技术领域
本发明涉及乳制品领域，公开了一种在肠道成膜益生菌乳制品及制备方法。
背景技术
益生菌又称微生态调节剂、生态制品、活菌制剂，是一种取代或平衡系统中一种或多种菌系作用的微生物添加物，即通过补充动物消化道内的有益微生物，改善消化道菌群平衡而对生物产生有益作用，迅速提高机体的抗病能力、代谢能力和对饲料的消化吸收能力，达到防治消化道疾病和促进生长双重作用的微生物添加剂。益生菌的健康功效包括促进乳糖消化、抗肠道致病菌等等。
研究表明，益生菌对乳糖不耐症的减缓和抗腹泻效果非常明显，抗癌和免疫调节效果比较乐观。肠道紊乱轻者会有腹泻、肚疼等苦恼，严重的会危及生命。根据Merger和Croitoru的研究，与肠道固有微生物耐性降低有关的免疫系统功能的失调会导致慢性肠炎疾病，而这可以通过益生菌得到改善。益生菌其具有调节肠道菌群平衡，维护肠道健康的显著功效。
目前，益生菌已被广泛地运用于医药、保健品和食品等方面，而有关益生菌的产品更是琳琅满目。益生菌产品是指含有一种或多种益生菌的产品，使用最为广泛的益生菌为乳酸菌，尤其是乳杆菌类和双歧杆菌类。在医药领域，益生菌主要用于治疗腹泻和阴道炎等，其剂型主要包括片剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂等。
但是益生菌在进入消化道后，对肠道中的低pH值耐受性差，难以有效在肠道繁殖产足量的活菌数，形成于有害菌的争夺优势。因此，为益生菌在肠道中创造良好的繁殖环境和增强益生菌在肠道的定植效果，对益生菌快速形成具有竞争优势的菌群极为重要。
发明内容
目前应用较广的益生菌乳制品中益生菌对肠道内的低pH值耐受性差，高温存活率低，难以有效在肠道繁殖足量的活菌数，使得益生菌效用发挥有限。
为解决上述问题，本发明采用以下技术方案：
一种在肠道成膜的益生菌乳制品的制备方法，包括以下步骤：
（1）将香菇粉碎，与热水按照固液比1:60混合，搅拌1～2h，过滤，干燥，得到香菇干粉；
（2）将步骤（1）得到的香菇干粉、氢氧化铝混合加入冷冻破壁粉碎设备中，在温度为-80~-60℃下以900~1000r/min的转速粉碎，制得粒径为100~200μm的复合颗粒；
（3）将步骤（2）制得的复合颗粒与固态柠檬酸、低聚糖混合，充分研磨复合，制得定植成膜料；
（4）将益生菌、乳制品加入水中，超声分散均匀，然后加入步骤（3）制得的定植成膜料，高速搅拌分散，制得在肠道成膜性益生菌乳制品。
香菇是具有高蛋白、低脂肪、多糖、多种氨基酸和多种维生素的菌类食物。能提高机体免疫功能、延缓衰老、防癌抗癌、降血压、降血脂、降胆固醇：香菇中含有嘌呤、胆碱、酪氨酸、氧化酶以及某些核酸物质，能起到降血压、降胆固醇、降血脂的作用，又可预防动脉硬化、肝硬化等疾病；香菇还对糖尿病、肺结核、传染性肝炎、神经炎等起治疗作用，又可用于消化不良、便秘等。本发明利用香菇中香菇多糖、蛋白质等为乳制品提供营养，又能在肠道成膜，为益生菌繁殖提供场所，增加益生菌的存活率，改善肠道菌群平衡。
进一步的，上述一种在肠道成膜益生菌乳制品的制备方法，其中步骤（1）所述热水温度为60～90℃。
氢氧化铝少量在胃内转变为可溶性的氯化铝自胃肠道吸收，由尿排泄；大部分以磷酸铝、碳酸铝及脂肪酸盐类形式自粪便排出；氢氧化铝起效缓慢，能增加药物在胃及肠道的排空时间，缓解胃酸过多，增加益生菌在肠道里的存活率。进一步的，上述一种在肠道成膜益生菌乳制品的制备方法，其中步骤（2）中，香菇干粉与氢氧化铝质量比5～20:0.1～0.3。
