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1、10申请公布号CN104105471A43申请公布日20141015CN104105471A21申请号201380008776122申请日2013021261/598,59420120214USA61K8/44200601A61K8/60200601A61K8/73200601A61Q19/00200601A61K8/9720060171申请人宝洁公司地址美国俄亥俄州72发明人AC兰扎拉科DL查博尼奥BW霍华德74专利代理机构上海专利商标事务所有限公司31100代理人樊云飞54发明名称皮肤共生益生元剂和包含其的组合物的局部使用57摘要本发明公开了用于改善皮肤微生物组的健康状态、从而潜在地改善皮。
2、肤的状况和/或外观的皮肤共生益生元的局部使用，以及包含该皮肤共生益生元的局部化妆品组合物。所述局部化妆品组合物可包含皮肤病学可接受的载体和有效量的益生元，并且可与一种或多种口服的或局部的益生元、益生菌和/或益生菌裂解物一起使用。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014080886PCT国际申请的申请数据PCT/US2013/0257362013021287PCT国际申请的公布数据WO2013/122931EN2013082251INTCL权利要求书2页说明书23页附图7页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书23页附图7页10申请公布号CN10410。
3、5471ACN104105471A1/2页21一种增加皮肤上的厌氧的和/或需氧的皮肤共生微生物的数量的方法，包括向靶标皮肤表面局部施用化妆品组合物一段足够的时间以增加所述厌氧的和需氧的皮肤共生微生物中的至少一种的数量，其中所述化妆品组合物包含皮肤病学可接受的载体和有效量的皮肤共生益生元。2根据权利要求1所述的方法，还包括将所述靶标皮肤表面鉴定为需要处理，所述处理提供皮肤有益效果。3根据权利要求2所述的方法，其中所述皮肤有益效果选自改善皮肤外观、改善皮肤感觉、增加皮肤的一个或多个层的厚度、增加皮肤的弹性、增加皮肤的回弹力、增加皮肤的紧致度、减少皮肤的油性外观、减少皮肤的有光泽的外观、减少皮肤的无。
4、光泽的外观、增加皮肤的水合状态、增加皮肤的保湿状态、减少细纹的外观、减少皱纹的外观、改善皮肤肌理、改善皮肤光滑性、改善皮肤剥落、改善皮肤脱屑、使皮肤丰满、改善皮肤屏障性能、改善皮肤色调、减少红色的外观、减少皮肤斑点的外观、改善皮肤的亮度、改善皮肤的光彩、改善皮肤的半透明性。4根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括每天至少一次向所述靶标皮肤表面施用所述化妆品组合物。5根据权利要求4所述的方法，其中所述化妆品组合物被连续施用两天或更多天。6根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中根据平板计数测试，所述皮肤共生微生物的数量在体内增加了至少10。7根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述益生元。
5、以约0001至约25的量存在。8根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述益生元以足够使所述至少一种皮肤共生微生物的细菌ATP含量根据ATP测试在体外增加了至少80的量存在。9根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述益生元以足够使所述至少两种皮肤共生微生物的细菌ATP含量根据ATP测试在体外增加了至少50的量存在。10根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述益生元以足够使所述至少三种皮肤共生微生物的细菌ATP含量根据ATP测试在体外增加了至少25的量存在。11根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述益生元选自低聚半乳糖、羟基异亮氨酸、小麦糊精、阿拉伯半乳聚糖、柑橘纤维、豌豆纤维、。
