外，就与乳酸菌同样地用于药品、饮食品的双歧杆菌属细菌而言，通常为厌氧菌，因此存活性差，特别是存在氧时会迅速死亡。
此前，本申请人报道了如下技术：为了提高使用双歧杆菌属细菌的发酵乳等产品中的双歧杆菌属细菌的存活性等，将甜茶提取物等添加到发酵乳等产品中(专利文献2)。
但是，上述添加有甜茶提取物的发酵乳等产品虽然能提高乳酸菌的增殖性等和双歧杆菌属细菌的存活性等，但有源自甜茶的苦味，风味方面存在问题。
因此，此前本申请人报道了：发现了在甜茶提取物中添加氯化镁等无机盐后对其进行电渗析、从而以浓缩液形式得到的甜茶精华，通过用含有该甜茶精华的培养基培养乳酸菌，在促进乳酸菌增殖的同时，可以得到没有源自甜茶的苦味、风味良好的培养物(专利文献3)。此外报道了：对于双歧杆菌属细菌，也通过用含有上述甜茶精华的培养基培养而改善了存活性，同时可以得到没有源自甜茶的苦味、风味良好的培养物(专利文献4)。
但是，就上述甜茶精华而言，制造时需要进行长期(一昼夜)的电渗析，因此耗时且需要大量的电力(能量)。此外，为了进行电渗析而大量添加氯化镁等无机盐，但无机盐有可能引起乳成分的沉淀、从而妨碍培养物的制造。而且，尤其是使用氯化镁作为无机盐的情况下，镁本身具有强烈的苦味，因此如果镁以高浓度残留在甜茶精华中，则强烈的苦味可能会影响培养物的风味。进而，氯化镁具有潮解性，因此即使少量残留在甜茶精华中，当考虑运输性、操作性而进行粉末化的情况下，可能存在开封后该粉末发生潮解、液态化的问题。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开WO2006/126476号
专利文献2：国际公开WO2006/129508号
专利文献3：日本特开2012-75382号公报
专利文献4：日本特开2013-201898号公报
发明内容
发明要解决的问题
因此，本发明的课题在于，提供一种可代替存在上述各种问题的对甜茶提取物进行电渗析而得到的甜茶精华、维持此前的甜茶提取物和甜茶精华的提高乳酸菌的增殖性和双歧杆菌属细菌的存活性等效果并且不影响风味、且容易制造、粉末化的技术。
用于解决问题的方案
本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现，通过对甜茶提取物进行活性炭处理来代替电渗析，从而能解决上述课题，以至完成了本发明。
即，本发明为以下的(1)～(16)的发明。
(1)一种甜茶提取精华，其特征在于，其是对甜茶提取物进行活性炭处理而得到的。
(2)根据(1)所述的甜茶提取精华，其为干燥粉末。
(3)根据(1)或(2)所述的甜茶提取精华，其中，活性炭处理中使用的活性炭为化学法活性炭。
(4)根据(1)～(3)中任一项所述的甜茶提取精华，其中，相对于甜茶提取物的每1白利糖度(Brix)，活性炭处理中的活性炭添加量以干燥重量计为0.035重量％以上。
(5)一种甜茶提取精华的制造方法，其特征在于，对甜茶提取物进行活性炭处理。
(6)根据(5)所述的甜茶提取精华的制造方法，其中，活性炭处理中使用的活性炭为化学法活性炭。
(7)根据(5)或(6)所述的甜茶提取精华的制造方法，其中，相对于甜茶提取物的每1白利糖度，活性炭处理中的活性炭添加量以干燥重量计为0.035重量％以上。
(8)一种发酵食品，其特征在于，其含有用配混有(1)～(4)中任一项所述的甜茶提取精华的培养基培养乳酸菌而得的乳酸菌培养物。
(9)一种发酵食品的制造方法，其特征在于，在含有乳酸菌的发酵食品的制造方法中具有如下工序：培养乳酸菌之前，在培养基中配混(1)～(4)中任一项所述的甜茶提取精华。
(10)一种发酵食品，其特征在于，其含有用配混有(1)～(4)中任一项所述的甜茶提取精华的培养基培养双歧杆菌属细菌而得的双歧杆菌属细菌培养物。
(11)一种发酵食品的制造方法，其特征在于，在含有双歧杆菌属细菌的发酵食品的制造方法中具有如下工序：培养双歧杆菌属细菌之前，在培养基中配混(1)～(4)中任一项所述的甜茶提取精华。
(12)一种乳酸菌和/或双歧杆菌属细菌的增殖促进方法，其特征在于，在乳酸菌和/或双歧杆菌属细菌的培养中，培养乳酸菌和/或双歧杆菌属细菌之前，在培养基中配混(1)～(4)中任一项所述的甜茶提取精华。
(13)一种乳酸菌和/或双歧杆菌属细菌的增殖促进剂，其以(1)～(4)中任一项所述的甜茶提取精华为有效成分。
(14)一种双歧杆菌属细菌的存活性改善方法，其特征在于，在双歧杆菌属细菌的培养中，培养双歧杆菌属细菌之前，在培养基中配混(1)～(4)中任一项所述的甜茶提取精华。
(15)一种双歧杆菌属细菌的存活性改善剂，其以(1)～(4)中任一项所述的甜茶提取精华为有效成分。
(16)一种甜茶提取物的风味改善方法，其特征在于，对甜茶提取物进行活性炭处理。
