发明领域
本发明涉及阴道环，其包含脱氢表雄酮(DHEA)或硫酸脱氢表雄酮(DHEA-S)作为活性试剂，和可选地包含调整所述活性试剂的释放的药学上可接受的赋形剂，所述阴道环可用于增加女性中的减少的卵巢储量，和用于减轻与绝经相关的症状，例如外阴阴道萎缩和女性性功能障碍。
现有技术
自从拥有有效的避孕方法的时候起，女性已推迟了她们的母亲身份，其中按照在某些欧洲国家中的统计，甚至达到在29-30岁的平均年龄时具有其第一个子女，这与在80年代初所具有的23至25岁的平均年龄形成对比(Alviggi等人,2009)。另一方面，女性的生殖能力随着岁月流逝而降低，其中在30岁的平均年龄时开始下降(Broekmans等人,2009)。
首次怀孕的自愿推迟与随年龄增加而出现的生殖力的自然降低的结合已导致寻求辅助生殖技术(ART)治疗的35岁以上的女性的不断增加。这些是具有高度复杂性且非常昂贵的程序，其并不总是得到积极的结果。不利地影响它们的主要因素之一是患者的高龄，因此，这些治疗中的改善旨在改变在该组女性中存在的状况。
对于不育女性的惯常疗法旨在刺激卵巢，诱导卵泡的发育和卵母细胞的释放。其在于用促性腺激素，例如促性腺激素释放激素 (GnRH)、人绝经期促性腺激素(HMG)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)和促卵泡激素(FSH)，来进行药理学治疗。此外，还可能的是用雌激素联合生长激素(GH)来进行预治疗，目的是提高促性腺激素的作用。然而，卵巢刺激的临床效果是有限的，并且应答不是完全令人满意的。用这些治疗产生了，20％至60％的女性实现怀孕，和在她们中70％至85％有着无并发症的怀孕，其中分娩出无病且健康的婴儿。如果没有取得良好的结果，可以向患者重复实施用促性腺激素进行的治疗，但仅在7个周期的最大时间段期间。
体外受精(IVF)是在辅助生殖技术中最常使用的程序之一。它在于使女性的卵子与男性的精子相接触。第一个阶段是刺激卵巢，然后通过穿刺来回收卵母细胞并在实验室中进行体外授精，以用于最后将一个或多个所得的胚胎转移至患者的子宫。
用促性腺激素进行的卵巢刺激治疗还在IVF的实验方案中作为初始或基础部分进行使用。其寻求刺激卵巢卵泡发育并且实现卵母细胞的释放，以便在麻醉下通过卵泡液的抽吸来回收它们。
卵巢对于促性腺激素刺激的低应答在从35岁起的女性中是更普通的，因为随着年龄的增加卵巢变得对于FSH较不敏感(Alviggi等人,2009)。依次地，这还降低了在体外受精后的胚胎植入的可能性和出生成功。相反地，已观察到在使用供卵的患者中的结果随着年龄增加而保持相对不变，这表明在年长女性中的低的结果与卵母细胞而不是与子宫因素有关。
虽然认为实足年龄对于规划对FSH的卵巢应答来说是最重要的参数，但是生殖衰老速率在个体之间相当大地变化。环境因素和遗传因素都对卵巢的生物学衰老作出贡献，从而实足年龄和生物学年龄不总是相等的。年长的女性和具有过早卵巢衰老的女性都产生很少的卵母细胞，并且其中很少是有生存力的和正常的(te Velde等人,2002；Broekmans等人,2009)。即使在IVF的程序中卵巢经历用促性腺激素进行最大刺激，但低的卵母细胞产生加上其较少的数量是IVF成功中的主要缺点之一。
女性中的生殖衰老在出生前开始直至转变成绝经，其中在卵巢中的不处于生长中的卵泡(NGF，非生长卵泡)的储量的减少是在该过程中出现的主要机制。卵泡生成开始于妊娠期的第12周并在大约第21周结束。在胎儿生命的4-5个月时，拥有大约6-7百万个被颗粒细胞层围绕的卵母细胞，从而形成原始卵泡贮备。在胎儿生命的后一半中，由于大多数原始卵泡的凋亡而产生丧失，并且在出生时女性拥有仅1至2百万个这些卵泡的预算量(等人,2002)。在出生后，卵泡丧失以更慢的速率继续进行，其中在月经初潮时达到大约400,000个卵泡的预算量(te Velde等人,2002)。
最初的模型显示，当卵泡数目下跌至低于25,000个卵母细胞这一临界水平时(这通常出现在大约38岁时)，NGF的减少速率遵循指数和双相模式，其中具有衰减的加速，从而最终达到绝经，此时具有仅数千个卵母细胞(Faddy等人,1992；Faddy等人,1996)。后来，通过使用新的医学和分析技术，显示NGF的减少在整个一生中是逐渐的，没有突然的衰减，但是具有随着年龄增长而发生的卵泡丧失速率的稳固增加(Hansen等人,2008)。作为该加速的结果，卵泡数目随着年纪增长而更快速地衰减。