低聚糖可促进双歧杆菌增殖、调整肠道、通便、降低血清胆固醇、抗龋齿、调节血糖、控制肥胖等，作为新型甜味剂，低聚糖还可代替蔗糖，添加到乳制品中供糖尿病人食用，既能满足口感又能有效控制血糖；进一步的，上述一种在肠道成膜益生菌乳制品的制备方法，其中步骤（3）所述低聚糖为低聚异麦芽糖、低聚半乳糖、低聚木糖、大豆低聚糖、水苏糖中的至少一种。
进一步的，上述一种在肠道成膜益生菌乳制品的制备方法，其中步骤（3）中：复合颗粒、固态柠檬酸、低聚糖的质量比为64~73:5~10:22~26。
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。进一步的，上述一种在肠道成膜益生菌乳制品的制备方法，其中步骤（4）所述益生菌选自双歧杆菌种、两岐双岐杆菌、短双岐杆菌、乳双岐杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌中的至少一种。
进一步的，上述一种在肠道成膜益生菌乳制品的制备方法，其中步骤（4）所述乳制品包括各种哺乳类动物（如人类、牛、羊、马、鹿、骆驼等）的鲜乳、保久乳、浓缩乳、乳酪、乳粉中的至少一种。
进一步的，上述一种在肠道成膜益生菌乳制品的制备方法，其中步骤（4）中所述高速搅拌的搅拌速率为300~500r/min，搅拌时间为1~3h。
进一步的，上述一种在肠道成膜益生菌乳制品的制备方法，其中步骤（4）中：益生菌、乳制品、定植成膜料质量比为1~10:500~1000:8~10。
本发明还提供一种上述方法制备得到的一种在肠道成膜益生菌乳制品。
本发明提供了一种在肠道成膜性益生菌乳制品及制备方法，与现有技术相比，其突出的特点和优异的效果在于：
1、通过将香菇干粉、氢氧化铝冷冻破壁粉碎为微米级复合颗粒；进一步与固态柠檬酸、低聚糖研磨复合形成定植成膜料，该定植膜料中氢氧化铝易于在肠道成膜，从而将益生菌大面积稳定在肠道，缓解胃酸，减少胃液对益生菌的破坏，提高了益生菌在肠道中的存活率和稳定性；
2、通过加入香菇干粉富含的多糖，对肠道具有良好的修复作用，在肠胃表面形成一层保护膜，同时低聚糖在肠道中可以作为益生菌的底物快速繁殖繁殖和抑制有害微生物的生长，可有效促进肠道健康；
4、本发明通过将益生菌混合于该定植膜材料，易于在肠道繁殖益生菌，快速大面积形成益生菌繁殖点，从而形成益生菌菌群的竞争优势，排斥有害菌的影响，建立起良好的微生物菌系，进而迅速提高机体的抗病能力、代谢能力和消化吸收能力。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述方法思想的情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包含在本发明的范围内。
实施例1
在肠道成膜的益生菌乳制品的制备，包括：
（1）将香菇粉碎，与温度为80℃的热水按照固液比1:60混合，搅拌1h，过滤，干燥，得到香菇干粉；
（2）将步骤（1）得到的香菇干粉、氢氧化铝按照质量比12:0.2混合，加入冷冻破壁粉碎设备中，在温度为-70℃下以950r/min的转速粉碎，制得粒径为100~200μm的复合颗粒；
