一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法.pdf

《一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法.pdf（16页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410268597.8 (22)申请日 2014.06.16 A23J 1/10(2006.01) A23J 3/34(2006.01) (73)专利权人 中国农业科学院农产品加工研究 所 地址 100193 北京市海淀区圆明园西路 2 号 院 (72)发明人 张春晖 胡礼 王金枝 李侠 贾伟 (74)专利代理机构 北京远大卓悦知识产权代理 事务所 ( 普通合伙 ) 11369 代理人 史霞 CN 101874590 A,2010.11.03, CN 101033481 A,2007.09.12, CN 101317668 A,20。

2、08.12.10, CN 102690372 A,2012.09.26, CN 102488180 A,2012.06.13, (54) 发明名称 一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的 方法 (57) 摘要 本发明公开了一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽 及风味基料的方法， 通过采用两段热压抽提方法， 并经过轻微泄压补压处理， 大幅度提高从鸡骨中 提取胶原蛋白活性肽的产率 ； 通过将抽提液中的 骨素在进行分步酶解反应之前进行高压均质， 提 高酶解液的水解度。 另外， 通过将酶解液进行两级 超滤， 实现酶解液中不同产物的分离纯化， 并针对 各分子段产物进行后续加工得到包含硫酸软骨素 在内的骨多糖、 大。

3、分子多肽及小分子多肽等不同 产品， 实现对骨素酶解液的充分利用， 尤其是通过 将大分子多肽与木糖、 半胱氨酸及硫胺素进行美 拉德反应， 得到风味浓郁的风味基料。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 张桢 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书2页 说明书7页 附图6页 CN 104095141 B 2016.06.08 CN 104095141 B 1.一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 将鸡骨进行两段热压抽提得到抽提液， 并对从抽提液中提取的骨素进行高压均质处理 后进行分步酶解， 其中所述两段热压抽提方法为： 将鸡骨与水按照1。

4、:1-2质量比混合， 顺次 进行一段热压抽提及二段热压抽提， 其中一段热压抽提温度为110-120， 抽提时间100- 120min， 二段热压抽提温度为130-140， 抽提时间70-90min； 其中， 所述两段热压抽提反应在热压反应罐中进行， 并在两段热压抽提反应结束后进 行轻微泄压补压， 具体方法为： 二段热压抽提结束后， 开启热压反应罐的泄压阀8-10min， 使 热压反应罐内温度降低5-10后关闭泄压阀8-10min， 并使温度上升5-10， 按照此步骤重 复3-5次； 此外， 还包括以下步骤： 步骤一、 分步酶解反应， 将经过高压均质处理后的骨素按照先后顺序分别与复合蛋白 酶及风。

5、味蛋白酶混合进行分步酶解反应， 得到酶解液； 步骤二、 二级超滤， 将所得酶解液采用截留分子量为9-10kDa的超滤膜进行一级超滤， 得到一级截留液和一级滤出液， 将一级滤出液采用截留分子量为2-3kDa的超滤膜进行二级 超滤， 得到二级截留液和二级滤出液； 步骤三、 风味基料的制备， 将所得一级截留液采用乙醇沉淀法进行处理， 静置沉淀， 取 上清液和二级截留液混合形成美拉德反应前体， 将所得美拉德反应前体与一定量的木糖、 半胱氨酸和硫胺素混合后进行热压反应， 得到美拉德反应产物， 将所得美拉德反应产物浓 缩干燥后既得所述风味基料； 步骤四、 胶原蛋白活性肽的制备， 将步骤二中所得二级滤出液进。

6、行浓缩干燥既得胶原 蛋白活性肽。 2.如权利要求1所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 步骤 一中所加复合蛋白酶及风味蛋白酶的质量分别为所用骨素质量的0.2-0.3， 酶解反应温 度均为51-53， 各步酶解反应分别进行100-120min， 各步酶解反应结束后分别升温至90- 100并保持20-30min进行酶灭活。 3.如权利要求1所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 步骤 三中所述乙醇沉淀法的具体方法为： 将所述一级截留液与90-100乙醇按照1:2-3的体积 比进行混合后， 经8000-10000r/min离心， 得到上层清夜和下层沉淀。。

