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一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101491199 B (45)授权公告日 2011.01.05 CN 101491199 B *CN101491199B* (21)申请号 200910094173.3 (22)申请日 2009.03.09 A01G 7/00(2006.01) A01G 1/00(2006.01) (73)专利权人云南省烟草科学研究所地址 653100 云南省玉溪市红塔区南祥路中段 14 号 (72)发明人李梅云李永平刘勇卢秀萍高家合 (74)专利代理机构昆明正原专利代理有限责任公司 53100 代理人陈左 CN 1922965 A,2007.03.07, 全。

2、文 . CN 1918959 A,2007.02.28, 全文 . 李惠琴等 . 烟草品种抗黑胫病鉴定方法与抗性指标的探讨 . 植物保护 .1982,( 第 5 期 ),38. (54) 发明名称一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法 (57) 摘要一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，采用历史上烟草黑胫病病害高发区连作烟田作病圃，通过增加田间湿度诱导植株发病，减少了菌株分离保存及培养的复杂操作，其菌株来源于大田，接种用的小种数量、种类理论上说是无限的，多样性、代表性较好，接种条件也是自然控制，故鉴定结果较能准确反映当地当时的实际情况；采用烤烟采收后一次性挖根调查。

3、的方法，大大减少了工作量，节省了成本，结果准确可靠。 (51)Int.Cl. (56)对比文件审查员刘明强 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利权利要求书 1 页说明书 14 页 CN 101491199 B1/1 页 2 1. 一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，包括以下顺序步骤：一、病圃的选择 (1) 选择历史上烟草黑胫病常年流行，发生严重，发病率达 80以上地块； (2) 当地 5 7 月份高温高湿，年平均降雨量大； (3) 连作，自然灌溉条件好，烟草作物种植和田间管理按常规操作和管理；二、烟草作物采收后挖根调查，按国家标准对。

4、鉴定品种进行分级和抗性评价。 2. 根据权利要求 1 所述的烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，其特征在于：烟草作物种植期间，烟苗移栽后补苗和施肥，确保烟苗全部存活 15d 后，开始田间灌水，确保田间沟内明水可见，后期根据各品种需肥状况补肥。权利要求书 CN 101491199 B1/14 页 3 一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法技术领域 0001 本发明属于植物抗病性鉴定技术领域，具体涉及烟草黑胫病抗性的鉴定，特别是涉及一种对烟草黑胫病抗性进行病圃鉴定的方法。背景技术 0002 烟草黑胫病是世界烟草中危害最严重的病害之一，同时也是我国烟草主要病害，可以危。

5、害烤烟、晾烟、晒烟、白肋烟、香料烟等所有的栽培烟草。美国北卡罗莱纳州每年因烟草黑胫病损失的烟叶约占总产量的 1 2， 1995 年和 1996 年两年间因黑胫病造成的损失就达 3610 万美元，占病害总损失的 35.13，居各病害之首。该病在我国分布范围很广，除黑龙江省尚未发现之外，其余各植烟省区 ( 含台湾省 ) 均有发生。平均发病率为 5 12，严重田块发病率高达 75，甚至造成绝收。据不完全统计，我国烟草黑胫病平均每年发病面积高达 76373hm2，产量损失 2869.26 万千克，产值损失超过 1.23 亿元人民币。生产实践表明，防治黑胫病最经济、。

6、有效、环保的措施就是选育抗病品种，抗性鉴定自然成为抗源挖掘利用、抗病育种、抗性监测等工作中重要的一环。 0003 作物抗病育种有别于其他农艺性状的选择，抗病性的表型是作物与病原物在一定的环境条件下互作的表现。与农艺性状的表型比较，作物抗病性是两种生物的互作，因此，抗病性的表现则以病原物存在为前提，同时环境条件又必须满足两种生物生长发育。烟草黑胫病育种和抗源的筛选评价都必须在黑胫病生态系的选择压中选育或检验，否则，进行抗黑胫病育种是盲目的、低效的。 0004 现有的烟草抗性鉴定方法主要有温室苗期鉴定接种法和病圃活体菌株人工接种鉴定法。苗期鉴定法通常采用游动孢子。

7、或菌丝体悬浮液浸根接种，但由于各供试菌株之间产生游动孢子或菌丝体的数量差异较大，这些方法的接菌量不易控制，试验操作复杂，分级标准不易掌握，且易受游动孢子或菌丝体的浓度及游动孢子的游动时间、生活力和侵入能力等因素的影响。利用该方法鉴定的结果与田间抗性差异大，不能准确反映品种的抗病性。病圃活体菌株人工接种鉴定是目前常用的鉴定方法。目前现有鉴定方法的缺点是接种用菌株的收集、保存与合理选择是长期、连续、操作技术较高、成本较大的工作，并且接种用的小种数量、种类的多样性与田间试验方法相比始终是有限的。且以前的病害调查方法按照抗病性分级标准自然发病于病发初期、盛。

8、期和未期各调查一次，若人工接种则于接种后第 20 天、 40 天、 60 天各调查一次。每次均应调查各品种全部植株。由于烟草黑胫病发病部位主要在茎基部，调查起来有些困难。发明内容 0005 本发明的目的在于针对现有技术存在的不足，提供一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，采用历年病害高发区连作烟田作病圃，通过增加田间湿度为植株发病提供必要条件，减少了菌株分离保存及培养的复杂操作，让需要鉴定的品种在黑胫病生态系的选择压中选育或检验，采用烤烟采收后一次性挖根调查的方法，鉴定结果准确，并能准确反映当地说明书 CN 101491199 B2/14 页 4 当时的实际情况。

9、，成本低、操作简便易行。 0006 本发明的目的通过以下技术方案实现：一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，包括以下顺序步骤： 0007 一、病圃的选择 0008 (1)、选择历史上烟草黑胫病常年流行，发生严重，发病率达 80以上地块； 0009 (2)、当地 5 7 月份高温高湿，年平均降雨量大； 0010 (3)、连作，自然灌溉条件好，烟草作物种植和管理水平一致，按常规操作和管理。 0011 二、田间管理 0012 其他农事操作按常规管理。烟草作物种植期间，烟苗移栽后补苗、施肥。确保烟苗全部存活 15d 后，开始田间灌水，确保田间沟内明水可见，。

10、后期根据各品种需肥状况补肥。 0013 三、病害调查与鉴定 0014 烤烟采收后挖根调查，按国家标准对鉴定品种进行分级和抗性评价。 0015 本发明率先提出了一种具有实用价值的烟草黑胫病圃鉴定方法，实现了不用人工接种，在自然条件下有效鉴定品种抗性。通过提供有利条件诱发病害发生，减少繁杂的菌种保存培养、接种体制定与接种等工作，其菌株来源于大田，接种用的小种数量、种类理论上说是无限的，多样性、代表性较好，接种条件也是自然控制，故鉴定结果较能准确反映当地当时的实际情况；采用烤烟采收后一次性挖根调查的方法，大大减少了工作量，节省了成本，鉴定结果准确可靠，。

11、并能准确反映当地当时的实际情况，具有成本低、操作简便易行的特点，是一种较为经济实用的方法，具有良好的市场应用前景。具体实施方式 0016 实施例 1 ： 0017 1.1 田间自然诱发病圃的选址与建立 0018 有利于发病、发病稳定的地理生态环境是病圃的基础。病菌以厚垣孢子和休眠菌丝体在病株残体、土壤、粪肥中越冬，可以存活 3 年左右。带菌的土壤、类肥、灌溉水及病苗是烟草黑胫病的主要初侵染源。病菌借风雨、灌溉水、农事操作等进行重复再侵染，使病害越来越重，进而蔓及全田。烟草黑胫病菌主要集中在距土表下 0 5cm 的土层中活动，通过伤口或直接侵入，侵染。