6、麦芽糖糊精、低聚果糖、菊粉、菊粉低聚纤维、甘露聚糖水解产物、葡甘露聚糖水解产物、半乳甘露聚糖、低聚龙胆糖、异麦芽低聚糖、猕猴桃衍生化合物、甜菜浆、和米糠。12根据权利要求11所述的方法，其中所述低聚半乳糖选自二糖、三糖、四糖、五糖、六糖以及这些的混合物。13根据权利要求12所述的方法，其中所述低聚半乳糖为约20至约35W/V的所述二糖、约20至约35W/V的所述三糖、约15至约25W/V的所述四糖、和约10至约20W/V的所述五糖的混合物。14根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述皮肤共生微生物为选自葡萄球菌属、棒状杆菌属、丙酸杆菌属的物种。15根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括。
7、结合所述第一化妆品组合物使用第二化妆品组合物，其中所述第二化妆品组合物包含选自胃肠道益生菌、胃肠道益生菌裂权利要求书CN104105471A2/2页3解物、胃肠道益生元和营养补充剂的材料。权利要求书CN104105471A1/23页4皮肤共生益生元剂和包含其的组合物的局部使用技术领域0001本文的组合物和方法一般地涉及针对皮肤共生微生物的益生元剂的使用。更具体地，本文的组合物和方法涉及局部施用的益生元剂。背景技术0002大多数人的皮肤和胃肠道“GI”定植着大量各种不同类的微生物。定植一般开始于出生后不久，当婴儿暴露于母亲的微生物区系和通常导致向先前无菌的人类胎儿的定植的其他环境事件时。从初始的。
8、定植时起，人类的微生物组保持不断变化的状态，其中常驻微生物区系的组成响应于对宿主而言内在和外在的因素而随着时间变化。一般来讲，定植于人类宿主的微生物可被划分为三个不同的类别。1零星驻留并通常不增殖的那些，2可增殖并与宿主在一起例如，在皮肤上或在胃肠道中相对短时期的那些，和3可永久性地定植于宿主的那些。0003已经认识到，宿主的健康状态至少部分地依赖于宿主的微生物组的健康状态。例如，通常存在于人类胃肠道的某些微生物提供的健康有益效果已被很好地研究。相似地，不健康的或不平衡的胃肠道微生物组的不可取的效应也是为人们所熟知的。有关宿主的健康状态和宿主的胃肠道微生物组的健康状态之间关系的知识，已产生了市。
9、场定位于改善或维持人类胃肠道微生物组中的一个或多个成员的健康状态的多种可商购获得的产品。这些可商购获得的产品一般被分类为益生菌、益生元或合生元。益生菌是所谓的“好”微生物通常为细菌，其活着被人摄入，使得所引入的微生物能够定植在此人的胃肠道中。常规的益生元是可摄取的成分，其选择性地支持有利地存在于胃肠道中的“好”微生物的生长或生存。常规的益生元通常是能够被胃肠道微生物组中的一个或多个成员吸收、但不能被人类宿主消化的营养物质来源例如，低聚果糖或低聚半乳糖。合生元是益生元和益生菌的混合物。合生元的益生元部分向合生元的益生菌部分提供合适的营养物质来源，这据信提高了益生菌存活和定植的可能性。0004不久。
10、前，关注转向了存在于人类皮肤上的微生物区系，以更好地了解驻留的微生物区系的健康状态和宿主的健康状态之间的关系。不出意料地，已经发现健康平衡的皮肤微生物组能够向人类宿主提供健康和/或美容有益效果，例如，通过刺激人类的免疫系统和/或产生定向减少不希望的微生物的定植的抗微生物物质。另一方面，破坏皮肤微生物区系的微妙平衡的扰动可以为宿主和/或微生物区系带来不可取的后果。例如，与痤疮丙酸杆菌的增殖相关联的游离脂肪酸副产物的增产可促进粉刺的发展。就所存在的微生物的类型和多样性两者而言，人类皮肤微生物组的组成与胃肠道微生物组的组成是显著不同的。因此，毫无意外的是，至少部分地由于两种微生物组存在于其中的显著不。
11、同的环境和可供用作食物的底物，胃肠道和皮肤微生物组的成员可利用不同的营养物质来源。0005为人们所熟知的是，微生物的饮食需求从一个物种到另一个可显著地不同，并且对于在特定微生物上表现出益生元活性的试剂，在不同的微生物上表现出无益生元活性是并不稀奇的。例如，被设计用于胃肠道微生物区的益生元历史上是基于碳水化合物的材料，说明书CN104105471A2/23页5其作为食物用于驻留的糖分解驱动的微生物。但存在于人的皮肤上的微生物区系能够包括亲脂的生物，其不一定能被预期吸收碳水化合物。甚至可存在于皮肤上的糖分解的微生物也可能不利用与胃肠道微生物相同种类的碳水化合物，因为存在于皮肤上的微生物一般不暴露于。
12、与胃肠道中的微生物相同种类的碳水化合物。0006尽管可能毫无意外的是，人类的胃肠道和皮肤微生物组的组成可显著地不同，也许更加令人意外的是相同微生物组的组成在个体之间也能够存在显著的变异度这一发现。提供健康、平衡的皮肤微生物组的健康和美容有益效果直到最近才被较好地了解。因此，仅鉴定了有限数量的合适的益生元剂用于皮肤上的使用。此外，常规的益生元剂通常是口服施用的，例如，作为营养补充剂方案的部分。虽然口服摄取可能适于向胃肠道递送益生元剂，它可能不是向存在于皮肤上的微生物区递送益生元的最佳途径。0007因此，存在通过提供在一种或多种皮肤共生微生物上表现出益生元活性的试剂来改善人类皮肤的健康状态和/或外。
