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一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610513379.5 (22)申请日 2016.06.30 (71)申请人湖南鑫利生物科技有限公司地址 426100 湖南省祁阳经济开发区灯塔路申请人重庆大学 (72)发明人杨洋袁德宽江文余红梅姚萍陶仁友黄国帅周小华 (51)Int.Cl. A61K 9/19(2006.01) A61K 31/05(2006.01) A61K 31/122(2006.01) A61P 7/02(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 3。

2、/04(2006.01) A61P 1/12(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 31/10(2006.01) A61P 11/14(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 9/12(2006.01) C07C 37/68(2006.01) C07C 37/82(2006.01) C07C 39/21(2006.01) C07C 46/10(2006.01) C07C 50/34(2006.01) (54)发明名称一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法 (57)摘要一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，属于白藜芦醇和大黄素分离制备技。

3、术领域。本发明以含大黄素的虎杖白藜芦醇提取物为原料，经过制备MCI分离填料平衡柱，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液，制备白藜芦醇分离液，制备白藜芦醇和大黄素浓缩液，制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，制备白藜芦醇和大黄素冻干粉的步骤，制备出纯度超过99的虎杖白藜芦醇和纯度超过 95的大黄素。本发明生产设备均为工业化设备，生产条件温和，适合规模化生产，产品符合市场要求；采用膜技术和溶剂回收系统，能耗较低，物料可反复利用，生产成本显著降低。采用本发明制备出的白藜芦醇和大黄素产品，可广泛用于医药、保健品等领域。权利要求书2页说明书7页 CN 106。

4、176627 A 2016.12.07 CN 106176627 A 1.一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，其特征在于具体的工艺步骤如下： (1)制备MCI分离填料平衡柱先将新购进的粒径为75150 m的MCI GEL CHP 20P和63150 m的MCI GEL CHP 20SS 分离填料分散于纯净水中，再装入直径为210cm、高度为5080cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统，再泵入体积浓度为 6080乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离填料柱体积的2 4倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为2。

5、4(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1 0.2MPa，分别收集经过体积浓度为6080乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为6080乙醇水溶液平衡的 MCI分离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡 MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇； (2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液第(1)步完成后，先用体积浓度为6085的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50 90、大黄素含量为455的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为5090、大黄素。

6、含量为 455的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为6085的乙醇水溶液体积之比为1 1030 (kg/L)，溶解完成后再用孔径为0.451.0 m的微孔滤膜过滤，收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液； (3)制备白藜芦醇分离液第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇溶液泵入第(1)步制备的MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1 1020(L/L)，泵入该滤液的压力为0.10.2MPa，泵入该滤液完成后，再泵入体积浓度为6085的乙醇水溶液进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为14BV/h，。

7、泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为45BV，泵入该乙醇水溶液的压力为0.10.2MPa，用分部收集器分别收集从MCI分离填料平衡柱出液口流出的第00.5BV、第0.511.5BV、第1.512.8BV、第2.93.8BV及第3.95.0BV的洗脱液，对收集的第00.5BV和第3.95.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇分离液；对收集的第0.511.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.512.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2)步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.93.8。

8、BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩液； (4)制备自藜芦醇和大黄素浓缩液第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分离液和第2.93.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在12.5MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1 1020 (L/L)时止，反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液； (5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液第(4)步完。

9、成后，分别将第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收权利要求书 1/2 页 2 CN 106176627 A 2 真空系统中，在温度为3550、真空度为50100Mbar的条件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止，分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉； (6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于-40- 20冰箱中预冻812。

10、h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为30 50Pa、温度为-50-40的条件下冷冻干燥2436h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。权利要求书 2/2 页 3 CN 106176627 A 3 一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法一、技术领域 0001 本发明属于白藜芦醇和大黄素分离制备技术领域，具体涉及一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法。二、背景技术 0002 白藜芦醇简称芪三酚，是一种含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，广泛存在于葡萄、虎杖、花生等植物中。生物学及医学研究表明，白藜芦醇有抗氧化、延缓衰老、抗肿瘤、抗凝血和。

11、冠状动脉硬化、抗炎抗菌、预防高血压和心脏病、改善血液循环、降低血糖浓度、平衡胰岛素分泌、免疫护肝等活性作用，广泛应用于药物、保健食品和化妆品等领域。大黄素为蒽醌类化合物，包括大环素甲醚、大黄酸、大黄酚、大黄素葡萄糖苷等，有泻下活性和抗菌、止咳、抗肿瘤、降血压等作用，用于医疗、保健品和日化领域。 0003 虎杖是制备白藜芦醇的主要原料之一，含约3的白藜芦醇苷和约为0.7的大黄素。在制备虎杖白藜芦醇的过程中，一般先将白藜芦醇苷水解生成白藜芦醇，再用醇-水溶液提取及分离纯化。而白藜芦醇与大黄素在溶解性质等方面相近，两者难以完全分离。由于。