更近来，已提出了将人卵巢中的NGF群体与女性的年龄(从受孕至绝经)相关联的模型(Wallace等人,2010)。从该分析中估计，95％的年龄为30岁的女性仅拥有在出生之前所具有的最大NGF群体的12％；和在40岁时，仅保留了3％的NGF。此外还发现，向着成熟期的NGF的募集从出生直至14岁一直增加，随后减少直至绝经。
NGF群体的减少是与剩余卵母细胞的卵巢品质的降低一起出现的连续的生理学过程(te Velde等人,2002)。认为NGF的贮备代表了卵巢储量(Hansen等人,2008)。较低的卵巢品质归因于减数分裂的不可能性的增加，其相应于染色单体分离的异常，这造成在年长女性中在早期胚胎中的渐增的非整倍性比率(Battaglia等人,1996；Kuliev等人,2005；Pellestor等人,2005；Hunt等人,2008)。作为结果，观察到在35岁后的妊娠中自然流产和染色体突变的增加(Munne 等人,1995；Munne等人,2005)。天然不育也可以在更年轻的女性中过早出现。向更小的卵巢应答变化被称为“减少的卵巢储量”(DOR)或“降低的卵巢功能”(DOF)。
原始卵泡从出生前开始就不断地被募集加入早期生长卵泡组。在该初始募集阶段中，卵泡停止在第一减数分裂前期。在青春期后，在每个新的周期中，募集有限数目的生长卵泡(周期性募集)，并且在最后的选择之后，产生单个卵泡的占优势和排卵(Gougeon 1996；McGee等人,2000)。在生命的某个确定时刻，大多数原始卵泡保持在潜伏状态，而未到达排卵前状态的那些被指定闭锁在卵泡发育的早期状态下，而达不到成熟和可用于排卵。在通过增加诱导排卵的促黄体生成激素(LH)进行刺激时，大约仅0.1％的卵母细胞重新开始减数分裂，从而形成可用于受精的单倍体配子。
被称作女性不育的状况包括想要怀孕但在12个月的时间段内未实现怀孕的女性(Evers 2002)。这些女性中的许多大于35岁并且患有天然不育。存在内分泌和超声标志物，其可用于估计个体患者的卵巢生物学年龄并且帮助改善这些患者的个体化关怀、信息和合适的管理。在这些标志物中，包括：FSH水平、囊状卵泡计数(AFC)、抑制素-B和抗苗勒管激素(AMH)。
已显示，升高的FSH基础水平与差的对于卵巢刺激的应答相关，后者可以由在使用辅助生殖技术时导致更低怀孕率的减少的卵母细胞数目造成(Abdalla等人,2004；Alviggi等人,2009)。差的对于卵巢刺激的应答被定义为少于5的囊状卵泡计数(AFC)，其中所述卵泡的大小为2至5mm(Klinkert等人,2005)。
AMH是由囊状前卵泡和小囊状卵泡的颗粒细胞所产生的二聚糖蛋白。它的产生开始于当卵泡从原始状态向初级状态分化时，并且继续直至卵泡达到直径为2-6mm的中间的囊状状态。一旦卵泡达到占优势的状态(其为依赖于FSH的卵泡生长阶段)，AMH的产生就停止(Ueno等人,1989；Fanchin等人,2003；Broekmans等人,2009)。此外，当卵泡达到闭锁状态时，AMH就消失了(Visser等人,2006)。
AMH是在从原始卵泡贮备中的早期卵泡募集过程之中的主要调节成分之一(Durlinger等人,2002)。已显示，在AMH不存在下，卵泡对于FSH更敏感并前进至卵泡发育的早期状态(Durlinger等人,1999；Durlinger等人,2001)。一旦由小生长卵泡产生AMH，在卵泡生成中就具有至少两个作用位点，即抑制初始卵泡募集和抑制依赖于FSH的囊状前卵泡和小囊状卵泡的生长和选择(van Houten 2010)。
最初，当检测到血清AMH水平时，该激素被提议为用于检测在女性和男性性腺中的肿瘤病理学状态的良好的指示物(Hudson等人,1990；Lee等人,1996)。后来，AMH被设想为用于评价卵巢衰老的有希望的候选物(在Visser等人,2006中作了综述)。由于该过程的数量方面反映为原始卵泡贮备的减少，和由于该贮备不可能直接地进行测量，因而可以通过生长卵泡的数目来间接地进行估计(Scheffer等人,1999)，这是因为生长卵泡的数目与原始卵泡储量的大小成比例(Scheffer等人,2003)。由于该原因，主要由生长卵泡分泌的因子，例如AMH，反映了原始卵泡贮备的大小。
已在小鼠中观察到，血清AMH水平随着年龄的增加而逐渐降低，而在独个的生长卵泡中AMH的表达不变化。血清AMH降低与生长卵泡数目的减少和主要与原始卵泡的衰减相关联(Kevenaar ME等人,2006)。同样地，在成年女性中，血清AMH水平随着年龄增加而降低，直至在绝经时达到无法检测的水平(de Vet A等人,2002；van Rooij等人,2005)。已显示，AMH水平不随月经周期而改变，并且在周期之间也不显著地变化(Fanchin等人,2005；Hehenkamp等人,2006)，这暗示AMH不受促性腺激素调节(van Houten ELAF等人,2010)。