7、 4.如权利要求3所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 将乙 醇沉淀法所得下层沉淀用90-100乙醇脱水处理2-3次后， 经干燥后得到硫酸软骨素。 5.如权利要求1所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 步骤 三中所加木糖、 半胱氨酸和硫胺素的质量分别为所用美拉德反应前体质量的0.4-0.6， 所 述热压反应温度为100-110， 热压反应时间为80-100min。 6.如权利要求1所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 所述 骨素的提取方法为： 将所得抽提液筛除骨渣后进行静置分层， 去除上层油相后既得所述骨 素； 另外， 对。

8、骨素进行高压均质的方法为： 采用高压均质机对骨素进行高压均质， 其中设定 均质温度702， 压力302MPa， 转速700-800r/min， 均质时间5-8min。 7.如权利要求6所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 采用 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 104095141 B 2 振动筛除法对抽提液进行骨渣筛除， 所用振动筛孔径为40-50目， 并可将筛除的骨渣及热压 反应罐中残存的骨渣经粉碎干燥制备为骨粉。 8.如权利要求7所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 取静 置分层后的上层油相并将上层油相加热到80左右， 加入体积为上层。

9、油相10-15的90-95 热水， 10-15r/min搅拌8-10min， 静置沉降20-30min后去除水相， 将剩余油相加热至100- 115后在30min以内降温至80-85得到骨油。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 104095141 B 3 一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法 技术领域 0001 本发明涉及生物技术领域， 尤其涉及一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的 方法。 背景技术 0002 近10年来世界肉类生产中鸡肉产量增长很快， 我国鸡肉产量居世界第二位， 而鸡 骨年产量可高达700万吨， 占活畜禽总重的25。 鸡骨营养相当丰富， 其蛋白质和脂肪含量 与。

10、等量鲜肉相似， 分别为16.3和14.5， 而钙、 磷、 铁及锌等矿物质元素是鲜肉的数倍， 并 且比例适宜， 其中钙含量为3.95， 磷含量为2.04。 鸡骨蛋白是较为全价的可溶性蛋白 质， 生物价高， 是优质的蛋白源。 此外， 鸡骨中还含有大量其它人体必需的营养素， 如各种氨 基酸和维生素A、 D、 B1、 B12等， 尤其是含有大脑不可缺少的磷脂质和磷蛋白， 可防止衰老和加 强皮层细胞代谢的骨胶原与硫酸软骨素， 以及能促进肝功能的蛋氨酶。 由此可见， 鸡骨具有 重要的综合利用和开发价值， 但是长期以来由于资金、 技术等方面的原因， 大量的鸡骨没有 得到合理的利用， 而被加工成附加值很低的产。

11、品， 如骨泥、 饲料或肥料等， 没有完全体现出 鸡骨的营养价值， 甚至有的被遗弃并造成严重的环境污染。 随着我国禽类加工产业的发展， 如何实现鸡骨高值化利用， 提高鸡骨的利用附加值是目前面临的严峻问题。 0003 目前， 对鸡骨的利用主要是提取鸡骨中的胶原蛋白或硫酸软骨素， 采用的工艺方 法虽然能够提取鸡骨软骨中的II型胶原蛋白， 但对占骨架质量60左右的硬骨中的I型胶 原蛋白的提取率很低或是仅是对鸡骨酶解得到硫酸软骨素， 而酶解液则作为废水处理， 这 些方法不但鸡骨的利用率低， 同时也对环境造成较大的污染。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 。

12、通过采用 两段热压抽提方法， 并经过轻微泄压补压处理， 使鸡骨得到充分热解， 硬骨中的I型胶原蛋 白和软骨中的II型胶原蛋白等得到充分提取， 从而大幅度提高从鸡骨中提取胶原蛋白活性 肽的产率； 另外， 通过将抽提液中的骨素在进行分步酶解反应之前进行高压均质， 促进骨素 中胶原蛋白进行物理解聚， 从而大幅度提高酶解液的水解度。 0005 本发明的另一个目的是， 通过将抽提液中的骨素由复合蛋白酶及风味蛋白酶进行 分步酶解， 一方面复合蛋白酶能够增加酶切位点， 从而增加酶解的效果， 获得大量多肽， 另 一方面风味蛋白酶对多肽分子链末端进行修饰， 提高胶原蛋白活性肽的产物风味。 0006 本发明的又一。