13、观的需求。还存在对于向皮肤共生微生物递送益生元剂的改善的机制的需求。发明内容0008为了提供对上述问题中的一个或多个的解决，本文公开了用于改善皮肤的状况和/或外观的方法。所述方法包括向皮肤局部施用化妆品组合物。所述化妆品组合物包含皮肤病学可接受的载体和低聚半乳糖。附图说明0009图1示出了示例性的微生物组群体分布。0010图2示出了基于体外测试，随着时间进程对测试试剂的微生物ATP响应。0011图3示出了基于体外测试，随着时间进程对测试试剂的细菌计数响应。0012图4示出了基于体外测试，对不同含量的测试试剂的微生物ATP响应。0013图5示出了基于体外测试，对不同含量的测试试剂的细菌计数响应。。
14、0014图6示出了基于体内测试，对测试试剂的需氧微生物的细菌计数响应。0015图7示出了基于体内测试，对测试试剂的厌氧微生物的细菌计数响应。0016图8示出了对多种组合物的体外的细菌ATP响应。0017图9显示了就体内研究而言的测试计划表的一部分。0018图10示出了测试区域在人的前臂上的示例性位置。具体实施方式0019定义0020“化妆品组合物”是指适于局部施用于哺乳动物皮肤和/或诸如毛发和指/趾甲的角质组织上的组合物，其旨在改善所述皮肤或角质组织的状况和/或外观，或以其他方式提供护肤有益效果。局部是指皮肤或其他角质组织的表面。化妆品组合物包括任何有色化妆品、指/趾甲、或护肤产品。“护肤”是。
15、指调节和/或改善皮肤状况。护肤有益效果的一些非限制性例子包括通过提供更光滑、更均匀的外观和/或感觉来改善皮肤外观和/或感觉；增加皮肤的一个或多个层的厚度；改善皮肤的弹性或回弹力；改善皮肤的紧致度；和减说明书CN104105471A3/23页6少皮肤的油性的、有光泽的、和/或无光泽的外观、改善皮肤的水合状态或保湿状态、改善细纹和/或皱纹的外观、改善皮肤肌理或光滑性、改善皮肤剥落或脱屑、使皮肤丰满、改善皮肤屏障性能、改善皮肤色调、减少红色或皮肤斑点的外观、和/或改善皮肤的亮度、光彩、或半透明性。化妆品组合物的一些非限制性例子包括在面部留下颜色的产品，例如粉底、睫毛膏、遮瑕膏、眼线膏、眉彩、眼影、腮。
16、红、唇膏、润唇膏、化妆底粉、固体乳液粉盒等。“护肤产品”包括但不限于护肤霜、保湿剂、洗剂、和沐浴露。0021“皮肤病学可接受的载体”是指可局部施用于皮肤或角质组织的载体。皮肤病学可接受的载体可以是很多种形式，例如，简单溶液水基或油基的、固体形式凝胶或棒状物和乳液油包水或水包油。0022“有效量”是指在指定条件下足够具有指定特性的指定组分的量。例如，益生元的有效量是指足够在体外和/或体内导致一种或多种所选择的微生物的代谢物含量和/或细菌计数的所期望的增加的量。0023“胃肠道微生物”或“GI微生物”是定植即，生活和繁殖在人类消化道中的原核生物和/或真核生物。0024“增加”是指高于基础含量或与对。
17、照相比的增加。例如，可以测定基础含量以用于体内研究，而对照被用于体外测试。0025“代谢”是指在微生物内发生的任何化学反应。代谢包括合成代谢，即生物分子的合成例如蛋白质合成和DNA复制，和分解代谢，即生物分子的裂解。0026“微生物裂解物”是指产生自微生物裂解的细胞组分和试剂的混合物。“裂解”涉及通过处理例如，化学的、生物学的、机械的、或热的处理使细胞的细胞壁和/或细胞膜破裂，导致该细胞的生物学组分的一些或全部的释放的动作。0027“微生物体”和“微生物”是同义的，是指细菌、真菌、和藻类。0028“基本碳培养基”“MCM”是指用于支持微生物的有限生长即，在24小时期间菌落形成单位数“CFU”小。
18、于02对数增长和/或生存的物质的混合物，在其中碳是限制性资源。在某些实施例中，MCM可以是液体或凝胶的形式。由于在不同微生物之间基本的碳需求可能有差别，MCM中存在的碳的量也可以有差别。在某些实施例中，例如，MCM可以完全不含碳。在某些实施例中，MCM可以基本上不含碳即，基于培养基的重量计，小于0001重量。在某些实施例中，MCM可包含0001至01的碳。碳的量以存在的碳的摩尔份数或分子量被测定。例如，葡萄糖按重量计为40碳。0029“低聚糖”是指包含少量例如，二至十的单糖的糖类聚合物。0030“可口服摄取”是指旨在被置于口中并被吞下的组合物。0031“PCR”是指聚合酶链反应，并且包括实时P。
19、CR、定量PCR“QPCR”、半定量PCR、以及它们的组合。0032“益生元”是指能够作为营养物质被所选择的微生物例如，皮肤共生微生物或胃肠道微生物利用、能够诱导所选择的微生物的生长和/或活性、能够诱导所选择的微生物的复制、能够作为能量源被所选择的微生物利用、和/或能够被所选择的微生物用于生物分子即，RNA、DNA、和蛋白质的制备的任何物质或多种物质的组合。益生元的非限制性例子包括黏多糖、低聚糖如低聚半乳糖“GOS”、多糖、氨基酸、维生素、营养物质前体、收集的生物体的代谢产物、脂类、和蛋白质。为了确定测试试剂是否在一种微生物上表现出益说明书CN104105471A4/23页7生元活性，可能期望。