AMH水平与囊状卵泡计数(AFC)紧密相关联，并且在周期的第3天也与卵巢衰老的其他标志物例如FSH和抑制素B相关联(deVet A等人,2002)。但已观察到，AMH水平先于其他标志物而降低，结果成为最好的用于预测向绝经转变的开始的指示物(van Rooij等人,2004)。还观察到，AMH是更好的用于预测女性的生殖年龄的标志物，相比于用于预测实足年龄而言(van Disseldorp等人,2008)。
在可用于评价卵巢储量的标志物中，AMH水平是可靠的用于确定卵巢状态的指示物，从而是可用于ART程序的参数。已证明，AMH水平与在排卵诱导治疗之前的囊状卵泡计数(AFC)和与在治疗之后回收的卵母细胞的数目紧密相关联(van Houten ELAF等人,2010)。AMH水平在差地对刺激作出应答的患者中比在具有正常应答的患者中显著更低(Seifer等人,2002；van Rooij等人,2002)。尽管AMH是良好的用于了解卵巢储量的预测指数，但还已显示该激素在预测怀孕中具有低的效益，与AFC一样(Broer等人,2009)。这些结果使得能够提出，AMH是良好的关于卵巢储量的数量方面的标志物，但对于评价卵巢品质来说不是如此。尽管如此，在AMH水平与所回收的卵母细胞的数目之间存在紧密关系。其他作者已发现了高的AMH水平与通过ART程序的良好的化学和临床怀孕结果之间的直接关系，所述ART程序包括IVF和胞质内精子注射(ICSI)(Dehghani-Firouzabadi等人,2008)。在这些研究中，良好的应答者呈现出比差的应答者明显更高的AMH水平。该应答是指在所述程序中回收的卵母细胞的数目。在具有天然不育的女性中，在IVF治疗中回收的卵母细胞的低数目是所述程序成功中的主要限制因素之一，因此取得该数目从<4(差的应答者)增加至≥4(良好的应答者)是优异的结果，其可以相当大地放大在IVF中怀孕的可能性。
由于这些过去的情况，绝对必要取得，在经历了辅助生殖计划的女性中，AMH水平增加。
脱氢表雄酮(DHEA)和硫酸DHEA(DHEA-S)是由肾上腺大量地分泌的类固醇，其转变为雄烯二酮或雄烯二醇，并且随后在周边组织中转变为有效能的雄激素类和雌激素类(Adams 1985；Labrie1991)。血清DHEA和DHEA-S水平是女性中雄激素类的主要来源。各种不同的报告已显示，随着衰老，在女性中从30岁的年龄开始发生血清DHEA和DHEA-S水平的逐渐降低(Orentreich等人,1984；Labrie等人,1997)。在女性中，在50-60岁时，血清DHEA已降低至在20-30岁时记录的最大值的70％(Labrie等人,1997)。在循环 中，DHEA-S可以在周边和肾上腺组织中被硫酸水解酶代谢为DHEA。已报道，DHEA-S的日产量的64％可以在女性中被转变为DHEA，但仅13％的DHEA被羟基类固醇硫酸酯酶代谢回DHEA-S(在Kroboth等人,1999中作了综述)。DHEA和DHEA-S在绝经前女性中用作75％的活性雌激素类的前体，和在绝经时用作100％的活性雌激素类的前体(Labrie等人,1997)。
已在大鼠中观察到，在施用DHEA的阴道栓剂后，在阴道水平上产生了形态学变化，这表明已局部转变为有活性的性类固醇，其具有雌激素和/或雄激素的作用(Labrie,1991)。
存在各种各样的科学报告(Casson等人,2000；Barad等人,2005；Barad等人,2006；Barad等人,2007；等人,2009；Gleicher等人,2009；Mamas等人,2009；Gleicher等人,2010a；Gleicher等人,2010b；Gleicher等人,2010c；Wiser等人,2010)和专利文献(US20060089339、US2006089308、US2008269180、US2010048525和US2010113407、US20110207708、US7615544)，它们显示，施用DHEA或DHEA-S改善了卵母细胞数目的产量、其品质、胚胎的数目和品质，改善了自然怀孕率、通过IVF的怀孕率、累积怀孕率、受孕时间，和减少了自然流产。