12、部位主要是茎基部，感病阶段主要在现蕾前。高温高湿有利于病害发生，而湿度是流行的关键因素。在温度 24 32，相对湿度 80以上 3 5d，田间就会出现一个发病高峰，湿度越大，发病愈快愈重。 0019 1.1.1 病圃的地理及生态要求： 0020 根据黑胫病发生的最适生态条件及其他因素，确立如下病圃目标：历史上黑胫病常年流行，发生严重； 5 7 月份高温高湿，年平均降雨量大；病圃面积在 2 3 亩左右，连作，自然灌溉条件好，作物种植和管理水平一致；交通方便。 0021 1.1.2 选址过程 0022 1.1.2.1 被选区黑胫病史及主要气象资料调。

13、研 0023 根据选址目标，确立昆明、玉溪作为被选目的区。 0024 1.1.2.2 现场考察 0025 2005 年 5 月至 7 月正值烟草黑胫病发病高峰期，先后考察了昆明草甸、昆明施甸、说明书 CN 101491199 B3/14 页 5 玉溪市红塔区、玉溪江川、玉溪澄江、玉溪华宁等地，了解了当地历年发病情况，在病害高发区采集了黑胫病标样，并记载地名，拍摄了照片。 0026 1.1.2.3 选址的初步确定 0027 根据选址目标，确立玉溪市江川县雄关镇、玉溪市红塔区研和镇烟科所试验基地、昆明市寻甸县科技推广站试验基地有 3 地块是黑胫病历年常发区，发。

14、病率达 80以上，为连作田。 0028 被选区的地理位置及气象资料如下： 0029 玉溪市江川县雄关镇地理位置：海拔 1932 米，北纬 24 20 ，北纬 30，年均气温 16.7，年降雨量 749.2 毫米；玉溪市红塔区研和镇烟科所试验基地试验田地理位置： N ： 24 14.382 ， E ： 102 30.024 ，海拔 1635m，年平均气温 16-17，年降雨量 880 900 毫米；昆明市寻甸县科技推广站试验基地试验田地理位置 N ： 25 30.759 ， E ： 103 15.910 ，海拔 1878m，年均气温 14.7，年降雨量。

15、 1352.2 毫米。 0030 1.1.3 病圃的检验与建立，试验验证： 0031 1 材料与方法 0032 1.1 供试品种 0033 玉溪研和与玉溪江川有 18 个品种，其分别为 L8、 NC1071、 N.nesophila、 N.nudicaudis、 N.plumbaginifolia、 G28、 K326、 NC95、 MD609、小黄金 1025、革新三号、金星 6007、红大、 N.stocktonii、落地黄、 Barley37、 Barley21、筑波 1 号。 0034 昆明寻甸点共有 13 个品种，其分别为 L8、 NC。

16、1071、 N.nesophila、 N.nudicaudis、 N.Plumbaginifolia、 G28、 K326、 NC95、 MD609、 1025、革新三号、金星 6007、红大。 0035 以云南品种 K326 为高抗对照品种，红大为感病对照品种。 0036 1.2 试验测定方法 0037 玉溪研和：在云南省烟草科学研究所研和试验基地进行试验测定。利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病。小区随机排列，三次重复，每品种每重复种植一行，每行 35 株。 0038 田间布置图 0039 0040 昆明寻甸点：在昆明寻甸科技推广站试验基地进行试验测定， N ：。

17、25 30.759 ， E ： 103 15.910 ，海拔： 1878m。利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病。小区随机排列，三次重复，每品种每重复种植一行，每行 20 株。 0041 田间布置图 0042 说明书 CN 101491199 B4/14 页 6 0043 玉溪江川：利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病。小区随机排列，三次重复，每品种每重复种植一行，每行 25 株。 0044 田间布置图 0045 0046 栽培管理常规漂浮育苗、适龄移栽，烟苗成活后田间多浇水，保证田间湿度，施肥按常规管理。植株生长期均不施用杀菌剂，虫害管理与大田管。

18、理相同。 0047 病害严重度分级应符合 YC/T 39 的规定。自然发病于病发初期、盛期和未期各调查一次，每次均应调查各品种全部植株，并计算各品种的病株率、病情指数，然后以病情指数为主要依据评定各品种的抗病能力。 0048 病害严重度分级按中华人民共和国烟草行业标准 YC/T39 的规定。抗性评价标准按中华人民共和国烟草行业标准 YC/T41-1996 的方法进行。 0049 病害分级标准 ( 以整株为单位 ) 0050 0 级：全株无病； 0051 1 级：茎部病斑不超过茎围 1/2，或半数以下叶片轻度凋萎，或下部少数叶片出现病斑； 0052 2 级：。

19、茎部病斑超过茎围的 1/2，或半数以上叶片调萎； 0053 3 级：茎部病斑环绕茎围，或 2/3 以上叶片凋萎； 0054 4 级：病株全部叶片凋萎或枯死。 0055 病情指数计算 0056 病指 ( 各级病株数该病级值 )/( 调查总株数最高级值 )100 0057 1.3 统计分析 0058 对病指作方差分析，测定各鉴定材料间病指的差异。 0059 2 结果与分析 0060 表 2-3 研和田间病害抗病性显著分析说明书 CN 101491199 B5/14 页 7 0061 0062 以上 3 个不同地点田间自然鉴定结果表明，感病品种红大、小黄金 1025 。

20、与抗病品种 K326、 G28 及革新三号间差异极显著。感病对照红大在玉溪研和点、玉溪江川点、昆明寻甸点的病指分别为 60.95、 35.67、 27.5，抗病对照 K326 病指分别为 0、 1.67、 1.67，高感种质最高病指分别为 99.05、 94.00、 79.17。玉溪研和的发病程度较高。 0063 从表 2-3 看 3 个试验均能较一致地反应出各供试品种对烟草黑胫病的抗病性，抗感病差异明显。这说明在上述地点建立烟草黑胫病自然抗性鉴定圃是可行的，其结果可基本评判供试品种的抗病性差异。鉴于玉溪江川点和昆明寻甸点红大感病对照品种病指偏低，云南烟草黑胫病菌生理。

21、小种组成单一， 3 地块测定结果基本一致，仅保留了玉溪研和地块作病圃，继续进行抗病种质资源的筛选研究。 0064 从玉溪研和 2006 2008 年的鉴定结果看，该病圃发病程度高， 2007 年红大病指达 61.43， K326 病指为 24.52， 2008 年红大病指达 76.85， K326 病指为 7.87，抗感病差异极显著，年度间发病差异较小，试验数据准确、完整、连续，作物种植和管理水平一致，远离农民烟田，说明在此建立自然诱发病圃，用于鉴定种质资源抗病性是可行的。病圃建好后，尽量保全其原生态环境，避免小环境的人为改变。 0065 1.1.3.22。

22、006 2008 年度主要气象资料 ( 表 2-4) 0066 表 2-42006 2008 年 5-9 月主要气象资料说明书 CN 101491199 B6/14 页 8 0067 年度月份旬均温 ( ) 气温距平 ( ) 气温年型雨量 (mm) 雨量距平 ( ) 雨量年型日照 (hr) 日照距平日照百分率日照年型气候年型 2006 5 18.5 -1.7 极低 125 44 略多 200 -4 50 正常低温型 6 21.2 0.1 正常 55 -60 特少 159 17 39 略多少雨型 7 21.2 0.4 略高 196 10 略多 109 -。