（3）将步骤（2）制得的复合颗粒与固态柠檬酸、低聚糖按照质量比70:8:24混合，充分研磨复合，制得定植成膜料；所述低聚糖为低聚异麦芽糖；
（4）将益生菌、乳制品加入水中，超声分散均匀，然后加入步骤（3）制得的定植成膜料，其中，益生菌、乳制品、定植成膜料质量比为5:800:9；高速搅拌分散，高速搅拌的搅拌速率为400r/min，搅拌时间为2h，制得在肠道成膜性益生菌乳制品；所述益生菌选自双歧杆菌种；所述乳制品为牛的鲜乳。
实施例1制得的益生菌乳制品，其益生菌体外耐受性试验存活率及小鼠肠内定植菌数如表1所示。
实施例2
在肠道成膜的益生菌乳制品的制备，包括：
（1）将香菇粉碎，与温度为90℃的热水按照固液比1:60混合，搅拌1h，过滤，干燥，得到香菇干粉；
（2）将步骤（1）得到的香菇干粉、氢氧化铝按照质量比10:0.1混合，加入冷冻破壁粉碎设备中，在温度为-80℃下以1000r/min的转速粉碎，制得粒径为100~200μm的复合颗粒；
（3）将步骤（2）制得的复合颗粒与固态柠檬酸、低聚糖按照质量比64:10:25混合，充分研磨复合，制得定植成膜料；所述低聚糖为低聚半乳糖；
（4）将益生菌、乳制品加入水中，超声分散均匀，然后加入步骤（3）制得的定植成膜料，其中，益生菌、乳制品、定植成膜料质量比为2:550:8；高速搅拌分散，高速搅拌的搅拌速率为400r/min，搅拌时间为2h，制得在肠道成膜性益生菌乳制品；所述益生菌选自嗜酸乳杆菌；所述乳制品为羊的鲜乳。
实施例2制得的益生菌乳制品，其益生菌体外耐受性试验存活率及小鼠肠内定植菌数如表1所示。
实施例3
在肠道成膜的益生菌乳制品的制备，包括：
（1）将香菇粉碎，与温度为60℃的热水按照固液比1:60混合，搅拌3h，过滤，干燥，得到香菇干粉；
（2）将步骤（1）得到的香菇干粉、氢氧化铝按照质量比20:0.3混合，加入冷冻破壁粉碎设备中，在温度为-60℃下以900r/min的转速粉碎，制得粒径为100~200μm的复合颗粒；
（3）将步骤（2）制得的复合颗粒与固态柠檬酸、低聚糖按照质量比64:5:26混合，充分研磨复合，制得定植成膜料；所述低聚糖为低聚木糖；
（4）将益生菌、乳制品加入水中，超声分散均匀，然后加入步骤（3）制得的定植成膜料，其中，益生菌、乳制品、定植成膜料质量比为9:900:10；高速搅拌分散，高速搅拌的搅拌速率为350r/min，搅拌时间为3h，制得在肠道成膜性益生菌乳制品；所述益生菌选自鼠李糖乳杆菌；所述乳制品为牛的鲜乳浓缩乳。
实施例3制得的益生菌乳制品，其益生菌体外耐受性试验存活率及小鼠肠内定植菌数如表1所示。
实施例4
在肠道成膜的益生菌乳制品的制备，包括：
（1）将香菇粉碎，与温度为65℃的热水按照固液比1:60混合，搅拌1.5h，过滤，干燥，得到香菇干粉；
（2）将步骤（1）得到的香菇干粉、氢氧化铝按照质量比16:0.15混合，加入冷冻破壁粉碎设备中，在温度为-70℃下以980r/min的转速粉碎，制得粒径为100~200μm的复合颗粒；
（3）将步骤（2）制得的复合颗粒与固态柠檬酸、低聚糖按照质量比65:6:25混合，充分研磨复合，制得定植成膜料；所述低聚糖为低聚异麦芽糖；