12、大黄素的泻下作用，严重影响到虎杖白藜芦醇的销售和整个产业的发展。虎杖植物提取物国际商务标准规定， 50虎杖白藜芦醇中大黄素含量2.0， 98虎杖白藜芦醇中大黄素含量0.1。因此，将虎杖白藜芦醇中的大黄素完全分离，分别获得高纯度白藜芦醇和大黄素，有重要的经济和社会效益。 0004 现有分离虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，如2012年中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集公布的 “高浓度琼脂糖凝胶微球分离纯化白藜芦醇” 论文，介绍了以琼脂糖凝胶微球分离虎杖白藜芦醇的方法，该法的缺陷是：以醋酸和乙醇水溶液为流动相分离虎杖粗提物中的白藜芦醇，在纯化白藜芦醇的基础上。

13、，尚需进一步将白藜芦醇与醋酸进行分离。醋酸沸点高达117.9且异味阈值低，在60以上减压浓缩回收也难以除尽，产品可能存在醋酸异味；加之白藜芦醇60以上即开始氧化，形成氧化白藜芦醇，这将严重影响白藜芦醇质量。由于未使用交联剂进行交联反应，琼脂糖凝胶微球的形成与破坏受酸碱度控制，因此，必须严格控制醋酸和乙醇溶液的酸碱度。而减压浓缩回收液中的醋酸和乙醇浓度均发生变化，每次回用前须重新校准，操作繁琐。又如发表于天然产物研究与开发 2009年第21卷的文章 “凝胶柱层析分离虎杖中白藜芦醇的研究” 介绍了用Sephadex LH-20 凝胶分离虎杖白藜芦醇的方法，。

14、该方法的缺点是：直接以虎杖粗提取浓缩液进行分离，由于虎杖粗提取浓缩液中存在大量杂质，而凝胶层析仅仅是依赖分离物分子直径差异实现分离，分离精度有限，因此分离效果不佳，分离物白藜芦醇纯度仅达到86.16。经过凝胶分离后，分离液未经过进一步精制处理，尚无工业化价值。三、发明内容 0005 本发明是针对现有虎杖白藜芦醇和大黄素分离纯化技术的不足之处，提供一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法。该方法具有操作简单、高效、连续性强、溶剂可反复回收说明书 1/7 页 4 CN 106176627 A 4 利用、产品纯度高且稳定等特点。 0006 本发明的原理是：。

15、 MCI系列精细分离填料是在三菱化学Diaion和Sepabeads大孔吸附树脂基础上设计的、基于现代高效液相色谱分离技术、有较小颗粒及更高色谱分离性能的分离材料。由于该材料基于分子筛原理来实现物质的分离纯化，故广泛应用于分离天然产物和发酵产物。虎杖白藜芦醇的分子量为228Da，分子直径1.375nm，大黄素分子量为 270Da，分子直径1.310nm。由于两者的分子直径不同，通过MCI分离填料柱的路径不同，流出该填料柱的时间不同，因此，可实现两者的分离；反渗透是以压力差为推动力，实现溶剂和溶质分离的膜分离技术。分别将分离纯化获得的虎杖白藜芦醇乙醇水溶。

16、液和大黄素乙醇水溶液进行反渗透处理，乙醇和水分子均可透过反渗透膜，虎杖白藜芦醇和大黄素则分别被截留，于是就实现了虎杖白藜芦醇及大黄素的浓缩及溶剂的回收；乙醇的沸点仅为78，在真空条件下，其沸点更低，因此，控制体系的真空度，可在较低温度下完全蒸发该溶剂，失去乙醇的虎杖白藜芦醇水溶液和大黄素水溶液，再经过冷冻干燥，就可以获得高纯度虎杖白藜芦醇和大黄素。 0007 本发明的目的是通过以下途径实现的，一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，以含大黄素的虎杖白藜芦醇提取物为原料，经过制备MCI分离填料平衡柱，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液，制备白藜芦醇分离液，制备白。

17、藜芦醇和大黄素浓缩液，制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，制备白藜芦醇和大黄素冻干粉的步骤，制备出纯度超过99的虎杖白藜芦醇和纯度超过95的大黄素。其具体的工艺步骤如下： 0008 (1)制备MCI分离填料平衡柱 0009 先将新购进的粒径为75150 m的MCI GEL CHP 20P和63150 m的MCI GEL CHP 20SS分离填料分散于纯净水中，再装入直径为210cm、高度为5080cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统。再泵入体积浓度为6080乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离。

18、填料柱体积的2 4倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为24(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1 0.2MPa。分别收集经过体积浓度为6080乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为6080乙醇水溶液平衡的 MCI分离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡 MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇。 0010 (2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液 0011 第(1)步完成后，先用体积浓度为6085的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50 。

