书签分享收藏举报版权申诉 / 8

立即下载加入VIP,免费下载

当前位置：首页 > > 一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法.pdf

一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法.pdf

上传人：a***

文档编号：6880894

上传时间：2019-09-11

格式：PDF

页数：8

大小：297.68KB

《一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法.pdf（8页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201710305685.4 (22)申请日 2017.05.03 (65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 106942063 A (43)申请公布日 2017.07.14 (73)专利权人广西绿树农林科技有限公司地址 530000 广西壮族自治区南宁市西乡塘区科德西路9号金乐福花园2号楼3 单元505号 (72)发明人邹明洋陈政璋 (74)专利代理机构广西南宁汇博专利代理有限公司 45114 代理人卢颖 (51)Int.Cl. A01H 4/00(200。

2、6.01) A01G 31/00(2018.01) A01G 7/06(2006.01) C05G 3/00(2006.01) C05G 3/02(2006.01) (56)对比文件 CN 106258971 A,2017.01.04,说明书第5- 18段. CN 102835233 A,2012.12.26,实施例1. CN 102523860 A,2012.07.04,全文. 黄卓忠等.试管苗瓶外生根技术. 广西农业科学 .2007,第38卷(第2期),第124页左栏第一段，右栏第一段， 2.1基质培. 审查员陈佩 (54)发明名称一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法 (57。

3、)摘要本发明公开了一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，包括外植体处理、初始芽诱导培养、继代芽增殖培养、育苗基质准备、继代芽移植和移植后管理；选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于继代培养基中后得到组培继代芽，单个切下生长健壮，高度2.5cm的继代芽移植于育苗基质中，经过移植后管理得到泡桐苗木。本发明方法简单可行，简化了流程，缩短了育苗周期，从初始芽诱导至苗木移植后成活最短45天即可实现，加快了苗木培育的速度，提高了生产效率，。

4、节约了成本，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。权利要求书2页说明书5页 CN 106942063 B 2019.01.18 CN 106942063 B 1.一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，其特征在于：包括外植体处理、初始芽诱导培养、继代芽增殖培养、育苗基质准备、继代芽移植和移植后管理；选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于继代培养基中后得到组培继代芽，单个切下生长健壮，高度2.5cm的继代芽移植于育苗基质中，经过移植后管理得到。

5、泡桐苗木；主要操作步骤如下：（1）外植体处理：选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消毒，然后修剪成茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1% 洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗56遍；再用体积浓度为0.1%氯化汞溶液浸泡外植体5 10min进行消毒，用无菌水清洗56遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动；（2）初始芽诱导培养：将步骤（1）处理后的外植体两端分别剪除12mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；（3）。

6、继代芽增殖培养：将步骤（2）获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，得到组培继代芽；（4）育苗基质准备：将配制好的育苗基质经过杀菌处理后装入规格8 cm8 cm无纺纸育苗容器中；（5）继代芽移植：单个切下生长健壮，高度2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于生根剂后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质；（6）移植后管理：在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚，再盖上遮荫度为7585%的遮阴网，每3天淋施一次激素溶液，直至完全生根为止；移植1015天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分35次，使育苗床。

7、湿度保持75%以上；移植1821天后每半月喷洒一次600800倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度15002500 lx，光照1214h/d；步骤（1）中所述的茎段长3.05.0 cm，至少带有一个腋芽；步骤（2）中所述的诱导培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA 2.04.0 mg/ L + IBA 1.02.0 mg/L +蔗糖30000 mg/L + 琼脂3000 mg/L；所述的改良MS培养基的组成为： KNO3 1600 mg/L； NH4NO3 1500 mg/L； CaCl22H。

8、2O 220 mg/L； MgSO47H2O 370 mg/L； KH2PO3 100 mg/L； Ca(NO3)2 450 mg/L； MnSO44 H2O 25 mg/L； ZnSO47 H2O 10 mg/L； CuSO45 H2O 0.025 mg/L； H3BO3 6.2 mg/L； Na2MoO42 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L；步骤（3）中所述的继代培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA 4.56.5 mg/ L + 。

9、IBA 0.51.0 mg/L +IAA 0.51.0mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L；所述的改良MS培养基的组成为： KNO3 1600 mg/L； NH4NO3 1500 mg/L； CaCl22H2O 220 mg/L； MgSO47H2O 370 mg/L； KH2PO3 100 mg/L； Ca(NO3)2 450 mg/L； MnSO44 H2O 25 mg/L； ZnSO47 H2O 10 mg/L； CuSO45 H2O 0.025 mg/L； H3BO3 6.2 mg/L； Na2MoO42 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0。