发明的效果
本发明的甜茶提取精华维持此前的甜茶提取物、甜茶精华的提高乳酸菌的增殖性和双歧杆菌属细菌的存活性的效果，并且也不影响风味。此外，还具有此前未发现的提高双歧杆菌属细菌的增殖性的效果。此外，此前的甜茶精华的制造中需要进行一昼夜的电渗析，本发明的甜茶提取精华由于进行仅需要30分钟～2小时左右的活性炭处理来代替电渗析，因此节省能量。进而，本发明的甜茶提取精华不添加氯化镁等无机盐，因此即使将其用于发酵食品，也不会发鲜奶类沉淀问题。进而，即使将本发明的甜茶提取精华粉末化，也不产生发生潮解、液化之类的问题，可以长期稳定地保存运输性、操作性优异的粉末品。
因此，本发明的甜茶提取精华能适宜用于含有乳酸菌、双歧杆菌属细菌的发酵食品的制造。
具体实施方式
本发明的甜茶提取精华是对甜茶提取物进行活性炭处理而得到的。
上述甜茶提取物只要是用溶剂对蔷薇科悬钩子属的甜茶(学名：Rubus suavissimus S.Lee(Rosaceae))的任意部位进行提取而得到的则没有特别限定，可以列举例如对甜茶的叶、茎、优选叶直接或根据需要实施洗涤、脱皮、干燥、破碎等处理后用溶剂提取而得到的提取物等。
对上述甜茶提取物的制造中使用的溶剂没有特别限定，可以列举例如：水，乙醇等碳数1～5的低级醇、乙酸乙酯、甘油、丙二醇等有机溶剂等，这些可以使用一种或将两种以上组合使用。这些溶剂中，尤其优选水或水-低级醇等水性溶剂。
此外，对使用上述溶剂的甜茶提取物的提取方法没有特别限定，例如优选酸提取法。此外，该酸提取在pH4.0以下、优选pH3.0～4.0的酸性条件下进行。在进行该酸提取时，作为为了调节溶剂的pH而使用的酸成分，只要是酸性物质就可以没有特别限定地使用，作为优选的酸成分，可以列举柠檬酸、苹果酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、乙酸等有机酸。
进而，对使用上述溶剂的甜茶提取物的提取条件没有特别限定，例如，在0℃以上且100℃以下的温度、更优选在10℃以上且40℃以下的温度进行30～60分钟左右的提取。
本发明的甜茶提取精华通过使上述甜茶提取物接触活性炭的活性炭处理而得到。对使甜茶提取物与活性炭接触的方法没有特别限定，可以列举例如：在甜茶提取物中投入活性炭的分批式，使甜茶提取物从活性炭柱中通过的柱方式，使甜茶提取物从装有活性炭的盒中通过的盒方式等，尤其优选分批方式。
对上述中使用的活性炭的种类没有特别限定，可以列举例如：利用氯化锌、磷酸、硫酸、氯化钙、氢氧化钠、氢氧化钾等进行了化学法活化的化学法活性炭，利用水蒸汽、二氧化碳、氧气、燃烧排气、它们的混合气体等得到的气体活化炭等。这些活性炭中，优选利用氯化锌得到的化学法活性炭、或水蒸汽活化炭，特别优选利用氯化锌得到的化学法活性炭。作为利用氯化锌得到的化学法活性炭，可以使用TAIKO粉末碳SA1000-W65(Futamura Chemical Co.,Ltd.)等市售品。
该活性炭处理中使用的活性炭的量根据甜茶提取物的浓度(白利糖度)、活性炭的种类来适当确定即可，例如，如果是分批方式，则相对于甜茶提取物的每1白利糖度添加以干燥重量计为0.035重量％(以下简称为“％”)以上、优选为0.05％～0.5％、进一步优选为0.055％～0.085％的活性炭。例如，甜茶提取物的白利糖度为2时，添加以干燥重量计为0.07％以上、优选为0.1％～1％、进一步优选为0.11％～0.17％的活性炭，甜茶提取物的白利糖度为20时，添加以干燥重量计为0.7％以上、优选为1％～10％、进一步优选为1.1％～1.7％的活性炭。需要说明的是，关于甜茶提取物的白利糖度的测定方法，例如可以通过光学折射率计(RX-7000α(ATAGO Co.,Ltd.)等数显折光仪)来测定。此外，对使甜茶提取物与活性炭接触时的条件也没有特别限定，例如，投入活性炭后在室温下搅拌30分钟～2小时左右即可。
除了上述活性炭处理以外，还可以根据需要进行离心分离、硅藻土过滤、微量过滤、浓缩、杀菌等处理。作为本发明的甜茶提取精华的优选制造方法，可以列举：对甜茶提取物进行活性炭处理后，按照离心分离、硅藻土过滤、微量过滤、浓缩、杀菌的顺序进行处理；或者，对甜茶提取物进行微量过滤后进行活性炭处理，然后按照离心分离、硅藻土过滤、浓缩、杀菌的顺序进行处理。作为离心分离的条件，只要是能除去活性炭的条件则没有特别限定，可以列举例如10000g、2分钟的条件。作为硅藻土过滤的条件，没有特别限定，可以列举添加0.1％的硅藻土后用标准滤纸No.131进行过滤的条件。作为微量过滤的条件，没有特别限定，可以列举例如用0.2μm的微过滤器进行过滤，作为浓缩的条件，可以列举用蒸发器等将白利糖度浓缩到期望的值。此外，对杀菌的条件也没有特别限定，可以列举达到90℃后冷却到50℃以下的条件。