13、个目的是， 通过将酶解液进行两级超滤， 实现酶解液中不同产物的 分离纯化， 并针对各分子段产物进行后续加工得到包含硫酸软骨素在内的骨多糖、 大分子 多肽及小分子多肽等不同产品， 实现对骨素酶解液的充分利用， 尤其是通过将大分子多肽 与木糖、 半胱氨酸及硫胺素进行美拉德反应， 得到风味浓郁的风味基料。 0007 本发明的技术方案为： 0008 一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 说 明 书 1/7 页 4 CN 104095141 B 4 0009 将鸡骨进行两段热压抽提得到抽提液， 并对从抽提液中提取的骨素进行高压均质 处理后进行分步酶解， 其中所述两段热压抽提方法为：。

14、 将鸡骨与水按照11-2质量比混合， 顺次进行一段热压抽提及二段热压抽提， 其中一段热压抽提温度为110-120， 抽提时间 100-120min， 二段热压抽提温度为130-140， 抽提时间70-90min； 0010 此外， 还包括以下步骤： 0011 步骤一、 分步酶解反应， 将经过高压均质处理后的骨素按照先后顺序分别与复合 蛋白酶及风味蛋白酶混合进行分步酶解反应， 得到酶解液； 0012 步骤二、 二级超滤， 将所得酶解液采用截留分子量为9-10kDa的超滤膜进行一级超 滤， 得到一级截留液和一级滤出液， 将一级滤出液采用截留分子量为2-3kDa的超滤膜进行 二级超滤， 得到二级截留。

15、液和二级滤出液； 0013 步骤三、 风味基料的制备， 将所得一级截留液采用乙醇沉淀法进行处理， 静置沉 淀， 取上清液和二级截留液混合形成美拉德反应前体， 将所得美拉德反应前体与一定量的 木糖、 半胱氨酸和硫胺素混合后进行热压反应， 得到美拉德反应产物， 将所得美拉德反应产 物浓缩干燥后既得所述风味基料； 0014 步骤四、 胶原蛋白活性肽的制备， 将步骤二中所得二级滤出液进行浓缩干燥既得 胶原蛋白活性肽。 0015 优选的是， 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 所述两段热压 抽提反应在热压反应罐中进行， 并在两段热压抽提反应结束后进行轻微泄压补压， 具体方 法为： 二段热压。

16、抽提结束后， 开启热压反应罐的泄压阀8-10min， 使热压反应罐内温度降低 5-10后关闭泄压阀8-10min， 并使温度上升5-10， 按照此步骤重复3-5次。 0016 优选的是， 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 步骤一中所加 复合蛋白酶及风味蛋白酶的质量分别为所用骨素质量的0.2-0.3， 酶解反应温度均为51- 53， 各步酶解反应分别进行100-120min， 各步酶解反应结束后分别升温至90-100并保 持20-30min进行酶灭活。 0017 优选的是， 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 步骤三中所述 乙醇沉淀法的具体方法为： 将所述一级截留液。

17、与90-100乙醇按照12-3的体积比进行混 合后， 经8000-10000r/min离心， 得到上层清夜和下层沉淀。 0018 优选的是， 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 将乙醇沉淀法 所得下层沉淀用90-100乙醇脱水处理2-3次后， 经干燥后得到硫酸软骨素。 0019 优选的是， 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 步骤三中所加 木糖、 半胱氨酸和硫胺素的质量分别为所用美拉德反应前体质量的0.4-0.6， 所述热压反 应温度为100-110， 热压反应时间为80-100min。 0020 优选的是， 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 所述骨。

