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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710358739.3 (22)申请日 2017.05.19 (83)生物保藏信息 CGMCC 10722 2015.04.15 (71)申请人 安徽省农业科学院植物保护与农产 品质量安全研究所 地址 230031 安徽省合肥市农科南路40号 (72)发明人 谷春艳 王学峰 陈雨 苏贤岩 杨雪 臧昊昱 张爱芳 (51)Int.Cl. A01N 63/00(2006.01) A01N 63/02(2006.01) A01N 47/38(2006.01) A01P 3/00(2。
2、006.01) (54)发明名称 一种含解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺的杀菌组 合物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种含有解淀粉芽孢杆菌和 咪鲜胺的杀菌组合物及其应用， 该组合物以解淀 粉芽孢杆菌和咪鲜胺为活性成分， 其质量比为6: 11:6。 本发明还公开了所述杀菌组合物的农用 剂型可湿性粉剂和悬浮剂的制备方法及其在防 治草莓炭疽病及灰霉病方面的应用。 本发明的杀 菌组合物与单剂相比对草莓炭疽病及灰霉病的 防治具有明显的增效作用， 可显著提高防治效 果； 降低了草莓炭疽病菌及灰霉病菌对咪鲜胺和 芽孢杆菌的潜在抗药性风险； 减少了化学农药使 用量， 降低了用药成本， 有效改善了环境污染和 农产品。
3、的残留问题， 对人畜、 有益生物、 环境安 全， 从而可以广泛的应用于草莓炭疽病及灰霉病 的防治。 权利要求书1页 说明书6页 CN 107087640 A 2017.08.25 CN 107087640 A 1.一种含解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺的杀菌组合物， 其特征在于该组合物以解淀粉芽孢 杆菌和咪鲜胺为活性成分， 其质量比为20:11:20， 优选配比为6:11:6。 2.根据权利要求1所述的含解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺的组合物， 其特征在于： 所述的解 淀粉芽孢杆菌名称为WH1G， 保存号为CGMCC NO. 10722。 3.根据权利要求1、 2所述的含解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺的组合物， 其特征。
4、在于所述的 解淀粉芽孢杆菌中活孢子数为10亿/克100亿/克。 4.根据权利要求1、 2、 3所述的含解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺的组合物， 其特征在于向活 性成分解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺中加入助剂和填料后， 即可配得适合农业上使用的农用剂 型， 如可湿性粉剂和水悬浮剂。 5.采用的助剂可以选用湿润剂、 分散剂、 渗透剂、 防冻剂、 增稠剂、 增效剂、 消泡剂等各 类助剂中的一种或几种;采用的填料可以为轻质碳酸钙、 白炭黑、 高岭土、 凹凸棒土、 有机膨 润土中的一种或几种。 6.根据权利要求4所述的含解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺的组合物， 其特征在于其中有效 成分占杀菌组合物总重量的20%60%， 助剂占。