按照上述方式得到的甜茶提取精华从容易操作的角度出发优选制成干燥粉末。需要说明的是，该干燥粉末不含氯化镁，因此无潮解性，能够稳定地保存。此外，干燥粉末无潮解性这一点可以通过实施例中记载的方法来确认。
对得到上述干燥粉末的方法没有特别限定，可以列举例如喷雾干燥、冷冻干燥等，优选通过喷雾干燥来得到干燥粉末的方法。对喷雾干燥的干燥条件没有特别限定，可以列举例如入口温度为160℃、出口温度为80～100℃、流速为10mL/分钟的条件。此外，通过喷雾干燥来进行干燥时，可以根据需要添加赋形剂。作为赋形剂，可以列举：糊精、环糊精、淀粉、麦芽糖等，特别优选糊精。对赋形剂的添加量没有特别限定，例如，在使用糊精作为赋形剂时，相对于甜茶提取精华的固体成分1，添加0.5～5重量比、优选1～2重量比、进一步优选1.5重量比的糊精。
将本发明的甜茶提取精华配混在培养基中并培养乳酸菌，由此可得到乳酸菌培养物，能够得到含有其的发酵食品。作为配混本发明的甜茶提取精华并培养乳酸菌的培养基，可以列举：含有牛奶、山羊奶、马奶、羊奶等鲜奶或脱脂奶粉、全脂奶粉、鲜奶油等乳产品等的动物乳汁培养基，豆浆等源自植物的液体乳汁，各种合成培养基。还可以在该培养基中添加在通常的乳酸菌培养基中使用的成分。作为这样的成分，可以列举例如：葡萄糖等糖类，维生素A、维生素B类、维生素C、维生素E等维生素类，各种肽，氨基酸类，钙、镁等盐类。
此外，可以在上述培养基中添加油酸类。作为这样的油酸类，可以列举油酸，油酸钠、油酸钾等油酸的盐，甘油油酸酯、聚甘油油酸酯、蔗糖油酸酯等油酸酯的衍生物等。这些油酸类可以按照以换算为油酸时的浓度计大致在培养基中为5～50ppm、优选5～25ppm的方式来添加。
作为将本发明的甜茶提取精华配混在培养基中而进行培养的乳酸菌，只要为通常用于食品制造的乳酸菌则没有特别限定，可以列举例如：干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、乳脂乳杆菌(Lactobacillus cremoris)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、日本乳杆菌(Lactobacillus yoghurti)、德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)、德氏乳杆菌德氏亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.delbrueckii)、约翰逊氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)等乳杆菌属细菌，嗜热链球菌(Streptococcus thermophiles)等链球菌属细菌，乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)、植物乳球菌(Lactococcus plantarum)、棉子糖乳球菌(Lactococcus raffinolactis)等乳球菌属细菌，粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)等肠球菌属细菌。这些乳酸菌中，优选乳杆菌属细菌、链球菌属细菌、乳球菌属细菌，这些中，优选干酪乳杆菌、加氏乳杆菌、乳酸乳球菌、嗜热链球菌，尤其优选干酪乳杆菌YIT9029(FERM BP-1366、保藏日：昭和56年1月12日)、加氏乳杆菌YIT0192(DSM20243)、乳酸乳球菌YIT2027(FERM BP-6224、保藏日：平成9年2月10日)、嗜热链球菌YIT2021(FERM BP-7537、保藏日：平成8年11月1日)。需要说明的是，可以使用上述各种乳酸菌中的一种或两种以上，此外，可以与后述各种双歧杆菌属细菌中的一种或两种以上组合使用。
对进行乳酸菌培养时的、本发明的甜茶提取精华向培养基中的配混量没有特别限定，例如，以甜茶提取精华的干燥粉末换算(以不含赋形剂、仅含甜茶提取精华的干燥粉末换算)为0.0004％～0.12％(以白利糖度为11.5的甜茶提取精华换算为0.0035％～1％)、优选0.0012％～0.012％(以白利糖度为11.5的甜茶提取精华换算为0.01％～0.1％)。
此外，对用于得到乳酸菌培养物的培养条件没有特别限定，例如，可以列举下述条件：将乳酸菌接种到培养基中以使培养基中的菌数为1.0×103～1.0×109cfu/ml左右，将其在30～40℃左右的温度进行1～7天左右的培养。作为此时的培养条件，从静置、搅拌、振荡、通气等中适宜选择适于所使用的乳酸菌的培养的方法来进行即可。