23、8 26 正常正常型 8 20.5 0.1 正常 66 -64 极少 99 -27 24 偏少少雨寡照 9 18.5 -0.8 偏低 95 -12 略少 105 -12 28 略少低温型 2007 5 18.5 -1.7 极低 142 64 偏多 160 -23 39 偏少低温阴雨寡照 6 21.8 0.7 偏高 64 -39 特少 233 72 57 极多高温少雨多光 7 20.9 0.1 正常 175 -1 正常 70 -41 16 偏少寡照型说明书 CN 101491199 B7/14 页 9 8 20.3 -0.1 正常 246 17 略多 103 -24 26 偏少。

24、寡照型 9 18.1 -1.1 特低 71 -32 偏少 116 -3 31 正常低温少雨 2008 5 19.6 -0.6 略低 75 -13 略少 195 -6 48 正常正常型 6 20.4 -0.7 偏低 178 29 略多 160 18 39 略多低温型 7 20.1 -0.7 特低 264 49 偏多 125 5 30 正常低温多雨 8 20.1 -0.3 略低 139 -25 略少 130 -4 32 正常正常型 9 19.3 0 正常 69 -36 偏少 99 -17 27 略少少雨型 0068 1.1.3.3 辅助设施 0069 基于病圃的试验和主要参数的检验，。

25、选址玉溪市红塔区研和镇烟科所试验基地完全符合病圃的要求。病圃的农田园化建设，包括喷灌系统、田埂水泥硬化及进排水围沟清瘀等有基地统一改建。说明书 CN 101491199 B8/14 页 10 0070 1.1.4 病圃的特点和功能 0071 1.1.4.1 地理气候 0072 位于玉溪市红塔区研和镇烟科所试验基地， N ： 24 14.382 ， E ： 102 30.024 ，海拔 1635m，年平均气温 16-17，年降雨量 880 900 毫米。 0073 1.1.4.2 地理隔离条件优越 0074 与农田隔离。 0075 1.1.4.3 鉴定规模 0076 可。

26、用于病圃面积 2.3 亩，一次性能同时鉴定 60 份种质材料。 0077 1.1.4.4 交通及灌溉方便。 0078 交通便利、灌溉方便，距玉溪约 17 公里，途径玉元高速公路。灌溉常年能满足需要。 0079 实施例 2 ： 0080 烟草种质资源抗黑胫病鉴定 0081 烟草黑胫病是由烟草疫霉 Phytophthora parasitica var.nicotianae(Breda deHean)Tucker 引起的一种世界性烟草毁灭性真菌病害。病原菌属鞭毛菌亚门疫霉属，是喜高温高湿的兼性寄生菌，可以危害所有的烟草类型，在烟草生长的任何阶段都能侵染根、茎、叶，引起萎蔫、。

27、茎损伤和植株死亡。近年来，由于连作烟田面积扩大以及连作年限的增长，烟草黑胫病有加重流行的趋势。为减轻该病造成的损失，人们曾用农业防治、化学防治、抗病育种等多种不同方法控制烟草黑胫病，但由于该病菌的游动孢子形成速度快且数量大，侵染烟株后潜育期短、发病快，在一个生长季节可以发生多次再侵染，同时该病有时还与其它病害混合发生，一旦病害流行则难以控制。如果防治措施不到位黑胫病引起的损失可达100。针对目前烟草黑胫病的严重危害，研究抗病新品种已成为当今防治烟草黑胫病的重点。本申请利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病，建立自然抗性鉴定圃，进行种质资源的抗病性鉴。

28、定，旨在为有效控制烟草黑胫病的发生、减小经济损失提供理论依据。 0082 1 材料与方法 0083 1.1 试验条件 0084 本研究田间试验于 2006 2008 年在云南省烟草科学研究所研和试验基地进行，属亚热带内陆高原型气候，年平均气温 15.5 23.7，年平均降雨量 700 900mm。栽培土壤为红壤土，根作层 35 45cm。前茬作物为梢子。 0085 1.2 材料 0086 06 年共有 18 个品种，分别为 L8、 NC1071、 N.nesophila、 N.nudicaudis、 N.plumbaginifolia、 G28、 K326、 NC95。

29、、 MD609、小黄金 1025、革新三号、金星 6007、红大、 N.stocktonii、落地黄、 Barley37、 Barley21、筑波 1 号。 0087 07 年供试品种 21 个，分别为 NC2514、筑波 1 号、 Islangold、 CV78-5、密叶尖、金星 6007、大红星、晋太 7615、 CV78-4、乌江 1 号、 CV16-2、大柳叶 2014、落地黄、 Daris Special、 Q1236 ： Hicks Q46、长把黄光板、许金 7 号、柳叶尖和 Black Shank Resistant。 0088 08 年供试品。

30、种 39 个，分别为 CV16-2、 Islangold、 CV78-5、晋太 7615、乌江 1 号、筑波 1 号、 CV78-4、 Daris Special、落地黄、 NC2514、小黄金 1025、 MD609、革新三号、 N.plumbaginifolia、 G28、 NC95、 NC1071、 L8、 N.nudicaulis、 Coker Tobacco、 H80A432、安选说明书 CN 101491199 B9/14 页 11 79-1、潘圆黄、 NC86、、 NC-22-NF、 BL-921、日本烤烟 1、龙岩 C2、津引 1 号、 COM 。

31、烟、 OX414、 RG12、 K358、 RG17、 D101、 OX2028。 0089 以 K326 为抗病对照品种，红花大金元为感病对照品种。 0090 1.3 试验设计 0091 06 年：在云南省烟草科学研究所研和试验基地进行试验测定。利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病。小区随机排列，三次重复，每个品种种植一行，行株距为 1.2m0.5m，每行 35 株。 0092 07 年采用单因素完全随机区组设计，每一品种 ( 系 ) 为 1 处理， 3 次重复，每个品种种植 1 行，每行 35 株。行株距为 1.2m0.5m，啤酒瓶定位理墒。 0093 08 年。

32、：采用单因素完全随机区组设计，每一品种 ( 系 ) 为一处理，三次重复，每品种种植 3 墒，每墒 18 株，行株距为 120cm50cm，试验田面积为 2.3 亩。 0094 试验采用育苗盘直播，漂浮育苗，每种质播种二盘，并于移栽前一星期进行炼苗，三次剪叶，苗龄 67 天， 5 月 6 日移栽，移栽时已达到壮苗标准。移栽的当天喷施农药 ( 功夫 200mm/ 亩次 ) 防治虫害。各品种施肥种类和总量一致， N P2O5 K2O 1 1 2.5，氮肥、钾肥和磷肥的基肥与追肥比例为 3 1。白肋烟 L8 适当增加肥料。田间每次使用的肥料都为云南省烟叶公司生产的。

33、烟草专用复合肥。 0095 移栽后团棵期进行高培土，整个大田期共喷施防虫农药 4 次，并未喷施抗菌类农药。其他栽培管理措施均按照云南省烟草科学研究所的生产技术方案要求进行。 0096 1.1.4 抗病性测定 0097 利用有病连作烟田作病圃，进行田间灌水，保持湿度，诱其自然发病。病害严重度分级应符合 YC/T39 的规定。自然发病后，进行多次病害分级调查，每次均应调查各品种的全部植株，并计算各品种发病率和病情指数，以病情指数作为抗性指标，根据抗性划分标准，评价各测定品种的抗病能力。并对平均病指作方差分析，测定各鉴定材料间抗感程度的差异。种质资源的抗病性评价，。

34、根据最后烟叶采收完毕，挖根调查，计算病情指数来判断。 0098 1.1.5 田间发病规律研究 0099 利用有病连作烟田作病圃，采用田间灌水，诱其自然发病。病害严重度分级应符合 YC/T39 的规定。自然发病后每隔 10d 进行一次病害分级调查，每次均应调查各品种的全部植株，并计算各品种的发病率和病情指数，绘出田间消长曲线，判断出病害的盛发期。根据抗性划分标准，评价各测定品种的抗病能力。并对平均病指作方差分析，测定各鉴定材料间抗病的差异。 0100 病害调查分级标准： 0101 0 级：全株无病； 0102 1 级：茎部病斑不超过茎围的二分之一，或。