10、.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L；步骤（4）所述的育苗基质是泥炭和珍珠岩按体积比为1 1混合，并在其混合物中加入质权利要求书 1/2 页 2 CN 106942063 B 2 量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀；步骤（6）所述的激素溶液为200400 mg/L ABT 6#溶液。 2.根据权利要求1所述的一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，其特征在于：所述步骤（2）、（3）的培养条件均为：温度28，光照15002000 lx，。

11、光照1214h/d。 3.根据权利要求1所述的一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，其特征在于：步骤（4）对育苗基质的杀菌处理方法是将体积分数为50%多菌灵600800倍溶液与育苗基质拌匀，湿度成团却不滴水。 4.根据权利要求1所述的一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，其特征在于：步骤（5）所述的生根剂为200400 mg/L ABT 6#溶液与滑石粉混合而成的匀浆。权利要求书 2/2 页 3 CN 106942063 B 3 一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法技术领域 0001 本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种结合瓶外生根技术的泡桐组。

12、培快繁方法。背景技术 0002 泡桐为玄参科(Scrophulariaceae)泡桐属(Paulownia)物种的统称落叶乔木，适生范围甚广，我国23个省、市、自治区都有栽植，是我国人工栽培历史最悠久的树种之一。泡桐木材具有质轻、耐火性强、不易劈裂、不易变形、以及隔潮、耐腐、易干燥和声学性能好等特点，是重要的速生用材树种；成树开花多、花冠大、树冠优美，抗污染和空气净化能力较强，是城市和近郊重要的绿化和美化树种；泡桐叶、花、木材有消炎、止咳、利尿、降压等药用功效，具有较高的生态、社会和经济效益。 0003 上世纪七、八十年代，。

13、泡桐常用繁殖方式是实生繁育，收集种子播种育苗，但种子萌芽率低，而且实生繁殖由于个体间分化严重，易造成林分品种混杂，低产株比例大，株间差异大等现象；后来，泡桐主要繁育方式为根插育苗，但这种繁殖方法根段不易采集，根萌芽时间不一致，苗木生长参差不齐，繁殖系数较低，且苗木易携带病毒，难以进行规模化生产；因此，为保证优树性状能稳定遗传，采用组织培养方式进行无性繁殖，可以在短时间内获得大量优良脱毒苗木，但传统的组培快繁技术要经过初始芽诱导、继代增殖、瓶内生根、炼苗和移栽等诸多工序，过程复杂，成本较高。发明内容 0004 本发明的目的在于针对传统组。

14、培快繁技术中过程复杂，周期长，成本高等不足，提供一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，建立一种高效的组培快繁体系，从而提高苗木繁殖速度，降低泡桐组培苗的培育成本。 0005 为了实现上述目的，本发明的技术方案如下： 0006 一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，包括外植体处理、初始芽诱导培养、继代芽增殖培养、育苗基质准备、继代芽移植和移植后管理；选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于继代培养基中后得到组培继代芽，单个切下生长健壮，高度2。

15、.5cm的继代芽移植于育苗基质中，经过移植后管理得到泡桐苗木；主要操作步骤如下： 0007 （1）外植体处理：选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消毒，然后修剪成茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗56遍；再用体积浓度为0.1%氯化汞溶液浸泡外植体510min进行消毒，用无菌水清洗56遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动； 0008 （2）初始芽诱导培养：将步骤（1）处理后。

16、的外植体两端分别剪除12mm，接种到诱导说明书 1/5 页 4 CN 106942063 B 4 培养基上诱导初始芽； 0009 （3）继代芽增殖培养：将步骤（2）获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，得到组培继代芽； 0010 （4）育苗基质准备：将配制好的育苗基质经过杀菌处理后装入规格8 cm8 cm无纺纸育苗容器中； 0011 （5）继代芽移植：单个切下生长健壮，高度2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于生根剂后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质； 0012 （6）移植后管理：在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜。

17、搭建小拱棚，再盖上遮荫度为7585%的遮阴网，每3天淋施一次激素溶液，直至完全生根为止；移植1015天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分35次，使育苗床湿度保持75%以上；移植1821 天后每半月喷洒一次600800倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度15002500 lx，光照1214h/d。 0013 以上步骤（1）中所述的茎段长3.05.0 cm，至少带有一个腋芽。 0014 以上步骤（2）中所述的诱导培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA 2.0 4.0 mg/L + IB。