含有通过将本发明的甜茶提取精华配混在培养基中并培养乳酸菌而得到的乳酸菌培养物的发酵食品，除了在培养乳酸菌之前向培养基中配混甜茶提取精华以外，可以按照现有公知的发酵食品的制造方法来制造。在此，含有乳酸菌培养物的发酵食品包括例如发酵豆浆或乳等部令所规定的发酵乳、乳产品乳酸菌饮料、乳酸菌饮料等。此外，上述发酵食品中包括各种利用乳酸菌的饮食品，例如，原味型(plain type)、调味型(flavored type)、水果型(fruit type)、甜味型、液体型(soft type)、可饮型(drinkable type)、凝固型(hard type)、冷冻型(frozen type)等发酵乳，乳酸菌饮料、山羊乳酪(kefir)等。
此外，含有乳酸菌培养物的发酵食品可以如下制得：根据需要，除了配混糖浆等甜味料外还配混其以外的各种食品材料，例如各种糖质、增稠剂、乳化剂、各种维生素剂等任意成分。作为这些食品材料的具体物质，可以列举：蔗糖、葡萄糖、果糖、帕拉金糖、海藻糖、乳糖、木糖、麦芽糖等糖质；山梨糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、乳糖醇、帕拉金糖醇、还原饴糖、还原麦芽饴糖等糖醇；阿斯巴甜、奇异果甜蛋白、三氯蔗糖、安赛密、甜叶菊等高甜度甜味料；琼脂、明胶、角叉菜胶、瓜尔胶、黄原胶、果胶、刺槐豆胶、结冷胶、羧甲基纤维素、大豆多糖类；藻酸丙二醇酯等各种增稠(稳定)剂；蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、失水山梨醇脂肪酸酯、卵磷脂等乳化剂；奶油、黄油、酸味奶油等乳脂；柠檬酸、乳酸、醋酸、苹果酸、酒石酸、葡糖酸等酸味剂；维生素A、维生素B类、维生素C、维生素E类等各种维生素类；钙、镁、锌、铁、锰等矿物质成分；酸奶系；浆果(berry)系；橘(orange)系；榅桲(quince)系；紫苏(perilla)系；柑橘(citrus)系；苹果系；薄荷系；葡萄系；杏(apricot)系；梨、乳蛋糕乳脂、桃、甜瓜、香蕉、热带系；香草系；红茶、咖啡系等风味类。
此外，将本发明的甜茶提取精华配混在培养基中并培养双歧杆菌属细菌，由此可得到双歧杆菌属细菌培养物，能够得到含有其的发酵食品。作为在培养基中配混本发明的甜茶提取精华并培养双歧杆菌属细菌的培养基，与前述第7页倒数第二段中记载的培养乳酸菌的培养基同样地可以列举：含有牛奶、山羊奶、马奶、羊奶等鲜奶或脱脂奶粉、全脂奶粉、鲜奶油等乳产品等的动物乳汁培养基，豆浆等源自植物的液体乳汁，各种合成培养基。可以在该培养基中添加通常用于双歧杆菌属细菌的培养基的成分。作为这样的成分，可以列举例如：葡萄糖等糖类，维生素A、维生素B类、维生素C、维生素E等维生素类，各种肽，氨基酸类，钙、镁等盐类。
此外，与培养乳酸菌的培养基同样地，可以在培养双歧杆菌属细菌的培养基中添加前述第7页倒数第1段～第8页第1段中记载的油酸类，其添加量也与前述第7页倒数第1段～第8页第1段中的记载同样地可以按照换算成油酸时的浓度计大致在培养基中为5～50ppm、优选5～25ppm的方式来添加。
对作为将本发明的甜茶提取精华配混在培养基中而进行培养的双歧杆菌属细菌，没有特别限定，可以列举例如短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum)、假链状双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、角双歧杆菌(Bifidobacterium angulatum)、高卢双歧杆菌(Bifidobacterium gallicum)、乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)等。这些双歧杆菌属细菌中，优选短双歧杆菌、两歧双歧杆菌和长双歧杆菌，特别优选短双歧杆菌YIT12272(FERM BP-11320、保藏日：平成22年2月16日)、两歧双歧杆菌YIT10347(FERM BP-10613、保藏日：平成17年6月23日)。需要说明的是，可以使用上述各种双歧杆菌属细菌中的一种或两种以上，此外，可以与前述各种乳酸菌中的一种或两种以上组合使用。
上述记载了保藏日的乳酸菌、双歧杆菌属细菌均保藏于独立行政法人制品评价技术基盘机构专利生物保藏中心(〒292-0818日本千叶县木更津市上总镰足2丁目5番地8 120号室)。
对进行双歧杆菌属细菌培养时的、本发明的甜茶提取精华向培养基中的配混量没有特别限定，例如，在想要提高双歧杆菌属细菌的增殖性时，以白利糖度为11.5的甜茶提取精华换算为0.001％～1％、优选0.35～0.55％。此外，在想要将双歧杆菌属细菌的存活性维持在较高状态时，以甜茶提取精华的干燥粉末换算(以不含赋形剂、而进行甜茶提取精华的干燥粉末换算)为0.0004％～0.12％(以白利糖度为11.5的甜茶提取精华换算为0.0035％～1％)、优选0.0012％～0.012％(以白利糖度为11.5的甜茶提取精华换算为0.01％～0.1％)。