（4）将益生菌、乳制品加入水中，超声分散均匀，然后加入步骤（3）制得的定植成膜料，其中，益生菌、乳制品、定植成膜料质量比为4:600:9；高速搅拌分散，高速搅拌的搅拌速率为450r/min，搅拌时间为3h，制得在肠道成膜性益生菌乳制品；所述益生菌选自乳双岐杆菌；所述乳制品为牛的浓缩乳。
实施例4制得的益生菌乳制品，其益生菌体外耐受性试验存活率及小鼠肠内定植菌数如表1所示。
实施例5
在肠道成膜的益生菌乳制品的制备，包括：
（1）将香菇粉碎，与温度为75℃的热水按照固液比1:60混合，搅拌2h，过滤，干燥，得到香菇干粉；
（2）将步骤（1）得到的香菇干粉、氢氧化铝按照质量比18:0.3混合，加入冷冻破壁粉碎设备中，在温度为-70℃下以920r/min的转速粉碎，制得粒径为100~200μm的复合颗粒；
（3）将步骤（2）制得的复合颗粒与固态柠檬酸、低聚糖按照质量比73:9:22混合，充分研磨复合，制得定植成膜料；所述低聚糖为水苏糖；
（4）将益生菌、乳制品加入水中，超声分散均匀，然后加入步骤（3）制得的定植成膜料，其中，益生菌、乳制品、定植成膜料质量比为3:880:8；高速搅拌分散，高速搅拌的搅拌速率为480r/min，搅拌时间为2h，制得在肠道成膜性益生菌乳制品；所述益生菌选自短双岐杆菌；所述乳制品为牛的鲜乳。
实施例5制得的益生菌乳制品，其益生菌体外耐受性试验存活率及小鼠肠内定植菌数如表1所示。
实施例6
在肠道成膜的益生菌乳制品的制备，包括：
（1）将香菇粉碎，与温度为65℃的热水按照固液比1:60混合，搅拌2h，过滤，干燥，得到香菇干粉；
（2）将步骤（1）得到的香菇干粉、氢氧化铝按照质量比20:0.2混合，加入冷冻破壁粉碎设备中，在温度为-80℃下以1000r/min的转速粉碎，制得粒径为100~200μm的复合颗粒；
（3）将步骤（2）制得的复合颗粒与固态柠檬酸、低聚糖按照质量比64:6:24混合，充分研磨复合，制得定植成膜料；所述低聚糖为大豆低聚糖；
（4）将益生菌、乳制品加入水中，超声分散均匀，然后加入步骤（3）制得的定植成膜料，其中，益生菌、乳制品、定植成膜料质量比为7:680:10；高速搅拌分散，高速搅拌的搅拌速率为500r/min，搅拌时间为1h，制得在肠道成膜性益生菌乳制品；所述益生菌选自两岐双岐杆菌；所述乳制品为羊的鲜乳。
实施例6制得的益生菌乳制品，其益生菌体外耐受性试验存活率及小鼠肠内定植菌数如表1所示。
对比例1
对比例1没有添加氢氧化铝，其他与实施例6一致，制得的益生菌乳制品，其益生菌体外耐受性试验存活率及小鼠肠内定植菌数如表1所示。
上述性能指标的测试方法为：
选择益生菌中的鼠李糖乳杆菌制成乳制品作为测试对象，采用红色荧光蛋白进行标记；
先将1mg的益生菌乳制品加入10mL的人工模拟胃液中，置于37℃培养箱中2h，测定其活菌数A1，取出后接种于10mL人工模拟肠液中，继续于37℃小花4h，取1mL进行梯度稀释，测定其活菌数A2，计算存活率，并采用显微镜观察在模拟肠液中乳制品的成膜情况；
取成年小鼠作为研究对象，每天喂食0.3mg本发明制得的益生菌乳制品，分别在3d、7d和15d时引颈处死3只小鼠，进行体表消毒后，无菌取小鼠的十二指肠、空肠、回肠和结肠，观察成膜情况，冲洗后收集洗液，梯度稀释后收集涂布于含红霉素的MRS固体平板，检测菌落个数，任取24个菌落，采用菌落PCR验证，最后测定肠道内定植菌为平板计数菌落数×PCR验证为阳性的菌株/24，计算平均值。
表1：