18、A 1.02.0 mg/L +蔗糖30000 mg/L + 琼脂3000 mg/L。 0015 以上步骤（3）中所述的继代培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA 4.5 6.5 mg/L + IBA 0.51.0 mg/L +IAA 0.51.0mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/ L。 0016 以上所述的改良MS培养基的组成为： KNO3 1600 mg/L； NH4NO3 1500 mg/L； CaCl2 2H2O 220 mg/L； MgSO47H2O 370 mg/L； KH2PO3 100 mg/L； Ca(NO3)2 450 mg/L。

19、； MnSO44 H2O 25 mg/L； ZnSO47 H2O 10 mg/L； CuSO45 H2O 0.025 mg/L； H3BO3 6.2 mg/L； Na2MoO42 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L。 0017 以上步骤（2）、（3）的培养条件均为：温度28，光照15002000 lx，光照1214h/ d。 0018 以上步骤（4）所述的育苗基质是泥炭和珍珠岩按体积比为1 1混合，并在其混合物中加入质量分数为0.5%的辛。

20、硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀。 0019 以上步骤（4）对育苗基质的杀菌处理方法是将体积分数为50%多菌灵600800倍溶液与育苗基质拌匀，湿度成团却不滴水。 0020 以上步骤（5）所述的生根剂为200400 mg/L ABT 6#溶液与滑石粉混合而成的匀浆。 0021 以上步骤（6）所述的激素溶液为200400 mg/L ABT 6#溶液。 0022 相当于现有技术，本发明具有的优点及有益效果如下： 0023 （1）本发明以改良MS作为基本培养基，辅以不同浓度的激素溶液对泡桐进行诱导和增殖培养，组培各阶段的培养基配方合理，更适应泡桐的生长，。

21、诱导率高达85%以上，增殖系数810。 0024 （2）本发明在育苗基质中加入辛硫酸颗粒剂和硫酸亚铁对土壤进行消毒，能够更有效地防治地下病虫害，避免由于育苗基质携带病毒导致泡桐感染病毒，提高成活率。 0025 （3）本发明以无纺纸作为育苗容器，既透气透水透根，又便于运输，且苗木造林时说明书 2/5 页 5 CN 106942063 B 5 可直接连容器栽植，避免了根系损伤，造林成活率高。 0026 （4）本发明在移植后瓶外生根阶段淋施ABT 6#激素溶液，能够促进泡桐快速生根，且使苗木更加健壮，移植1520天生根，根系数量可达510条，生根成活率高达。

22、98%以上。 0027 （5）本发明是移栽后进行生根，避免了传统组培快繁技术中移栽时对瓶内生根苗根系的损伤，提高了成活率。 0028 （6）本发明省去传统瓶内生根和炼苗等程序，方法简单可行，简化了流程，缩短了育苗周期，从初始芽诱导至苗木移植后成活最短45天即可实现，加快了苗木培育的速度，提高了生产效率，节约了成本，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。具体实施方式 0029 下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。 0030 实施例1： 0031 选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面。

23、消毒，然后修剪成长3.0 cm，至少带有一个腋芽的茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗56遍；再用体积浓度为0.1%氯化汞溶液浸泡外植体510min进行消毒，用无菌水清洗56遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动。 0032 将处理后的外植体两端分别剪除12mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；诱导培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA 2. 0 mg/L + IBA 1.0 mg/L +蔗糖30000 。

24、mg/L + 琼脂3000 mg/L，并置于温度28，光照1500 lx，光照14h/d的条件下进行初始芽诱导培养。接种5天后，初始芽开始萌动，诱导率为90%。 0033 将获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，继代培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA 4.5 mg/L + IBA 0.5 mg/L +IAA 0.5mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L，并置于温度28，光照1500 lx，光照12 h/d的条件下进行继代芽增殖培养。接种30天后，芽增殖成健壮的丛芽，增殖系数为8。 0034 用泥炭和珍珠岩按体积。

25、比为1 1混合，并在其混合物中加入质量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀配成育苗基质。将体积分数为50%多菌灵600 倍溶液与育苗基质拌匀，进行杀菌处理，湿度成团却不滴水。将经过杀菌处理后的育苗基质装入规格8 cm8 cm无纺纸育苗容器中。 0035 单个切下生长健壮，高度2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于用200 mg/L ABT 6#溶液与滑石粉混合而成的匀浆后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质。移植15天开始生根，根系数量可达510条，生根成活率为98%。 0036 在摆有育苗容器的育苗床上方用。

26、塑料薄膜搭建小拱棚，再盖上遮荫度为75%的遮阴网，每3天淋施一次200 mg/L ABT 6#溶液，直至完全生根为止；移植10天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分35次，使育苗床湿度保持75%以上；移植18天后每半月喷洒一次600倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度1500 lx，光照14h/d。说明书 3/5 页 6 CN 106942063 B 6 0037 以上所述的改良MS培养基的组成为： KNO3 1600 mg/L； NH4NO3 1500 mg/L； CaCl2 2H2O 220 m。