5、杀菌组合物总重量的10%30%,其余为填料。 7.根据权利要求5所述的含解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺的组合物在防治草莓炭疽病和草 莓灰霉病方面的应用。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107087640 A 2 一种含解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺的杀菌组合物及其应用 技术领域 0001 本 发 明 属于 农 药 领 域 ， 具 体 涉 及 一 种含 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌（Ba c i l l u s amyloliquefaciens） 和咪鲜胺的组合物及其在防治草莓炭疽病和草莓灰霉病方面的应用。 背景技术 0002 草莓色泽艳丽、 风味浓郁、 营养丰富、 经济效益高、 是目前果品市场上的。
6、高档水果 之一， 在我国多个省市广泛栽培， 且种植面积呈逐年上升的趋势。 为提高草莓产品的产量和 品质， 延长市场供应时间， 目前我国大部地区均采用以大棚和日光温室为主保护地栽培模 式进行种植。 在这种栽培模式下， 由于环境相对密闭， 通风透气性差， 温度、 湿度适宜， 及化 学肥料的过度施用， 草莓极易产生各种病虫害。 0003 草莓炭疽病是我国草莓产区的主要病害之一， 该病害主要危害匍匐茎、 叶柄、 叶 片、 托叶， 花、 果实和根部也可感染， 可导致局部病斑和全株萎蔫。 该病在育苗期发生最为普 遍， 在繁苗阶段和定植初期， 发病率有时高达90% ， 甚至大面积毁灭性死苗也时有发生， 造 。
7、成严重的经济损失。 近年来， 随着全国范围内草莓种植面积的扩大， 设施密闭及高温高湿环 境等导致草莓炭疽病发生日益严重， 造成草莓减产 25%30%， 严重影响草莓的产量和品 质。 0004 草莓灰霉病是草莓生产中以及采后草莓储藏期的一种重要病害， 尤其在草莓开花 结果期遇到低温高湿的环境条件容易导致病害的发生和流行， 引起花和果实的腐烂， 对草 莓产量、 品质影响很大， 损失较为严重。 草莓灰霉病的病原菌为灰葡萄孢， 在十大植物病原 真菌中被列为第二位。 0005 化学防治目前仍然是防治草莓炭疽病和灰霉病的主要手段， 长期以来由于杀菌剂 的多频次、 多剂量的使用 ， 使得病原菌抗药性增加、 。
8、防治效果下降、 环境污染及果实的农药 残留等一系列问题更加突出， 因此寻求一种高效安全的防治方法显得尤为重要， 对草莓产 业的可持续发展具有重要的意义。 0006 解淀粉芽孢杆菌 （Bacillus amyloliquefaciens） 属革兰阳性芽孢杆菌， 是一种与 枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌， 在自然界中分布广泛。 解淀粉芽孢杆菌生长过程中可以 产生一系列具有广泛地抑制真菌和细菌的活性的代谢产物， 在生物防治方面具有广阔的应 用前景， 已逐步成为具有生物农药开发潜力的微生物。 解淀粉芽孢杆菌WH1G， 抑菌谱较广， 对多种病原真菌和病原细菌均有很强的抑制作用， 该菌株生长速度快， 适应环。
9、境能力强， 易 于在植物表面定殖， 并形成优势种群； 诱导寄主产生抗病性； 分泌多种抗菌物质； 对草莓炭 疽病菌及草莓灰霉病菌的防治效果较好。 该菌株对咪鲜胺有天然抗性， 在咪鲜胺含量为 5000ppm的NA培养基中能正常生长， 该菌株与2015年04月15日保藏于在中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心， 保藏号为 CGMCC No.10722。 该菌株命名为WHIG， 分类命名： 解淀粉芽孢杆菌 （Bacillus amyloliquefaciens） 。 0007 咪鲜胺是一种广谱杀菌剂， 对多种作物由子囊菌和半知菌引起的病害具有明显的 防效， 也可以与大多数杀菌剂、 杀虫剂、 除。