19、90、大黄素含量为455的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为5090、大黄素含量为455的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为6085的乙醇水溶液体积之比为1 10 30(kg/L)。溶解完成后再用孔径为0.451.0 m的微孔滤膜过滤。收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液。 0012 (3)制备白藜芦醇分离液 0013 第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇溶液泵入第(1)步制备的 MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1 1020(L/L)，泵入该滤液的压力为0.10.2MPa。泵入该滤液完成后，再。

20、泵入体积浓度为6085的乙醇水溶液说明书 2/7 页 5 CN 106176627 A 5 进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为14BV/h，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为45BV，泵入该乙醇水溶液的压力为0.10.2MPa。用分部收集器分别收集从 MCI分离填料平衡柱出液口流出的第00.5BV、第0.511.5BV、第1.512.8BV、第2.9 3.8BV及第3.95.0BV的洗脱液，对收集的第00.5BV和第3.95.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇分离液；对收集的第0.511.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于。

21、下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.512.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2)步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.93.8BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩液。 0014 (4)制备白藜芦醇和大黄素浓缩液 0015 第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分离液和第2.93.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在12.5MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1 10 20(L/L)时止。反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别。

22、用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液。 0016 (5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液 0017 第(4)步完成后，分别将第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收真空系统中，在温度为3550、真空度为50100Mbar的条件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止。分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉。 001。

23、8 (6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉 0019 第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于- 40-20冰箱中预冻812h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为30 50Pa、温度为-50-40的条件下冷冻干燥2436h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。 0020 本发明采用上述技术方案后，主要有以下效果： 0021 1、本发明方法以含大黄素的虎杖白藜芦醇提取物为原料，高效、高产制备出虎杖白藜芦醇和大黄素。其中虎杖白藜芦醇的产率高达4585，纯度高达99.699.8，大黄素含量0.030.05，产品质量符合虎。

24、杖植物提取物国际商务标准规定。大黄素产率为 432，纯度高达95.696.8； 0022 2、本发明方法用MCI精细分离填料在价格低廉的中压层析柱中分离虎杖白藜芦醇和大黄素，避免使用价格昂贵的制备型液相色谱和色谱级试剂；利用反渗透膜技术对洗脱液进行浓缩，使用溶剂低温回收真空系统回收乙醇，能耗和乙醇损耗均低； 0023 3、本发明方法产生的洗脱液、反渗透滤过液均可回用， MCI分离填料可反复使用数百次，显著降低了生产成本； 0024 4、本发明方法所用生产设备均为工业化设备，生产条件温和，操作方便，适合规模化生产。 0025 5、本发明生产的产品白藜芦醇具。

25、有抑制血小板非正常凝聚、预防心肌梗塞和脑栓说明书 3/7 页 6 CN 106176627 A 6 塞、保护缺氧心脏、控制肥胖者体重等作用，可广泛用于医药、保健品等领域；产品大黄素可用于泻下、抗菌、止咳、抗肿瘤、降血压等。四、具体实施方式 0026 下面结合具体实施方式，进一步说明本发明。 0027 实施例1 0028 一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，其具体工艺步骤如下： 0029 (1)制备MCI分离填料平衡柱 0030 先将新购进的粒径为75150 m的MCI GEL CHP 20P和63150 m的MCI GEL CHP 20SS分离填料分散于纯净。

26、水中，再装入直径为2cm、高度为50cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统。再泵入体积浓度为60 乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离填料柱体积的2倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为2(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1MPa。分别收集经过体积浓度为60乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为60乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡MCI分离填料柱系统。

27、的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇。 0031 (2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液 0032 第(1)步完成后，先用体积浓度为60的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50 90、大黄素含量为455的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为5090、大黄素含量为 455的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为60的乙醇水溶液体积之比为1 10(kg/L)。溶解完成后再用孔径为0.45 m的微孔滤膜过滤。收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液。 0033 (3)制备白藜芦醇分离液 0034 第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇。

28、溶液泵入第(1)步制备的 MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1 10(L/L)，泵入该滤液的压力为0.1MPa。泵入该滤液完成后，再泵入体积浓度为60的乙醇水溶液进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为1BV/h，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为4BV，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1MPa。用分部收集器分别收集从MCI分离填料平衡柱出液口流出的第00.5BV、第0.511.5BV、第1.512.8BV、第2.93.8BV及第3.95.0BV的洗脱液，对收集的第00.5BV和第3.95.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇。

29、分离液；对收集的第0.511.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.512.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2)步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.93.8BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩液。 0035 (4)制备白藜芦醇和大黄素浓缩液 0036 第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分离液和第2.93.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在1MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1 10(L/L)时止。反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗。

30、透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，说明书 4/7 页 7 CN 106176627 A 7 即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液。 0037 (5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液 0038 第(4)步完成后，分别将第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收真空系统中，在温度为35、真空度为50Mbar的条件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止。分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下。