此外，对用于得到双歧杆菌属细菌培养物的培养条件没有特别限定，例如，可以列举下述条件：将双歧杆菌属细菌接种到培养基中，以使培养基中的菌数为1.0×103～1.0×109cfu/ml左右，将其在30～40℃左右的温度培养12小时～7天左右或培养至pH达到4～5.5左右为止的条件。作为此时的培养条件，从静置、搅拌、振荡等中适宜选择适于所使用的双歧杆菌属细菌的培养的方法来进行即可，优选在厌氧条件下进行。
含有通过将本发明的甜茶提取精华配混在培养基中并培养双歧杆菌属细菌而得到的双歧杆菌属细菌培养物的发酵食品，除了在培养双歧杆菌属细菌之前向培养基中配混甜茶提取精华以外，可以按照现有公知的发酵食品的制造方法来制造。含有双歧杆菌属细菌培养物的发酵食品与第9页第3段中记载的含有乳酸菌培养物的发酵食品同样地，包括例如发酵豆浆或乳等部令所规定的发酵乳、乳产品乳酸菌饮料、乳酸菌饮料等，包括各种利用双歧杆菌属细菌的饮食品。此外，上述发酵食品与含有乳酸菌培养物的发酵食品同样地可通过配混第9页最后1段～第10页第1段中记载的甜味料、其以外的各种食品材料而得到。
由此得到的含有配混有本发明的甜茶提取精华的乳酸菌培养物的发酵食品可改善乳酸菌的增殖性，此外，含有配混有本发明的甜茶提取精华的双歧杆菌属细菌培养物的发酵食品可改善双歧杆菌属细菌的增殖性和存活性。并且，这些发酵食品也没有源自甜茶的苦味，风味良好。因此，这些发酵食品的有用性高，有助于增进健康。需要说明的是，存活率可以通过实施例中记载的方法来求出。
实施例
以下列举实施例来详细说明本发明，但本发明不受这些实施例任何限定。
参考例1
甜茶提取物的制造1：
对甜茶(学名：Rubus suavissimus S.Lee(Rosaceae))的叶实施粉碎处理后，添加为甜茶叶的15倍量的水和相当于甜茶叶的5％的量的柠檬酸而将pH调节为3.8，在25℃下搅拌60分钟，进行提取，由此得到白利糖度为2.0的甜茶提取物。进而，将所得到的白利糖度为2.0的甜茶提取物用蒸发器浓缩约10.3倍，得到白利糖度为20.6的甜茶提取物。
实施例1
甜茶提取精华干燥粉末的制造：
(1)活性炭的选择
甜茶提取物中残留的甜茶苷(rubusoside)和多酚、以及甜茶提取物的高白利糖度值会影响发酵食品的风味，因此对使用各活性炭时的这些物质的量进行了测定。
在参考例1所制造的白利糖度为20.6的甜茶提取物中分别按照表1中记载的活性炭的种类和添加量进行添加，搅拌30分钟后，用RX-7000α(ATAGOCo.,Ltd.)数显折光仪测定溶液的白利糖度。此外，通过HPLC法测定溶液中所含的甜茶苷。HPLC法按照下述条件来进行。
装置：waters alliance 2690
检测器：PDA检测器W2996
测定波长：210nm
柱：YMC-Pack ODS-A 150x 4.6mmI.D.S-5μm
柱温度：25℃
流动相：A线(0.17％磷酸水溶液)、B线(0.17％磷酸/乙腈)
送液条件：流速1.0ml/分钟梯度洗脱
梯度条件：
(时间) (A线)(B线)
0→5分钟(组成固定) 75％ 25％
5→30分钟(线性梯度) 30％ 70％
需要说明的是，溶液中所含的多酚量通过酒石酸铁法来测定。此外，多酚量通过换算为没食子酸乙酯而算出。进而，将使用各活性炭时的白利糖度、甜茶苷和多酚含量结果示于表1。
[表1]
*1：TAIKO粉末炭SA1000-W65(Futamura Chemical Co.,Ltd.)。本品含有65％的水，但表1的添加量为不含水的干重换算量。.
*2：TAIKO粉末炭K(Dry)(Futamura Chemical Co.,Ltd.)
*3：TAIKO粉末炭M(W50)(Futamura Chemical Co.,Ltd.)。本品含有50％的水，但表1的添加量为不含水的干重换算量。
其结果是，不添加活性炭时，白利糖度最高，此外甜茶苷和多酚的残留量也最多。通过使用化学法活性炭和水蒸汽活化炭，白利糖度、甜茶苷和多酚的量均下降，尤其是化学法活性炭的情况下，虽然添加量少于水蒸汽活化炭，但与添加水蒸汽活化炭时相比，白利糖度、甜茶苷和多酚含量均进一步下降。
活性炭量多时，与量少时相比在活性炭除去工序中更花费时间，因此优选以较少添加量来降低这些物质的量，由此可知，关于活性炭，利用氯化锌得到的化学法活性炭比水蒸汽活化炭更适合。
(2)甜茶提取精华的制造