10、草剂混用， 均有较好的防治效果。 对大田作物、 水 说 明 书 1/6 页 3 CN 107087640 A 3 果蔬菜、 草皮及观赏植物上的多种病害具有治疗和铲除作用。 咪鲜胺在欧美、 中东、 中国、 日 本等全世界多个国家和地区大面积推广使用多年， 是瓜果类的主要保鲜剂及杀菌剂之一。 由于近年来在我国多次、 连续使用， 使得病原真菌对咪鲜胺的抗药性群体不断增大。 目前在 我国草莓病害防治上应用的咪鲜胺产品多数是单剂， 仅有的少数复配剂也是与其它化学药 剂进行复配， 对于延缓和治理咪鲜胺的抗药性作用有限。 至今还未发现咪鲜胺与生防菌的 复配剂型用于草莓病害的防治， 而本发明利用解淀粉芽胞杆菌。
11、与咪鲜胺的组合物在防治草 莓炭疽病和灰霉病上的应用还没有公开报道。 发明内容 0008 本发明的目的在于： 针对目前利用现有的杀菌剂防治草莓炭疽病及草莓灰霉病时 出现的一系列问题， 提供一种可提高药效、 延长药剂使用时间、 降低成本、 协同增效作用显 著， 对草莓炭疽病及灰霉病有较好防治作用的， 且环境友好、 安全的有机杀菌组合物。 该组 合物以解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺为主要活性物质， 不仅极大的减少了化学杀菌剂的使用 量， 降低了现有病原菌对咪鲜胺的潜在抗药性的风险， 还能发挥解淀粉芽孢杆菌WH1G有效 控制草莓炭疽病及灰霉病的作用， 弥补了解淀粉芽孢杆菌抑菌效果慢的缺点， 综合了生防 菌和化。
12、学杀菌剂的优点。 本研究结果表明解淀粉芽孢杆菌WHIG与咪鲜胺的组合对草莓炭疽 病及灰霉病的防效具有明显的增效作用。 0009 本发明所述的杀菌组合物可以用已知的方法加工成适合农业使用的剂型， 包括可 湿性粉剂、 悬浮剂、 水乳剂等， 本发明提供了所述杀菌剂的可湿性粉剂及水悬浮剂的制备方 法。 0010 本发明所述组合物中的助剂包括湿润剂、 分散剂、 渗透剂、 防冻剂、 增稠剂、 增效 剂、 消泡剂等各类助剂中的一种或几种， 具体成分和用量根据配方要求通过简单试验确定。 0011 本发明的目的可以通过以下措施达到: 一种含解淀粉芽孢杆菌WHIG与咪鲜胺的组合物， 该组合物以解淀粉芽孢杆菌WHI。
13、G和咪 鲜胺为活性成分， 其质量比为500:11： 500； 解淀粉芽孢杆菌WHIG和咪鲜胺的质量比优选为 100： 11:100， 进一步优化为20:11:20， 最优选为6:11:6。 本发明所采用的解淀粉芽孢杆 菌活孢子数为1亿/克100亿/克， 最优选为10亿/克100亿/克。 0012 本发明所述杀菌组合物中的解淀粉芽孢杆菌要先制成母粉， 方法如下： 首先将 WH1G接入NA培养基中振荡培养(180 r/min, 28) 48 h， 80水浴处理 15 min， 8000 r/ min 离心 15 min， 去上清液获得细菌沉淀， 加入10 mL过滤除菌的MgSO4溶液(0.l mo。
14、l/L) 和1mL无菌甘油， 振荡混勻后再加入l mL浓度为1.5%(w/v)海藻酸钠溶液， 然后将上述混合 液与50g滑石粉及4g Ca-lignosulphate充分混合， 无菌条件下室温保存。 0013 所述组合物中解淀粉芽胞杆菌母粉的生存能力测定 每隔30d,分别测定可湿性粉 剂中生防菌的生存能力， 方法是每次测定时， 分别称取0.5克可湿性粉剂， 置于10mL无菌水 中， 制备悬浮液， 经倍比稀释后， 分别涂布于NA平板上， 28培养24h， 计数生长菌落， 计算出 单位重量可湿性粉剂中细菌的菌落形成单位。 结果表明， 生防菌剂中细菌的生存能力较强， 室温条件下保存120d细菌的存活。