被描述用于增加卵巢储量的治疗包括：每天一次以50至100mg的剂量口服施用DHEA，持续一至四或更多个月的时间段。在专利申请US2010048525和US2010113407中，通过口服途径使用那些DHEA剂量至少一个月，以改善通过血清AMH水平的变化而测量的卵巢储量。在这些文献中，描述了评价女性中对于排卵诱导的应答(通过在卵母细胞和胚胎产生方面的效益来测量的)，所述排卵诱导通过施用DHEA至少一个月的时间段和更优选地至少四个月来进行。还评价了累积胚胎计数的改善，其牵涉卵母细胞和胚胎的数量和品质的改善，和整倍体胚胎的比率的改善。在治疗两个月时，效果是正面的，但如果继续进行等于或多于16周的时间段，则不再改善。除了观察到以所示的治疗剂量和治疗持续时间导致受精的卵母细胞的数目增加外，还 增加了在第3天时的胚胎的数目，增加了整倍体卵母细胞的数目和转移的胚胎的数目，在具有减少的卵巢储量的女性中。还具有DHEA水平的升高、自然受孕的增加、怀孕率和累积怀孕的增加，特别是在具有减少的卵巢储量的那些女性中。
已观察到，在通过口服途径以日剂量接受DHEA 30至120天的时间段的女性中，DHEA的施用引起基础AMH水平的升高(US20100048525、US20100113407、US20110207708)，并且由于AMH已被建议为卵巢储量的更特异的标志物，因而它已被用于评价在卵巢功能性中DHEA的效应。在施用DHEA之前和之后进行AMH的测量，并且观察到血清AMH水平显著地得到改善以及关于AMH变化的怀孕成功(Gleicher等人,2010a)。
于在190位女性(其中89位具有41.6岁的平均年龄)中进行的研究(描述在US20110207708、US20100048525、US20100113407中)之中，每天一次使用75mg的DHEA，或者每天使用三个剂量(每个剂量25mg)，并持续直至在IVF程序开始之前四个月的一段时间。其他101位对照组的女性平均具有40岁，并且接受用于不育的治疗但不使用DHEA。初步结果是临床怀孕。她们经历了用FSH和HMG进行的卵巢刺激。研究组的患者接受DHEA直至获得阳性的怀孕测试或者直至患者结束治疗。在研究组中结果是显著地更高的，具有28％的临床怀孕，而在对照组中为11％。用DHEA进行治疗增加临床怀孕至少150％，并且还减少了累积怀孕时间。另一方面，自然流产率在用DHEA进行治疗的组中更小，为仅20％，相比于对照组中的36％而言。
在美国专利申请US20100048525、US20100113407和US20110207708中，还描述了这样的临床研究结果，其显示了在具有减少的卵巢储量的不育女性中施用DHEA对于自然流产率的影响，所述临床研究在两个独立的生殖中心(一个在美国，和另一个在加拿大)进行。将所述结果与在美国对于在2004年通过IVF而怀孕的人所报道的全国自然流产率进行比较。自然流产的减少在两个中心中是类似 的，分别具有15.0％和15.2％的减少。在所有年龄组中均观察到差异，但在大于35岁的女性中更显著。这些结果也由Gleicher等人,2009进行了描述。
迄今，在被描述用于增加减少的卵巢储量的所有治疗中，都已通过口服途径使用了DHEA，这牵涉在长的时间段(一至四或更多个月)内进行每日施用，其可以是采用每天一至三次的吞咽。另一方面，知晓口服途径的额外缺点，因为DHEA在肝脏中遭到重大降解，然而知道其在施加在皮肤和粘膜上后通过全身途径非常好地被吸收，并且已发现可以通过透粘膜途径来施用治疗有效剂量的DHEA(ES2227523)。用该施用类型，避免了肝首过效应和通过注射进行施用的不适。
知道阴道途径可以表现出在减少副作用方面的优点和在目的位点处的更好的活性产物浓度。该主张的合理性在于“子宫首过”的概念，根据这一概念，通过阴道途径施用的药物优先地被引向盆腔器官。负责该流定向性的机制基本上在于：通过简单渗透作用的被动吸收，子宫蠕动，围绕排液至子宫峡的阴道的三分之二的宽广的静脉血管网，和在子宫及附件周围的微循环的特殊分布。该最后一个机制被命名为“血管反流”，并且在于溶质由于在密切接触时的大表面积和以反向流从静脉至动脉的直接通过。
现有技术中已公开了包含DHEA的阴道药栓或栓剂在治疗在绝经后女性中的外阴阴道萎缩、性功能障碍之中以及用于减轻绝经的其他症状的用途。作为参考，包括了国际专利申请公开WO 2009021323，以及Labrie等人,2008和Labrie等人,2009的报告。在这些文献中，描述了在阴道药栓中以3.25mg(0.25％)、6.5mg(0.5％)、13mg(1.0％)和23.4mg(1.8％)的剂量使用DHEA，其在一至十二周的时间段内每天进行施用，以治疗所提及的病症。