20、将该测试试剂与惰性缓冲液例如，盐水溶液或溶剂混合。合适的溶剂的非限制性例子包括二甲基亚砜DMSO、诸如甲醇和乙醇的醇类、和诸如水和培养基的水性溶液。0033“复制”是指微生物向子细胞的分裂例如，通过有丝分裂或二分裂。0034“皮肤”是指表皮、真皮、和下皮即，皮下组织、毛囊、毛根、毛球、甲床爪床的腹侧上皮层、皮脂腺和汗腺外分泌的和顶泌的中的一种或多种。0035“皮肤共生微生物”是指在体外和/或体内可定植即，在人类皮肤上生活和繁殖或暂时栖息在人类皮肤上的原核生物和真核生物。示例性的皮肤共生微生物包括但不限于变形菌ALPHAPROTEOBACTERIA、变形菌BETAPROTEOBACTERIA、变。
21、形菌GAMMAPROTEOBACTERIA、丙酸杆菌PROPIONIBACTERIA、棒状杆菌CORYNEBACTERIA、放线菌ACTINOBACTERIA、梭菌CLOSTRIDIALES、乳杆菌LACTOBACILLALES、葡萄球菌STAPHYLOCOCCUS、芽孢杆菌BACILLUS、微球菌MICROCOCCUS、链球菌STREPTOCOCCUS、拟杆菌BACTEROIDALES、黄杆菌FLAVOBACTERIALES、肠球菌ENTEROCOCCUS、假单胞菌PSEUDOMONAS、马拉色菌MALASSEZIA、MAYDIDA、德巴利酵母DEBAROYOMYCES、和隐球菌CRYPTO。
22、COCCUS。0036“局部的”及其变型是指旨在被直接施用于皮肤或其他角质组织的外表面的组合物。0037冠词“一个”和“一种”被理解为指所指称的和/或描述的对象的一个或多个。0038靶标微生物的选择0039哺乳动物皮肤的表面通常包含很多种的微生物，其可以是物种与物种不同的、个体与个体不同的、和甚至是一个个体的位置与位置不同的。总之，这些微生物形成了微生物组。健康的皮肤微生物组将大体由皮肤共生微生物的平衡的集合组成。人类宿主的皮肤微生物组可包含帮助提升宿主皮肤的健康状态和/或外观的多种驻留微生物。但在一些情况下，某些不期望的微生物如病原性细菌、酵母和真菌可能企图定植在皮肤上。此类微生物的定植能够。
23、扰乱健康的微生物组的平衡。幸运的是，通常并且有利地存在于人类皮肤微生物组中的驻留微生物已进化出多种主动和被动的机制来抑制和/或防止不期望的微生物在皮肤上定植。被动机制的例子包括针对可被不期望的微生物占据的生态位的竞争，以及消耗对于不期望的微生物的生长和增殖至关重要的营养物质。就主动的机制而言，合乎期望的微生物可产生抑制不期望的微生物的增殖、或甚至将它们彻底杀灭的代谢物。除了对不期望的微生物的抑制之外，还有越来越多的证据表明某些驻留微生物区系影响先天免疫。例如，已经证明皮肤微生物组的某些成员通过它们对脂类、蛋白质和碳水化合物的代谢产生有助于维持皮肤的“酸性壳层”的酸。0040使微生物组保持处于健。
24、康、平衡的状态和/或使微生物组回到健康、平衡的状态的一种方法可以是向某些合乎期望的微生物提供足够的营养物质，以使其兴旺发展，并从而胜过和/或杀灭不期望的细菌。例如，可能有利的是在人们在它们的日常护肤方案中使用的组合物中包含一种或多种益生元剂。然而，这并不是一件容易的事，因为人与人之间微生物的组成的可变性可导致作为有效的益生元适合一个人的皮肤共生微生物的特定的试剂不适合另一个人。尽管在不同个体的皮肤共生微生物中可观察到广泛的可变性，已发现的确存在一些共性。例如，已发现杰氏棒状杆菌CORYNEBACTERIUMJEIKEIUM“C说明书CN104105471A5/23页8JEIKEIUM”、表皮葡。
25、萄球菌STAPHYLOCOCCUSEPIDERMIDIS“SEPIDERMIDIS”、和痤疮丙酸杆菌PROPIONIBACTERIUMACNES“PACNES”以不同的程度以可测量的量存在于人类的面部和前臂两者上。0041图1示出了可存在于人的面部和前臂上的类似但不同的微生物群体。图1中示出的微生物是通过用磷酸盐缓冲盐水“PBS”润湿的无菌拭子对皮肤取样而分离的。图1中示出的QPCR分析利用了从拭子样品分离的DNA。如图1所示，葡萄球菌STAPHYLOCOCCUS、棒状杆菌CORYNEBACTERIUM和丙酸杆菌PROPIONIBACTERIUM均存在于所取样的个体的面部和前臂上。因此，在益生。