35、半数以下叶片轻度凋萎，或下部少数叶片出现病斑。 0103 2 级：茎部病斑超过茎围的二分之一，或半数以下叶片凋萎。 0104 3 级：茎部病斑环绕茎围，或三分之二以上叶片凋萎。 0105 4 级：病株全部叶片凋萎或枯死。 0106 根据病株调查数据，按如下公式计算病株率 ( 普遍率 ) 和病情指数 ( 严重度 )。 0107 病株率 ( ) 发病株数 / 调查总株数 *100 ；说明书 CN 101491199 B10/14 页 12 0108 病情指数 ( 各级病株数 * 该病级 )/( 调查总株数 * 最高病级 )*100。 0109 (2) 抗性评价标准 01。

36、10 高抗：病情指数 0 5，用 HR 表示；抗病：病情指数为 5.01 25，用 R 表示；中抗：病情指数 25.01 50，用 MR 表示；中感： 50.01 75，用 MS 表示；感病：病情指数 75 以上，用 S 表示。 0111 1.1.6 数据处理 0112 试验数据用浙江大学唐启义、冯明光编的实用统计分析及其 DPS 数据处理系统进行分析。 0113 2 结果与分析 0114 2.1 鉴定材料间的抗性差异 0115 根据田间最后一次调查结果，计算病情指数，根据抗性评价标准评价种质资源抗病性。从表 2-5 可知： 2006 年。

37、供试的 18 个品种有 5 个高抗品种，分别为 NC1071、 NC95、落地黄、 G28、 K326，有 5 个抗病品种，分别为 N.nesophila、 N.plumbaginifolia、 MD609、革新三号、筑波 1 号，有 2 个中抗品种金星 6007 和 N.stocktoii，有 2 个中感品种红大与小黄金 1025，有 4 个感病品种 Barley 21、 Barley 37、 L8 与 N.nudicaulis。Barley 21、 Barley 37、 L8 与 N.nudicaulis 表现感病，其感病程度重于对照品种红大与小黄金 1025，。

38、差异极显著。NC1071、 NC95、落地黄高抗，与对照抗病品种 G28、 K326、革新三号差异不显著。抗病品种 N.plumbaginifolia、 MD609 表现抗病，与对照抗病品种 G28、 K326、革新三号差异不显著。其余品种抗性居中。 0116 表 2-5 2006 烟草种质资源的抗性评价 0117 0118 0119 注： * 为中后期栏多重比较 (SSR) 结果。 “” 前面数字代表病情指数平均值；后面数字表示标准差。大写字母示 P 0.01 水平上差异显著性，小写字母示 P 0.05 水平上差异显著性。下同。 0120 2007 年烟叶采收完毕。

39、后，挖根调查，计算病情指数，根据抗性评价标准评价种质资源的抗病性。07 年各品种平均病指间的差异显著性检验结果表明：不同烟草种质对黑胫病的抗性有明显差异，烟草品种柳叶尖的病情指数最高，为 95.00， K326 的最低，为 24.52。感说明书 CN 101491199 B11/14 页 13 病品种柳叶尖、 Black Shank Resistant和许金7号的病指极显著的高于对照品种红花大金元；品种 Q1236 ： Hicks Q46、长把黄光板与感病对照无显著差异，但品种长把黄光板的病指低于感病对照。各抗病品种与对照品种 K326 的差异性结果表明。

40、：品种密叶尖、大柳叶 2014 的病指极显著的高于对照；品种大红星、金星 6007、 CV16-2、 Islangold、 CV78-5、病指显著高于对照；品种晋太 7615、乌江 1 号、筑波 1 号、 CV78-4、 Daris Special、落地黄、 NC2514 与对照无显著差异，但病指均高于对照。 NC2514与K326病情指数最低，可推荐抗病育种选用。 0121 表 2-6 2007 各鉴定材料病指间的差异显著性 0122 0123 表 2-7 2008 各鉴定材料病指间的差异显著性 0124 说明书 CN 101491199 B12/14 页。

41、14 0125 烟叶采收完毕后，挖根调查，计算病情指数，根据抗性评价标准评价种质资源的抗病性。通过对 39 份烟草种质资源抗黑胫病鉴定 ( 表 2-7)，抗病对照 K326 的平均病指 7.87，抗性评价在抗病范围内，感病对照红大的平均病指为 76.85，抗性评价在感病范围内。烟草品种 BL-921 发病最重，病情指数最高，达 99.07，高于红大病指，与感病对照红大间差异显著，其余品种发病轻于红大，其中潘圆黄、晋太 7615 与红大间差异不显著，其余品种与红大差异显著。RG17 的病情指数最低，为 0.93。高抗品种 N.plumbaginifolia。

42、、 G28、 NC95、 NC86、日本烤烟 1、 COM 烟、 OX414、 K358、 RG17 与抗病对照品种 K326 差异不显著，所有抗病品种 CV16-2、 CV78-4、 Daris Special、落地黄、 NC25 14、 NC1071、 L8、 N.nudicaulis、 Coker Tobacco、 H80 A432、安选 79-1、、 NC-22-NF、龙岩 C2、津引 1 号、 RG12、 D101、 OX2028与K326差异亦不显著。感病品种有BL-921、红大、潘圆黄、晋太7615、 CV78-5、 Islangold、 MD609、乌。

43、江 1 号、筑波 1 号、小黄金 1025 与 K326 差异极显著。 0126 2.2 烟草种质资源抗性鉴定结果 0127 2006年供试的18个品种(表2-8)有5个高抗品种，分别为NC1071、 NC95、落地黄、 G28、 K326，有 5 个抗病品种，分别为 N.nesophila、 N.plumbaginifolia、 MD609、革新三号、筑波 1 号，有 2 个中抗品种金星 6007 和 N.stocktoii，有 2 个中感品种红大与小黄金 1025，有 4 个感病品种 Barley 21、 Barley 37、 L8 与 N.nudicaulis。。

44、0128 2007 年从对 21 个鉴定材料的抗病性鉴定结果 ( 表 2-8)，根据对烟草黑胫病菌的说明书 CN 101491199 B13/14 页 15 抗性大体可分为 4 类：抗病品种、中抗品种、中感品种和感病品种。其中抗病品种有： K326 和 NC2514，占总鉴定材料的 9.52 ；中抗品种有：筑波 1 号、 Islangold、 CV78-5、密叶尖、金星 6007、大红星、晋太 7615、 CV78-4、乌江 1 号、 CV16-2、大柳叶 2014、落地黄和 Daris Special，共13个，占61.90。中感品种有： Q1。

45、236 ： Hicks Q46、长把黄光板和红大，共3个，占 14.29 ；感病品种有许金 7 号、柳叶尖和 Black Shank Resistant，占 14.29。 0129 2008 年对 39 个鉴定材料抗病性鉴定初步看出，对烟草黑胫病菌的抗性程度大体可分为 5 类：高抗品种、抗病品种、中抗品种、中感品种和感病品种。其中高抗品种有 N.plumbaginifolia、 G28、 NC95、 NC86、日本烤烟1、 COM烟、 OX414、 K358、 RG17，共9个，占鉴定材料总数的 23.08；；抗病品种有 CV16-2、 CV78-4、 D。

46、aris Special、落地黄、 NC2514、 K326、 NC1071、 L8、 N.nudicaulis、 Coker Tobacco、 H80 A432、安选 79-1、、 NC-22-NF、龙岩 C2、津引 1 号、 RG12、 D101、 OX2028 共 19 个，占鉴定材料总数的 48.72 ；中抗品种有乌江 1 号、筑波 1 号、 MD609、革新三号，共 4 个，占鉴定材料总数的 10.26 ；中感品种有 Islangold、 CV78-5、晋太 7615、小黄金 1025，共 4 个，占鉴定材料总数的 10.26；感病品种有红大、。