另一方面，已观察到，包含雌激素类的阴道制剂引起全身浓度的增加而不仅是局部水平上的变化，这增加了雌激素类特有的副作用的风险(Beral V,2003；Heiss等人,2008)。通过使用DHEA的每日栓 剂，未记录到血浆雌激素类水平的变化(Labrie等人,2008)，而是保持了在正常绝经后女性中所发现的值之内的血清水平，由此避免了增加的随着使用一些阴道内或全身施用的雌激素类制剂而遇到的乳腺癌的风险。
在现有技术中，可能遇见关于用于施用DHEA或DHEA-S的不同药物形式的描述，以及它们在治疗或预防各种各样的病理学状态中的用途。作为参考，包括了专利文献ES2227523、EP1350541、US5948434、US5955455、US2009054383和ES2098193。在这些专利中，描述了用于口服途径的软胶囊；用于透皮或经皮施用的霜剂、凝胶剂、软膏剂、洗剂和贴剂；用于阴道内施用的药栓和栓剂。没有描述包含DHEA的阴道环，而是仅在专利文献US2009054383中在各种不同的施用可能性之中提及了环，但未特别地描述阴道环。
在制药工业中，已着手进行阴道环的开发以提供各种不同类型的活性成分，但仅一些包含激素的阴道环已达到成为用于在人中使用的治疗武器库的一部分。这是因为仅对于已在不同国家的卫生机构获得了批准的少数以阴道环形式的产品证明了功效和安全性。这些环在单一疗法(孕酮)、联合疗法(依托孕烯和炔雌醇)、在绝经症状的治疗中用雌二醇的激素替代疗法()之中用作避孕药，和对于卵子捐赠、体外受精、胚胎转移和其他辅助生殖技术()的接受者在不育的情况下在需要外源提供孕酮的女性中用作黄体补充。
在专利US6951654中提及，从由均匀设计或基质设计(其中活性试剂均匀分布在弹性体系统中)而形成的环中释放药物提供了具有一阶指数衰减的释放，其特征在于，药物的高的初始释放，随后是更缓慢的释放；并且指出，药物不能以基本上恒定或受控(零阶)的释放速率被释放。在专利US6951654中，描述了药物的阴道内释放系统，其中在最初的24小时期间基本上是一阶释放，随后为至少三天的零阶释放。提及了包含抗微生物试剂和增加活性试剂释放的试剂的环，所述增加活性试剂释放的试剂尤其例如为聚乙烯吡咯烷酮、纤维素醚、 聚丙烯酸、卡波姆、藻酸、糖类例如乳糖、环糊精。在显示了直至第25天的药物累积释放的结果之中，观察到，以相等的剂量，即50mg甲硝唑(MET)，在25天内，具有5％和10％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的环比没有PVP的环释放更多量的药物。在与更大剂量相比较时，观察到不同的行为(专利US6951654的图3)。在头三天中，从包含PVP和50mg甲硝唑(MET)的阴道环中的释放比从包含更大剂量的活性试剂(100mg MET)但没有PVP的环中的释放稍多。自第6天起，具有PVP的环的释放开始降低，其中达到比不包含该试剂(100mgMET)的系统更少。自第13天起，具有PVP的环的累积释放比从具有双倍剂量但没有PVP的环中的累积释放显著地更少。在专利US6951654中观察到，向环添加PVP或乳糖诱导了防腐剂的更多释放，但该增加未达到在时间上持续，并且也没有随着时间而超过不包含PVP的最高的活性成分剂量的释放。
发明详述
存在对于递送DHEA或DHEA-S的持续释放的制剂的需要，以在治疗或预防通过使用DHEA而得到改善的病理学状态或病症中进行使用，其中所述制剂的施用为每月、每两个月或每三个月仅一次，以便促进对于DHEA的治疗效果来说特有的长期疗法，并且通过允许减小或消除肝首过效应的施用途径。
所述制剂可以包含DHEA或硫酸化形式，DHEA-S，因为DHEA-S内源性地转变为非硫酸化形式。
在本申请中所描述的制剂涉及包含DHEA或其硫酸化形式DHEA-S的持续释放的阴道环。
更优选地，本申请涉及持续释放的阴道环，其包含DHEA或DHEA-S和调整所述活性试剂的释放的试剂。
更加优选地，本发明涉及持续释放的阴道环，其包含DHEA或DHEA-S和调整所述活性试剂的释放的试剂，例如PVP K-30、乳糖、 微晶纤维素或十二烷基硫酸钠。
用本发明的持续释放的阴道环，可能获得升高的(局部)组织浓度和可以取决于调节试剂的存在和在阴道环制剂中所使用的浓度而最小化或最大化的血浆水平，这使得能够取决于待治疗的病理学状态、治疗时间和想要到达的靶器官来管理所希望的血浆DHEA水平。
另外，还描述了持续释放的阴道环在治疗或预防通过使用DHEA而得到改善的病理学状态或病症中的用途，所述持续释放的阴道环包含DHEA或DHEA-S作为活性试剂，和任选地包含调整所述活性试剂的释放的试剂。
更特别地，本发明涉及持续释放的阴道环用于提高具有减少的卵巢储量的女性中的卵巢储量的用途，所述持续释放的阴道环包含DHEA或DHEA-S作为活性试剂，和任选地包含调整所述活性试剂的释放的试剂。