18、素的提 取方法为： 将所得抽提液筛除骨渣后进行静置分层， 去除上层油相后既得所述骨素； 0021 另外， 对骨素进行高压均质的方法为： 采用高压均质机对骨素进行高压均质， 其中 设定均质温度702， 压力302MPa， 转速700-800r/min， 均质时间5-8min。 0022 优选的是， 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 采用振动筛除 法进行骨渣筛除， 所用振动筛孔径为40-50目， 并可将筛除的骨渣及热压反应罐中残存的骨 渣经粉碎干燥制备为骨粉。 说 明 书 2/7 页 5 CN 104095141 B 5 0023 优选的是， 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料。

19、的方法中， 取静置分层后 的上层油相并将上层油相加热到80左右， 加入体积为上层油相10-15的90-95热水， 10-15r/min搅拌8-10min， 静置沉降20-30min后去除水相， 将剩余油相加热至100-115后 在30min以内降温至80-85得到骨油。 0024 本发明具有以下有益效果： 本发明所述的一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基 料的方法， 通过采用两段热压抽提方法， 并经过轻微泄压补压处理， 使鸡骨得到充分热解， 硬骨中的I型胶原蛋白和软骨中的II型胶原蛋白等胶原蛋白得到充分提取， 使抽提液中胶 原蛋白的含量达到40mg/g左右， 尤其是对于硬骨中的I型胶原蛋白的提取。

20、， 传统的常压蒸煮 方法很难提取到硬骨中的I型胶原蛋白， 而本发明对硬骨中I型胶原蛋白提取率提高了3倍 以上， 使硬骨中的I型胶原蛋白得到有效利用， 并大幅度提高从鸡骨中提取胶原蛋白活性肽 的产率， 所得产物的多肽含量达91； 另外， 通过将抽提液中的骨素在进行分步酶解反应之 前进行高压均质， 促进骨素中胶原蛋白进行物理解聚， 从而大幅度提高酶解液的水解度， 使 水解度达30以上， 而传统方法水解度仅能达到20左右。 0025 此外， 通过将抽提液中的骨素由复合蛋白酶及风味蛋白酶进行分步酶解， 一方面 复合蛋白酶能够增加酶切位点， 能够充分酶解不易溶解的胶原蛋白， 从而增加酶解的效果， 获得大。

21、量多肽， 另一方面风味蛋白酶对多肽分子链末端进行修饰， 使酶解产生的苦味肽含 量得到控制， 鲜味肽含量增多， 大大提高了产物的风味。 0026 同时， 通过将酶解液进行两级超滤， 实现酶解液中不同产物的分离纯化， 并针对各 分子段产物进行后续加工得到包含硫酸软骨素在内的骨多糖、 大分子多肽及小分子多肽等 不同产品， 其中所得硫酸软骨素含量高于92， 实现对骨素酶解液的充分利用， 尤其是通过 将大分子多肽与木糖、 半胱氨酸及硫胺素进行美拉德反应， 反应过程中大分子多肽和木糖 发生羰氨反应生成的中间产物与半胱氨酸和硫胺素的热压产物反应生成美拉德产物， 得到 风味浓郁的风味基料， 根据GC-MS的结。

22、果分析， 风味基料中的吡嗪含量约是酶解液的10倍， 醛酮类约是酶解液的2.5倍， 证明了美拉德反应的生香作用。 本发明迎合市场需求的同时实 现废弃物的资源化利用， 且不添加任何无机酸、 碱， 工艺流程紧凑， 工艺参数精准， 人为干扰 因素少， 适合企业规模化生产， 充分利用低价值鸡骨获得多种具有市场前景的产品， 实现鸡 骨的高附加值利用， 降低农副产品加工对环境的污染的同时提高企业经济效益， 为鸡骨综 合利用提供技术支持。 附图说明 0027 图1为本发明所述鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法工艺流程图； 0028 图2为本发明所述分步酶解反应不同酶解时间下水解程度变化曲线图； 0029 。

23、图3为Sigma公司硫酸软骨素标准品高效液相色谱图； 0030 图4为本发明所提取的硫酸软骨素的高效液相色谱图； 0031 图5为不同热压抽提条件下不同物质随热压抽提时间的变化图； 0032 图6为本发明所述骨粉的成分组成表； 0033 图7为本发明所述骨油的成分组成表； 0034 图8为本发明所述骨多糖理化指标分析结果统计表； 0035 图9为各分子段超滤产物及酶解液产物抗氧化性统计表； 说 明 书 3/7 页 6 CN 104095141 B 6 0036 图10为本发明所述美拉德反应产物成分表。 具体实施方式 0037 下面结合附图1-10对本发明做详细说明， 以令本领域普通技术人员参阅。