27、g/L； MgSO47H2O 370 mg/L； KH2PO3 100 mg/L； Ca(NO3)2 450 mg/L； MnSO44 H2O 25 mg/L； ZnSO47 H2O 10 mg/L； CuSO45 H2O 0.025 mg/L； H3BO3 6.2 mg/L； Na2MoO42 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L。 0038 实施例2： 0039 选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消毒，然后修剪成长3。

28、.545 cm，至少带有一个腋芽的茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗56遍；再用体积浓度为 0.1%氯化汞溶液浸泡外植体510min进行消毒，用无菌水清洗56遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动。 0040 将处理后的外植体两端分别剪除12mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；诱导培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA 3.0 mg/L + IBA 1.5 mg/L +蔗糖30000 mg/L + 琼脂30。

29、00 mg/L，并置于温度28，光照2000 lx，光照12 h/d的条件下进行初始芽诱导培养。接种5天后，初始芽开始萌动，诱导率为85%。 0041 将获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，继代培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA 5.5 mg/L + IBA 0.5 mg/L +IAA1.0mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L，并置于温度28，光照1500 lx，光照12 h/d的条件下进行继代芽增殖培养。接种25天后，芽增殖成健壮的丛芽，增殖系数为10。 0042 用泥炭和珍珠岩按体积比为1 1混合，并。

30、在其混合物中加入质量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀配成育苗基质。将体积分数为50%多菌灵600 倍溶液与育苗基质拌匀，进行杀菌处理，湿度成团却不滴水。将经过杀菌处理后的育苗基质装入规格8 cm8 cm无纺纸育苗容器中。 0043 单个切下生长健壮，高度2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于用300 mg/L ABT 6#溶液与滑石粉混合而成的匀浆后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质。移植15天生根，根系数量可达510条，生根成活率为99%。 0044 在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚，再。

31、盖上遮荫度为80%的遮阴网，每3天淋施一次300 mg/L ABT 6#溶液，直至完全生根为止；移植12天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分35次，使育苗床湿度保持75%以上；移植20天后每半月喷洒一次800倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度2000 lx，光照12 h/d。 0045 以上所述的改良MS培养基的组成为： KNO3 1600 mg/L； NH4NO3 1500 mg/L； CaCl2 2H2O 220 mg/L； MgSO47H2O 370 mg/L； KH2PO3 100 mg/L；。

32、Ca(NO3)2 450 mg/L； MnSO44 H2O 25 mg/L； ZnSO47 H2O 10 mg/L； CuSO45 H2O 0.025 mg/L； H3BO3 6.2 mg/L； Na2MoO42 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L。 0046 实施例3： 0047 选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消说明书 4/5 页 7 CN 106942063 B 7 毒，然后修剪成长4.55.0 cm，至。

33、少带有一个腋芽的茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗56遍；再用体积浓度为 0.1%氯化汞溶液浸泡外植体510min进行消毒，用无菌水清洗56遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动。 0048 将处理后的外植体两端分别剪除12mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；诱导培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA4.0 mg/L + IBA 2.0 mg/L +蔗糖30000 mg/L + 琼脂3000 mg/L，并置。

34、于温度28，光照2000 lx，光照12 h/d的条件下进行初始芽诱导培养。接种5天后，初始芽开始萌动，诱导率高于88%。 0049 将获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，继代培养基的原料组分和质量含量为改良MS + 6-BA 6.5 mg/L + IBA 1.0 mg/L +IAA 1.0mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L，并置于温度28，光照2000 lx，光照12 h/d的条件下进行继代芽增殖培养。接种27天后，芽增殖成健壮的丛芽，增殖系数为9.5。 0050 用泥炭和珍珠岩按体积比为1 1混合，并在其混合物中加入。

35、质量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀配成育苗基质。将体积分数为50%多菌灵800 倍溶液与育苗基质拌匀，进行杀菌处理，湿度成团却不滴水。将经过杀菌处理后的育苗基质装入规格8 cm8 cm无纺纸育苗容器中。 0051 单个切下生长健壮，高度2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于用400 mg/L ABT 6#溶液与滑石粉混合而成的匀浆后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质。移植17天生根，根系数量可达510条，生根成活率为98.5%。 0052 在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚，再盖上遮荫度为。