另外，本发明涉及持续释放的阴道环用于治疗与绝经相关的症状的用途，所述持续释放的阴道环包含DHEA或DHEA-S作为活性试剂，和任选地包含调整所述活性试剂的释放的试剂。
另外，本发明涉及持续释放的阴道环用于治疗绝经后女性中的外阴阴道萎缩的症状和性功能障碍的用途，所述持续释放的阴道环包含DHEA或DHEA-S作为活性试剂，和任选地包含调整所述活性试剂的释放的试剂。
更优选地，呈现了包含DHEA或DHEA-S和药物释放增强剂(特别是PVP K-30)的阴道环。令人惊奇地，已发现，相比于施用具有相同浓度的DHEA但没有PVP-K30的阴道环而言，施用具有DHEA和PVP-K30的阴道环增加了子宫内膜DHEA浓度，而没有以同样的程度增加血浆药物浓度。这使得能够确保在靶组织中的治疗浓度，而同时保持低的血浆浓度，从而保证了局部治疗效果并降低了不希望的全身副作用的可能性。在使用现有技术中已知的其他释放增强剂的情况下，未观察到该效应。PVP K-30相应于具有26至35厘沲的在1％溶液中的粘度(或K值)的1-乙烯基-2-吡咯烷酮的聚合物或聚乙烯吡咯 烷酮。
附图描述
图1.从包含2.0g DHEA(没有PVP K-30或者具有10％和15％PVP K-30)的阴道环中，脱氢表雄酮(DHEA)的体外释放特性曲线。
图2.从包含1.0g DHEA(没有PVP K-30或者具有10％和15％PVP K-30)的阴道环中，脱氢表雄酮(DHEA)的体外释放特性曲线。
图3.从包含0.5g DHEA(没有PVP K-30或者具有15％和20％PVP K-30)的阴道环中，脱氢表雄酮(DHEA)的体外释放特性曲线。
图4.在第1天至第4天之间，从包含2.5g、2.0g、1.0g和0.5gDHEA(没有PVP K-30或者具有5％、10％、15％和20％PVP K-30)的阴道环中脱氢表雄酮(DHEA)的平均体外释放。
图5.在第5天至第30天之间，从包含2.5g、2.0g、1.0g和0.5g DHEA(没有PVP K-30或者具有5％、10％、15％和20％PVP K-30)的阴道环中脱氢表雄酮(DHEA)的平均体外释放。
图6.在第31天至第90天之间，从包含2.5g、2.0g、1.0g和0.5g DHEA(没有PVP K-30或者具有5％、10％、15％和20％PVP K-30)的阴道环中脱氢表雄酮(DHEA)的平均体外释放。
图7.从包含1.0g DHEA但没有PVP K-30的阴道环中，以及从包含1.0g DHEA且具有15％PVP K-30和包含2.5g DHEA且具有5％PVP K-30的阴道环中，脱氢表雄酮(DHEA)的体外释放特性曲线。
图8.从包含2.0g DHEA但没有PVP K-30的阴道环中，以及从包含0.5g DHEA且具有20％PVP K-30的阴道环中，脱氢表雄酮(DHEA)的体外释放特性曲线。
图9.从包含2.0g DHEA(没有乳糖或者具有10％和15％乳糖)的阴道环中，脱氢表雄酮(DHEA)的体外释放特性曲线。
图10.从包含2.0g DHEA(没有十二烷基硫酸钠(SLS)或者具有0.5％SLS)的阴道环中，脱氢表雄酮(DHEA)的体外释放特性曲 线。
图11.在施用包含1.0g DHEA但没有调节所述药物的释放的试剂的阴道环后，在女性的血浆和子宫内膜液中脱氢表雄酮(DHEA)的水平。
图12.在施用包含1.0g和2.0g DHEA但没有PVP K-30，以及包含1.0g DHEA且具有15％PVP K-30的阴道环后，在女性的子宫内膜液中脱氢表雄酮(DHEA)的水平。
图13.在施用包含1.0g和2.0g DHEA但没有PVP K-30，以及包含1.0g DHEA且具有15％PVP K-30的阴道环后，在女性的血浆中脱氢表雄酮(DHEA)的水平。
本发明的实施例
实施例1.包含DHEA或DHEA-S的阴道环
制造包含不同量的DHEA或DHEA-S的阴道环。此外，添加选自下列的调节所述活性成分的释放的试剂：
·PVP K-30：聚乙烯吡咯烷酮K-30，或者具有26至35厘沲的在1％溶液中的粘度(26至35的K值)的1-乙烯基-2-吡咯烷酮的聚合物；
·十二烷基硫酸钠；
·Cremophor RH40：乙氧基化氢化蓖麻油(CAS 61788-85-0)；
·聚卡波非AA-1：用二乙烯基乙二醇交联的丙烯酸的聚合物(CAS 9003-97-8)；
·乳糖；
·微晶纤维素。
1.1.所测试的制剂
在表1、1a、2和2a中，详细描述了所测试的普通制剂(GF)。 包括了连同各种不同的调整释放的试剂一起使用的聚合物。