31、批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉。 0039 (6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉 0040 第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于- 40冰箱中预冻8h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为30Pa、温度为- 50的条件下冷冻干燥24h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。 0041 实施例2 0042 一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，其具体工艺步骤如下： 0043 (1)制备MCI分离填料平衡柱 0044 先将新购进的粒径为75150。

32、 m的MCI GEL CHP 20P和63150 m的MCI GEL CHP 20SS分离填料分散于纯净水中，再装入直径为5cm、高度为60cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统。再泵入体积浓度为70 乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离填料柱体积的3倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为3(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.15MPa。分别收集经过体积浓度为70乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为70乙醇水溶液平衡的MCI分。

33、离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇。 0045 (2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液 0046 第(1)步完成后，先用体积浓度为70的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50 90、大黄素含量为455的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为5090、大黄素含量为 455的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为70的乙醇水溶液体积之比为1 20(kg/L)。溶解完成后再用孔径为0.65 m的微孔滤膜过滤。收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液。

34、。 0047 (3)制备白藜芦醇分离液 0048 第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇溶液泵入第(1)步制备的 MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1 15(L/L)，泵入该滤液的压力为0.15MPa。泵入该滤液完成后，再泵入体积浓度为70的乙醇水溶液进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为2.5BV/h，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为 4.5BV，泵入该乙醇水溶液的压力为0.15MPa。用分部收集器分别收集从MCI分离填料平衡柱出液口流出的第00.5BV、第0.511.5BV、第1.512.8BV、第2.93。

35、.8BV及第3.95.0BV 的洗脱液，对收集的第00.5BV和第3.95.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇分离说明书 5/7 页 8 CN 106176627 A 8 液；对收集的第0.511.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.512.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2) 步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.93.8BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩液。 0049 (4)制备白藜芦醇和大黄素浓缩液 0050 第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分。

36、离液和第2.93.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在1.8MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1 15(L/L) 时止。反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液。 0051 (5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液 0052 第(4)步完成后，分别将第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收真空系统中，在温度为40、真空度为75Mbar的条。

37、件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止。分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉。 0053 (6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉 0054 第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于- 30冰箱中预冻10h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为40Pa、温度为-45的条件下冷冻干燥30h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。 0055 实施例3 0056 一种制备虎杖白。

38、藜芦醇和大黄素的方法，其具体工艺步骤如下： 0057 (1)制备MCI分离填料平衡柱 0058 先将新购进的粒径为75150 m的MCI GEL CHP 20P和63150 m的MCI GEL CHP 20SS分离填料分散于纯净水中，再装入直径为10cm、高度为80cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统。再泵入体积浓度为80 乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离填料柱体积的4倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为4(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.2MPa。分别收集经过体积浓度为80乙醇水。

39、溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为80乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇。 0059 (2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液 0060 第(1)步完成后，先用体积浓度为85的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50 90、大黄素含量为455的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为5090、大黄素含量为 455的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为85的乙醇水溶液体积之比为1 30(kg/L)。

40、。溶解完成后再用孔径为1.0 m的微孔滤膜过滤。收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液。说明书 6/7 页 9 CN 106176627 A 9 0061 (3)制备白藜芦醇分离液 0062 第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇溶液泵入第(1)步制备的 MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1 20(L/L)，泵入该滤液的压力为0.2MPa。泵入该滤液完成后，再泵入体积浓度为85的乙醇水溶液进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为4BV/h，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为5BV，。

41、泵入该乙醇水溶液的压力为0.2MPa。用分部收集器分别收集从MCI分离填料平衡柱出液口流出的第00.5BV、第0.511.5BV、第1.512.8BV、第2.93.8BV及第3.95.0BV的洗脱液，对收集的第00.5BV和第3.95.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇分离液；对收集的第0.511.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.512.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2)步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.93.8BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩。

42、液。 0063 (4)制备白藜芦醇和大黄素浓缩液 0064 第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分离液和第2.93.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在2.5MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1 20(L/L) 时止。反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液。 0065 (5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液 0066 第(4)步完成后，分别将。

43、第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收真空系统中，在温度为50、真空度为100Mbar的条件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止。分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉。 0067 (6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉 0068 第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于- 20冰箱中预冻12h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为50Pa、温度为-40的条件下冷冻干燥36h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。说明书 7/7 页 10 CN 106176627 A 10 。

摘要
申请专利号：	CN201610513379.5	申请日：	20160630
公开号：	CN106176627A	公开日：	20161207
当前法律状态：		有效性：	审查中
法律详情：
IPC分类号：	A61K9/19,A61K31/05,A61K31/122,A61P7/02,A61P9/10,A61P3/04,A61P1/12,A61P31/04,A61P31/10,A61P11/14,A61P35/00,A61P9/12,C07C37/68,C07C37/82,C07C39/21,C07C46/10,C07C50/34	主分类号：	A61K9/19,A61K31/05,A61K31/122,A61P7/02,A61P9/10,A61P3/04,A61P1/12,A61P31/04,A61P31/10,A61P11/14,A61P35/00,A61P9/12,C07C37/68,C07C37/82,C07C39/21,C07C46/10,C07C50/34
申请人：	湖南鑫利生物科技有限公司,重庆大学
发明人：	杨洋,袁德宽,江文,余红梅,姚萍,陶仁友,黄国帅,周小华
地址：	426100 湖南省祁阳经济开发区灯塔路
优先权：	CN201610513379A
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内容摘要

