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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710086939.8 (22)申请日 2017.02.17 (71)申请人 西北农林科技大学 地址 712100 陕西省咸阳市杨凌示范区邰 城路3号 (72)发明人 周占琴 张爱平 宋宇轩 张磊 张希云 高义祖 (74)专利代理机构 北京方圆嘉禾知识产权代理 有限公司 11385 代理人 董芙蓉 (51)Int.Cl. A01K 67/02(2006.01) G01N 1/28(2006.01) G01N 1/30(2006.01) G01N 1/36(2006.01) 。
2、G01N 21/84(2006.01) (54)发明名称 一种提高母本绵羊产奶量的方法 (57)摘要 本发明公开了一种提高母本绵羊产奶量的 方法， 该方法包括以下步骤： 试验动物的选择、 杂 交、 体重测定、 产奶量测定、 乳腺组织受体基因的 mRNA表达量测定。 本发明的试验方法通过东弗里 森公羊与湖羊母羊杂交生产高产奶量东湖F1， 用 作三元杂交母本羊， 从根本上解决母本羊泌乳量 不足、 羔羊生长缓慢以及肉羊养殖效益不高等问 题。 结果证明： 杂种一代羊母羊是理想的母本羊， 与杜泊羊杂交后， 可哺育3只羔羊， 养殖效益提高 30以上。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 10681。
3、8639 A 2017.06.13 CN 106818639 A 1.一种提高母本绵羊产奶量的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 步骤1、 试验动物的选择 (1)杂交父本羊为东弗里森奶绵羊； (2)杂交母本湖羊为成年湖羊； 步骤2、 杂交 东湖一代， 即F1， 含1/2东弗里森羊血液， 是纯种东弗里森公羊与纯种湖羊杂交后代； 含 1/4东弗里森羊血液湖羊为东湖一代公羊与纯种湖羊母羊交配后代； 所有母羊均利用人工 授精技术配种； 步骤3、 体重测定 对相同饲养管理条件下同期出生的湖羊、 东湖一代羊、 含1/4东弗里森羊血液湖羊的初 生重、 2月龄重、 4月龄重进行测定、 记录； 步骤4、 产奶。
4、量测定 分别选择相同饲养管理条件下同期产羔母羊3只， 用羔羊体重称重法对产奶量进行测 定、 记录； 步骤5、 乳腺组织受体基因的mRNA表达量测定 5.1采样 用手术法采集哺乳期东湖一代羊试验组和湖羊对照组乳腺组织样， 置于多聚甲醛中带 回实验室， 固定48h后， 修样至1cm3； 5.2制样 5.2.1脱水将固定后的组织样依次置于70酒精30min、 80酒精1h、 90酒精1h、 100酒精1h， 1h后换一次酒精； 5 .2.2透明用等比列配制的无水乙醇、 二甲苯混合溶液浸泡2h， 再用二甲苯I浸泡 10min,换二甲苯， 再泡5min； 5.2.3浸蜡在等比列配制的二甲苯、 石蜡液的混。
5、合液中浸2h， 石蜡I液中浸2h、 石蜡II液 中浸2h， 然后置于60烤箱中烘干； 5.2.4包埋将预热包埋剂倒入简易纸盒， 然后将浸蜡后的组织样放在室温下静置； 5.2.5切片将包埋好的蜡块置于石蜡切片机上， 切成5um薄片， 再进行展片、 粘片、 标记 后， 置于切片架上， 在37条件下烘干； 5.3染色 (1)HE染色脱蜡依次将石蜡切片置于二甲苯I液10min、 二甲苯II液5min、 100乙醇I液 3min、 100乙醇II液3min、 90乙醇3min、 80乙醇3min、 70乙醇3min； (2)染色苏木精染色2min， 水洗除去染液， 加5冰醋酸分化30s， 用蒸馏水洗5m。
6、in， 再用 伊红染色1min,然后在显微镜下观察； (3)脱色将玻片依次置于70酒精、 80酒精、 90酒精、 100酒精I液、 100酒精II 液中脱色各1min， 然后分别在二甲苯I液和二甲苯II液脱色5min； (4)封片取出切片， 擦干二甲苯， 滴上树胶， 盖上盖玻片， 在室温条件下晾干； (5)照相： 用显微照相机照相后， 进行图像分析； 5.4数据统计与分析 通过HE染色对东湖一代羊和湖羊乳腺组织结构进行比较。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106818639 A 2 一种提高母本绵羊产奶量的方法 技术领域 0001 本发明属于畜牧技术领域， 具体地说， 涉及一种提高。