26、元筛选方法中包括痤疮丙酸杆菌PACNES、葡萄球菌STAPHYLOCOCCUS和棒状杆菌CORYNEBACTERIUM可能对于预测潜在的益生元剂的体内效应是尤其有用的。图1还示出了丙酸杆菌PROPIONIBACTERIUM相较于前臂更常见于面部，而就棒状杆菌CORYNEBACTERIUM和葡萄球菌STAPHYLOCOCCUS而言似乎正好相反。因此，由于痤疮丙酸杆菌PACNES对前臂和面部微生物组的组成的相应贡献，表现出对痤疮丙酸杆菌的益生元活性的试剂可能对皮肤健康和/或皮肤微生物组具有显著的影响。并且表现出对棒状杆菌CORYNEBACTERIUM和葡萄球菌STAPHYLOCOCCUS的益生元活。
27、性的试剂可被用于提供特定于前臂和/或具有类似微生物组组成的其他身体区域的靶向皮肤健康有益效果。0042就可有利地影响皮肤微生物组和/或皮肤健康的皮肤共生微生物而言，据信杰氏棒状杆菌CJEIKEIUM、表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS、和痤疮丙酸杆菌PACNES提供皮肤健康和/或期望的微生物组有益效果，通过向这些微生物提供具有益生元潜能的化合物可使它们增加。具体地，已经证明杰氏棒状杆菌CJEIKEIUM产生螯合铁的铁载体。杰氏棒状杆菌CJEIKEIUM还采用特化的机制来捕集锰，二者均是某些不期望的微生物的生长所必需的。0043表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS据信在刺激皮肤的免疫系统中起着。
28、积极作用，例如，通过影响经TOLL样受体“TLR”信号的角质细胞的先天免疫应答。此外，表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS据信占据了宿主细胞上的、还被诸如金黄色葡萄球菌STAPHYLOCOCCUSAUREUS的更具毒性的微生物识别的受体。另外，表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS产生包含羊毛硫氨酸的抗菌肽有时被称为细菌素，已知其表现出对某些有害细菌物种的抗菌特性。此类肽的例子包括表皮素EPIDERMIN、EPILANCINK7、EPILANCIN15XPEP5、和葡萄球菌素STAPHYLOCOCCIN1580。由表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS产生的其他肽反作用于种内和种间的竞争者。上述肽。
29、有效地抗金黄色葡萄球菌STREPTOCOCCUSAUREUS、A组链球菌STREPTOCOCCUS、和酿脓链球菌STREPTOCOCCUSPYOGENES。0044痤疮丙酸杆菌PACNES是共生的、非孢子的、杆状的棒状的、革兰氏阳性的细菌，存在于人体的多种位置，包括皮肤、口、泌尿道和大肠的区域。痤疮丙酸杆菌PACNES能够消耗皮肤的油并产生诸如短链脂肪酸和丙酸的副产物，这些副产物已知有助于维持健康的皮肤PH和屏障性能。诸如痤疮丙酸杆菌PACNES的丙酸杆菌还产生细菌素和细菌素样的化合物例如，PROPIONICINPLG1、JENSENIING、PROPIONICINSSM1、SM2T1、和AC。
30、NECIN，这些化合物对不期望的产乳酸细菌、革兰氏阴性细菌、酵母、和霉菌是抑制性的。0045考虑到据信由杰氏棒状杆菌CJEIKEIUM、表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS、和痤疮丙酸杆菌PACNES提供的有益的功能，以及它们似乎存在于人的前臂和面部上，对说明书CN104105471A6/23页9这些皮肤共生微生物中的一种、两种、或甚至全部提供表现出适当的体内益生元活性的试剂将是合乎期望的。并且由于至少一些化妆品组合物通常被施用于人的面部、手和/或前臂，可能有利的是向这些化妆品组合物中掺入促进杰氏棒状杆菌CJEIKEIUM、表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS、和/或痤疮丙酸杆菌PACNES的。
31、健康状态和/或生存的成分。当然，应当理解本文所述的益生元活性不限于前述微生物，而是可同样表现出对其他皮肤共生微生物的适当的益生元活性。0046益生元剂0047微生物，以及实际上全部的生命形式，已进化为在它们的环境中是成功的。生物体的进化的一个方面是适于利用通常存在于该生物的栖息地的可用的食物源。因此，皮肤共生微生物倾向于利用通常存在于皮肤上和/或在其内的营养物质来源，而栖息在胃肠道的微生物倾向于利用通常存在于胃肠道的食物源。例如，存在于大多数人的皮肤上的痤疮丙酸杆菌PACNES已知消耗皮脂腺中的脂肪酸或由毛囊分泌的皮脂。另一方面，通常存在于人类胃肠道的双歧双歧杆菌BIDOBACTERIUMBI。