在参考例1所制造的白利糖度为2.0的甜茶提取物中添加化学法活性炭(TAIKO粉末碳SA1000-W65(Futamura Chemical Co.,Ltd.))0.14％(干重换算量)，搅拌30分钟。搅拌后以10,000×g、2分钟的条件进行离心分离，对上清液进行硅藻土过滤(添加硅藻土(东京今野株式会社制)0.1％后，用No.131的滤纸进行过滤)。将所得到的硅藻土过滤后的溶液用0.2μm的微过滤器(东洋滤纸株式会社制)进行微量过滤，用蒸发器将滤液浓缩至白利糖度为11.5。浓缩后，升温到90℃进行杀菌，冷却到50℃以下，得到甜茶提取精华。
(3)甜茶提取精华的粉末化
相对于(2)中所得到的甜茶提取精华的固体成分40，以60的重量比添加糊精(Cargill Japan制)，与水混合并使其溶解后，通过喷雾干燥器(Nihon Buchi公司制)进行粉末化。以入口160℃、出口80～100℃、流速10mL/分钟的粉末化条件来进行。
所得到的甜茶提取精华的干燥粉末即使在室温下放置2小时的情况下，通过目视也可确认未发生潮解。
实施例2
含有乳酸菌的发酵食品的制造：
将10％脱脂奶粉溶液作为基本培养基，将实施例1所制造的甜茶提取精华干燥粉末按照表2中记载的量添加到基本培养基中。在该培养基中接种干酪乳杆菌YIT9029的起子0.1％(初始发酵菌数：1.5×106cfu/ml)，在37℃下进行24小时的培养，得到乳酸菌培养物，然后冷却到10℃以下，得到发酵乳。测定该发酵乳的pH、酸度、活菌数。pH使用pH计(HORIBA F-52)来测定。关于酸度，取发酵乳9g，测定用0.1N氢氧化钠中和滴定到pH8.5时的滴定值(单位：ml)。此外，活菌数使用BCP培养基(荣研化学株式会社制)来测定。进而，由3名专门小组成员按照以下的评价基准评价了所得到的发酵乳的风味。将其结果示于表2。
[表2]
*：表示不含糊精、仅含甜茶提取精华干燥粉末的干燥粉末换算量。括号内的数字表示：相对于甜茶提取精华的固体成分40，添加60重量比的糊精后进行粉末化的干燥粉末的添加量。
＜风味评价基准＞
评价内容
5：完全感觉不到苦味、涩味
4：几乎感觉不到苦味、涩味
3：稍稍感觉到苦味、涩味
2：感觉到苦味、涩味
1：强烈感觉到苦味、涩味
含有用添加有甜茶提取精华干燥粉末(不含糊精、仅含甜茶提取精华干燥粉末的干燥粉末)0.0004％以上(以白利糖度为11.5的甜茶提取精华换算为0.0035％以上)的培养基培养得到的乳酸菌培养物的发酵乳，与未添加甜茶提取精华干燥粉末的发酵乳相比，显示出干酪乳杆菌的培养得到促进、活菌数多(5.0×108cfu/ml以上)的结果。干酪乳杆菌的培养得到促进这一点也通过pH降低程度和酸度的上升得到确认。
特别是添加了甜茶提取精华干燥粉末(不含糊精、仅含甜茶提取精华干燥粉末的干燥粉末)0.0012％～0.012％(以白利糖度为11.5的甜茶提取精华换算为0.01％～0.1％)的情况，干酪乳杆菌的培养促进效果显著、且风味也良好。
实施例3
含有双歧杆菌属细菌的发酵食品的制造(1)：
将20％脱脂奶粉溶液作为基本培养基，将实施例1所制造的甜茶提取精华干燥粉末按照表3中记载的量添加到基本培养基中。在该培养基中接种短双歧杆菌YIT12272的起子1％(初始发酵菌数：1.0×107cfu/ml)，在37℃下进行24小时的培养，得到发酵乳。将该发酵乳填充到玻璃容器中并用丁基橡胶塞密封，然后在10℃下保存21天。使用TOS培养基(Yakult Pharmaceutical Industry Co.,Ltd.制)测定保存前后的活菌数。此外，与实施例2同样地评价保存后的风味。进而，由保存前后的活菌数求出存活率((保存后的活菌数/制造时的活菌数)×100(％))。将这些的结果示于表3。
[表3]
*：表示不含糊精、仅含甜茶提取精华干燥粉末的干燥粉末换算量。括号内的数字表示：相对于甜茶提取精华的固体成分40，添加60重量比的糊精后进行粉末化的干燥粉末的添加量。
含有用添加甜茶提取精华干燥粉末(不含糊精、仅含甜茶提取精华干燥粉末的干燥粉末)0.0004％以上(以白利糖度为11.5的甜茶提取精华换算为0.0035％以上)的培养基培养短双歧杆菌而得到的双歧杆菌属细菌培养物的发酵乳，与不添加甜茶提取精华干燥粉末的发酵乳相比，短双歧杆菌的存活率得到改善。
尤其是添加了甜茶提取精华干燥粉末(不含糊精、仅含甜茶提取精华干燥粉末的干燥粉末)0.0012％～0.012％(以白利糖度为11.5的甜茶提取精华换算为0.01％～0.1％)的情况，短双歧杆菌的存活性改善效果显著、且风味也良好。
实施例4
含有双歧杆菌属细菌的发酵食品的制造(2)