7、母本绵羊产奶量的方法。 背景技术 0002 绵羊是约11000年前在西南亚地区被最早驯化的动物， 主要用于肉食来源。 现在世 界各地均有饲养。 中国是世界上绵羊饲养量最多的国家， 其中以内蒙和西北地区饲养量最 大， 全国饲养量达到1.6亿只。 绵羊性情温顺， 易管理。 绵羊肉质鲜美， 各民族都喜食。 大多数 绵羊品种为常年发情， 有些地方品种则为季节发情， 多在秋季发情、 配种， 春季产羔。 母羊的 怀孕期为145152天， 每胎产羔15只， 羔羊的成活率取决于母羊的产奶量， 但中国大多数 绵羊品种产奶量不高， 通常只能养活12只羔羊。 母羊本身的初生重、 断奶重、 乳房容积和 形状、 产羔月。
8、份、 产羔数、 泌乳期间的营养水平、 产羔前的营养状况等都对产奶量有一定影 响。 0003 湖羊具有繁殖力高、 适应性好、 母性强、 易管理等特点， 深受广大养殖场(户)的欢 迎， 被广泛用作肉羊杂交母本。 该品种平均产羔率高达270280， 窝产34只羔羊的母 羊较常见， 但其产奶量通常只够哺育2只羔羊， 多胎羔羊会被饿死， 成活率不到70， 严重影 响了肉羊养殖效益。 因此， 急需开发一种提高母本绵羊产奶量的方法。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种提高母本绵羊产奶量的方法， 本发明通过导入东弗里 森血液， 用东弗里森公羊与湖羊母羊杂交， 生产的东湖F1具有较高的产奶量， 可用作。
9、三元杂 交母本羊， 从根本上解决母本羊泌乳量不足、 羔羊生长缓慢以及肉羊养殖效益不高等问题； 该方法通过解决同窝多胎羔羊的吮乳量问题， 提高羔羊的成活率和肉羊效益。 0005 其具体技术方案为： 0006 一种提高母本绵羊产奶量的方法， 包括以下步骤： 0007 步骤1、 试验动物的选择 0008 (1)杂交父本羊为东弗里森奶绵羊， 购自澳大利亚； 0009 (2)杂交母本为本地湖羊； 0010 步骤2、 杂交 0011 东湖一代， 即F1， 含1/2东弗里森羊血液， 是纯种东弗里森公羊与纯种湖羊杂交后 代； 含1/4东弗里森羊血液湖羊为东湖一代公羊与纯种湖羊母羊交配后代； 所有母羊均利用 人。
10、工授精技术配种； 0012 步骤3、 体重测定 0013 对相同饲养管理条件下同期出生的湖羊、 东湖一代羊、 含1/4东弗里森羊血液湖羊 的初生重、 2月龄重、 4月龄重进行测定、 记录； 0014 步骤4、 产奶量测定 0015 分别选择相同饲养管理条件下同期产羔母羊3只， 用羔羊体重称重法对产奶量进 说 明 书 1/4 页 3 CN 106818639 A 3 行测定、 记录； 0016 步骤5、 乳腺组织受体基因的mRNA表达量测定 0017 5.1采样 0018 用手术法采集哺乳期东湖一代羊试验组和湖羊对照组乳腺组织样， 置于多聚甲醛 中带回实验室， 固定48h后， 修样至1cm3； 。
11、0019 5.2制样 0020 5.2.1脱水将固定后的组织样依次置于70酒精30min、 80酒精1h、 90酒精1h、 100酒精1h， 1h后换一次酒精； 0021 5.2.2透明用等比列配制的无水乙醇、 二甲苯混合溶液浸泡2h， 再用二甲苯I浸泡 10min,换二甲苯， 再泡5min； 0022 5.2.3浸蜡在等比列配制的二甲苯、 石蜡液的混合液中浸2h， 石蜡I液中浸2h、 石蜡 II液中浸2h， 然后置于60烤箱中烘干； 0023 5.2.4包埋将预热包埋剂倒入简易纸盒， 然后将浸蜡后的组织样放在室温下静置； 0024 5.2.5切片将包埋好的蜡块置于石蜡切片机上， 切成5um薄。
12、片， 再进行展片、 粘片、 标记后， 置于切片架上， 在37条件下烘干； 0025 5.3染色 0026 (1)HE染色脱蜡依次将石蜡切片置于二甲苯I液10min、 二甲苯II液5min、 100乙 醇I液3min、 100乙醇II液3min、 90乙醇3min、 80乙醇3min、 70乙醇3min； 0027 (2)染色苏木精染色2min， 水洗除去染液， 加5冰醋酸分化30s， 用蒸馏水洗5min， 再用伊红染色1min,然后在显微镜下观察； 0028 (3)脱色将玻片依次置于70酒精、 80酒精、 90酒精、 100酒精I液、 100酒 精II液中脱色各1min， 然后分别在二甲苯I液。
13、和二甲苯II液脱色5min； 0029 (4)封片取出切片， 擦干二甲苯， 滴上树胶， 盖上盖玻片， 在室温条件下晾干； 0030 (5)照相： 用显微照相机照相后， 进行图像分析； 0031 5.4数据统计与分析 0032 通过HE染色对东湖一代羊和湖羊乳腺组织结构进行比较。 0033 与现有技术相比， 本发明的有益效果： 0034 本发明的试验方法通过东弗里森公羊与湖羊母羊杂交生产高产奶量东湖F1， 用作 三元杂交母本羊， 从根本上解决母本羊泌乳量不足、 羔羊生长缓慢以及肉羊养殖效益不高 等问题。 结果证明： 杂种一代羊母羊是较理想的母本羊， 与杜泊羊杂交后， 可哺育3只羔羊， 养殖效益提。