一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，属于白藜芦醇和大黄素分离制备技术领域。本发明以含大黄素的虎杖白藜芦醇提取物为原料，经过制备MCI分离填料平衡柱，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液，制备白藜芦醇分离液，制备白藜芦醇和大黄素浓缩液，制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，制备白藜芦醇和大黄素冻干粉的步骤，制备出纯度超过99％的虎杖白藜芦醇和纯度超过95％的大黄素。本发明生产设备均为工业化设备，生产条件温和，适合规模化生产，产品符合市场要求；采用膜技术和溶剂回收系统，能耗较低，物料可反复利用，生产成本显著降低。采用本发明制备出的白藜芦醇和大黄素产品，可广泛用于医药、保健品等领域。

权利要求书

1.一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：(1)制备MCI分离填料平衡柱先将新购进的粒径为75～150μm的MCIGELCHP20P和63～150μm的MCIGELCHP20SS分离填料分散于纯净水中，再装入直径为2～10cm、高度为50～80cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统，再泵入体积浓度为60～80％乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离填料柱体积的2～4倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为2～4(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1～0.2MPa，分别收集经过体积浓度为60～80％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为60～80％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇；(2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液第(1)步完成后，先用体积浓度为60～85％的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为60～85％的乙醇水溶液体积之比为1∶10～30(kg/L)，溶解完成后再用孔径为0.45～1.0μm的微孔滤膜过滤，收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液；(3)制备白藜芦醇分离液第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇溶液泵入第(1)步制备的MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1∶10～20(L/L)，泵入该滤液的压力为0.1～0.2MPa，泵入该滤液完成后，再泵入体积浓度为60～85％的乙醇水溶液进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为1～4BV/h，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为4～5BV，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1～0.2MPa，用分部收集器分别收集从MCI分离填料平衡柱出液口流出的第0～0.5BV、第0.51～1.5BV、第1.51～2.8BV、第2.9～3.8BV及第3.9～5.0BV的洗脱液，对收集的第0～0.5BV和第3.9～5.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇分离液；对收集的第0.51～1.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.51～2.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2)步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.9～3.8BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩液；(4)制备自藜芦醇和大黄素浓缩液第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分离液和第2.9～3.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在1～2.5MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1∶10～20(L/L)时止，反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液；(5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液第(4)步完成后，分别将第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收真空系统中，在温度为35～50℃、真空度为50～100Mbar的条件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止，分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉；(6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于-40～-20℃冰箱中预冻8～12h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为30～50Pa、温度为-50～-40℃的条件下冷冻干燥24～36h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。

说明书

一、技术领域

本发明属于白藜芦醇和大黄素分离制备技术领域，具体涉及一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法。

二、背景技术

白藜芦醇简称芪三酚，是一种含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，广泛存在于葡萄、虎杖、花生等植物中。生物学及医学研究表明，白藜芦醇有抗氧化、延缓衰老、抗肿瘤、抗凝血和冠状动脉硬化、抗炎抗菌、预防高血压和心脏病、改善血液循环、降低血糖浓度、平衡胰岛素分泌、免疫护肝等活性作用，广泛应用于药物、保健食品和化妆品等领域。大黄素为蒽醌类化合物，包括大环素甲醚、大黄酸、大黄酚、大黄素葡萄糖苷等，有泻下活性和抗菌、止咳、抗肿瘤、降血压等作用，用于医疗、保健品和日化领域。

虎杖是制备白藜芦醇的主要原料之一，含约3％的白藜芦醇苷和约为0.7％的大黄素。在制备虎杖白藜芦醇的过程中，一般先将白藜芦醇苷水解生成白藜芦醇，再用醇-水溶液提取及分离纯化。而白藜芦醇与大黄素在溶解性质等方面相近，两者难以完全分离。由于大黄素的泻下作用，严重影响到虎杖白藜芦醇的销售和整个产业的发展。《虎杖植物提取物国际商务标准》规定，50％虎杖白藜芦醇中大黄素含量≤2.0％，98％虎杖白藜芦醇中大黄素含量≤0.1％。因此，将虎杖白藜芦醇中的大黄素完全分离，分别获得高纯度白藜芦醇和大黄素，有重要的经济和社会效益。

