技术领域
本发明属于食品技术领域，具体涉及一种解酒护肝酵素及其制备方法。
背景技术
葛根作为药食同源原料，含有黄酮成分葛根素、葛根素木糖甙、大豆黄酮、大豆黄酮甙及β-谷甾醇、花生酸等，丹参中则含有根主含脂溶性的二萜类成分和水溶性的酚酸成分，还含黄酮类，三萜类，甾醇等其他成分；二者都是营养价值高、具有广泛的生物活性的药食同源性保健品。蜂蜜中富含多种氨基酸、维生素、有机酸、无机盐以及促进新陈代谢的酶类，是重要的功能性产品。
过度饮酒容易对肝脏造成损伤，目前市面上虽有较多的解酒护肝产品，如药品、中药制剂及保健品等，虽然可以在一定程度上起到分解酒精浓度，缓解酒精浓度过高造成的头晕、呕吐等症状，但是药品在解酒的同时，会对肝脏、肾脏造成代谢负担而产生不同程度的伤害。而且，目前药食同源原料多使用传统的高温炮制方法进行处理提取，该方法虽然简便，但是不能有效的将原料中的活性成分进行完整提取和释放，且高温浸泡及蒸煮工艺容易破坏一些天然活性成分。经过调查，目前市面上尚无完全以药食同源原料为原料并通过益生菌发酵转化形成的解酒护肝相关产品。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种解酒护肝酵素及其制备方法；本发明以葛根、茯苓、山楂等已报道的与解酒护肝相关的药食同源原料，经生物酶解和益生菌发酵，后熟后复配成功能性的解酒护肝酵素，使得各成分协同作用，有助于缓解过度饮酒对肝脏造成的损伤。
本发明是通过如下技术方案实现的，本发明提供了一种解酒护肝酵素，以药食同源原料制备而成，药食同源原料由以下重量份的组分组成：葛花1-2份，葛根3-5份，山药1-3 份、马齿笕1-2份、乌梅3-4份、黄精2-3份、蒲公英1-2份、金银花1-2份、砂仁1-3份、杏仁1-2份、决明子2-3份、黄连1-2份，茯苓1-3份，白术2-3份，丹参1-3份，陈皮 1-2份，山楂2-4份，枳椇子1-2份。
葛根有葛根异黄酮和葛根素：可以低血管阻力，增加脑及冠状血管血流量作用，还具有抗自由基和提高SOD活性功能。抑制乙醇胃吸收和和加速乙醇降解代谢，以降低机体血醇浓度，从而起到解酒防醉功效；枳椇子具有中枢神经抑制作用，抗脂质过氧化和降血压作用；葛花可有效改善血中乙醇浓度、降低血中肝油三脂，提高肝组织的抗氧化能力，促进脂肪酸氧化分解，降低脂质水平；山药、砂仁、杏仁水解产生葡萄糖能抑制乙醇脱氢酶,减缓乙醛的产生；马齿笕含有马齿笕多糖，乌梅中含有没食子酸、柠檬酸、苹果酸等成分,以上成分具有抗病毒、抗氧化的作用，可以提高机体的抗氧化能力，加速乙醛分解；研究表明，黄精提取物和蒲公英提取物对急性肝损伤小鼠具有明显保护作用；金银花中主要化学成分有黄酮类、有机酸类、苷类及挥发油等。其中苷类中三萜皂苷类成分主要与金银花保肝利胆作用有关；决明子提取液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性、mRNA及蛋白表达水平有影响，具有减少肝脏脂质沉淀的作用；黄连对胰岛素抵抗大鼠氧自由基所致肝脏线粒体损伤具有的保护作用；茯苓、白术、山楂对肝损伤有解毒作用；丹参能够促进微循环, 抑制肝脏细胞损伤和死亡，改善细胞内的缺氧环境，促进肝细胞合成和分泌，对肝脏具有明显保护作用。
本发明另一方面提供一种解酒护肝酵素的制备方法，两步酶解法提取药食同源原料得酶解液，将酶解液和水混合，添加辅料，灭菌处理后接入益生菌群进行多级联合发酵，随后进入后熟转化阶段，转化完成后离心收集上清液；
本发明的两步酶解法与传统的高温炮制工艺相比，通过生物提取及微生物转化工艺，不仅将药食同源原料中的天然活性成分完整保留并释放，并将部分大分子成分转化为利于人体吸收与代谢的小分子成分，同时产生活性次级代谢产物，提高解酒护肝酵素中活性成分的种类和功能。两步酶法在酵素工艺中尚无报道。
