一种杨梅叶提取物的制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102727540 A (43)申请公布日 2012.10.17 CN 102727540 A *CN102727540A* (21)申请号 201210234858.5 (22)申请日 2012.06.25 A61K 36/185(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 1/12(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 31/06(2006.01) A61P 11/04(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 9/12(2006.01) A61K 127/00(2006.01) (71)申。

2、请人 陆建益 地址 315326 浙江省慈溪市宁波拓邦电线电 缆有限公司内 (72)发明人 陆建益 (54) 发明名称 一种杨梅叶提取物的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种杨梅叶提取物的制备方 法， 原料采用新鲜状态的杨梅叶， 经过洗净、 粉碎、 加水打浆， 压榨后得榨汁液和原料渣， 将榨汁液提 取分离， 得到榨汁液粗提物 ； 然后继而对原料渣 提取分离， 得到原料渣粗提物， 再将榨汁液粗提物 和原料渣粗提物合并用 90以上乙醇提取精制 得杨梅叶提取物。本发明既解决了在工业化生产 中难以大量得到高纯度低成本提取杨梅叶总黄酮 产品的问题， 又实现了最大限度的从新鲜杨梅叶 中提取出有效物质。

3、总黄酮， 有利于后续的高纯度 提取物制备。 且工艺流程简单， 无需大量有机溶剂 进行提取， 绿色、 环保、 生产成本低。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种杨梅叶提取物的制备方法， 其特征在于依次包括下述步骤 ： (1) 取新鲜状态的杨梅叶洗净， 粉碎， 得粉碎叶 ； (2)将粉碎叶放入榨汁机中， 加入粉碎叶38倍重量的水打浆， 压榨， 得榨汁液及原料 渣 ； (3) 取榨汁液过滤， 滤液过 AB-8 大孔树脂吸附， 先用水， 后用含水乙醇洗脱， 。

4、收集洗脱 液经浓缩、 干燥后得榨汁液粗提物 ； (4) 取原料渣， 加入原料渣 2 6 倍重量的水提取， 将提取液过滤， 滤液过 AB-8 大孔树 脂吸附， 先用水， 后用含水乙醇洗脱， 收集洗脱液经浓缩、 干燥后得原料渣粗提物 ； (5) 将榨汁液粗提物和原料渣粗提物合并用 90以上乙醇提取精制得杨梅叶提取物。 2. 如权利要求 1 所述的一种杨梅叶提取物的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 (1) 中， 新鲜状态的杨梅叶是树龄为 5 年以上， 于 3 月至 4 月和 6 月至 11 月 从树上采摘下之后不超过 48 小时的鲜杨梅叶。 3. 如权利要求 1 所述的一种杨梅叶提取物的制备方法，。

5、 其特征在于， 所述步骤 (3) 和 (4) 中， 含水乙醇为 35 75乙醇。 4. 如权利要求 1 所述的一种杨梅叶提取物的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 (4) 中， 提取方法为在 35 65下浸提 2 4 次， 每次 0.5 2 小时。 权 利 要 求 书 CN 102727540 A 2 1/4 页 3 一种杨梅叶提取物的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种杨梅叶提取物的制备方法， 属于植物提取技术领域。 背景技术 0002 杨梅(Myrica rubra)是杨梅科常绿乔木植物， 主产于我国浙江、 江苏、 福建、 江西、 湖南及广东， 资源十分丰富。杨梅为药食两用的芳香植。

6、物， 在 本草纲目 中记载， 杨梅的 果实、 核、 根、 树皮均可入药， 有止血、 疗烫伤、 治痈肿、 止腹泻等功效， 民间有用杨梅叶治烫 伤、 臃肿、 腹痛等疾病的习俗 ( 中药大辞典 1979)。已有的研究结果表明， 杨梅叶中存在较 高含量的总黄酮， 总黄酮主要为杨梅素、 槲皮素等， 具有收敛剂， 兴奋剂和催吐剂的作用， 可 治疗腹泻、 黄胆肝炎、 淋巴结核、 慢性咽喉炎等疾病。 从杨梅叶中提取出的黄酮醇甙、 黄酮醇 等黄酮类化合物均具有保肝降酶、 调血脂、 抗血小板活化因子、 抗氧化、 抗病毒、 抑制恶性肿 瘤细胞转移和生长、 以及增强机体免疫功能等多种药理活性 夏其乐等，“食品科学” 。