表1.包含DHEA和PVP K-30的阴道环的制剂
表2.包含DHEA和不同于PVP K-30的活性成分释放调整剂的阴道环的制剂
还制备了包含DHEA的硫酸化形式(DHEA-S)而非DHEA的阴道环，如在表1a和2a中所示的。
表1a.包含DHEA-S和PVP K-30的阴道环的制剂
表2a.包含DHEA-S和不同于PVP K-30的活性成分释放调整剂的阴道环的制剂
进行各种不同的制剂试验以获得具有必需量的活性成分和在调节释放的试剂存在下适当地聚合或固化的环。包含Cremophor RH40(普通配方7，GF-7；和普通配方18，GF-18)或聚卡波非(普通配方8，GF-8；和普通配方19，GF-19)的环不固化，因此弃用这些试剂。其余在表1、1a、2和2a中所提及的环在所试验的条件下聚合。
所制作的环具有6.0至10.5克的重量，其根据环的粗细而变化。制造具有54至58mm的外径和3至9mm的横截面的环。
1.2.阴道环的制造程序
准备具有所有成分的均匀混合物以用于注射至环的模子中。首先称取必需量的每种成分：聚合物A，调整释放的试剂，如果合适，和DHEA或DHEA-S。混合这些成分直至均质化，并且添加聚合物B，同时不断地混合。在环境温度下将混合物注射至环的模子中，然后在处于105℃的烘箱中保持1小时。然后，使模子冷却，并且将所形成的环从其各自的模子中脱离出来，从而获得最终产品。
还制造了具有其他聚合物的环，其通过下述方式来进行制备：称取每种成分，如前面所指出的，但用聚合物C代替聚合物A，和用聚合物D代替聚合物B，按照在表2(GF-11)和2a(GF-22)中所指明的。此外，添加辛酸亚锡作为聚合物C和D之间的聚合反应的催化剂。混合所述成分直至均质，并注射至环的模子中。这些在环境温度(23-25℃)下保持1小时。然后，将所形成的环从其各自的模子中脱离出来，从而获得最终产品。
1.3.本发明的优选制剂
按照表1和2的普通制剂，制备包含不同量的DHEA和药物释放增强剂的阴道环的制剂。在表3、4、5和6中，包括了本发明的优选制剂。所述成分的所有的量均以克表达。
表3.包含PVP K-30的具有DHEA的阴道环的药物制剂
表4.包含十二烷基硫酸钠(SLS)的具有DHEA的阴道环的药物制剂
表5.包含乳糖的具有DHEA的阴道环的药物制剂
表6.包含微晶纤维素的具有DHEA的阴道环的药物制剂
还通过使用DHEA-S而非DHEA作为活性试剂而制备了在表3至6中所指出的特殊制剂(SF)。按照在这些表中所示的比例制备的所有环都适当地聚合。
实施例2.体外释放研究
按照下面的分析程序，用在表1至6中所描述的阴道环进行了体外释放研究。在结果的描述中，对于所测试的制剂，使用表3至6的命名法，例如“SF-n”，其中n相应于在这些表中所示的制剂编号。
a)扩散介质的制备：准确量取189mL(17％的苯扎氯铵)，转移至包含24升蒸馏水的具有龙头的聚乙烯桶中。搅拌以使均质化。给桶贴上标签，其中分配制备批次编号，并且放置制作日期。
一旦制备了扩散介质，就应当通过测量在262.4nm处的吸光度来对溶液进行检查，并且所得的读数应当在1.3-1.6之间波动；否则应当弃用该溶液。
b)样品的制备：对随机拿取的4个每种独个选择的制剂的环进行称重，标注各自的重量。用具有使得能够完全浸没所述环的足够长度的聚乙烯线绑住每一个所述环。将所述环悬在具有螺旋盖(以避免扩散介质的损失)的广口的500mL聚乙烯烧瓶中，用在烧瓶外表面上的胶带来固定所述环，从而其保持在距每个烧瓶的底部2.0±0.2cm处。给具有其相应的环的烧瓶贴上标签。
将具有样品的烧瓶放在温度调节式水浴(Yamato,BT-47型, Japan)中，将温度设置在37℃，使搅拌系统以100rpm进行运作。每天核查水浴温度和搅拌速率。温度应当在37±0.5℃之间，和搅拌速度应当在100±5rpm之内。
每天更换介质溶液(24小时后)，除了星期日外。从第二周开始，弃用星期一那天的样品。注意，应当每天在相同的时刻更换扩散介质。
c)分析程序：在210nm处借助于UV分光光度测定法来测定所拿取和制备的样品
应当用各种不同浓度的在扩散介质中的超微细化的DHEA来制作校准曲线，目的是确定在其中符合朗伯-比尔定律的浓度范围。确立待制备的标准物的浓度，和如果需要，对所拿取的样品进行稀释。
d)DHEA标准溶液的制备：精确地称取25mg左右的超微细化的DHEA标准物，转移至50mL的容量瓶，添加大约25mL乙醇，溶解，并用乙醇补足体积。所获得的储备溶液浓度为大约0.5mg/ml。用容量移液管取2.0mL的储备溶液等分试样至25mL的容量瓶，用用于待测量的样品的扩散介质来补足体积。所获得的浓度为大约0.04mg/mL。