目前公开的专利中酵素发酵多为一种菌单一发酵，最多是酵母和乳酸的混合发酵，本专利采用多级联合发酵工艺，多级联合发酵工艺的优点是：多级联合发酵能够近一步释放和转化药食同源原料中的活性成分，同时产生不同种类的丰富益生刺激代谢产物，增强酵素中活性成分的种类和含量。
经酶法提取和益生菌发酵后，葛根素含量相对于传统高温炮制水溶液中葛根素提高了近7倍。葛根素具有降低血管阻力，抑制乙醇胃吸收和加速乙醇降解代谢，以降低机体血醇浓度，降低内毒素(LPS)浓度及抑制细胞色素P4502E1(CYP2E1)表达，减少自由基产生，从而减轻氧化应激导致的肝损伤，达到解酒护肝功效。
对该酵素产品和经高温炮制方法制得的提取溶液中的氨基酸含量进行检测，发现，经过本方法制得的解酒护肝酵素的氨基酸含量较传统方法中氨基酸含量提高了近10倍。氨基酸含量的增加可调节机体因过度摄入酒精导致的代谢紊乱，稳定胞液中的氧化还原电位，加速三羧酸循环，促进乙醛的分解，减少肝组织的损伤。
对该酵素产品和传统高温炮制水溶液的自由基清除率曲线进行检测，解酒护肝酵素的自由基清除率较比传统炮制水溶液提高了92％，具有较高的抗氧化能力。酒精对肝细胞的毒性可以通过影响肝细胞的代谢，使肝细胞膜表面的脂质成分过度氧化，破坏肝细胞膜。并且过度饮酒后体内超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽发生明显改变，机体产生大量的氧自由基使氧化反应增强，产生大量自由基，对机体组织的毒害很大。因此，研究解酒护肝酵素的抗氧化能力对保肝护肝具有重要的指导意义。
优选的，酶解液和水按如下重量份的组分混合：酶解液30-45份，水55-70份。
优选的，所述解酒护肝酵素3000-4000rpm离心5-10min，收集上清液；
优选的，添加的辅料按酶解液和水混合体系的重量份百分比计，为以下任意一种或任意两种及两种以上的混合：
食用葡萄糖 3-8％
食用蔗糖 2-5％
食用酵母粉 1-2％。
添加辅料是为了让微生物更好的生长和发酵，按照微生物生长的基本需求C\N源进行添加，添加量是经过实验论证可以使微生物较好生长的范围。
优选的，在上清液中加入与上清液以重量百分比计的以下任意一种或任意两种及两种以上的混合物：
蜂蜜 3-6％
赤藓糖醇 0.5-1％
低聚果糖 0.5-1％
为了增加解酒护肝酵素的口感，添加上述成分，上述添加量是经过品尝结合功能糖功效的添加范围最终确定的。
优选的，所述益生菌群为益生解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、米根霉、醋酸菌、毛霉菌、布拉氏酵母菌酿酒酵母菌、增香酵母菌、魏氏酵母、异常汉逊酵母、粟酒裂殖酵母、黏红酵母、粉状毕赤酵母、产甘油假丝酵母、产朊假丝酵母、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜热链球菌、格氏乳杆菌、双歧杆菌、小牛葡萄球菌、木糖葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、蜷曲乳杆菌中的任意两种及两种以上的混合。
优选的，所述益生菌群接入量按照酶解液体积的2-10％接入。优选的，所述益生菌群接入量按照酶解液体积的2-5％接入。2％-10％是允许的接种范围；2％-5％是常规最优的接种范围。
优选的，所述多级联合发酵为好氧发酵、兼性厌氧发酵、厌氧发酵中的任意两种及两种以上的混合发酵方式。
优选的，所述多级联合发酵为30-37℃、150-200rpm好氧发酵1-2天、25-37℃50-100rpm 兼性厌氧发酵1-5天、20-37℃静置发酵1-14天中的任意两种及两种以上的混合发酵工艺。