7、2004， 25(1) ： 55 57。杨梅叶中分离得到的总黄酮具有降血糖、 降血压的作用 李国成等，“中 草药” 2011， 42(5) ： 863 865。 0003 鉴于杨梅叶具有上述等功效， 近年来国内外对杨梅叶提取方法进行了大量的研 究， 取得了较大进展， 具有代表性的是有机溶剂萃取法， 将干杨梅叶粉碎用乙醇提取， 提取 液过滤， 滤液过树脂吸附柱， 用低级醇洗脱， 洗脱液浓缩， 干燥得到杨梅叶提取物。 这一方法 的提取溶剂使用不充分， 造成提取溶剂使用量大， 料液浓缩量大， 导致溶剂残留多， 所得产 品收率低， 生产成本高， 工艺步骤较多也较为复杂， 且安全性较差 胡静丽等，“杨梅。

8、叶黄酮 类化合物最佳提取工艺研究” 食品科学 2003 年第 01 期 ， 以干杨梅叶为原料， 利用超声 波振动增加溶剂进入杨梅叶细胞的渗透性， 获得自身的巨大加速度和动能， 产生空化气泡， 气泡剧烈运动对细胞形成强大的剪切力， 有效地破碎杨梅叶的细胞壁， 加速胞内物质向介 质释放、 扩散和溶解， 将杨梅叶中的总黄酮提取出来。 而申请人通过实验发现杨梅叶在干燥 过程中会丧失大量的生物活性物质， 其有效成分的破坏程度也很大， 对后续的总黄酮精制 影响较大。 另外， 杨梅叶干燥后， 细胞壁木质化， 细胞液系统环境发生改变， 水难以进入细胞 内部， 只能用有乙醇等机溶剂提取， 其杂质多、 提取率低，。

9、 相应的生产成本也较高， 不利于工 业化生产。 又因杨梅叶质量受天气、 产地、 采集时间、 存期等因素影响， 导致杨梅叶的有效成 分含量不稳定， 较难得到高质量的产品。 因此， 申请人从新鲜状态的杨梅叶中制备提取物的 想法应运而生， 而国内外尚没有文献报道。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种杨梅叶提取物的制备方法， 可最大限度保存杨梅叶中 的天然生物活性物质， 有利于提高产品得率以及后续的总黄酮高纯度制备， 且工艺简单、 生 产成本低。 0005 本发明中提取物的制备是通过下述步骤实现的 ： 0006 (1) 取新鲜状态的杨梅叶洗净， 粉碎， 得粉碎叶 ； 说 明 书 CN 102。

10、727540 A 3 2/4 页 4 0007 (2)将粉碎叶放入榨汁机中， 加入粉碎叶38倍重量的水打浆， 压榨， 得榨汁液及 原料渣 ； 0008 (3) 取榨汁液过滤， 滤液过 AB-8 大孔树脂吸附， 先用水， 后用含水乙醇洗脱， 收集 洗脱液经浓缩、 干燥后得榨汁液粗提物 ； 0009 (4) 取原料渣， 加入原料渣 2 6 倍重量的水提取， 将提取液过滤， 滤液过 AB-8 大 孔树脂吸附， 先用水， 后用含水乙醇洗脱， 收集洗脱液经浓缩、 干燥后得原料渣粗提物 ； 0010 (5) 将榨汁液粗提物和原料渣粗提物合并用 90以上乙醇提取精制得杨梅叶提 取物。 0011 所述步骤 (。