32、DUM能够利用低聚半乳糖“GOS”作为食物源。由于胃肠道中的环境和皮肤上的环境之间的实质差异以及通常存在于各自环境中的可用的营养物质的实质差异，皮肤共生微生物和胃肠道微生物预期不利用相同的食物源。0048诸如GOS的可摄取形式的益生元剂用于改善胃肠道微生物组的健康状态是为人们所熟知的。如前文所指出的，一般被认为是存在于人类胃肠道中的有益菌种的双歧双歧杆菌BIDOBACTERIUMBIDUM已知利用GOS作为食物源。GOS是利用半乳糖苷酶的半乳糖基转移酶活性通常从乳糖产生的包含半乳糖的低聚糖。根据下式，取决于用于制备其的方法，GOS可包括二、三、四、五、或六糖或这些中的两种或更多种的混合物004。
33、90050其中N25,0051GAL表示半乳糖残基而0052GLC表示葡萄糖残基。0053在尤其合适的实施例中，GOS可以是混合物的形式，其包含20至35W/V的二糖、20至35W/V的三糖、约15至约25W/V的四糖、和10至20W/V的五糖。授予GIBSON等人的美国专利7,883,874和授予TZORTZIS等人的美国专利8,030,049和8,058,047各自公开了GOS和制备GOS的方法的例子。0054GOS是可以诸如粉末和糖浆的多种形式商购获得的。GOS还可作为成分存在于供人类和/或动物消耗的销售的食物产品中。GOS的可商购获得的来源的尤其合适的例子是BIMUNO，可购自CLAS。
34、ADO,INCPANAMA。据信BIMUNO是GOS、膳食纤维和其他填充成分的混合物。授予GIBSON等人的美国专利7,883,874公开了通过双歧双歧杆菌BBIDUM的菌株产生的GOS的合适的例子，该菌株通过半乳糖苷酶活性将乳糖转化为前述的GOS的混合物。以这种方式产生的GOS被描述为包含至少一种二糖、至少一种三糖、至少一种四糖和至少一种五糖。尽管GOS是已知的针对胃肠道微生物的益生元剂，GOS通常不以显著量存在于人类皮肤上。因此，GOS先前尚未被考虑用作针对皮肤共生微生物的益生元。然而，已出人意料地发现，GOS表现出对至少一些皮肤共生微生物的可取水平的益生元活性。具体地，说明书CN1041。
35、05471A7/23页10GOS表现出对杰氏棒状杆菌CJEIKEIUM、表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS、和痤疮丙酸杆菌PACNES的益生元活性。0055尽管前述例子描述了GOS作为合适的皮肤共生益生元剂，需要理解的是，其他胃肠道益生元但不是所有的胃肠道益生元，如下文所详细讨论的，可能适用作皮肤共生益生元剂。可能适用作皮肤共生益生元的胃肠道益生元的一些非限制性例子包括羟基异亮氨酸；小麦糊精；阿拉伯半乳聚糖例如，松木多糖LARCHARABINOGALACTIN；柑橘纤维；豌豆纤维；麦芽糖糊精；低聚果糖即，果寡糖或“FOS”；菊粉；菊粉低聚纤维；甘露聚糖水解产物；葡甘露聚糖水解产物；半乳甘露聚。
36、糖；低聚龙胆糖；异麦芽低聚糖；猕猴桃和猕猴桃衍生化合物例如，来源于猕猴桃并可购自VITALFOODS的ZYACTINASE45品牌酶复合物；甜菜浆；和米糠。0056要适用作针对皮肤共生微生物的益生元，该组合物或试剂应当促进所述微生物的生存和/或生长。为了测定测试试剂的益生元潜能，可能有利的是测定因使皮肤共生微生物暴露于该测试试剂而形成的代谢物。合适的微生物输出包括但不限于细胞裂解时被释放的诸如ATP、NAD、NADP、NADH、NADPH、CAMP、CGMP、和/或ADP的代谢物的含量。在一些情况下，可使用可商购获得的基于酶的测定来测量代谢指标。除此之外或作为另外一种选择，可能有利的是测量微生。
37、物的数量和/或浓度的变化即，增殖，以确定是否表现出益生元活性。例如，细菌计数例如，当用适当的平板计数测试测量时的增加可能足以表明益生元活性。0057对于测定益生元活性，体内测试一般是优选的。但此类测试可能是耗时的和高成本的。常规的体外测试例如，ATP测定或平板计数尽管通常比体内测试更快和成本更低，却可能不提供对体内活性的适当预测。因此，可能有利的是使用复合方法，在其中一种或多种类型的体外测试被用于预测GOS是否在体内表现出益生元活性，任选地随后是用以确认此类活性的体内测试。用于确定益生元活性的复合筛选测定和方法的尤其合适的例子公开于共同待决的美国专利13/672,163；13/672,192；。
38、和13/672,211中，全部由LANZALACO等人提交。0058图2和3示出了基于测试样品的体积计，当以05重量的量存在时GOS对时间的体外益生元效应。图2示出了在24小时和48小时相对于水对照组，三种皮肤共生微生物的ATP产生的百分比变化。图2和3中示出的三种皮肤共生微生物是表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS显示为“SEPI”、杰氏棒状杆菌CJEIKEIUM显示为“CJ”和痤疮丙酸杆菌PACNES显示为“PACNES”。如图2所示，在24和48小时，相对于水对照组，全部三种皮肤共生微生物的ATP产生增加了。ATP含量是按照下文所详述的ATP测试测定的。图3示出了当在24小时和48小时测。