优选的，后熟转化阶段的时间为1-6个月，温度为10-25℃。这是目前酵素后熟的常用时间。
优选的，两步酶解法提取药食同源原料的具体步骤包括：
S101：将药食同源原料粉碎后加入水，混合液进行破壁，破壁液经搅拌进行第一步酶解提取；
S102：将第一步酶解提取后的混合液，搅拌进行第二步酶解提取。
目前药食同源原料多使用传统的高温炮制方法处理提取，本发明采用两步酶法，两步酶法在酵素的制备过程中还没有被报道过；采用两步酶解法可以通过不同种类酶的协同作用，充分酶解和释药食同源原料中的有效成分，使药食同源原料中的有效成分充分释放到酶解液中，葛根素含量相对于传统高温炮制水溶液中葛根素提高了近7倍。氨基酸含量较传统方法中氨基酸含量提高了近10倍。
优选的，S101中，破壁条件包含但不限于30-40℃超声60-90min，破壁率85-95％。
优选的，S101中，第一步酶解提取的提取方法：40-60℃，150-200rpm搅拌，pH 3.5-5.5，提取时间60-90min；S102中，第二步酶解提取的提取方法：50-70℃，100-200rpm搅拌， pH 7.0-8.5，提取时间30-60min。
优选的，S101中，第一步酶解提取所用酶类与混合液以重量千分比计，为以下任意两种及两种以上的混合：
优选的，S102中，第二步酶解提取所用酶类与混合液以重量千分比计，为以下任意一种或任意两种及两种以上的混合：
第一步酶解提取所用酶类为酸性酶，第二步酶解提取所用酶类为中性或者碱性酶，通过不同种类酶的协同作用，充分酶解和释药食同源原料中的有效成分。
经过本发明制备的解酒护肝酵素中葛根素含量、氨基酸含量等活性成份含量及抗氧化能力均高于传统高温炮制工艺水溶液中相关含量和指标，因此采用本发明方法所制备的解酒护肝酵素在加速三羧酸循环并促进乙醛的分解，改善血液中乙醇和甘油三酯浓度，提高肝组织的抗氧化能力等方面具有重要潜能，对于缓解人们过度饮酒造成的肝损伤和其他酵素产品的开发具有重要的指导意义。
本发明的有益效果：
1)本发明通过温和且高效的生物提取及微生物转化工艺，不仅将药食同源原料中的天然活性成分完整保留并释放，并将部分大分子成分转化为利于人体吸收与代谢的小分子成分，同时产生活性次级代谢产物，提高解酒护肝酵素中活性成分的种类和功能。
2)本发明以葛根、茯苓、山楂等具备解酒功效的药食同源原料，通过复合酶酶解法提取药食同源中的有效成分，提取条件温和、提取率高，后经益生菌的生物转化，在较好的保留并释放药食同源中营养成分的同时，又包含活性益生菌及其有益代谢产物。
3)本发明制备所得产品是以具有解酒功效的药食同源原料，兼经生物酶解和益生菌转化，发酵后熟并加以复配的的功能性解酒护肝酵素。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1解酒护肝酵素和高温炮制水溶液中葛根素相色谱图；
图2解酒护肝酵素自由基清除率曲线；
图3高温炮制水溶液自由基清除率曲线。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
正如背景技术部分所介绍的，市面上虽有较多的解酒护肝产品，如药品、中药制剂及保健品等，虽然可以在一定程度上起到分解酒精浓度，缓解酒精浓度过高造成的头晕、呕吐等症状，但是药品在解酒的同时，会对肝脏、肾脏造成代谢负担而产生不同程度的伤害。同时，经过调查，目前市面上尚无完全以药食同源原料为原料并通过益生菌发酵转化形成的解酒护肝相关产品。
本实施例的一种解酒护肝酵素，以药食同源原料制备而成，药食同源原料由以下重量份的组分组成：葛花1-2份，葛根3-5份，山药1-3份、马齿笕1-2份、乌梅3-4份、黄精 2-3份、蒲公英1-2份、金银花1-2份、砂仁1-3份、杏仁1-2份、决明子2-3份、黄连1-2 份，茯苓1-3份，白术2-3份，丹参1-3份，陈皮1-2份，山楂2-4份，枳椇子1-2份。