11、1) 中， 新鲜状态的杨梅叶是树龄为 5 年以上， 于 3 月至 4 月和 6 月至 11 月从树上采摘下之后不超过 48 小时的鲜杨梅叶。 0012 所述步骤 (3) 和 (4) 中， 含水乙醇为 35 75乙醇， 最佳 70乙醇。 0013 所述步骤 (4) 中， 提取方法为在 35 65下浸提 2 4 次， 每次 0.5 2 小时。 0014 本发明中， 以新鲜状态的杨梅叶为原料， 进行压榨处理， 使杨梅叶的有效成分得以 最大程度的保留。经研究显示， 新鲜状态的杨梅叶体内生物活性成分为均态存在， 细胞液 系统稳定， 而其细胞壁比较脆弱， 此时进行匀浆压榨， 可使细胞壁破坏， 活性成分被快。

12、速提 取出来， 经过压榨所得的榨汁液直接提取分离， 就可得到具有大部分生物活性成分的杨梅 叶提取物。而压榨后的原料渣中还有一小部分生物活性成分， 申请人对原料渣部分用热水 再次进入细胞内部进行提取， 在综合利用鲜杨梅叶原料的同时又进一步提高了提取率和收 率。 结果证实， 本发明所得到的杨梅叶总黄酮提取率超过4， 在杨梅叶提取物中， 总黄酮达 58以上， 该总黄酮的含量测定参见文献 山西中医 ， 2008， 24(2) ： 55 57。 0015 申请人在杨梅叶的原料考察中， 发现鲜杨梅叶中总黄酮的含量比干杨梅叶 ( 烘干 或晒干)高出许多。 对干、 鲜杨梅叶总黄酮的含量分析方法参见 分析化学 。

13、， 1998年05期， “反相高效液相色谱分析杨梅叶中抗氧化成分黄酮类化合物” ， 具体数据见下表 1 ： 0016 表 1 为干杨梅叶 ( 烘干或晒干 )、 新鲜杨梅叶的总黄酮含量 0017 0018 由上表 1 可以看出烘干或晒干的杨梅叶中总黄酮的含量与鲜杨梅叶相比， 两者差 距十分明显， 因为杨梅叶在干燥过程中造成杨梅叶的生物活性成分的丧失， 又因从树上采 摘下之后超过 48 小时的鲜杨梅叶未经处理， 其含有的总黄酮将会大量分解， 导致提取物中 含量显著降低。为此， 本发明中采用杨梅树上采摘下的鲜杨梅叶立刻用于杨梅叶提取物的 制备， 以尽可能地减少总黄酮的降解， 无疑提高了所得产品的收率。

14、和提取率， 有利于后续工 序的提纯。 经检索， 在以前的工业化生产中从未使用过新鲜状态的杨梅叶作为原料， 这是本 说 明 书 CN 102727540 A 4 3/4 页 5 发明的重大创新。 0019 杨梅叶常年绿色， 全年均可采收。一般地， 杨梅树 5 月为花蕾期， 12 2 月为休眠 期， 以此阶段采摘的鲜杨梅叶受生长周期的影响， 总黄酮的含量最低。 因此， 依据本发明， 为 了不使最终提取物中总黄酮含量受到过大影响， 所使用的鲜杨梅叶不在5月、 12月、 1月和2 月这四个月份中进行采摘。另外， 在一年的其它时间中， 虽然因生长周期影响， 鲜杨梅叶中 总黄酮含量也会有波动， 但是对得到。

15、的杨梅叶提取物中的总黄酮的最低含量无太大影响。 0020 申请人之所以没有选用树龄为 5 年以下的鲜杨梅叶， 一方面因为杨梅树定植后 34年处于始果期， 5年后进入盛果期， 始果期的杨梅叶生物总量不多， 会影响提取率和收 率 ； 另一方面， 在始果期大量采摘杨梅叶不利于杨梅树的生长。因而在本发明中， 确立最佳 采摘树龄为 5 年以上。 0021 本发明通过对新鲜状态的杨梅叶压榨直接提取分离， 既解决了在工业化生产中难 以大量得到高纯度低成本提取杨梅叶总黄酮产品的问题， 又实现了最大限度的从鲜杨梅叶 中提取出有效物质总黄酮， 有利于后续的高纯度提取物制备。 且工艺流程简单， 无需大量有 机溶剂进。