24、本说明书 后能够据以实施。 0038 如图1所示， 一种鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法， 其特征在于， 将鸡 骨进行两段热压抽提得到抽提液， 将抽提液去除骨渣后投入静置罐中静置分层， 利用罐底 分流阀门分离得到骨素及上层油相， 并对从抽提液中的提取的骨素进行高压均质处理后进 行分步酶解， 其中所述两段热压抽提方法为： 将鸡骨用清水冲洗， 除去表面血迹杂质后， 将 鸡骨与水按照11-2质量比混合加入热压反应罐中， 顺次进行一段热压抽提及二段热压抽 提， 其中一段热压抽提温度为110-120， 抽提时间100-120min， 二段热压抽提温度为130- 140， 抽提时间70-90min；。

25、 0039 此外， 还包括以下步骤： 0040 步骤一、 分步酶解反应， 将经过高压均质处理后的骨素按照先后顺序分别与复合 蛋白酶及风味蛋白酶混合进行分步酶解反应， 得到酶解液； 分步酶解过程在反应釜中进行， 并进行低速搅拌， 转速为20-25r/min， 以增加酶和底物的接触机会， 提高酶解反应效率。 另 外， 所述复合蛋白酶是一种由多种生物酶混合而成的酶， 包括菠萝蛋白酶、 木瓜蛋白酶及中 性蛋白酶等， 所述复合蛋白酶具有多个酶切位点， 具有多个蛋白位点切断功能， 并能有效酶 解胶原蛋白中疏水性基团， 提高胶原蛋白溶解度， 充分酶解不易溶解的胶原蛋白， 获得大量 多肽及氨基酸， 并在风味蛋。

26、白酶的作用下， 多肽分子链末端得到修饰， 从而使酶解液中苦味 肽含量得到控制， 鲜味肽含量增多， 提高产物的风味。 0041 步骤二、 两级超滤， 将所得酶解液采用截留分子量为9-10kDa的超滤膜进行一级超 滤， 得到一级截留液和一级滤出液， 将一级滤出液采用截留分子量为2-3kDa的超滤膜进行 二级超滤， 得到二级截留液和二级滤出液； 本发明中所述酶解液经过200目过滤筛过滤后进 入两级超滤联用设备， 所用超滤膜元件截留分子量分别10kDa、 2kDa， 超滤温度控制在45- 50， 操作压力0.5MPa。 通过对酶解液进行两级超滤， 实现对酶解液中具有不同分子量产物 的分离纯化， 获得1。

27、0kDa、 10kDa-2kDa及2kDa三段物质， 其中10kDa主要成分为包括硫 酸软骨素在内的骨多糖和部分美拉德反应的前体物； 10kDa-2kDa主要成分为大分子多肽， 是主要的美拉德反应的前体物； 2kDa主要为小分子多肽， 富含生物活性， 针对各分子段产 物的特性进行后续加工得到不同产品， 实现对骨素酶解液的充分利用。 各分子段超滤产物 及酶解液产物抗氧化性见图9。 0042 步骤三、 风味基料的制备， 将所得一级截留液采用乙醇沉淀法进行处理， 静置沉 淀， 取上清液和二级截留液混合形成美拉德反应前体， 将所得美拉德反应前体与一定量的 木糖、 半胱氨酸和硫胺素在热压反应釜中混合后进。

28、行热压反应， 反应过程中开低速搅拌， 转 速为20-25r/min， 得到美拉德反应产物； 将所得美拉德反应产物进行夹层水浴降温至60-70 后转入真空浓缩罐进行真空浓缩至Brix40 ， 真空度在0.08MPa以上， 并用喷雾干燥机 将浓缩液进行喷雾干燥后既得所述风味基料， 其中喷雾干燥机进料温度控制为180-190， 出料温度控制为90左右， 成品水分不大于5。 0043 步骤四、 胶原蛋白活性肽的制备， 将步骤二中所得二级滤出液进行浓缩干燥既得 说 明 书 4/7 页 7 CN 104095141 B 7 胶原蛋白活性肽。 本发明所用方法为将二级滤出液进行真空浓缩至Brix40 ， 真空。