葛根有葛根异黄酮和葛根素：可以低血管阻力，增加脑及冠状血管血流量作用，还具有抗自由基和提高SOD活性功能。抑制乙醇胃吸收和和加速乙醇降解代谢，以降低机体血醇浓度，从而起到解酒防醉功效；枳椇子具有中枢神经抑制作用，抗脂质过氧化和降血压作用；葛花可有效改善血中乙醇浓度、降低血中肝油三脂，提高肝组织的抗氧化能力，促进脂肪酸氧化分解，降低脂质水平；山药、砂仁、杏仁水解产生葡萄糖能抑制乙醇脱氢酶,减缓乙醛的产生；马齿笕含有马齿笕多糖，乌梅中含有没食子酸、柠檬酸、苹果酸等成分,以上成分具有抗病毒、抗氧化的作用，可以提高机体的抗氧化能力，加速乙醛分解；研究表明，黄精提取物和蒲公英提取物对急性肝损伤小鼠具有明显保护作用；金银花中主要化学成分有黄酮类、有机酸类、苷类及挥发油等。其中苷类中三萜皂苷类成分主要与金银花保肝利胆作用有关；决明子提取液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性、mRNA及蛋白表达水平有影响，具有减少肝脏脂质沉淀的作用；黄连对胰岛素抵抗大鼠氧自由基所致肝脏线粒体损伤具有的保护作用；茯苓、白术、山楂对肝损伤有解毒作用；丹参能够促进微循环, 抑制肝脏细胞损伤和死亡，改善细胞内的缺氧环境，促进肝细胞合成和分泌，对肝脏具有明显保护作用。
一种解酒护肝酵素的制备方法，两步酶解法提取药食同源原料得酶解液，将酶解液和水混合，酶解液和水按如下重量份的组分混合：酶解液30-45份，水55-70份；添加辅料，灭菌处理后接入益生菌群进行多级联合发酵，随后进入后熟转化阶段，转化完成后 3000-4000rpm离心5-10min，收集上清液；
本发明与传统的高温炮制工艺相比，通过生物提取及微生物转化工艺，不仅将药食同源原料中的天然活性成分完整保留并释放，并将部分大分子成分转化为利于人体吸收与代谢的小分子成分，同时产生活性次级代谢产物，提高解酒护肝酵素中活性成分的种类和功能。
经酶法提取和益生菌发酵后，葛根素含量相对于传统高温炮制水溶液中葛根素提高了近7倍。葛根素具有降低血管阻力，抑制乙醇胃吸收和加速乙醇降解代谢，以降低机体血醇浓度，降低内毒素(LPS)浓度及抑制细胞色素P4502E1(CYP2E1)表达，减少自由基产生，从而减轻氧化应激导致的肝损伤，达到解酒护肝功效。
对该酵素产品和经高温炮制方法制得的提取溶液中的氨基酸含量进行检测，发现，经过本方法制得的解酒护肝酵素的氨基酸含量较传统方法中氨基酸含量提高了近10倍。氨基酸含量的增加可调节机体因过度摄入酒精导致的代谢紊乱，稳定胞液中的氧化还原电位，加速三羧酸循环，促进乙醛的分解，减少肝组织的损伤。
对该酵素产品和传统高温炮制水溶液的自由基清除率曲线进行检测，解酒护肝酵素的自由基清除率较比传统炮制水溶液提高了92％，具有较高的抗氧化能力。酒精对肝细胞的毒性可以通过影响肝细胞的代谢，使肝细胞膜表面的脂质成分过度氧化，破坏肝细胞膜。并且过度饮酒后体内超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽发生明显改变，机体产生大量的氧自由基使氧化反应增强，产生大量自由基，对机体组织的毒害很大。因此，研究解酒护肝酵素的抗氧化能力对保肝护肝具有重要的指导意义。
添加的辅料按酶解液和水混合体系的重量份百分比计，为以下任意一种或任意两种及两种以上的混合：
食用葡萄糖 3-8％
食用蔗糖 2-5％
食用酵母粉 1-2％。
为了增加解酒护肝酵素的口感，添加以下成分，添加量是经过品尝结合功能糖功效的添加范围最终确定的。在上清液中加入与上清液以重量百分比计的以下任意一种或任意两种及两种以上的混合物：
蜂蜜 3-6％
赤藓糖醇 0.5-1％