16、行提取， 绿色、 环保、 生产成本低。 具体实施方式 0022 下面的实施例， 用于进一步说明和描述本发明， 但并不意味着本发明仅限于此。 0023 实施例一 ： 0024 选取树龄 15 年， 于 8 月份从树上采摘下之后不超过 48 小时、 无黄萎、 无腐坏的鲜 杨梅叶 100kg， 用清水洗净沥干后， 用粉碎机粉碎至 30 60 目， 使鲜杨梅叶细胞破壁， 得破 碎叶 ； 将粉碎叶放入榨汁机中， 再加入 300kg 的水后， 榨汁机按每分钟 60 转的转速搅拌打 浆 25 分钟， 压榨分离， 得榨汁液及原料渣。榨汁液用滤纸抽滤后过 AB-8 大孔树脂吸附， 流 速 0.5BV/h， 先用。

17、水洗脱， 后用醇度 70乙醇水溶液解吸， 解吸液回收乙醇后真空浓缩， 浓 缩至 10 B， 喷雾干燥， 获得杨梅叶提取物 14.6kg， 收率 ( 原料折干计 )4.87， 总黄酮含 量 61.4。 0025 实施例二 ： 0026 选取树龄 8 年， 于 9 月份从树上采摘下之后不超过 48 小时、 无黄萎、 无腐坏的鲜杨 梅叶 100kg， 用清水洗净沥干后， 用粉碎机粉碎至 35 70 目， 使鲜杨梅叶细胞破壁， 得破碎 叶 ； 将粉碎叶放入榨汁机中， 再加入 320kg 的水后， 榨汁机按每分钟 45 转的转速搅拌打浆 35 分钟， 压榨分离， 得榨汁液及原料渣。榨汁液用滤纸抽滤后过 。

18、AB-8 大孔树脂吸附， 流速 0.5BV/h， 先用水洗脱， 后用醇度 70乙醇水溶液解吸， 解吸液回收乙醇后真空浓缩， 浓缩至 10 B， 喷雾干燥， 获得杨梅叶提取物 10.7kg， 总黄酮含量 59.6。 0027 取原料渣， 加入原料渣 3 倍重量 50的热水， 提取 2 次， 每次 1.5 小时， 过滤， 滤 液过 AB-8 大孔树脂吸附， 流速 0.5BV/h， 先用水洗脱， 后用醇度 70乙醇水溶液解吸， 解吸 液回收乙醇后真空浓缩， 浓缩至 10 B， 喷雾干燥， 获得杨梅叶提取物 4.6kg， 总黄酮含量 52.7。 0028 榨汁液和原料渣合并提取后的杨梅叶提取物的总收率。

19、 ( 原料折干计 ) 为 5.1。 0029 实施例三 ： 0030 选取树龄 20 年， 于 3 月份从树上采摘下之后不超过 48 小时、 无黄萎、 无腐坏的鲜 说 明 书 CN 102727540 A 5 4/4 页 6 杨梅叶 100kg， 用清水洗净沥干后， 用粉碎机粉碎至 40 75 目， 使鲜杨梅叶细胞破壁， 得破 碎叶 ； 将粉碎叶放入榨汁机中， 再加入380kg的水后， 榨汁机按每分钟50转的转速搅拌打浆 30 分钟， 压榨分离， 得榨汁液及原料渣。榨汁液用滤纸抽滤后过 AB-8 大孔树脂吸附， 流速 0.5BV/h， 先用水洗脱， 后用醇度 70乙醇水溶液解吸， 解吸液回收乙。