36、85%的遮阴网，每3天淋施一次400 mg/L ABT 6#溶液，直至完全生根为止；移植15天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分35次，使育苗床湿度保持75%以上；移植21天后每半月喷洒一次800倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度2500 lx，光照12 h/d。 0053 以上所述的改良MS培养基的组成为： KNO3 1600 mg/L； NH4NO3 1500 mg/L； CaCl2 2H2O 220 mg/L； MgSO47H2O 370 mg/L； KH2PO3 100 mg/L； Ca(NO3)2 450 mg/L； MnSO44 H2O 25 mg/L； ZnSO47 H2O 10 mg/L； CuSO45 H2O 0.025 mg/L； H3BO3 6.2 mg/L； Na2MoO42 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L。说明书 5/5 页 8 CN 106942063 B 8 。

摘要
申请专利号：	CN201710305685.4	申请日：	20170503
公开号：	CN106942063B	公开日：	20190118
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	A01H4/00,A01G31/00,A01G7/06,C05G3/00,C05G3/02	主分类号：	A01H4/00,A01G31/00,A01G7/06,C05G3/00,C05G3/02
申请人：	广西绿树农林科技有限公司
发明人：	邹明洋,陈政璋
地址：	530000 广西壮族自治区南宁市西乡塘区科德西路9号金乐福花园2号楼3单元505号
优先权：	CN201710305685A
专利代理机构：	广西南宁汇博专利代理有限公司	代理人：	卢颖
PDF完整版下载：	PDF下载

内容摘要

本发明公开了一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，包括外植体处理、初始芽诱导培养、继代芽增殖培养、育苗基质准备、继代芽移植和移植后管理；选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于继代培养基中后得到组培继代芽，单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽移植于育苗基质中，经过移植后管理得到泡桐苗木。本发明方法简单可行，简化了流程，缩短了育苗周期，从初始芽诱导至苗木移植后成活最短45天即可实现，加快了苗木培育的速度，提高了生产效率，节约了成本，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

权利要求书

1.一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，其特征在于：包括外植体处理、初始芽诱导培养、继代芽增殖培养、育苗基质准备、继代芽移植和移植后管理；选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于继代培养基中后得到组培继代芽，单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽移植于育苗基质中，经过移植后管理得到泡桐苗木；主要操作步骤如下：（1）外植体处理：选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消毒，然后修剪成茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗5~6遍；再用体积浓度为0.1%氯化汞溶液浸泡外植体5~10min进行消毒，用无菌水清洗5~6遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动；（2）初始芽诱导培养：将步骤（1）处理后的外植体两端分别剪除1~2mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；（3）继代芽增殖培养：将步骤（2）获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，得到组培继代芽；（4）育苗基质准备：将配制好的育苗基质经过杀菌处理后装入规格8cm×8cm无纺纸育苗容器中；（5）继代芽移植：单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于生根剂后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质；（6）移植后管理：在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚，再盖上遮荫度为75～85%的遮阴网，每3天淋施一次激素溶液，直至完全生根为止；移植10～15天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分3～5次，使育苗床湿度保持75%以上；移植18～21天后每半月喷洒一次600～800倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度1500～2500lx，光照12～14h/d；步骤（1）中所述的茎段长3.0～5.0cm，至少带有一个腋芽；步骤（2）中所述的诱导培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS+6-BA2.0~4.0mg/L+IBA1.0~2.0mg/L+蔗糖30000mg/L+琼脂3000mg/L；所述的改良MS培养基的组成为：KNO1600mg/L；NHNO1500mg/L；CaCl·2HO220mg/L；MgSO·7HO370mg/L；KHPO100mg/L；Ca(NO)450mg/L；MnSO·4HO25mg/L；ZnSO·7HO10mg/L；CuSO·5HO0.025mg/L；HBO6.2mg/L；NaMoO·2HO0.025mg/L；维生素B10.2mg/L；维生素B60.2mg/L；烟酸0.5mg/L；甘氨酸2.0mg/L；肌醇100mg/L；步骤（3）中所述的继代培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS+6-BA4.5~6.5mg/L+IBA0.5~1.0mg/L+IAA0.5~1.0mg/L+蔗糖30000mg/L+琼脂3500mg/L；所述的改良MS培养基的组成为：KNO1600mg/L；NHNO1500mg/L；CaCl·2HO220mg/L；MgSO·7HO370mg/L；KHPO100mg/L；Ca(NO)450mg/L；MnSO·4HO25mg/L；ZnSO·7HO10mg/L；CuSO·5HO0.025mg/L；HBO6.2mg/L；NaMoO·2HO0.025mg/L；维生素B10.2mg/L；维生素B60.2mg/L；烟酸0.5mg/L；甘氨酸2.0mg/L；肌醇100mg/L；步骤（4）所述的育苗基质是泥炭和珍珠岩按体积比为1∶1混合，并在其混合物中加入质量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀；步骤（6）所述的激素溶液为200～400mg/LABT6溶液。 2.根据权利要求1所述的一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，其特征在于：所述步骤（2）、（3）的培养条件均为：温度28℃，光照1500～2000lx，光照12～14h/d。 3.根据权利要求1所述的一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，其特征在于：步骤（4）对育苗基质的杀菌处理方法是将体积分数为50%多菌灵600～800倍溶液与育苗基质拌匀，湿度成团却不滴水。 4.根据权利要求1所述的一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，其特征在于：步骤（5）所述的生根剂为200～400mg/LABT6溶液与滑石粉混合而成的匀浆。