39、量时，相对于水对照组，三种皮肤共生微生物的细菌计数的百分比变化。细菌计数是通过下文所详述的平板计数测试测量的。如图3所示，相对于水对照组，细菌计数在24和48小时增加。换句话讲，对于所测试的微生物，GOS在体外在24和48小时表现出益生元活性。用于产生图2和3所示的数据的测试样品是按照下文关于起始培养物、工作培养物和测试样品的建立所描述的方法制备的。测试样品是BIMUNO品牌GOS、基本碳培养基、和所选择的微生物的混合物。0059图4和5示出了基于测试样品的体积计，005重量和05重量的GOS的比较性体外益生元效应。如图4所示，相对于水对照组，在005和05两者含量上，全部三说明书CN1041。
40、05471A108/23页11种皮肤共生微生物的ATP产生均增加。图5示出了在005和05的含量，细菌计数的增加。因此，当以005和05存在时，GOS在体外表现出益生元活性。用于产生图4和5所示的数据的测试样品是按照下文关于起始培养物、工作培养物和测试样品的建立所描述的方法制备的。测试样品是BIMUNO品牌GOS、基本碳培养基、和所选择的微生物的混合物。0060图6示出了当微生物暴露于基于测试样品的体积计1重量的GOS测试样品时，GOS对皮肤微生物组中的至少一些需氧微生物的体内益生元效应。图表10示出了对应于取自详述于下文的体内临床实验中的人类受试者的样品的需氧细菌计数。图表10中显示为TPS。
41、1和TPS2的样品对应于取自该研究的处理阶段的微生物样品，在其中1GOS测试样品存在于受试者的前臂上。图表10中显示为RGS1的样品对应于取自该研究的复原阶段的第一微生物样品，在其中GOS不存在于前臂上。如图6所示，相对于在详述于下文的初始的条件化阶段测量的基线水平，需氧细菌计数在处理阶段增加，并且相对于处理阶段，需氧细菌计数在复原阶段减少。基于图6显示的数据，据信在处理阶段GOS的存在导致了需氧细菌计数的增加，并且随后在复原阶段GOS的缺乏导致了需氧细菌计数的减少。换句话讲，当以1存在时，GOS在体内表现出对至少一些需氧的皮肤共生微生物的益生元活性。用于产生图6所示的数据的测试样品是1BIM。
42、UNO品牌GOS的水性溶液。0061图7示出了当微生物暴露于1的GOS测试样品时，GOS对皮肤微生物组中的至少一些厌氧微生物的体内益生元效应。TPS1、TPS2、和RGS1对应于就图6而言所描述的相同的取样时间。RGS2对应于取自复原阶段的第二微生物样品。如可见于图7中，相对于在条件化阶段测量的基线水平，厌氧细菌计数在处理阶段增加，并且相对于处理阶段，厌氧细菌计数在复原阶段减少。另外，图7示出了相对于RGS1，厌氧细菌计数在RGS2中的继续减少。基于图7的图表20所显示的数据，据信在处理阶段GOS的存在导致了厌氧细菌计数的增加，并且随后在复原阶段GOS的缺乏导致了厌氧细菌计数的减少。换句话讲，。
43、当以1存在时，GOS在体内表现出对至少一些厌氧的皮肤共生微生物的益生元活性。用于产生图7所示的数据的测试样品是1BIMUNO品牌GOS的水性溶液。0062尽管已出人意料地发现，某些胃肠道益生元表现出对皮肤共生微生物的适当的益生元潜能，但这并不是对所有的通常已知的胃肠道益生元都成立，即使是在组成上与GOS相似即，基于碳水化合物的那些。图8示出了通过测量相对于水对照组的细菌ATP含量变化，多种基于碳水化合物的胃肠道益生元对表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS、杰氏棒状杆菌CJEIKEIUM和痤疮丙酸杆菌PACNES的益生元潜能。如可见于图8中的，并非所有的胃肠道益生元均表现出对这三种皮肤共生微生物。
44、的所期望的益生元潜能。用于产生图8所示的数据的测试样品是按照下文关于起始培养物、工作培养物和测试样品的建立所描述的方法制备的。测试样品包括基于该测试样品的体积计，以1重量存在的图8中显示的测试试剂中的一种。测试样品是测试试剂、基本碳培养基、和所选择的微生物的混合物。0063美容组合物0064不受理论的约束，据信皮肤微生物组的健康状态可能与期望的皮肤功能或外观相关和/或可在其他方面提供一种或多种护肤有益效果。例如，有可能通过维持或改善皮肤微生物组中的一个或多个成员的健康状态来维持或改善皮肤的外观、屏障功能、保湿性和/或其他特性。在一些情况下，如果皮肤的特定的某个区域或某些区域表现出不期望的功能和。