低聚果糖 0.5-1％
所述益生菌群为益生解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、米根霉、醋酸菌、毛霉菌、布拉氏酵母菌酿酒酵母菌、增香酵母菌、魏氏酵母、异常汉逊酵母、粟酒裂殖酵母、黏红酵母、粉状毕赤酵母、产甘油假丝酵母、产朊假丝酵母、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜热链球菌、格氏乳杆菌、双歧杆菌、小牛葡萄球菌、木糖葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、蜷曲乳杆菌中的任意两种及两种以上的混合。选择的上述菌种为常用的益生菌发酵菌群。
所述益生菌群接入量按照酶解液体积的2-10％接入。所述益生菌群接入量按照酶解液体积的2-5％接入。2％-10％是允许的接种范围；2％-5％是常规最优的接种范围。
所述多级联合发酵为好氧发酵、兼性厌氧发酵、厌氧发酵中的任意两种及两种以上的混合发酵方式。目前公开的专利中酵素发酵多为一种菌单一发酵，最多是酵母和乳酸的混合发酵，本专利采用多级联合发酵工艺，多级联合发酵工艺的优点是：多级联合发酵能够近一步释放和转化药食同源原料中的活性成分，同时产生不同种类的丰富益生刺激代谢产物，增强酵素中活性成分的种类和含量。
所述多级联合发酵为30-37℃、150-200rpm好氧发酵1-2天、25-37℃50-100rpm兼性厌氧发酵1-5天、20-37℃静置发酵1-14天中的任意两种及两种以上的混合发酵工艺。
目前酵素后熟的常用时间为：后熟转化阶段的时间为1-6个月，温度为10-25℃。
两步酶解法提取药食同源原料的具体步骤包括：
S101：将药食同源原料粉碎后加入水，混合液进行破壁，破壁液经搅拌进行第一步酶解提取；
破壁条件包含但不限于30-40℃超声60-90min，破壁率85-95％。
第一步酶解提取的提取方法：40-60℃，150-200rpm搅拌，pH 3.5-5.5，提取时间60-90min； S102中，第二步酶解提取的提取方法：50-70℃，100-200rpm搅拌，pH 7.0-8.5，提取时间30-60min。
第一步酶解提取所用酶类与混合液以重量千分比计，为以下任意两种及两种以上的混合：
S102：将第一步酶解提取后的混合液，搅拌进行第二步酶解提取。
第二步酶解提取所用酶类与混合液以重量千分比计，为以下任意一种或任意两种及两种以上的混合：
目前药食同源原料多使用传统的高温炮制方法处理提取，本发明采用两步酶法，两步酶法在酵素的制备过程中还没有被报道过；采用两步酶解法可以通过不同种类酶的协同作用，充分酶解和释药食同源原料中的有效成分，使药食同源原料中的有效成分充分释放到酶解液中，葛根素含量相对于传统高温炮制水溶液中葛根素提高了近7倍。氨基酸含量较传统方法中氨基酸含量提高了近10倍。第一步酶解提取所用酶类为酸性酶，第二步酶解提取所用酶类为中性或者碱性酶，通过不同种类酶的协同作用，充分酶解和释药食同源原料中的有效成分。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
本发明实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。
实施例1
以重量份计，取40℃低温烘干药食同源葛花2份，葛根4份，山药3份、马齿笕2份、乌梅4份、黄精2份、蒲公英2份、金银花2份、砂仁3份、杏仁2份、决明子2份、黄连1份，茯苓3份，白术2份，丹参3份，陈皮2份，山楂3份，共42份粉碎至低于36 目后充分混匀。取上述混合干粉，加入水65份，混匀。