47、潘圆黄、 BL-921，占鉴定材料总数的 7.69。其中抗病品种所占比例最高，而感病品种所占比例最低。鉴定结果见表 2-8。 0130 表 2-8 烟草种质资源抗黑胫病结果统计 0131 0132 表 2-9 品种抗性汇总 0133 说明书 CN 101491199 B14/14 页 16 0134 ( 年度间不一致的几个品种差异不大，采用平均值判断抗病性水平 ) 0135 2.3 烟草种质鉴定材料病情消长动态 0136 2007 年通过对各鉴定品种连续 7 次发病率调查，分析各品种资源田间发病消长动态。结果表明随田间生长期的增长，病害呈现总体上升趋势，各种质发病盛期多集中。

48、在 5 月下旬至 6 月下旬。21 份供试种质因发病高峰所在时间不同可分 3 种类型：第 1 种类型为感病品种 Black Shank Resistant、许金 7 号、柳叶尖发病高峰集中在 5 月 25 日至 6 月 5 日时间段， 6 月 5 日至 6 月 16 日发病稍有减缓， 6 月中旬以后病情稳定，这一类品种发病时间集中在 5 月下旬至 6 月中旬。第 2 种类型为长把黄光板、大柳叶 2014、密叶尖、大红星、金星 6007、 CV16-2、 Q1236 ： Hicks Q46、红大、晋太 7615、筑波 1 号发病高峰在 6 月 5 日至 6 月 16 日时间段，这一类品种发病时间集中在 5 月下旬至 6 月下旬；第 3 种类型为大柳叶 2014、 CV78-5、乌江 1 号、 CV78-4、 Daris Special、落地黄、 NC2514、 K326 发病盛期在 6 月 16 至 6 月 27 日，为 6 月中下旬，这些品种发病时间集中在 6 月上旬。

摘要
申请专利号：	CN200910094173.3	申请日：	20090309
公开号：	CN101491199B	公开日：	20110105
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	A01G7/00,A01G1/00	主分类号：	A01G7/00,A01G1/00
申请人：	云南省烟草科学研究所
发明人：	李梅云,李永平,刘勇,卢秀萍,高家合
地址：	653100 云南省玉溪市红塔区南祥路中段14号
优先权：	CN200910094173A
专利代理机构：	昆明正原专利代理有限责任公司	代理人：	陈左
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内容摘要

一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，采用历史上烟草黑胫病病害高发区连作烟田作病圃，通过增加田间湿度诱导植株发病，减少了菌株分离保存及培养的复杂操作，其菌株来源于大田，接种用的小种数量、种类理论上说是无限的，多样性、代表性较好，接种条件也是自然控制，故鉴定结果较能准确反映当地当时的实际情况；采用烤烟采收后一次性挖根调查的方法，大大减少了工作量，节省了成本，结果准确可靠。

权利要求书

1.一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，包括以下顺序步骤：一、病圃的选择(1)选择历史上烟草黑胫病常年流行，发生严重，发病率达80％以上地块；(2)当地5～7月份高温高湿，年平均降雨量大；(3)连作，自然灌溉条件好，烟草作物种植和田间管理按常规操作和管理；二、烟草作物采收后挖根调查，按国家标准对鉴定品种进行分级和抗性评价。 2.根据权利要求1所述的烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，其特征在于：烟草作物种植期间，烟苗移栽后补苗和施肥，确保烟苗全部存活15d后，开始田间灌水，确保田间沟内明水可见，后期根据各品种需肥状况补肥。

说明书

技术领域

本发明属于植物抗病性鉴定技术领域，具体涉及烟草黑胫病抗性的鉴定，特别是涉及一种对烟草黑胫病抗性进行病圃鉴定的方法。

背景技术

烟草黑胫病是世界烟草中危害最严重的病害之一，同时也是我国烟草主要病害，可以危害烤烟、晾烟、晒烟、白肋烟、香料烟等所有的栽培烟草。美国北卡罗莱纳州每年因烟草黑胫病损失的烟叶约占总产量的1％～2％，1995年和1996年两年间因黑胫病造成的损失就达3610万美元，占病害总损失的35.13％，居各病害之首。该病在我国分布范围很广，除黑龙江省尚未发现之外，其余各植烟省区(含台湾省)均有发生。平均发病率为5％～12％，严重田块发病率高达75％，甚至造成绝收。据不完全统计，我国烟草黑胫病平均每年发病面积高达76373hm2，产量损失2869.26万千克，产值损失超过1.23亿元人民币。生产实践表明，防治黑胫病最经济、有效、环保的措施就是选育抗病品种，抗性鉴定自然成为抗源挖掘利用、抗病育种、抗性监测等工作中重要的一环。

作物抗病育种有别于其他农艺性状的选择，抗病性的表型是作物与病原物在一定的环境条件下互作的表现。与农艺性状的表型比较，作物抗病性是两种生物的互作，因此，抗病性的表现则以病原物存在为前提，同时环境条件又必须满足两种生物生长发育。烟草黑胫病育种和抗源的筛选评价都必须在黑胫病生态系的选择压中选育或检验，否则，进行抗黑胫病育种是盲目的、低效的。

现有的烟草抗性鉴定方法主要有温室苗期鉴定接种法和病圃活体菌株人工接种鉴定法。苗期鉴定法通常采用游动孢子或菌丝体悬浮液浸根接种，但由于各供试菌株之间产生游动孢子或菌丝体的数量差异较大，这些方法的接菌量不易控制，试验操作复杂，分级标准不易掌握，且易受游动孢子或菌丝体的浓度及游动孢子的游动时间、生活力和侵入能力等因素的影响。利用该方法鉴定的结果与田间抗性差异大，不能准确反映品种的抗病性。病圃活体菌株人工接种鉴定是目前常用的鉴定方法。目前现有鉴定方法的缺点是接种用菌株的收集、保存与合理选择是长期、连续、操作技术较高、成本较大的工作，并且接种用的小种数量、种类的多样性与田间试验方法相比始终是有限的。且以前的病害调查方法按照抗病性分级标准自然发病于病发初期、盛期和未期各调查一次，若人工接种则于接种后第20天、40天、60天各调查一次。每次均应调查各品种全部植株。由于烟草黑胫病发病部位主要在茎基部，调查起来有些困难。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术存在的不足，提供一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，采用历年病害高发区连作烟田作病圃，通过增加田间湿度为植株发病提供必要条件，减少了菌株分离保存及培养的复杂操作，让需要鉴定的品种在黑胫病生态系的选择压中选育或检验，采用烤烟采收后一次性挖根调查的方法，鉴定结果准确，并能准确反映当地当时的实际情况，成本低、操作简便易行。

本发明的目的通过以下技术方案实现：一种烟草黑胫病抗性的病圃鉴定方法，包括以下顺序步骤：

一、病圃的选择

(1)、选择历史上烟草黑胫病常年流行，发生严重，发病率达80％以上地块；

(2)、当地5～7月份高温高湿，年平均降雨量大；

(3)、连作，自然灌溉条件好，烟草作物种植和管理水平一致，按常规操作和管理。

二、田间管理

其他农事操作按常规管理。烟草作物种植期间，烟苗移栽后补苗、施肥。确保烟苗全部存活15d后，开始田间灌水，确保田间沟内明水可见，后期根据各品种需肥状况补肥。

三、病害调查与鉴定

烤烟采收后挖根调查，按国家标准对鉴定品种进行分级和抗性评价。

本发明率先提出了一种具有实用价值的烟草黑胫病圃鉴定方法，实现了不用人工接种，在自然条件下有效鉴定品种抗性。通过提供有利条件诱发病害发生，减少繁杂的菌种保存培养、接种体制定与接种等工作，其菌株来源于大田，接种用的小种数量、种类理论上说是无限的，多样性、代表性较好，接种条件也是自然控制，故鉴定结果较能准确反映当地当时的实际情况；采用烤烟采收后一次性挖根调查的方法，大大减少了工作量，节省了成本，鉴定结果准确可靠，并能准确反映当地当时的实际情况，具有成本低、操作简便易行的特点，是一种较为经济实用的方法，具有良好的市场应用前景。