现有分离虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，如2012年《中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集》公布的“高浓度琼脂糖凝胶微球分离纯化白藜芦醇”论文，介绍了以琼脂糖凝胶微球分离虎杖白藜芦醇的方法，该法的缺陷是：①以醋酸和乙醇水溶液为流动相分离虎杖粗提物中的白藜芦醇，在纯化白藜芦醇的基础上，尚需进一步将白藜芦醇与醋酸进行分离。醋酸沸点高达117.9℃且异味阈值低，在60℃以上减压浓缩回收也难以除尽，产品可能存在醋酸异味；加之白藜芦醇60℃以上即开始氧化，形成氧化白藜芦醇，这将严重影响白藜芦醇质量。②由于未使用交联剂进行交联反应，琼脂糖凝胶微球的形成与破坏受酸碱度控制，因此，必须严格控制醋酸和乙醇溶液的酸碱度。而减压浓缩回收液中的醋酸和乙醇浓度均发生变化，每次回用前须重新校准，操作繁琐。又如发表于《天然产物研究与开发》2009年第21卷的文章“凝胶柱层析分离虎杖中白藜芦醇的研究”介绍了用Sephadex LH-20凝胶分离虎杖白藜芦醇的方法，该方法的缺点是：①直接以虎杖粗提取浓缩液进行分离，由于虎杖粗提取浓缩液中存在大量杂质，而凝胶层析仅仅是依赖分离物分子直径差异实现分离，分离精度有限，因此分离效果不佳，分离物白藜芦醇纯度仅达到86.16％。②经过凝胶分离后，分离液未经过进一步精制处理，尚无工业化价值。

三、发明内容

本发明是针对现有虎杖白藜芦醇和大黄素分离纯化技术的不足之处，提供一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法。该方法具有操作简单、高效、连续性强、溶剂可反复回收利用、产品纯度高且稳定等特点。

本发明的原理是：MCI系列精细分离填料是在三菱化学Diaion和Sepabeads大孔吸附树脂基础上设计的、基于现代高效液相色谱分离技术、有较小颗粒及更高色谱分离性能的分离材料。由于该材料基于分子筛原理来实现物质的分离纯化，故广泛应用于分离天然产物和发酵产物。虎杖白藜芦醇的分子量为228Da，分子直径1.375nm，大黄素分子量为270Da，分子直径1.310nm。由于两者的分子直径不同，通过MCI分离填料柱的路径不同，流出该填料柱的时间不同，因此，可实现两者的分离；反渗透是以压力差为推动力，实现溶剂和溶质分离的膜分离技术。分别将分离纯化获得的虎杖白藜芦醇乙醇水溶液和大黄素乙醇水溶液进行反渗透处理，乙醇和水分子均可透过反渗透膜，虎杖白藜芦醇和大黄素则分别被截留，于是就实现了虎杖白藜芦醇及大黄素的浓缩及溶剂的回收；乙醇的沸点仅为78℃，在真空条件下，其沸点更低，因此，控制体系的真空度，可在较低温度下完全蒸发该溶剂，失去乙醇的虎杖白藜芦醇水溶液和大黄素水溶液，再经过冷冻干燥，就可以获得高纯度虎杖白藜芦醇和大黄素。

本发明的目的是通过以下途径实现的，一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，以含大黄素的虎杖白藜芦醇提取物为原料，经过制备MCI分离填料平衡柱，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液，制备白藜芦醇分离液，制备白藜芦醇和大黄素浓缩液，制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，制备白藜芦醇和大黄素冻干粉的步骤，制备出纯度超过99％的虎杖白藜芦醇和纯度超过95％的大黄素。其具体的工艺步骤如下：

(1)制备MCI分离填料平衡柱

先将新购进的粒径为75～150μm的MCI GEL CHP 20P和63～150μm的MCI GEL CHP 20SS分离填料分散于纯净水中，再装入直径为2～10cm、高度为50～80cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统。再泵入体积浓度为60～80％乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离填料柱体积的2～4倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为2～4(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1～0.2MPa。分别收集经过体积浓度为60～80％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为60～80％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇。

(2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液

第(1)步完成后，先用体积浓度为60～85％的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为60～85％的乙醇水溶液体积之比为1∶10～30(kg/L)。溶解完成后再用孔径为0.45～1.0μm的微孔滤膜过滤。收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液。

(3)制备白藜芦醇分离液

第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇溶液泵入第(1)步制备的MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1∶10～20(L/L)，泵入该滤液的压力为0.1～0.2MPa。泵入该滤液完成后，再泵入体积浓度为60～85％的乙醇水溶液进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为1～4BV/h，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为4～5BV，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1～0.2MPa。用分部收集器分别收集从MCI分离填料平衡柱出液口流出的第0～0.5BV、第0.51～1.5BV、第1.51～2.8BV、第2.9～3.8BV及第3.9～5.0BV的洗脱液，对收集的第0～0.5BV和第3.9～5.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇分离液；对收集的第0.51～1.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.51～2.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2)步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.9～3.8BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩液。

(4)制备白藜芦醇和大黄素浓缩液

第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分离液和第2.9～3.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在1～2.5MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1∶10～20(L/L)时止。反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液。