15、数量仍能达到1010cfu/g， 150d能达到108cfu/g， 随着时间 延长， 细菌数量不断下降， 至180d仅能达到107cfu/g。 0014 所述的杀菌组合物向活性成分解淀粉芽孢杆菌和咪鲜胺中加入农药助剂和填料 说 明 书 2/6 页 4 CN 107087640 A 4 后即可配得可湿性粉剂和悬浮剂， 其中有效成分占杀菌组合物总重量的20%60%， 助剂占杀 菌组合物总重量的10%30%,其余为填料。 咪鲜胺可以采用原药， 解淀粉芽孢杆菌采用原粉， 助剂可以选用湿润剂、 分散剂、 渗透剂、 防冻剂、 增稠剂、 增效剂等各类助剂中的一种或几 种。 0015 当所述杀菌组合物的剂型为。
16、可湿性粉剂时， 由下述质量百分含量的组分组成： 解淀粉芽胞杆菌母粉 （100亿活孢子/克） 5%50%, 咪鲜胺 10%40% , 载体 30%65%， 分散剂 3%8%, 润湿剂 2%5%， 渗透剂 3%5% 其特征是所述载体优选为白炭黑、 高岭土， 所述分散剂优选为木质素磺酸钠， 所述润湿 剂优选为十二烷基苯磺酸， 所述渗透剂优选为JFC。 0016 当所述杀菌组合物的剂型为水悬浮剂时， 由下述质量百分含量的组分组成： 解淀粉芽胞杆菌母粉 （100亿活孢子/克） 5%50%, 咪鲜胺 5%45% , 分散剂 2%8%， 润湿剂 2%4%， 增稠剂 0.2%2% 增效剂 2%5% 防冻剂 2。
17、%4% 消泡剂 1%3% 余量加水至100%， 其特征是所述分散剂优选为木质素磺酸钙， 润湿剂优选为十二烷基硫酸钠， 增稠剂优 选为黄原胶， 所选防冻剂优选为乙二醇； 消泡剂优选为有机硅消泡剂， 水优选为自来水。 0017 本发明的杀菌组合物用于防治草莓炭疽病及灰霉病， 在病害初步发生时进行施 药， 连续施用3次， 间隔期为10d， 以喷雾法均匀施药为宜。 0018 本发明的组合物降低了草莓炭疽病菌及灰霉病菌对咪鲜胺和解淀粉芽孢杆菌的 潜在抗药性风险， 将解淀粉芽孢杆菌与咪鲜胺组合后， 二者之间具有明显的增效作用， 可以 显著提高对草莓炭疽病及灰霉病的防治效果， 同时减少了化学农药使用量， 从。
18、而使该组合 物可以有效的应用于草莓炭疽病及灰霉病的防治。 具体实施方式 0019 下面结合具体实施例进一步阐释本发明， 但本发明的实质并不限于下述实施例。 0020 实施例1： 35%可湿性粉剂的制备 （各组分为质量份） 解淀粉芽孢杆菌WH1G （100亿活孢子/克） 5 咪鲜胺 30 十二烷基硫酸钠 2 木质素磺酸钠 4 说 明 书 3/6 页 5 CN 107087640 A 5 渗透剂JFC 4 白炭黑 补足至100 （调pH值57） 实施例2： 40%可湿性粉剂的制备 （各组分为质量份） 解淀粉芽孢杆菌WH1G （100亿活孢子/克） 20 咪鲜胺 20 十二烷基硫酸钠 2 木质素磺酸。
19、钠 4 渗透剂JFC 4 白炭黑 补足至100 （调pH值57） 实施例3： 45%可湿性粉剂制备 （各组分为质量份） 解淀粉芽孢杆菌WH1G （100亿活孢子/克） 15 咪鲜胺 30 十二烷基硫酸钠 2 木质素磺酸钠 4.5 渗透剂JFC 4.5 白炭黑 30 高岭土 补足至100 （调pH值57） 实施例4： 55%可湿性粉剂制备 （各组分为质量份） 解淀粉芽孢杆菌WH1G （100亿活孢子/克） 44 咪鲜胺 11 十二烷基硫酸钠 3 木质素磺酸钠 5 渗透剂JFC 5 白炭黑 20 高岭土 补足至100 （调pH值57） 实施例5： 60%可湿性粉剂制备 （各组分为质量份） 解淀粉芽。