具体实施方式

实施例1：

1.1田间自然诱发病圃的选址与建立

有利于发病、发病稳定的地理生态环境是病圃的基础。病菌以厚垣孢子和休眠菌丝体在病株残体、土壤、粪肥中越冬，可以存活3年左右。带菌的土壤、类肥、灌溉水及病苗是烟草黑胫病的主要初侵染源。病菌借风雨、灌溉水、农事操作等进行重复再侵染，使病害越来越重，进而蔓及全田。烟草黑胫病菌主要集中在距土表下0～5cm的土层中活动，通过伤口或直接侵入，侵染部位主要是茎基部，感病阶段主要在现蕾前。高温高湿有利于病害发生，而湿度是流行的关键因素。在温度24～32℃，相对湿度80％以上3～5d，田间就会出现一个发病高峰，湿度越大，发病愈快愈重。

1.1.1病圃的地理及生态要求：

根据黑胫病发生的最适生态条件及其他因素，确立如下病圃目标：历史上黑胫病常年流行，发生严重；5～7月份高温高湿，年平均降雨量大；病圃面积在2～3亩左右，连作，自然灌溉条件好，作物种植和管理水平一致；交通方便。

1.1.2选址过程

1.1.2.1被选区黑胫病史及主要气象资料调研

根据选址目标，确立昆明、玉溪作为被选目的区。

1.1.2.2现场考察

2005年5月至7月正值烟草黑胫病发病高峰期，先后考察了昆明草甸、昆明施甸、玉溪市红塔区、玉溪江川、玉溪澄江、玉溪华宁等地，了解了当地历年发病情况，在病害高发区采集了黑胫病标样，并记载地名，拍摄了照片。

1.1.2.3选址的初步确定

根据选址目标，确立玉溪市江川县雄关镇、玉溪市红塔区研和镇烟科所试验基地、昆明市寻甸县科技推广站试验基地有3地块是黑胫病历年常发区，发病率达80％以上，为连作田。

被选区的地理位置及气象资料如下：

玉溪市江川县雄关镇地理位置：海拔1932米，北纬24°20’，北纬30°，年均气温16.7℃，年降雨量749.2毫米；玉溪市红塔区研和镇烟科所试验基地试验田地理位置：N：24°14.382’，E：102° 30.024’，海拔1635m，年平均气温16-17℃，年降雨量880～900毫米；昆明市寻甸县科技推广站试验基地试验田地理位置N：25°30.759’，E：103°15.910’，海拔1878m，年均气温14.7℃，年降雨量1352.2毫米。

1.1.3病圃的检验与建立，试验验证：

1材料与方法

1.1供试品种

玉溪研和与玉溪江川有18个品种，其分别为L8、NC1071、N.nesophila、N.nudicaudis、N.plumbaginifolia、G28、K326、NC95、MD609、小黄金1025、革新三号、金星6007、红大、N.stocktonii、落地黄、Barley37、Barley21、筑波1号。

昆明寻甸点共有13个品种，其分别为L8、NC1071、N.nesophila、N.nudicaudis、N.Plumbaginifolia、G28、K326、NC95、MD609、1025、革新三号、金星6007、红大。

以云南品种K326为高抗对照品种，红大为感病对照品种。

1.2试验测定方法

玉溪研和：在云南省烟草科学研究所研和试验基地进行试验测定。利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病。小区随机排列，三次重复，每品种每重复种植一行，每行35株。

田间布置图

昆明寻甸点：在昆明寻甸科技推广站试验基地进行试验测定，N：25°30.759’，E：103°15.910’，海拔：1878m。利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病。小区随机排列，三次重复，每品种每重复种植一行，每行20株。

田间布置图

玉溪江川：利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病。小区随机排列，三次重复，每品种每重复种植一行，每行25株。

田间布置图

栽培管理常规漂浮育苗、适龄移栽，烟苗成活后田间多浇水，保证田间湿度，施肥按常规管理。植株生长期均不施用杀菌剂，虫害管理与大田管理相同。

病害严重度分级应符合YC/T 39的规定。自然发病于病发初期、盛期和未期各调查一次，每次均应调查各品种全部植株，并计算各品种的病株率、病情指数，然后以病情指数为主要依据评定各品种的抗病能力。

病害严重度分级按中华人民共和国烟草行业标准YC/T39的规定。抗性评价标准按中华人民共和国烟草行业标准YC/T41-1996的方法进行。

病害分级标准(以整株为单位)

0级：全株无病；

1级：茎部病斑不超过茎围1/2，或半数以下叶片轻度凋萎，或下部少数叶片出现病斑；

2级：茎部病斑超过茎围的1/2，或半数以上叶片调萎；

3级：茎部病斑环绕茎围，或2/3以上叶片凋萎；

4级：病株全部叶片凋萎或枯死。

病情指数计算

病指＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100

1.3统计分析

对病指作方差分析，测定各鉴定材料间病指的差异。

2结果与分析

表2-3研和田间病害抗病性显著分析

以上3个不同地点田间自然鉴定结果表明，感病品种红大、小黄金1025与抗病品种K326、G28及革新三号间差异极显著。感病对照红大在玉溪研和点、玉溪江川点、昆明寻甸点的病指分别为60.95、35.67、27.5，抗病对照K326病指分别为0、1.67、1.67，高感种质最高病指分别为99.05、94.00、79.17。玉溪研和的发病程度较高。

从表2-3看3个试验均能较一致地反应出各供试品种对烟草黑胫病的抗病性，抗感病差异明显。这说明在上述地点建立烟草黑胫病自然抗性鉴定圃是可行的，其结果可基本评判供试品种的抗病性差异。鉴于玉溪江川点和昆明寻甸点红大感病对照品种病指偏低，云南烟草黑胫病菌生理小种组成单一，3地块测定结果基本一致，仅保留了玉溪研和地块作病圃，继续进行抗病种质资源的筛选研究。

从玉溪研和2006～2008年的鉴定结果看，该病圃发病程度高，2007年红大病指达61.43，K326病指为24.52，2008年红大病指达76.85，K326病指为7.87，抗感病差异极显著，年度间发病差异较小，试验数据准确、完整、连续，作物种植和管理水平一致，远离农民烟田，说明在此建立自然诱发病圃，用于鉴定种质资源抗病性是可行的。病圃建好后，尽量保全其原生态环境，避免小环境的人为改变。

1.1.3.22006～2008年度主要气象资料(表2-4)

表2-42006～2008年5-9月主要气象资料

年度月份旬均温 (℃) 气温距平(℃) 气温年型雨量 (mm) 雨量距平 (％) 雨量年型日照 (hr) 日照距平％日照百分率％日照年型气候年型 2006 5 18.5 -1.7 极低 125 44 略多 200 -4 50 正常低温型 6 21.2 0.1 正常 55 -60 特少 159 17 39 略多少雨型 7 21.2 0.4 略高 196 10 略多 109 -8 26 正常正常型 8 20.5 0.1 正常 66 -64 极少 99 -27 24 偏少少雨寡照 9 18.5 -0.8 偏低 95 -12 略少 105 -12 28 略少低温型 2007 5 18.5 -1.7 极低 142 64 偏多 160 -23 39 偏少低温阴雨寡照 6 21.8 0.7 偏高 64 -39 特少 233 72 57 极多高温少雨多光 7 20.9 0.1 正常 175 -1 正常 70 -41 16 偏少寡照型