29、度在 0.08MPa以上， 并用喷雾干燥机将浓缩液进行喷雾干燥， 其中喷雾干燥机进料温度控制为 180-190， 出料温度控制为90左右， 成品水分不大于5， 获得胶原蛋白活性肽的多肽含 量为91左右， 其中的小分子低聚肽抗氧化及ACE抑制等功能显著， 相对于目前人工合成的 功能性药物， 具有副作用小、 效果显著等特点。 0044 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 所述两段热压抽提反应在 热压反应罐中进行， 并在两段热压抽提反应结束后进行轻微泄压补压， 具体方法为： 二段热 压抽提结束后， 开启热压反应罐的泄压阀8-10min， 使热压反应罐内温度降低5-10后， 关 闭泄压阀。

30、8-10min， 使温度上升5-10至原温度， 并按照此步骤重复3-5次。 经过轻微泄压补 压处理， 能够打破热压反应罐内的动态平衡， 促进物料的动态转换， 提高产物的抽提率， 本 发明能够高效提取硬骨中的I型胶原蛋白和软骨中的II型胶原蛋白等胶原蛋白， 100kg鸡骨 能提取360kgBrix4左右的骨素抽提液， 其中胶原蛋白含量为40mg/g左右。 0045 不同热压抽提时间条件下抽提液中总可溶性物质、 粗蛋白及胶原蛋白含量随热压 抽提时间而变化， 其中总可溶性物质由TSS表示， 鸡骨在热压抽提过程中其内的物质不断的 溶出， 其中主要的物质是蛋白质和少量的可溶性有机化合物， 如图5所示， 。

31、总可溶性物质含 量随着抽提时间延长和抽提温度的提高有不同程度的增加， 在不同抽提温度之间总可溶性 物质含量变化从0.9到5.2， 1.9到5.6， 不同温度下总可溶性物质含量变化显著， 既 P0.05， 抽提温度为120和130时不同抽提时间之间， 总可溶性物质含量不同， 特别是 抽提前90min， 总可溶性物质含量增幅大， 90min过后增加不显著。 不同温度之间粗蛋白含量 变化差异显著， P0.05， 不同抽提温度之间粗蛋白含量变化为从0.54到3.54、 1.23 到3.82， 其中抽提温度为120时粗蛋白含量增幅最大， 抽提温度为120和130时， 抽 提前90min粗蛋白增量幅度大，。

32、 90min后增幅趋于平缓， 当抽提温度为120时， 前20min变化 缓慢， 抽提20min过后其含量急剧增加直到120min时还有大幅增加的趋势， 说明鸡骨中还存 在许多未溶解的胶原蛋白。 0046 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 步骤一中所加复合蛋白酶 及风味蛋白酶的质量分别为所用骨素质量的0.2-0.3， 酶解反应温度均为51-53， 各步 酶解反应分别进行100-120min， 各步酶解反应结束后分别升温至90-100并保持20-30min 进行酶灭活； 另外， 在分步酶解过程中对酶解液进行低速搅拌。 0047 所述酶解反应的条件经多次试验验证得到， 将抽提液分为多。

33、份用不同生物酶分别 水解1h、 2h、 3h、 4h、 5h， 水解时间对水解度(DH)影响如图2所示。 水解度随着水解时间的延长 不断增加， 当水解超过一定时间后水解速率变得缓慢， 水解度上升幅度降低， 是由于随水解 时间的延长， 底物浓度减少或者酶活力下降所致。 木瓜蛋白酶、 复合蛋白和中性蛋白酶在水 解前3h时， 水解度增长迅速说明前3h水解反应剧烈， 蛋白质大量降解成游离的氨基酸。 而3h 后水解度的增长趋势变得平缓。 风味蛋白酶在水解前2h时水解度增加缓慢， 2h后水解反应 剧烈， 在水解4h后水解度增长趋于饱和。 虽然水解时间延长有利于蛋白的彻底水解， 但是水 解超过一定时间后， 。