将18％奶粉溶液(或非脂乳固体成分(SNF)为14％的奶粉溶液)作为基本培养基，准备：在基本培养基中添加有实施例1(2)所制造的白利糖度为11.5的甜茶提取精华0.44％的培养基、和不进行添加的培养基。在该培养基中添加乳清肽(LE80GF-US)，并在此基础上接种两歧双歧杆菌YIT10347的起子3％(初始发酵菌数：2.8×107cfu/ml)，在37℃下培养至pH为4.9，然后冷却到10℃以下，得到发酵乳。测定该发酵乳的活菌数。将结果示于表4。
[表4]
用添加有0.44％的白利糖度为11.5的甜茶提取精华的培养基培养两歧双歧杆菌而得到的发酵乳，与不添加甜茶提取精华的发酵乳相比，虽然pH和所添加的乳清肽的条件相同，但显示出培养时间短、发酵乳的活菌数高的倾向。
虽然此前已经知晓甜茶提取物使两歧双歧杆菌的培养时间稍稍缩短的效果(缩短到92％左右的效果)(专利文献2)，但通过添加0.44％的甜茶提取精华，使两歧双歧杆菌YIT10347的培养时间缩短到73％左右，确认到增殖促进效果。由此，虽然原因不明，但可知：通过对甜茶提取物进行活性炭处理，两歧双歧杆菌的增殖促进效果变得显著。
实施例5
甜茶提取精华干燥粉末A和B的制造：
(1)甜茶提取精华A的制造
用0.2μm的微过滤器(东洋滤纸株式会社制)对参考例1所制造的白利糖度为2.0的甜茶提取物进行微量过滤，在所得到的溶液中添加化学法活性炭(TAIKO粉末碳SA1000-W65(Futamura Chemical Co.,Ltd.))0.14％(干重换算量)，搅拌30分钟。搅拌后以10,000×g、2分钟的条件进行离心分离，对上清液进行硅藻土过滤(添加硅藻土(东京今野株式会社制)0.1％后，用No.131的滤纸进行过滤)。将所得到的溶液用蒸发器浓缩到白利糖度为11.5。浓缩后，加热到90℃进行杀菌，冷却到50℃以下，得到甜茶提取精华A。
对上述得到的甜茶提取精华A的固体成分40，以60的重量比添加糊精(Cargill Japan制)，与水混合并使其溶解后，通过喷雾干燥器(Nihon Buchi公司制)进行粉末化。关于粉末化的条件，通过与实施例1的(3)同样的条件来进行。将得到的粉末作为甜茶提取精华干燥粉末A。
需要说明的是，甜茶提取精华干燥粉末A即使在室温下放置2小时的情况下，通过目视也可确认未发生潮解。
(2)甜茶提取精华干燥粉末B的制造
通过与实施例1的(2)和(3)同样的方法来制造甜茶提取精华干燥粉末B。
参考例2
甜茶提取物干燥粉末和甜茶提取物的电渗析物干燥粉末的制造：
(1)甜茶提取物干燥粉末的制造
将参考例1所制造的白利糖度为2.0的甜茶提取物用蒸发器浓缩到白利糖度为11.5，升温到90℃进行杀菌，冷却到50℃以下。相对于所得到的白利糖度为11.5的甜茶提取物的固体成分40，以60的重量比添加糊精(Cargill Japan制)，与水混合并使其溶解后，通过喷雾干燥器(Nihon Buchi公司制)进行粉末化。关于粉末化的条件，通过与实施例1的(3)同样的条件来进行。将所得到的粉末作为甜茶提取物干燥粉末。
甜茶提取物干燥粉末即使在室温下放置2小时的情况下，通过目视也可确认未发生潮解。
(2)甜茶提取物的电渗析干燥粉末的制造
用0.2μm的微过滤器(东洋滤纸株式会社制)对参考例1所制造的白利糖度为2.0的甜茶提取物进行微量过滤，在所得到的溶液中按照氯化镁为1％的量添加氯化镁六水合物。然后，将其放入电渗析装置(电渗析膜：AC220-50、产品名：Micro AcilyzerS-3、ASTOM Corporation制)的脱盐室中，在浓缩室中加入相当于提取液的17％的水进行电渗析处理，直至脱盐室的电导率达到平衡(2毫西门子每厘米(mS/cm))为止，回收浓缩液。进而，用蒸发器将该浓缩液浓缩到白利糖度为11.5。将白利糖度为11.5的浓缩液升温到90℃进行杀菌，冷却到50℃以下，得到电渗析物。
相对于上述得到的白利糖度为11.5的电渗析物的固体成分40份，以60份的重量比添加糊精(Cargill Japan制)，与水混合并使其溶解后，通过喷雾干燥器(Nihon Buchi公司制)进行粉末化。关于粉末化的条件，通过与实施例1的(3)同样的条件来进行。将得到的粉末作为电渗析物干燥粉末。
电渗析物干燥粉末即使在室温下放置2小时的情况下，粉末发生部分液化，通过目视确认到发生潮解。
实施例6
含有乳酸菌的发酵食品的制造(1)：
将含有4％的葡萄糖的15％脱脂奶粉溶液作为基本培养基，相对于基本培养基，以不含糊精的干燥粉末换算为0.012％(以白利糖度为11.5的粉末化前的浓缩液换算为0.1％)的量的方式添加实施例5所制造的甜茶提取精华干燥粉末A和B、以及参考例2所制造的甜茶提取物干燥粉末和电渗析物干燥粉末。在该培养基中接种干酪乳杆菌YIT9029的起子0.5％(初始发酵菌数：7.5×106cfu/ml)，在37℃下进行24小时的培养、得到乳酸菌培养物，然后冷却到10℃以下，得到发酵乳。测定该发酵乳的pH、酸度、活菌数和风味。各项目标测定方法与实施例2同样地进行。将这些的结果示于表5。