8 20.3 -0.1 正常 246 17 略多 103 -24 26 偏少寡照型 9 18.1 -1.1 特低 71 -32 偏少 116 -3 31 正常低温少雨 2008 5 19.6 -0.6 略低 75 -13 略少 195 -6 48 正常正常型 6 20.4 -0.7 偏低 178 29 略多 160 18 39 略多低温型 7 20.1 -0.7 特低 264 49 偏多 125 5 30 正常低温多雨 8 20.1 -0.3 略低 139 -25 略少 130 -4 32 正常正常型 9 19.3 0 正常 69 -36 偏少 99 -17 27 略少少雨型

1.1.3.3辅助设施

基于病圃的试验和主要参数的检验，选址玉溪市红塔区研和镇烟科所试验基地完全符合病圃的要求。病圃的农田园化建设，包括喷灌系统、田埂水泥硬化及进排水围沟清瘀等有基地统一改建。

1.1.4病圃的特点和功能

1.1.4.1地理气候

位于玉溪市红塔区研和镇烟科所试验基地，N：24°14.382’，E：102°30.024’，海拔1635m，年平均气温16-17℃，年降雨量880～900毫米。

1.1.4.2地理隔离条件优越

与农田隔离。

1.1.4.3鉴定规模

可用于病圃面积2.3亩，一次性能同时鉴定60份种质材料。

1.1.4.4交通及灌溉方便。

交通便利、灌溉方便，距玉溪约17公里，途径玉元高速公路。灌溉常年能满足需要。

实施例2：

烟草种质资源抗黑胫病鉴定

烟草黑胫病是由烟草疫霉[Phytophthora parasitica var.nicotianae(Breda deHean)Tucker]引起的一种世界性烟草毁灭性真菌病害。病原菌属鞭毛菌亚门疫霉属，是喜高温高湿的兼性寄生菌，可以危害所有的烟草类型，在烟草生长的任何阶段都能侵染根、茎、叶，引起萎蔫、茎损伤和植株死亡。近年来，由于连作烟田面积扩大以及连作年限的增长，烟草黑胫病有加重流行的趋势。为减轻该病造成的损失，人们曾用农业防治、化学防治、抗病育种等多种不同方法控制烟草黑胫病，但由于该病菌的游动孢子形成速度快且数量大，侵染烟株后潜育期短、发病快，在一个生长季节可以发生多次再侵染，同时该病有时还与其它病害混合发生，一旦病害流行则难以控制。如果防治措施不到位黑胫病引起的损失可达100％。针对目前烟草黑胫病的严重危害，研究抗病新品种已成为当今防治烟草黑胫病的重点。本申请利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病，建立自然抗性鉴定圃，进行种质资源的抗病性鉴定，旨在为有效控制烟草黑胫病的发生、减小经济损失提供理论依据。

1材料与方法

1.1试验条件

本研究田间试验于2006～2008年在云南省烟草科学研究所研和试验基地进行，属亚热带内陆高原型气候，年平均气温15.5～23.7℃，年平均降雨量700～900mm。栽培土壤为红壤土，根作层35～45cm。前茬作物为梢子。

1.2材料

06年共有18个品种，分别为L8、NC1071、N.nesophila、N.nudicaudis、N.plumbaginifolia、G28、K326、NC95、MD609、小黄金1025、革新三号、金星6007、红大、N.stocktonii、落地黄、Barley37、Barley21、筑波1号。

07年供试品种21个，分别为NC2514、筑波1号、Islangold、CV78-5、密叶尖、金星6007、大红星、晋太7615、CV78-4、乌江1号、CV16-2、大柳叶2014、落地黄、Daris Special、Q1236：Hicks Q46、长把黄光板、许金7号、柳叶尖和Black Shank Resistant。

08年供试品种39个，分别为CV16-2、Islangold、CV78-5、晋太7615、乌江1号、筑波1号、CV78-4、Daris Special、落地黄、NC2514、小黄金1025、MD609、革新三号、N.plumbaginifolia、G28、NC95、NC1071、L8、N.nudicaulis、Coker Tobacco、H80A432、安选79-1、潘圆黄、NC86、ミィニルト、NC-22-NF、BL-921、日本烤烟1、龙岩C2、津引1号、COM烟、OX414、RG12、K358、RG17、D101、OX2028。

以K326为抗病对照品种，红花大金元为感病对照品种。

1.3试验设计

06年：在云南省烟草科学研究所研和试验基地进行试验测定。利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病。小区随机排列，三次重复，每个品种种植一行，行株距为1.2m×0.5m，每行35株。

07年采用单因素完全随机区组设计，每一品种(系)为1处理，3次重复，每个品种种植1行，每行35株。行株距为1.2m×0.5m，啤酒瓶定位理墒。

08年：采用单因素完全随机区组设计，每一品种(系)为一处理，三次重复，每品种种植3墒，每墒18株，行株距为120cm×50cm，试验田面积为2.3亩。

试验采用育苗盘直播，漂浮育苗，每种质播种二盘，并于移栽前一星期进行炼苗，三次剪叶，苗龄67天，5月6日移栽，移栽时已达到壮苗标准。移栽的当天喷施农药(功夫200mm/亩·次)防治虫害。各品种施肥种类和总量一致，N∶P2O5∶K2O＝1∶1∶2.5，氮肥、钾肥和磷肥的基肥与追肥比例为3∶1。白肋烟L8适当增加肥料。田间每次使用的肥料都为云南省烟叶公司生产的烟草专用复合肥。

移栽后团棵期进行高培土，整个大田期共喷施防虫农药4次，并未喷施抗菌类农药。其他栽培管理措施均按照云南省烟草科学研究所的生产技术方案要求进行。

1.1.4抗病性测定

利用有病连作烟田作病圃，进行田间灌水，保持湿度，诱其自然发病。病害严重度分级应符合YC/T39的规定。自然发病后，进行多次病害分级调查，每次均应调查各品种的全部植株，并计算各品种发病率和病情指数，以病情指数作为抗性指标，根据抗性划分标准，评价各测定品种的抗病能力。并对平均病指作方差分析，测定各鉴定材料间抗感程度的差异。种质资源的抗病性评价，根据最后烟叶采收完毕，挖根调查，计算病情指数来判断。

1.1.5田间发病规律研究

利用有病连作烟田作病圃，采用田间灌水，诱其自然发病。病害严重度分级应符合YC/T39的规定。自然发病后每隔10d进行一次病害分级调查，每次均应调查各品种的全部植株，并计算各品种的发病率和病情指数，绘出田间消长曲线，判断出病害的盛发期。根据抗性划分标准，评价各测定品种的抗病能力。并对平均病指作方差分析，测定各鉴定材料间抗病的差异。

病害调查分级标准：

0级：全株无病；

1级：茎部病斑不超过茎围的二分之一，或半数以下叶片轻度凋萎，或下部少数叶片出现病斑。

2级：茎部病斑超过茎围的二分之一，或半数以下叶片凋萎。

3级：茎部病斑环绕茎围，或三分之二以上叶片凋萎。

4级：病株全部叶片凋萎或枯死。

根据病株调查数据，按如下公式计算病株率(普遍率)和病情指数(严重度)。

病株率(％)＝发病株数/调查总株数*100；

病情指数＝∑(各级病株数*该病级)/(调查总株数*最高病级)*100。

(2)抗性评价标准

高抗：病情指数0～5，用HR表示；抗病：病情指数为5.01～25，用R表示；中抗：病情指数25.01～50，用MR表示；中感：50.01～75，用MS表示；感病：病情指数75以上，用S表示。