20、醇后真空浓缩， 浓缩至 10 B， 喷雾干燥， 获得杨梅叶提取物 11.9kg， 总黄酮含量 60.3。 0031 取原料渣， 加入原料渣 3 倍重量 60的热水， 提取 3 次， 每次 1 小时， 过滤， 滤液 过 AB-8 大孔树脂吸附， 流速 0.5BV/h， 先用水洗脱， 后用醇度 70乙醇水溶液解吸， 解吸 液回收乙醇后真空浓缩， 浓缩至 10 B， 喷雾干燥， 获得杨梅叶提取物 3.8kg， 总黄酮含量 51.7。 0032 榨汁液和原料渣合并提取后的杨梅叶提取物的总收率 ( 原料折干计 ) 为 5.23。 0033 实施例四 ： 0034 选取树龄 25 年， 于 4 月份从树上。

21、采摘下之后不超过 48 小时、 无黄萎、 无腐坏的鲜 杨梅叶 100kg， 用清水洗净沥干后， 用粉碎机粉碎至 30 65 目， 使鲜杨梅叶细胞破壁， 得破 碎叶 ； 将粉碎叶放入榨汁机中， 再加入430kg的水后， 榨汁机按每分钟55转的转速搅拌打浆 35 分钟， 压榨分离， 得榨汁液及原料渣。榨汁液用滤纸抽滤后过 AB-8 大孔树脂吸附， 流速 0.5BV/h， 先用水洗脱， 后用醇度 70乙醇水溶液解吸， 解吸液回收乙醇后真空浓缩， 浓缩至 10 B， 喷雾干燥， 获得杨梅叶提取物 13.3kg， 总黄酮含量 61.3。 0035 取原料渣， 加入原料渣 4 倍重量 60的热水， 提取 。

22、4 次， 每次 0.5 小时， 过滤， 滤 液过 AB-8 大孔树脂吸附， 流速 0.5BV/h， 先用水洗脱， 后用醇度 70乙醇水溶液解吸， 解吸 液回收乙醇后真空浓缩， 浓缩至 10 B， 喷雾干燥， 获得杨梅叶提取物 3.9kg， 总黄酮含量 53.4。 0036 榨汁液和原料渣合并提取后的杨梅叶提取物的总收率 ( 原料折干计 ) 为 5.73。 0037 实施例五 ： 0038 选取树龄 25 年， 于 10 月份从树上采摘下之后不超过 48 小时、 无黄萎、 无腐坏的鲜 杨梅叶 100kg， 用清水洗净沥干后， 用粉碎机粉碎至 25 45 目， 使鲜杨梅叶细胞破壁， 得破 碎叶 ；。

23、 将粉碎叶放入榨汁机中， 再加入500kg的水后， 榨汁机按每分钟35转的转速搅拌打浆 60 分钟， 压榨分离， 得榨汁液及原料渣。榨汁液用滤纸抽滤后过 AB-8 大孔树脂吸附， 流速 0.5BV/h， 先用水洗脱， 后用醇度 70乙醇水溶液解吸， 解吸液回收乙醇后真空浓缩， 浓缩至 10 B， 喷雾干燥， 获得杨梅叶提取物 13.9kg， 总黄酮含量 61.7。 0039 取原料渣， 加入原料渣 5 倍重量 60的热水， 提取 1 次， 提取时间为 2 小时， 过滤， 滤液过 AB-8 大孔树脂吸附， 流速 0.5BV/h， 先用水洗脱， 后用醇度 70乙醇水溶液解吸， 解 吸液回收乙醇后真空浓缩， 浓缩至 10 B， 喷雾干燥， 获得杨梅叶提取物 3.7kg， 总黄酮含 量 55.4。 0040 榨汁液和原料渣合并提取后的杨梅叶提取物的总收率 ( 原料折干计 ) 为 5.87。 说 明 书 CN 102727540 A 6 。