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法。

背景技术

泡桐为玄参科(Scrophulariaceae)泡桐属(Paulownia)物种的统称落叶乔木，适生范围甚广，我国23个省、市、自治区都有栽植，是我国人工栽培历史最悠久的树种之一。泡桐木材具有质轻、耐火性强、不易劈裂、不易变形、以及隔潮、耐腐、易干燥和声学性能好等特点，是重要的速生用材树种；成树开花多、花冠大、树冠优美，抗污染和空气净化能力较强，是城市和近郊重要的绿化和美化树种；泡桐叶、花、木材有消炎、止咳、利尿、降压等药用功效，具有较高的生态、社会和经济效益。

上世纪七、八十年代，泡桐常用繁殖方式是实生繁育，收集种子播种育苗，但种子萌芽率低，而且实生繁殖由于个体间分化严重，易造成林分品种混杂，低产株比例大，株间差异大等现象；后来，泡桐主要繁育方式为根插育苗，但这种繁殖方法根段不易采集，根萌芽时间不一致，苗木生长参差不齐，繁殖系数较低，且苗木易携带病毒，难以进行规模化生产；因此，为保证优树性状能稳定遗传，采用组织培养方式进行无性繁殖，可以在短时间内获得大量优良脱毒苗木，但传统的组培快繁技术要经过初始芽诱导、继代增殖、瓶内生根、炼苗和移栽等诸多工序，过程复杂，成本较高。

发明内容

本发明的目的在于针对传统组培快繁技术中过程复杂，周期长，成本高等不足，提供一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，建立一种高效的组培快繁体系，从而提高苗木繁殖速度，降低泡桐组培苗的培育成本。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法，包括外植体处理、初始芽诱导培养、继代芽增殖培养、育苗基质准备、继代芽移植和移植后管理；选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于继代培养基中后得到组培继代芽，单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽移植于育苗基质中，经过移植后管理得到泡桐苗木；主要操作步骤如下：

（1）外植体处理：选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消毒，然后修剪成茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗5~6遍；再用体积浓度为0.1%氯化汞溶液浸泡外植体5~10min进行消毒，用无菌水清洗5~6遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动；

（2）初始芽诱导培养：将步骤（1）处理后的外植体两端分别剪除1~2mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；

（3）继代芽增殖培养：将步骤（2）获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，得到组培继代芽；

（4）育苗基质准备：将配制好的育苗基质经过杀菌处理后装入规格8 cm×8 cm无纺纸育苗容器中；

（5）继代芽移植：单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于生根剂后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质；

（6）移植后管理：在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚，再盖上遮荫度为75～85%的遮阴网，每3天淋施一次激素溶液，直至完全生根为止；移植10～15天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分3～5次，使育苗床湿度保持75%以上；移植18～21天后每半月喷洒一次600～800倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度1500～2500 lx，光照12～14h/d。

以上步骤（1）中所述的茎段长3.0～5.0 cm，至少带有一个腋芽。

以上步骤（2）中所述的诱导培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6-BA 2.0~4.0 mg/L + IBA 1.0~2.0 mg/L +蔗糖30000 mg/L + 琼脂3000 mg/L。

以上步骤（3）中所述的继代培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6-BA 4.5~6.5 mg/L + IBA 0.5~1.0 mg/L +IAA 0.5~1.0mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L。

以上所述的改良MS培养基的组成为：KNO3 1600 mg/L；NH4NO3 1500 mg/L；CaCl2·2H2O 220 mg/L；MgSO4·7H2O 370 mg/L；KH2PO3 100 mg/L；Ca(NO3)2 450 mg/L；MnSO4·4 H2O 25 mg/L；ZnSO4·7 H2O 10 mg/L；CuSO4·5 H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L。

以上步骤（2）、（3）的培养条件均为：温度28℃，光照1500～2000 lx，光照12～14h/d。

以上步骤（4）所述的育苗基质是泥炭和珍珠岩按体积比为1∶1混合，并在其混合物中加入质量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀。