1.1.6数据处理

试验数据用浙江大学唐启义、冯明光编的实用统计分析及其DPS数据处理系统进行分析。

2结果与分析

2.1鉴定材料间的抗性差异

根据田间最后一次调查结果，计算病情指数，根据抗性评价标准评价种质资源抗病性。从表2-5可知：2006年供试的18个品种有5个高抗品种，分别为NC1071、NC95、落地黄、G28、K326，有5个抗病品种，分别为N.nesophila、N.plumbaginifolia、MD609、革新三号、筑波1号，有2个中抗品种金星6007和N.stocktoii，有2个中感品种红大与小黄金1025，有4个感病品种Barley 21、Barley 37、L8与N.nudicaulis。Barley 21、Barley 37、L8与N.nudicaulis表现感病，其感病程度重于对照品种红大与小黄金1025，差异极显著。NC1071、NC95、落地黄高抗，与对照抗病品种G28、K326、革新三号差异不显著。抗病品种N.plumbaginifolia、MD609表现抗病，与对照抗病品种G28、K326、革新三号差异不显著。其余品种抗性居中。

表2-5 2006烟草种质资源的抗性评价

注：*为中后期栏多重比较(SSR)结果。“±”前面数字代表病情指数平均值；后面数字表示标准差。大写字母示P＜0.01水平上差异显著性，小写字母示P＜0.05水平上差异显著性。下同。

2007年烟叶采收完毕后，挖根调查，计算病情指数，根据抗性评价标准评价种质资源的抗病性。07年各品种平均病指间的差异显著性检验结果表明：不同烟草种质对黑胫病的抗性有明显差异，烟草品种柳叶尖的病情指数最高，为95.00，K326的最低，为24.52。感病品种柳叶尖、Black Shank Resistant和许金7号的病指极显著的高于对照品种红花大金元；品种Q1236：Hicks Q46、长把黄光板与感病对照无显著差异，但品种长把黄光板的病指低于感病对照。各抗病品种与对照品种K326的差异性结果表明：品种密叶尖、大柳叶2014的病指极显著的高于对照；品种大红星、金星6007、CV16-2、Islangold、CV78-5、病指显著高于对照；品种晋太7615、乌江1号、筑波1号、CV78-4、Daris Special、落地黄、NC2514与对照无显著差异，但病指均高于对照。NC2514与K326病情指数最低，可推荐抗病育种选用。

表2-6 2007各鉴定材料病指间的差异显著性

表2-7 2008各鉴定材料病指间的差异显著性

烟叶采收完毕后，挖根调查，计算病情指数，根据抗性评价标准评价种质资源的抗病性。通过对39份烟草种质资源抗黑胫病鉴定(表2-7)，抗病对照K326的平均病指7.87，抗性评价在抗病范围内，感病对照红大的平均病指为76.85，抗性评价在感病范围内。烟草品种BL-921发病最重，病情指数最高，达99.07，高于红大病指，与感病对照红大间差异显著，其余品种发病轻于红大，其中潘圆黄、晋太7615与红大间差异不显著，其余品种与红大差异显著。RG17的病情指数最低，为0.93。高抗品种N.plumbaginifolia、G28、NC95、NC86、日本烤烟1、COM烟、OX414、K358、RG17与抗病对照品种K326差异不显著，所有抗病品种CV16-2、CV78-4、Daris Special、落地黄、NC25 14、NC1071、L8、N.nudicaulis、Coker Tobacco、H80 A432、安选79-1、ミィニルト、NC-22-NF、龙岩C2、津引1号、RG12、D101、OX2028与K326差异亦不显著。感病品种有BL-921、红大、潘圆黄、晋太7615、CV78-5、Islangold、MD609、乌江1号、筑波1号、小黄金1025与K326差异极显著。

2.2烟草种质资源抗性鉴定结果

2006年供试的18个品种(表2-8)有5个高抗品种，分别为NC1071、NC95、落地黄、G28、K326，有5个抗病品种，分别为N.nesophila、N.plumbaginifolia、MD609、革新三号、筑波1号，有2个中抗品种金星6007和N.stocktoii，有2个中感品种红大与小黄金1025，有4个感病品种Barley 21、Barley 37、L8与N.nudicaulis。

2007年从对21个鉴定材料的抗病性鉴定结果(表2-8)，根据对烟草黑胫病菌的抗性大体可分为4类：抗病品种、中抗品种、中感品种和感病品种。其中抗病品种有：K326和NC2514，占总鉴定材料的9.52％；中抗品种有：筑波1号、Islangold、CV78-5、密叶尖、金星6007、大红星、晋太7615、CV78-4、乌江1号、CV16-2、大柳叶2014、落地黄和Daris Special，共13个，占61.90％。中感品种有：Q1236：Hicks Q46、长把黄光板和红大，共3个，占14.29％；感病品种有许金7号、柳叶尖和Black Shank Resistant，占14.29％。

2008年对39个鉴定材料抗病性鉴定初步看出，对烟草黑胫病菌的抗性程度大体可分为5类：高抗品种、抗病品种、中抗品种、中感品种和感病品种。其中高抗品种有N.plumbaginifolia、G28、NC95、NC86、日本烤烟1、COM烟、OX414、K358、RG17，共9个，占鉴定材料总数的23.08％；；抗病品种有CV16-2、CV78-4、Daris Special、落地黄、NC2514、K326、NC1071、L8、N.nudicaulis、Coker Tobacco、H80 A432、安选79-1、ミィニルト、NC-22-NF、龙岩C2、津引1号、RG12、D101、OX2028共19个，占鉴定材料总数的48.72％；；中抗品种有乌江1号、筑波1号、MD609、革新三号，共4个，占鉴定材料总数的10.26％；中感品种有Islangold、CV78-5、晋太7615、小黄金1025，共4个，占鉴定材料总数的10.26％；感病品种有红大、潘圆黄、BL-921，占鉴定材料总数的7.69％。其中抗病品种所占比例最高，而感病品种所占比例最低。鉴定结果见表2-8。

表2-8烟草种质资源抗黑胫病结果统计

表2-9品种抗性汇总

(年度间不一致的几个品种差异不大，采用平均值判断抗病性水平)

2.3烟草种质鉴定材料病情消长动态

2007年通过对各鉴定品种连续7次发病率调查，分析各品种资源田间发病消长动态。结果表明随田间生长期的增长，病害呈现总体上升趋势，各种质发病盛期多集中在5月下旬至6月下旬。21份供试种质因发病高峰所在时间不同可分3种类型：第1种类型为感病品种Black Shank Resistant、许金7号、柳叶尖发病高峰集中在5月25日至6月5日时间段，6月5日至6月16日发病稍有减缓，6月中旬以后病情稳定，这一类品种发病时间集中在5月下旬至6月中旬。第2种类型为长把黄光板、大柳叶2014、密叶尖、大红星、金星6007、CV16-2、Q1236：Hicks Q46、红大、晋太7615、筑波1号发病高峰在6月5日至6月16日时间段，这一类品种发病时间集中在5月下旬至6月下旬；第3种类型为大柳叶2014、CV78-5、乌江1号、CV78-4、Daris Special、落地黄、NC2514、K326发病盛期在6月16至6月27日，为6月中下旬，这些品种发病时间集中在6月上旬至7月上旬。第三类品种皆为中抗或抗病品种，除大柳叶2014发病较早外，其余种质皆发病晚抗性高。第一类品种皆为感病品种，发病早而抗性低。由此看出种质资源的抗病性与发病早晚有关，这可能与后期植株粗大、角质层增厚、木质部形成使病菌不易侵入有关。