14、高30以上。 附图说明 0035 图1是不同品种妊娠绵羊乳腺组织受体基因mRNA表达量。 具体实施方式 0036 下面结合附图和具体实施方案对本发明的技术方案作进一步详细地说明。 0037 一、 体重和产奶量测定 0038 1材料与方法 说 明 书 2/4 页 4 CN 106818639 A 4 0039 1.1试验动物的选择 0040 (1)杂交父本羊东弗里森奶绵羊购自澳大利亚。 0041 (2)杂交母本湖羊为本地饲养的成年湖羊。 0042 1.2杂交东湖一代， 即F1， 含1/2东弗里森羊血液， 是纯种东弗里森公羊与纯种湖羊 杂交后代； 含1/4东弗里森羊血液湖羊为东湖一代公羊与纯种湖羊。
15、母羊交配后代。 所有母羊 均利用人工授精技术配种。 0043 1.3体重测定用常规方法对相同饲养管理条件下同期出生的湖羊、 东湖一代羊、 含 1/4东弗里森羊血液湖羊的初生重、 2月龄重、 4月龄重进行测定、 记录。 0044 1.4产奶量测定分别选择相同饲养管理条件下同期产羔母羊3只， 用羔羊体重称重 法对产奶量进行测定、 记录。 0045 二、 乳腺组织受体基因的mRNA表达量测定 0046 1采样 0047 用手术法采集哺乳期东湖一代羊(试验组)和湖羊(对照组)乳腺组织样， 置于多聚 甲醛中带回实验室， 固定48h后， 修样至1cm3即可。 0048 2制样 0049 2.1脱水将固定后。
16、的组织样依次置于70酒精30min、 80酒精1h、 90酒精1h、 100酒精1h(1h后换一次酒精)。 0050 2.2透明用等比列配制的无水乙醇、 二甲苯混合溶液浸泡2h， 再用二甲苯I浸泡 10min,换二甲苯， 再泡5min。 0051 2.3浸蜡在等比列配制的二甲苯、 石蜡液的混合液中浸2h， 石蜡I液中浸2h、 石蜡II 液中浸2h， 然后置于60烤箱中烘干。 0052 2.4包埋将预热包埋剂倒入简易纸盒， 然后将浸蜡后的组织样放在室温下静置。 0053 2.5切片将包埋好的蜡块置于石蜡切片机上， 切成5um薄片， 再进行展片、 粘片、 标 记后， 置于切片架上， 在37条件下烘。
17、干。 0054 3染色 0055 (1)HE染色脱蜡依次将石蜡切片置于二甲苯I液10min、 二甲苯II液5min、 100乙 醇I液3min、 100乙醇II液3min、 90乙醇3min、 80乙醇3min、 70乙醇3min。 0056 (2)染色苏木精染色2min， 水洗除去染液， 加5冰醋酸分化30s， 用蒸馏水洗5min， 再用伊红染色1min,然后在显微镜下观察。 0057 (3)脱色将玻片依次置于70酒精、 80酒精、 90酒精、 100酒精I液、 100酒 精II液中脱色各1min， 然后分别在二甲苯I液和二甲苯II液脱色5min。 0058 (4)封片取出切片， 擦干二甲苯。
18、， 滴上树胶， 盖上盖玻片， 在室温条件下晾干。 0059 (5)照相： 用显微照相机照相后， 进行图像分析。 0060 4数据统计与分析 0061 通过HE染色对东湖一代羊和湖羊乳腺组织结构进行比较。 0062 三、 试验结果 0063 湖羊母羊与东弗里森公羊杂交， 其杂种一代羊(简称东湖F1)初生重、 2月龄断奶重 和4月龄体重分别比相同饲养管理条件下的湖羊高0.25kg、 3.74kg和3.65kg， 而且体型外貌 更趋于肉用型。 东湖F1成年母羊产后50天内平均日奶量达到2.36kg， 比相同饲养管理条件 说 明 书 3/4 页 5 CN 106818639 A 5 下的湖羊高0.46。
19、k kg。 但杂种羊的产奶量会随东弗里森含血量的下降而下降(见表1)。 0064 表1东湖F1生长速度和产奶量(kg) 0065 0066 *指第三胎产双羔母羊产后150天平均产奶量。 0067 东湖F1妊娠母羊乳腺组织GHR(生长激素受体)、 PR(孕激素受体)、 PRLR(催乳素受 体)、 IGF-IR(胰岛素样生长因子I受体)基因的mRNA表达量均显著高于湖羊(见图1)， 这表明 东湖F1母羊具有较高的泌乳性能。 0068 以上所述， 仅为本发明较佳的具体实施方式， 本发明的保护范围不限于此， 任何熟 悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内， 可显而易见地得到的技术方案的简 单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。 说 明 书 4/4 页 6 CN 106818639 A 6 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 7 CN 106818639 A 7 。