以上步骤（4）对育苗基质的杀菌处理方法是将体积分数为50%多菌灵600～800倍溶液与育苗基质拌匀，湿度成团却不滴水。

以上步骤（5）所述的生根剂为200～400 mg/L ABT 6#溶液与滑石粉混合而成的匀浆。

以上步骤（6）所述的激素溶液为200～400 mg/L ABT 6#溶液。

相当于现有技术，本发明具有的优点及有益效果如下：

（1）本发明以改良MS作为基本培养基，辅以不同浓度的激素溶液对泡桐进行诱导和增殖培养，组培各阶段的培养基配方合理，更适应泡桐的生长，诱导率高达85%以上，增殖系数8~10。

（2）本发明在育苗基质中加入辛硫酸颗粒剂和硫酸亚铁对土壤进行消毒，能够更有效地防治地下病虫害，避免由于育苗基质携带病毒导致泡桐感染病毒，提高成活率。

（3）本发明以无纺纸作为育苗容器，既透气透水透根，又便于运输，且苗木造林时可直接连容器栽植，避免了根系损伤，造林成活率高。

（4）本发明在移植后瓶外生根阶段淋施ABT 6#激素溶液，能够促进泡桐快速生根，且使苗木更加健壮，移植15~20天生根，根系数量可达5~10条，生根成活率高达98%以上。

（5）本发明是移栽后进行生根，避免了传统组培快繁技术中移栽时对瓶内生根苗根系的损伤，提高了成活率。

（6）本发明省去传统瓶内生根和炼苗等程序，方法简单可行，简化了流程，缩短了育苗周期，从初始芽诱导至苗木移植后成活最短45天即可实现，加快了苗木培育的速度，提高了生产效率，节约了成本，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

具体实施方式

下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：

选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消毒，然后修剪成长3.0 cm，至少带有一个腋芽的茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗5~6遍；再用体积浓度为0.1%氯化汞溶液浸泡外植体5~10min进行消毒，用无菌水清洗5~6遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动。

将处理后的外植体两端分别剪除1~2mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；诱导培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6-BA 2. 0 mg/L + IBA 1.0 mg/L +蔗糖30000 mg/L + 琼脂3000 mg/L，并置于温度28℃，光照1500 lx，光照14h/d的条件下进行初始芽诱导培养。接种5天后，初始芽开始萌动，诱导率为90%。

将获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，继代培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6-BA 4.5 mg/L + IBA 0.5 mg/L +IAA 0.5mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L，并置于温度28℃，光照1500 lx，光照12 h/d的条件下进行继代芽增殖培养。接种30天后，芽增殖成健壮的丛芽，增殖系数为8。

用泥炭和珍珠岩按体积比为1∶1混合，并在其混合物中加入质量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀配成育苗基质。将体积分数为50%多菌灵600倍溶液与育苗基质拌匀，进行杀菌处理，湿度成团却不滴水。将经过杀菌处理后的育苗基质装入规格8 cm×8 cm无纺纸育苗容器中。

单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于用200 mg/L ABT 6#溶液与滑石粉混合而成的匀浆后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质。移植15天开始生根，根系数量可达5~10条，生根成活率为98%。

在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚，再盖上遮荫度为75%的遮阴网，每3天淋施一次200 mg/L ABT 6#溶液，直至完全生根为止；移植10天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分3～5次，使育苗床湿度保持75%以上；移植18天后每半月喷洒一次600倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度1500 lx，光照14h/d。

以上所述的改良MS培养基的组成为：KNO3 1600 mg/L；NH4NO3 1500 mg/L；CaCl2·2H2O 220 mg/L；MgSO4·7H2O 370 mg/L；KH2PO3 100 mg/L；Ca(NO3)2 450 mg/L；MnSO4·4 H2O 25 mg/L；ZnSO4·7 H2O 10 mg/L；CuSO4·5 H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L。

实施例2：

选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消毒，然后修剪成长3.5～4..5 cm，至少带有一个腋芽的茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗5~6遍；再用体积浓度为0.1%氯化汞溶液浸泡外植体5~10min进行消毒，用无菌水清洗5~6遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动。

将处理后的外植体两端分别剪除1~2mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；诱导培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6-BA 3.0 mg/L + IBA 1.5 mg/L +蔗糖30000 mg/L + 琼脂3000 mg/L，并置于温度28℃，光照2000 lx，光照12 h/d的条件下进行初始芽诱导培养。接种5天后，初始芽开始萌动，诱导率为85%。

将获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，继代培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6-BA 5.5 mg/L + IBA 0.5 mg/L +IAA1.0mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L，并置于温度28℃，光照1500 lx，光照12 h/d的条件下进行继代芽增殖培养。接种25天后，芽增殖成健壮的丛芽，增殖系数为10。