34、水解度增长趋势趋于饱和， 水解时间越长耗能量越大。 因此， 综合水解 度和能耗确定风味蛋白酶及复合蛋白酶最佳酶解时间分别为2h左右。 0048 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 步骤三中所述乙醇沉淀法 的具体方法为： 将所述一级截留液与90-100乙醇按照12-3的体积比进行混合后， 经 说 明 书 5/7 页 8 CN 104095141 B 8 8000-10000r/min离心， 得到上层清夜和下层沉淀。 将乙醇沉淀法所得下层沉淀用90-100 乙醇脱水处理2-3次后， 经干燥后得到含有92以上硫酸软骨素的骨多糖。 所述骨多糖理化 指标分析结果见图8； 图3为硫酸软骨素标。

35、准品的高效液相色谱图； 图4为本发明所提取的硫 酸软骨素的高效液相色谱图， 经计算本发明所得骨多糖提取物中硫酸软骨素含量为 92.1。 0049 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 步骤三中所加木糖、 半胱 氨酸和硫胺素的质量分别为所用美拉德反应前体质量的0.4-0.6， 所述热压反应温度为 100-110， 热压反应时间为80-100min。 以二级截留液和乙醇沉淀法所得上层清液组成的 美拉德反应前体物在木糖、 半胱氨酸和硫胺素的参与下进行美拉德反应， 其中木糖提供羰 基， 半胱氨酸和硫胺素是主要的肉香味前体物， 反应过程中所得美拉德反应前体物中的多 肽和木糖发生羰氨反应生成的。

36、中间产物与半胱氨酸及硫胺素的热解产物反应生成风味浓 郁的美拉德反应产物， 并经过浓缩干燥得到风味基料， 根据GC-MS的结果分析， 酸类和酮类 物质随酶解时间相对含量变化较小， 所得风味基料中的吡嗪含量约是酶解液的10倍， 吡嗪 类物质大都具有烤肉味， 使得酶解产物肉味浓郁； 醛酮类约是酶解液的2.5倍， 进一步增强 了酶解液的肉味及果香味， 在木糖、 半胱氨酸和硫胺素等添加物的作用下， 美拉德反应加强 了酶解液的风味， 使得产品风味及功能俱佳。 所述美拉德反应产物的成份组成如图10所示， 证明了美拉德反应的生香作用。 0050 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 所述骨素的提取。

37、方法为： 将所得抽提液筛除骨渣后进行静置分层， 去除上层油相后既得所述骨素； 另外， 对骨素进行 高压均质的方法为： 采用高压均质机对骨素进行高压均质， 其中设定均质温度702， 压 力302MPa， 转速700-800r/min， 均质时间5-8min。 均质过程中强烈、 往复的液流剪切、 摩 擦、 离心挤压及液流碰撞等综合作用， 促进骨素中胶原蛋白螺旋物理解聚， 增加其溶解性及 肽链间隙， 为后续分步酶解提供条件， 结果发现经过高压均质的骨素在酶解结束后水解度 为23.4， 比未经过高压均质的骨素酶解液水解度高6以上。 0051 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 采用振动筛。

38、除法进行骨渣 筛除， 所述骨渣中富含羟基磷灰石， 所用振动筛孔径为40-50目。 热压抽提结束后， 大部分骨 渣沉淀在热压抽提罐的底部， 小部分骨渣随骨素一起经热压抽提罐的压力泵泵出， 那么混 合在骨素中的这部分骨渣需要经振动筛筛除， 并可将筛除所得到的骨渣及热压反应罐中残 存的骨渣一起， 经粉碎干燥制备为骨粉， 用于动物饲料或农田无机肥， 其中钙、 磷含量分别 为62.3及29.4。 所述骨粉的成份组成如图6所示。 0052 所述的鸡骨联产胶原蛋白活性肽及风味基料的方法中， 取静置分层后的上层油相 并将上层油相加热到80左右， 加入体积为上层油相10-15的90-95热水， 10-15r/m。