[表5]
在无添加物时，发酵乳的活菌数少(不足5.0×108cfu/ml)，由pH和酸度也未确认到促进增殖。
另一方面，甜茶提取物干燥粉末、电渗析物干燥粉末、甜茶提取精华干燥粉末A和B的情况下，活菌数多，从pH和酸度方面也显著表现出增殖促进效果。
此外，使用甜茶提取物干燥粉末时，发酵乳的风味差，但电渗析物干燥粉末、甜茶提取精华干燥粉末A和B的情况下，未发现对风味的影响。
因此可知，甜茶提取精华干燥粉末A和B具有与电渗析物干燥粉末同等的干酪乳杆菌的增殖促进效果，且不影响发酵乳的风味。
实施例7
含有乳酸菌的发酵食品的制造(2)：
代替干酪乳杆菌YIT9029，接种加氏乳杆菌YIT0192 0.5％(初始发酵菌数：4.5×106cfu/ml)，除此以外，通过与实施例6同样的条件来进行试验。将结果示于表6。
[表6]
与实施例6的结果同样地，无添加物的情况下，发酵乳的活菌数少(不足5.0×108cfu/ml)，由pH和酸度也未确认到促进增殖，但甜茶提取物干燥粉末、电渗析物干燥粉末、甜茶提取精华干燥粉末A和B的情况下，活菌数多，从pH和酸度方面也显著表现出增殖促进效果。
此外，使用甜茶提取物干燥粉末的情况下，发酵乳的风味差，但电渗析物干燥粉末、甜茶提取精华干燥粉末A和B的情况下，未发现对风味的影响。
因此可知，甜茶提取精华干燥粉末A和B与电渗析物干燥粉末同样地，不仅具有干酪乳杆菌的增殖促进效果，还具有加氏乳杆菌的增殖促进效果，且不影响发酵乳的风味。
实施例8
含有双歧杆菌属细菌的发酵食品的制造(1)：
将15％脱脂奶粉溶液作为基本培养基，相对于基本培养基，以不含糊精的干燥粉末换算为0.012％(以白利糖度为11.5的粉末化前的浓缩液换算为0.1％)的方式添加实施例5所制造的甜茶提取精华干燥粉末A和B、以及参考例2所制造的甜茶提取物干燥粉末和电渗析物干燥粉末。在该培养基中接种短双歧杆菌YIT12272的起子1％(初始发酵菌数：1.0×107cfu/ml)、乳酸乳球菌YIT2027和嗜热链球菌YIT2021的起子各0.1％(初始发酵菌数：分别为1.0×106cfu/ml、1.2×106cfu/ml)，在35℃下培养至pH达到4.4。在将该培养物以15MPa均质化后的产物40重量份中加入在100℃下杀菌5分钟的10％蔗糖溶液60重量份，从而制造发酵乳。将所制造的发酵乳填充到玻璃容器中，用丁基橡胶塞密封后，在10℃、厌氧条件下保存21天，与实施例3同样地测定保存前后的活菌数。此外，与实施例2同样地评价保存后的风味。进而，与实施例3同样地由保存前后的活菌数求出存活率。将这些的结果示于表7。
[表7]
*活菌数和存活率表示短双歧杆菌YIT12272的值。
无添加物时，短双歧杆菌的存活率低。
另一方面，甜茶提取物干燥粉末、电渗析物干燥粉末、甜茶提取精华干燥粉末A和B的情况下，短双歧杆菌的存活率高，显著表现出存活性改善效果。
此外，使用甜茶提取物干燥粉末时，发酵乳的风味差，电渗析物干燥粉末、甜茶提取精华干燥粉末A和B的情况下则未发现对风味的影响。
因此可知，甜茶提取精华干燥粉末A和B具有与电渗析物干燥粉末同等的短双歧杆菌的存活性改善效果，且不影响发酵乳的风味。
实施例9
含有双歧杆菌属细菌的发酵食品的制造(2)：
代替短双歧杆菌YIT12272的起子1％、乳酸乳球菌YIT2027和嗜热链球菌YIT2021的起子0.1％，接种两歧双歧杆菌YIT10347的起子2％(初始发酵菌数：2.2×107cfu/ml)和嗜热链球菌YIT2021的起子0.01％(初始发酵菌数：1.2×105cfu/ml)，除此以外，在与实施例8同样的条件下进行试验。将结果示于表8。
[表8]
*活菌数和存活率表示两歧双歧杆菌YIT10347的值。
与实施例8的结果同样地，在无添加物的情况下，两歧双歧杆菌的存活率低，甜茶提取物干燥粉末、电渗析物干燥粉末、甜茶提取精华干燥粉末A和B的情况下，两歧双歧杆菌的存活率高，显著表现出存活性改善效果。
此外，在使用甜茶提取物干燥粉末的情况下，发酵乳的风味差，而电渗析物干燥粉末、甜茶提取精华干燥粉末A和B则未发现对风味的影响。
因此可知，甜茶提取精华干燥粉末A和B不仅具有与电渗析物干燥粉末同等的短双歧杆菌的存活性改善效果，还具有两歧双歧杆菌的存活性改善效果，且不影响发酵乳的风味。
产业上的可利用性
本发明的甜茶提取精华维持甜茶提取物提高乳酸菌的增殖性和双歧杆菌属细菌的存活性等的效果并且不影响风味，具有此前未发现的提高双歧杆菌属细菌的增殖性的效果，容易制造、粉末化。
因此，本发明的甜茶提取精华可以优选用于含有乳酸菌、双歧杆菌属细菌的发酵食品的制造。
PCT/RO/134表