45、/或外观，可能有利的是将皮肤的该特定的某个区域或某些区域作为维持或改善的靶说明书CN104105471A119/23页12标。例如，可能有利的是将诸如面部例如，前额、脸颊、和面部的眶周部分、手和/或前臂上的皮肤的特定区域作为靶标，上述区域趋于比皮肤的某些其他区域更多地因暴露于环境例如，紫外线辐射、风、污染、氧化、刺激物而受损和/或可能发生内在老化的可见迹象。用于改善皮肤的健康状态和/或外观的局部施用的化妆品组合物是为人们所熟知的例如，洗剂、保湿调理霜、油、粉底液体和粉末、唇膏、遮瑕物、剃刮准备组合物、液体或固体的洁肤皂。因此，可能有利的是将诸如GOS的益生元剂掺入到局部化妆品组合物中，以利用可。
46、由健康的、平衡的皮肤微生物组提供的健康和/或外观有益效果。0065本文的化妆品组合物可包含有效量的皮肤共生益生元剂。该益生元剂可以按所述组合物的重量计大于0001、001、005、01、05、1、2、3、4或甚至大于5的量存在。可能有利的是将本发明的化妆品组合物中益生元剂的量限制在按所述组合物的重量计小于25、20、15、或甚至10的量，以避免美容上不期望的特性例如，黏性或不良的铺展性。在某些实施例中，所述益生元剂可以足够使至少一种皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加了至少80例如801000或更多，或该范围内的任何值的量存在。另外或作为另外一种选择，所述益生元剂可以足够使至少两种皮肤共生微生。
47、物的ATP含量在体外增加了至少50例如501000或更多，或该范围内的任何值的量存在。此外，所述益生元剂可以足够使至少三种皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加了至少25例如251000或更多，或该范围内的任何值的量存在。应当理解的是，所述益生元剂可以在体外提供ATP含量的上述增加中的一种或多种的量存在于所述组合物中。例如，所述益生元剂可以足够使第一皮肤共生微生物的ATP含量计数在体外增加至少了80，并且第二皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加了至少50的量存在。继续这个例子，所述益生元剂还可以足够使第三皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加了至少25的量存在。ATP含量可按照下文所详述的ATP测。
48、试在体外测定。0066在某些实施例中，所述益生元剂可以足够使至少一种皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少10例如10200或更多、50175、100150、或这些范围内的任何值的量存在。除此之外或作为另外一种选择，所述益生元剂可以足够使至少两种皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少10例如10200或更多、20180、30160、40150、50120、或这些范围内的任何值的量存在。此外，所述益生元剂可以足够使至少三种皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少10例如10200或更多，或该范围内的任何值的量存在。应当理解的是，所述益生元可以在体外提供细菌计数的上述增加中的一种或多种的量被包。
49、含在本发明的组合物中。例如，所述益生元剂可以足够使第一皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少50并且第二皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少20的量存在。继续这个例子，所述益生元剂还可以足够使第三皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少10的量存在。体外的细菌计数可以按照下文所详述的平板计数测试测定。0067本发明的化妆品组合物有利地以足够使至少一种需氧的和/或厌氧的皮肤共生微生物例如，上文所述的皮肤共生微生物中的一种或多种的体内细菌计数增加的量包含益生元剂。在某些实施例中，所述益生元剂可以使需氧的和/或厌氧的体内细菌计数增加了至少10例如，至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130或更多，或这些范围内的任何值、但小于100X的增加例如，小于90X、80X、说明书CN104105471A1210/23页1370X、60X、50、40X、30、20X、10X、或5X的量存在。本发明的化妆品组合物有利地以足够提供护肤有益效果的量包含所述益生元剂。0068在某些实施例中，所述化妆品组合物可包含皮肤病学可接受的载体、有效量的皮肤共。