39、in 搅拌8-10min， 静置沉降20-30min后去除水相， 将剩余油相加热至100-115后在30min以内 迅速降温至80-85得到骨油。 所述骨油的成份组成如图7所示。 如图7所示， 由鸡骨制成的 骨油产品基本达到食用调和油标准， 且肉香味浓郁， 营养价值高， 可用于人造奶油和调味油 等。 0053 实施例1 0054 步骤一、 将300kg鸡骨用清水冲洗， 除去表面血迹杂质， 分为三批分别投入热压反 应罐内并按照12的质量比加入定量清水， 进行两段热压抽提， 一段热压抽提温度为120， 说 明 书 6/7 页 9 CN 104095141 B 9 抽提时间120min， 二段热压抽。

40、提温度为130， 抽提时间90min， 期间轻微泄压/补压提高产 物提率， 方法为： 二段热压抽提结束后， 开启热压反应罐的泄压阀10min， 使热压反应罐内温 度降低5后关闭泄压阀10min， 并使温度上升5回复至原温度， 按照此步骤重复3次。 0055 步骤二、 将抽提液采用振动筛除法去除骨渣， 振动筛孔径为40目， 进入静置罐静 置， 利用分流阀分离骨素和上层油相， 骨素经过高压均质机在302MPa条件下均质解聚后 进入酶解反应釜。 0056 步骤三、 将骨素采用分步酶解法进行酶解， 按底物质量的0.2先后添加复合蛋白 酶及风味蛋白酶， 两步酶解反应温度均为51-53， 两步酶解反应分别。

41、进行120min， 两步酶 解反应结束后分别升温至90并保持20min进行酶灭活， 酶解过程中反应釜内开低速搅拌， 转速2025r/min。 0057 步骤三、 酶解液经过200目过滤筛过滤后进入两级超滤联用设备， 超滤膜元件截留 分子量分别10kDa、 2kDa， 超滤温度控制在45-50， 操作压力0.5MPa。 0058 步骤四、 将所述一级截留液与95乙醇按照13的体积比进行混合后， 经过 10000r/min离心， 得到上层清夜和下层沉淀， 下层沉淀继续用95乙醇溶液脱水2次后， 干 燥得到含有硫酸软骨素的骨多糖成品， 上层清液加入二级截留液形成美拉德反应前体物。 0059 步骤五、。

42、 将美拉德反应前体物移入热压反应釜， 分别加入美拉德反应前体物质量 0.5的木糖、 半胱氨酸和硫胺素， 105下热压反应90min， 开低速搅拌， 获得的美拉德产 物， 夹层水浴降温至60-70后转入真空浓缩罐进行真空浓缩至Brix40 ， 真空度在 0.08MPa以上， 用喷雾干燥机将浓缩液干燥， 获得风味基料。 0060 步骤六、 将二级滤出液真空浓缩干燥得到胶原蛋白活性肽； 抽提液中筛除的骨渣 及热压反应罐中残存的骨渣经超微粉碎干燥后制成骨粉， 可用于动物饲料及农田无机肥； 骨油通过分流阀门转移到骨油储存罐， 向80左右温度的骨油中加入15的90热水， 10- 15r/min搅拌10mi。

43、n， 静置沉降30min弃去废水， 将骨油加热到115去除水分， 用夹层水浴迅 速降温至80-85， 降温时间控制在30min内， 获得成品鸡骨油。 0061 尽管本发明的实施方案已公开如上， 但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用， 它完全可以被适用于各种适合本发明的领域， 对于熟悉本领域的人员而言， 可容易地 实现另外的修改， 因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下， 本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的图例。 说 明 书 7/7 页 10 CN 104095141 B 10 图1 说 明 书 附 图 1/6 页 11 CN 104095141 B 11 图2 图3 图4 说 明 书 附 图 2/6 页 12 CN 104095141 B 12 图5 图6 图7 说 明 书 附 图 3/6 页 13 CN 104095141 B 13 图8 图9 说 明 书 附 图 4/6 页 14 CN 104095141 B 14 说 明 书 附 图 5/6 页 15 CN 104095141 B 15 图10 说 明 书 附 图 6/6 页 16 CN 104095141 B 16 。