药食同源原料混合液30℃超声60min破壁处理，破壁率85％。破壁后的混合液150rpm 搅拌酶解60min，温度50℃，pH 4.0。提取所用酶类与混合液以重量千分比计如下：
取第一步酶法提取后的药食同源混合液进行第二步生物提取。以重量份计，第一步酶法提取后的药食同源混合液经100rpm搅拌酶解提取30min，温度70℃，pH 7.0。提取所用酶类与混合液以重量千分比计如下：
药食同源酶解混合液添加辅料按酶解液和水混合体系的重量份百分比计如下：
食用葡萄糖 3％
食用酵母粉 2％
药食同源酶解液80℃灭菌15min。后按照酶解液体积的2％接菌量接入活化好的纳豆芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌于35℃、150-200rpm下好氧发酵1-2天后再2％接入活化好的植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜热链球菌在37℃静置发酵1周。
解酒护肝酵素于37℃温度下发酵完成后，在20℃下进入3个月的后熟转化阶段。
取后熟完成的解酒护肝酵素3000rpm离心5min，收集其上清液。
在上清液中加入蜂蜜以及功能糖，分别按照与与上清液重量百分比计混合如下：
蜂蜜 3％
赤鲜糖醇 1％
低聚果糖 1％
功能糖和蜂蜜加入到解酒护肝酵素中，200rpm搅拌30min充分混匀，即为解酒护肝酵素产品。对该酵素产品中的活性成分葛根素检测如图1所示，传统高温炮制水溶液中葛根素含量为69.33mg/L，解酒护肝酵素中葛根素含量为534.8mg/L。由此可见经酶法提取和益生菌发酵后，葛根素含量提高了近7倍。葛根素具有降低血管阻力，抑制乙醇胃吸收和和加速乙醇降解代谢，以降低机体血醇浓度，降低内毒素(LPS)浓度及抑制细胞色素 P4502E1(CYP2E1)表达，减少自由基产生，从而减轻氧化应激导致的肝损伤，达到解酒护肝功效。
实施例2
以重量份计，取35℃低温烘干药食同源葛花1份，山药2份、马齿笕1份、乌梅4份、蒲公英2份、金银花1份、砂仁2份、杏仁1份、决明子3份、黄连1份，茯苓3份，白术3份，丹参3份，陈皮1份，山楂2份，共30份粉碎至低于36目后充分混匀。取上述混合干粉，加入水45份，混匀。
药食同源原料混合液30℃超声70min破壁处理，破壁率87％。破壁后的混合液150rpm 搅拌酶解70min，温度50℃，pH 4.5。提取所用酶类与混合液以重量千分比计如下：
取第一步酶法提取后的药食同源混合液进行第二步生物提取。以重量百分比计，第一步酶法提取后的药食同源混合液经150rpm搅拌酶解提取50min，温度70℃，pH 7.5。提取所用酶类与混合液以重量千分比计如下：
药食同源酶解混合液添加辅料C、N源按酶解液和水混合体系的重量份百分比计如下：
食用蔗糖 4％
乳清蛋白粉 1％
药食同源酶解液80℃灭菌20min。后按照酶解液体积的3％接入活化好的布拉氏酵母菌、酿酒酵母菌、增香酵母菌于25-37℃、50-100rpm转速下兼性厌氧发酵1-5天。一次发酵完成后，再按照5％接菌量接入格氏乳杆菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌于35℃静置发酵15 天。
解酒护肝酵素于2级联合发酵完成后，在15℃下进入3个月的后熟转化阶段。
取后熟完成的解酒护肝酵素3000rpm离心8min，收集其上清液。
在上清液中加入功能糖，分别按照与与上清液重量百分比计混合如下：
赤鲜糖醇 1％
低聚果糖 1％