用泥炭和珍珠岩按体积比为1∶1混合，并在其混合物中加入质量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀配成育苗基质。将体积分数为50%多菌灵600倍溶液与育苗基质拌匀，进行杀菌处理，湿度成团却不滴水。将经过杀菌处理后的育苗基质装入规格8 cm×8 cm无纺纸育苗容器中。

单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于用300 mg/L ABT 6#溶液与滑石粉混合而成的匀浆后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质。移植15天生根，根系数量可达5~10条，生根成活率为99%。

在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚，再盖上遮荫度为80%的遮阴网，每3天淋施一次300 mg/L ABT 6#溶液，直至完全生根为止；移植12天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分3～5次，使育苗床湿度保持75%以上；移植20天后每半月喷洒一次800倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度2000 lx，光照12 h/d。

以上所述的改良MS培养基的组成为：KNO3 1600 mg/L；NH4NO3 1500 mg/L；CaCl2·2H2O 220 mg/L；MgSO4·7H2O 370 mg/L；KH2PO3 100 mg/L；Ca(NO3)2 450 mg/L；MnSO4·4 H2O 25 mg/L；ZnSO4·7 H2O 10 mg/L；CuSO4·5 H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L。

实施例3：

选取生长健壮无病虫害的泡桐半木质化枝条，用常规的消毒液对枝条进行表面消毒，然后修剪成长4.5～5.0 cm，至少带有一个腋芽的茎段作为外植体，软纱布轻轻擦洗茎段表面，置于质量浓度为1%洗衣粉溶液浸泡5min，用流水冲洗5min；然后置于超净工作台上，用体积浓度为75%的乙醇溶液对外植体浸泡30s，用无菌水清洗5~6遍；再用体积浓度为0.1%氯化汞溶液浸泡外植体5~10min进行消毒，用无菌水清洗5~6遍；在每一次浸泡期间不断进行搅动。

将处理后的外植体两端分别剪除1~2mm，接种到诱导培养基上诱导初始芽；诱导培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6-BA4.0 mg/L + IBA 2.0 mg/L +蔗糖30000 mg/L + 琼脂3000 mg/L，并置于温度28℃，光照2000 lx，光照12 h/d的条件下进行初始芽诱导培养。接种5天后，初始芽开始萌动，诱导率高于88%。

将获得的初始芽接种于继代培养基上进行增殖培养，继代培养基的原料组分和质量含量为∶改良MS + 6-BA 6.5 mg/L + IBA 1.0 mg/L +IAA 1.0mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L，并置于温度28℃，光照2000 lx，光照12 h/d的条件下进行继代芽增殖培养。接种27天后，芽增殖成健壮的丛芽，增殖系数为9.5。

用泥炭和珍珠岩按体积比为1∶1混合，并在其混合物中加入质量分数为0.5%的辛硫酸颗粒剂和质量分数为0.5%硫酸亚铁，混匀配成育苗基质。将体积分数为50%多菌灵800倍溶液与育苗基质拌匀，进行杀菌处理，湿度成团却不滴水。将经过杀菌处理后的育苗基质装入规格8 cm×8 cm无纺纸育苗容器中。

单个切下生长健壮，高度≥2.5cm的继代芽，用清水洗去培养基，将单芽的切端蘸于用400 mg/L ABT 6#溶液与滑石粉混合而成的匀浆后，移植于育苗容器中，压紧，清水淋透育苗基质。移植17天生根，根系数量可达5~10条，生根成活率为98.5%。

在摆有育苗容器的育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚，再盖上遮荫度为85%的遮阴网，每3天淋施一次400 mg/L ABT 6#溶液，直至完全生根为止；移植15天后选阴天拆除小拱棚；每周用喷雾器补充水分3～5次，使育苗床湿度保持75%以上；移植21天后每半月喷洒一次800倍的50%退菌特；移植25天后每3周喷一次FA旱地龙500倍液的叶面肥；移植后管理期间光照强度2500 lx，光照12 h/d。

以上所述的改良MS培养基的组成为：KNO3 1600 mg/L；NH4NO3 1500 mg/L；CaCl2·2H2O 220 mg/L；MgSO4·7H2O 370 mg/L；KH2PO3 100 mg/L；Ca(NO3)2 450 mg/L；MnSO4·4 H2O 25 mg/L；ZnSO4·7 H2O 10 mg/L；CuSO4·5 H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2 H2O 0.025 mg/L；维生素B1 0.2 mg/L；维生素B6 0.2 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 100 mg/L。