(5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液

第(4)步完成后，分别将第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收真空系统中，在温度为35～50℃、真空度为50～100Mbar的条件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止。分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉。

(6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉

第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于-40～-20℃冰箱中预冻8～12h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为30～50Pa、温度为-50～-40℃的条件下冷冻干燥24～36h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。

本发明采用上述技术方案后，主要有以下效果：

1、本发明方法以含大黄素的虎杖白藜芦醇提取物为原料，高效、高产制备出虎杖白藜芦醇和大黄素。其中虎杖白藜芦醇的产率高达45～85％，纯度高达99.6～99.8％，大黄素含量0.03～0.05％，产品质量符合《虎杖植物提取物国际商务标准》规定。大黄素产率为43～2％，纯度高达95.6～96.8％；

2、本发明方法用MCI精细分离填料在价格低廉的中压层析柱中分离虎杖白藜芦醇和大黄素，避免使用价格昂贵的制备型液相色谱和色谱级试剂；利用反渗透膜技术对洗脱液进行浓缩，使用溶剂低温回收真空系统回收乙醇，能耗和乙醇损耗均低；

3、本发明方法产生的洗脱液、反渗透滤过液均可回用，MCI分离填料可反复使用数百次，显著降低了生产成本；

4、本发明方法所用生产设备均为工业化设备，生产条件温和，操作方便，适合规模化生产。

5、本发明生产的产品白藜芦醇具有抑制血小板非正常凝聚、预防心肌梗塞和脑栓塞、保护缺氧心脏、控制肥胖者体重等作用，可广泛用于医药、保健品等领域；产品大黄素可用于泻下、抗菌、止咳、抗肿瘤、降血压等。

四、具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步说明本发明。

实施例1

一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，其具体工艺步骤如下：

(1)制备MCI分离填料平衡柱

先将新购进的粒径为75～150μm的MCI GEL CHP 20P和63～150μm的MCI GEL CHP 20SS分离填料分散于纯净水中，再装入直径为2cm、高度为50cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统。再泵入体积浓度为60％乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离填料柱体积的2倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为2(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1MPa。分别收集经过体积浓度为60％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为60％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇。

(2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液

第(1)步完成后，先用体积浓度为60％的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为60％的乙醇水溶液体积之比为1∶10(kg/L)。溶解完成后再用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤。收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液。

(3)制备白藜芦醇分离液

第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇溶液泵入第(1)步制备的MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1∶10(L/L)，泵入该滤液的压力为0.1MPa。泵入该滤液完成后，再泵入体积浓度为60％的乙醇水溶液进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为1BV/h，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为4BV，泵入该乙醇水溶液的压力为0.1MPa。用分部收集器分别收集从MCI分离填料平衡柱出液口流出的第0～0.5BV、第0.51～1.5BV、第1.51～2.8BV、第2.9～3.8BV及第3.9～5.0BV的洗脱液，对收集的第0～0.5BV和第3.9～5.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇分离液；对收集的第0.51～1.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.51～2.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2)步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.9～3.8BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩液。

(4)制备白藜芦醇和大黄素浓缩液

第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分离液和第2.9～3.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在1MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1∶10(L/L)时止。反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液。

(5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液

第(4)步完成后，分别将第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收真空系统中，在温度为35℃、真空度为50Mbar的条件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止。分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉。

(6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉

第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于-40℃冰箱中预冻8h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为30Pa、温度为-50℃的条件下冷冻干燥24h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。

实施例2

一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，其具体工艺步骤如下：

(1)制备MCI分离填料平衡柱

先将新购进的粒径为75～150μm的MCI GEL CHP 20P和63～150μm的MCI GEL CHP 20SS分离填料分散于纯净水中，再装入直径为5cm、高度为60cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统。再泵入体积浓度为70％乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离填料柱体积的3倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为3(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.15MPa。分别收集经过体积浓度为70％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为70％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇。

(2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液

第(1)步完成后，先用体积浓度为70％的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为70％的乙醇水溶液体积之比为1∶20(kg/L)。溶解完成后再用孔径为0.65μm的微孔滤膜过滤。收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液。

(3)制备白藜芦醇分离液

第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇溶液泵入第(1)步制备的MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1∶15(L/L)，泵入该滤液的压力为0.15MPa。泵入该滤液完成后，再泵入体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为2.5BV/h，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为4.5BV，泵入该乙醇水溶液的压力为0.15MPa。用分部收集器分别收集从MCI分离填料平衡柱出液口流出的第0～0.5BV、第0.51～1.5BV、第1.51～2.8BV、第2.9～3.8BV及第3.9～5.0BV的洗脱液，对收集的第0～0.5BV和第3.9～5.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇分离液；对收集的第0.51～1.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.51～2.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2)步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.9～3.8BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩液。