功能糖加入到解酒护肝酵素中，200rpm搅拌混匀并进一步冷却至22℃。蜂蜜加入至混合均匀的解酒护肝酵素中，200rpm搅拌20min充分混匀，即为酵素产品。对该酵素产品和经高温炮制方法制得的提取溶液中的氨基酸含量进行检测，发现，传统方法中氨基酸含量为0.343×103mg/L，而经过本方法制得的解酒护肝酵素的氨基酸含量为3.96×103mg/L，氨基酸含量提高了近10倍。氨基酸含量的增加可调节机体因过度摄入酒精导致的代谢紊乱，稳定胞液中的氧化还原电位，加速三羧酸循环，促进乙醛的分解，减少肝组织的损伤。
实施例3：
以重量份计，取35℃低温烘干药食同源葛根5份，山药3份、马齿笕2份、乌梅3份、蒲公英1份、金银花2份、砂仁3份、杏仁2份、决明子2份、茯苓3份，白术2份，丹参3份，陈皮1份，山楂3份，共35份粉碎至低于36目后充分混匀。取上述混合干粉，加入水55份，混匀。
药食同源原料混合液35℃超声70min破壁处理，破壁率89％。破壁后的混合液150rpm 搅拌酶解70min，温度60℃，pH 5.0。提取所用酶类与混合液以重量千分比计如下：
取第一步酶法提取后的药食同源混合液进行第二步生物提取。以重量份计，第一步酶法提取后的药食同源混合液经150rpm搅拌酶解提取50min，温度60℃，pH 7.5。提取所用酶类与混合液以重量千分比计如下：
药食同源酶解混合液添加辅料按酶解液和水混合体系的重量份百分比计如下：
食用葡萄糖 6％
食用酵母粉 1％
药食同源酶解液80℃灭菌20min。后按照2％接菌量接入活化好的解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌于35℃、150-200rpm下好氧发酵1-2天，再按照2％接菌量接入异常汉逊酵母、粟酒裂殖酵母兼性联合厌氧发酵5天，最后按照5％接菌量接入植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜热链球菌25℃静置发酵14天。
解酒护肝酵素于37℃温度下发酵2周。随后在20℃下进入4个月的后熟转化阶段。
取后熟完成的解酒护肝酵素4000rpm离心5min，收集其上清液。
在上清液中加入蜂蜜以及功能糖，分别按照与与上清液重量百分比计混合如下：
蜂蜜 4％
赤鲜糖醇 1％
功能糖和蜂蜜加入至混合均匀的解酒护肝酵素中，150rpm搅拌30min充分混匀，即为解酒护肝酵素产品。对该酵素产品和传统高温炮制水溶液的自由基清除率曲线进行检测，结果如图所示：图2解酒护肝酵素IC50值为0.088，图3传统高温炮制水溶液的IC50 值为0.1693，解酒护肝酵素的自由基清除率较比传统炮制水溶液提高了92％，具有较高的抗氧化能力。酒精对肝细胞的毒性可以通过影响肝细胞的代谢，使肝细胞膜表面的脂质成分过度氧化，破坏肝细胞膜。并且过度饮酒后体内超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽发生明显改变，机体产生大量的氧自由基使氧化反应增强，产生大量自由基，对机体组织的毒害很大。因此，研究解酒护肝酵素的抗氧化能力对保肝护肝具有重要的指导意义。
综上述实验结果，经过本发明制备的解酒护肝酵素中葛根素含量、氨基酸含量等活性成份含量及抗氧化能力均高于传统高温炮制工艺水溶液中相关含量和指标，因此采用本发明方法所制备的解酒护肝酵素在加速三羧酸循环并促进乙醛的分解，改善血液中乙醇和甘油三酯浓度，提高肝组织的抗氧化能力等方面具有重要潜能，对于缓解人们过度饮酒造成的肝损伤和其他酵素产品的开发具有重要的指导意义。
当然，上述说明也并不仅限于上述举例，本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述；以上实施例及附图仅用于说明本发明的技术方案并非是对本发明的限制，参照优选的实施方式对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换都不脱离本发明的宗旨，也应属于本发明的权利要求保护范围。