20、孢杆菌WH1G （100亿活孢子/克） 40 咪鲜胺 20 十二烷基硫酸钠 3 木质素磺酸钠 5 渗透剂JFC 5 白炭黑 20 高岭土 补足至100 （调pH值57） 按照实施例1、 2、 3、 4、 5的配方， 将有效成分、 助剂、 填料加在一起， 经气流粉碎后， 在锥 形混合机内搅拌30分钟， 即可制得解淀粉芽孢杆菌与咪鲜胺的杀菌可湿性粉剂。 0021 实施例6: 25% 悬浮剂的制备 （各组分为质量份） 解淀粉芽孢杆菌WH1G （100亿活孢子/克） 10 咪鲜胺 15 木质素磺酸钙 5 说 明 书 4/6 页 6 CN 107087640 A 6 十二烷基硫酸钠 2 有机硅 2 黄原。
21、胶 0.3 乙二醇 2 自来水 补足至100 实施例7: 49% 悬浮剂的制备 （各组分为质量份） 解淀粉芽孢杆菌WH1G （100亿活孢子/克） 42 咪鲜胺 7 木质素磺酸钙 6 十二烷基硫酸钠 3 有机硅 2 黄原胶 0.3 乙二醇 3 自来水 补足至100 实施例8: 50% 悬浮剂的制备 （各组分为质量份） 解淀粉芽孢杆菌WH1G （100亿活孢子/克） 10 咪鲜胺 40 木质素磺酸钙 7 十二烷基硫酸钠 4 有机硅 2 黄原胶 0.2 乙二醇 3.5 自来水 补足至100 按照实施例6、 7、 8的配方， 将有效成分、 分散剂、 润湿剂等各组分装入带高剪切搅拌的 反应釜中， 粉碎。
22、混合， 直到混合体均匀后将搅拌粉碎的物料通入砂磨机中， 通冷却循环水进 行砂磨超微粉碎， 终点粒径小于3微米。 即可制得解淀粉芽孢杆菌与咪鲜胺的杀菌水悬浮 剂。 0022 实施例9 用实施例1-实施例8所配置的解淀粉芽孢杆菌与咪鲜胺的杀菌组合物防 治草莓炭疽病及草莓灰霉病的田间效果。 0023 本发明试验作物为草莓， 品种为： 红颜； 共设置实施例1-实施例8所配置的解淀粉 芽孢杆菌与咪鲜胺的杀菌组合物、 100亿CFU/g解淀粉芽孢杆菌母粉、 50%咪鲜胺可湿性粉剂 和空白对照共11个处理， 每个处理4次重复， 小区面积20， 于病害发生初期开始第一次喷 药， 每亩兑水50公斤均匀喷雾， 连。
23、续喷洒3次， 间隔期为10d， 最后一次防治后7d调查各处理 草莓炭疽病和灰霉病的病情指数， 并以对照区的病情指数计算相对防治效果， 调查结果如 表1。 0024 表1 解淀粉芽孢杆菌 咪鲜胺对草莓炭疽病及灰霉病的田间小区试验的防效 （%） 说 明 书 5/6 页 7 CN 107087640 A 7 注： a: 理论防效%= （实施例中芽孢杆菌单剂防效所占比例咪鲜胺防效所占比例） 100 b: 增效效果%= （实施例防治效果理论防效） /理论防效100 从表1可以看出在草莓炭疽病和灰霉病初见病斑时就开始施药， 然后每间隔10d施1次 药， 连续喷洒3次后， 本发明组合物的8个制剂实施例对草莓。
24、炭疽病和草莓灰霉病的防效均 在80%以上， 明显高于对照药剂， 防效显著。 实施例1.2.3.5.8对草莓炭疽病的防效均在85% 以上， 实施例1-8对草莓灰霉病的防效均在80%以上， 特别是实施例8对草莓炭疽病和草莓灰 霉病的防效高达89.64%和86.72%， 防效极显著； 本发明组合物和单剂相比， 均有增效效果， 对草莓炭疽病的增效比例在10%-20%之间， 特别是实施例7增效效果高达19.14%， 对草莓灰 霉病的增效比例在16%-28%， 特别是实施例5和实施例7增效效果分别高达27.92%和25.67%， 增效作用明显， 可显著提高防治效果； 本发明组合物对草莓生长安全， 田间未发现任何不良 反应， 所以该组合物在生产上可以广泛的用于防治草莓炭疽病及灰霉病。 说 明 书 6/6 页 8 CN 107087640 A 8 。