(4)制备白藜芦醇和大黄素浓缩液

第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分离液和第2.9～3.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在1.8MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1∶15(L/L)时止。反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液。

(5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液

第(4)步完成后，分别将第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收真空系统中，在温度为40℃、真空度为75Mbar的条件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止。分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉。

(6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉

第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于-30℃冰箱中预冻10h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为40Pa、温度为-45℃的条件下冷冻干燥30h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。

实施例3

一种制备虎杖白藜芦醇和大黄素的方法，其具体工艺步骤如下：

(1)制备MCI分离填料平衡柱

先将新购进的粒径为75～150μm的MCI GEL CHP 20P和63～150μm的MCI GEL CHP 20SS分离填料分散于纯净水中，再装入直径为10cm、高度为80cm的玻璃中压层析柱中，连接好恒流泵、紫外检测器和分部收集器，装配出MCI分离填料柱系统。再泵入体积浓度为80％乙醇水溶液进行平衡处理，泵入的该乙醇水溶液体积为MCI分离填料柱体积的4倍(BV)，泵入该乙醇水溶液的流速为4(BV)/h，泵入该乙醇水溶液的压力为0.2MPa。分别收集经过体积浓度为80％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱和平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液，对收集的经过体积浓度为80％乙醇水溶液平衡的MCI分离填料柱，即制备出MCI分离填料平衡柱，用于分离纯化虎杖白藜芦醇；对收集的平衡MCI分离填料柱系统的乙醇水溶液流出液的乙醇水流出溶液，进行减压浓缩处理，回收乙醇。

(2)制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液

第(1)步完成后，先用体积浓度为85％的乙醇水溶液溶解白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物，白藜芦醇含量为50～90％、大黄素含量为45～5％的白藜芦醇提取物质量与体积浓度为85％的乙醇水溶液体积之比为1∶30(kg/L)。溶解完成后再用孔径为1.0μm的微孔滤膜过滤。收集滤液，即制备出虎杖白藜芦醇乙醇溶液，用于下步制备白藜芦醇分离液。

(3)制备白藜芦醇分离液

第(2)步完成后，先将第(2)步制备的虎杖白藜芦醇乙醇溶液泵入第(1)步制备的MCI分离填料平衡柱，泵入该滤液与MCI分离填料平衡柱的体积比为1∶20(L/L)，泵入该滤液的压力为0.2MPa。泵入该滤液完成后，再泵入体积浓度为85％的乙醇水溶液进行洗脱，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的流速为4BV/h，泵入该体积浓度的乙醇水溶液的体积为5BV，泵入该乙醇水溶液的压力为0.2MPa。用分部收集器分别收集从MCI分离填料平衡柱出液口流出的第0～0.5BV、第0.51～1.5BV、第1.51～2.8BV、第2.9～3.8BV及第3.9～5.0BV的洗脱液，对收集的第0～0.5BV和第3.9～5.0BV洗脱液，可用于制备下批次白藜芦醇分离液；对收集的第0.51～1.5BV洗脱液，含纯化白藜芦醇，即为白藜芦醇分离液，用于下步制备白藜芦醇浓缩液；对收集的第1.51～2.8BV洗脱液，含有少量白藜芦醇和大黄素，返回第(2)步，制备虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对收集的第2.9～3.8BV洗脱液，含大黄素，用于下步制备大黄素浓缩液。

(4)制备白藜芦醇和大黄素浓缩液

第(3)步完成后，分别将第(3)步收集的白藜芦醇分离液和第2.9～3.8BV洗脱液泵入反渗透膜分离机中，在2.5MPa下进行反渗透，直至截留液与滤过液的体积比为1∶20(L/L)时止。反渗透完成后，分别收集反渗透截留液和反渗透滤过液，对分别收集的反渗透截留液，即分别为白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液，分别用于下步制备白藜芦醇脱乙醇浓缩液和大黄素脱乙醇浓缩液；对分别收集的反渗透滤过液，进行合并后可用于制备下批次白藜芦醇分离液。

(5)制备白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液

第(4)步完成后，分别将第(4)步收集的白藜芦醇浓缩液和大黄素浓缩液泵入溶剂回收真空系统中，在温度为50℃、真空度为100Mbar的条件下进行浓缩，直至浓缩液无乙醇味时止。分别收集浓缩液和浓缩冷凝液，对分别收集的浓缩冷凝液，进行合并后可用于制备下批次虎杖白藜芦醇乙醇溶液；对分别收集的浓缩液，即分别为白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液，用于下步制备白藜芦醇和大黄素冻干粉。

(6)制备白藜芦醇和大黄素冻干粉

第(5)步完成后，分别先将第(5)步收集的白藜芦醇和大黄素脱乙醇浓缩液置于-20℃冰箱中预冻12h，再分别取出，分别放置于真空冷冻干燥机中，在真空度为50Pa、温度为-40℃的条件下冷冻干燥36h，即分别制备出白藜芦醇和大黄素冻干粉。