进行所取样品和所制备的标准物在210nm处的吸光度的测量。
根据下述公式来计算每天所释放的脱氢表雄酮的量：
mg DHEA＝(吸收因子)x(样品的吸光度)
下面接着描述包含DHEA和调整所述药物的释放的试剂的阴道环的体外释放试验的结果。
2.1.相同剂量的DHEA(2.0g)，在各种不同浓度的PVP K-30的情况下
在图1中观察到，在PVP K-30不存在下包含2.0g DHEA的环 (SF-11)具有19.8mg DHEA的平均初始释放(第1天)(还可参见表7)。从包含10％(SF-13)和15％(SF-14)PVP K-30的环中的初始释放比在该试剂不存在下更大，分别达到29.4和32.9mg的平均值。同样地，包含5％(SF-12)PVP K-30的环也具有比没有该试剂的环更大的释放，其中在相同剂量的DHEA(2.0g)的情况下在第1天达到23.6mg的值(表7)。在头4天过程中，对于具有PVP K-30的环，保持更显著的释放，虽然在所有情况下均发生了相当明显的初始降低(参见图1)。
在表7中显示了在头4天期间从以所示浓度包含PVP K-30的环中释放的DHEA的平均量。对于每一种情况，以四次重复从四个环的释放介质中获取样品。
表7.从按照表3中所示的特殊配方(SF)包含2.0g DHEA的环中的DHEA的平均释放
从第15天开始，释放曲线的斜率小得多，并且所述环随时间而不断地和持久地继续释放DHEA，这保持直至第90天。当比较具有相同剂量的DHEA(2.0g)的没有PVP和具有10％和15％PVP K-30的环时，还观察到在长时间内DHEA的释放在包含PVP K-30的环中总是更大，如在图1中清楚可辨的，其中在具有更大量的该试剂的那些环中更加大。在15％PVP K-30的情况下，在第5至30天之间DHEA的平均释放为21.5mg；而在10％的情况下，平均值为18.7mg，在 5％的情况下，平均值为14.5mg，和在PVP K-30不存在下，平均值为12.2mg(图5，白色柱)。值得注意的是观察到，DHEA的释放继续维持甚至直至90天，其中保持在较短时间内所观察到的倾向；因而辨认出，在15％PVP K-30存在下，在第31至90天之间DHEA的平均释放为17.5mg；而在10％的情况下，平均值为14.7mg，在5％的情况下，平均值为9.3mg，和在PVP K-30不存在下，平均值为6.7mg(图6，白色柱)。
2.2.低剂量的DHEA，在不存在和存在各种不同浓度的PVP K-30的情况下
在更低剂量的DHEA(1.0g和0.5g)的情况下，观察到相同的PVP K-30的效应，即活性成分的释放在包含PVP K-30的那些环中更大，这随着该试剂的浓度增加而升高(图2和3)。另外，在具有最低剂量的DHEA(0.5g)的环中观察到PVP K-30的效应的饱和，如在图3中所显示的，其中无法分辨出在15％(SF-4)(圆圈)和20％(SF-5)(菱形)PVP K-30之间DHEA释放的差异。
2.3.高剂量的DHEA，在不存在和存在各种不同浓度的PVP K-30的情况下
另一方面，测试了在PVP K-30不存在(SF-16)和存在(SF-17和SF-18)下包含高剂量的DHEA(2.5g)的环。在所有情况下，不包含PVP K-30的环在整个测试时间期间释放较少量的DHEA。在第1至4天之间，不包含PVP K-30的环释放22.3mg DHEA，具有5％DHEA的环(SF-17)释放26.1mg DHEA，和具有10％PVP K-30的环(SF-28)释放32.1mg DHEA(图4，灰色柱)。在随后的天(5至30天)内，DHEA的释放也随着PVP K-30的浓度增加而增加，其中对于0％、5％和10％PVP K-30，分别为14.7mg、18.5mg和24.2mg(图5，灰色柱)。同样地，在更长的时间内(31至90天)，依然观察到从这些环中的重大的DHEA释放，其中对于0％、5％和10％ PVP K-30的浓度，达到10.8mg、14.0mg和19.1mg(图6，灰色柱)。
2.5g DHEA的剂量是所测试的最大剂量，并且相应地，用该剂量获得更高的DHEA释放，具有或没有PVP K-30。在10％和15％PVPK-30存在下(SF-9，表3)包含低剂量的DHEA(1.0g或0.5g)的环可以达到和超过用2.5g DHEA但没有PVP K-30而获得的释放，如在图4至6中在整个释放时间内可见的。另一方面，用包含1.0g DHEA和15％PVP K-30的环达到了从具有2.5g DHEA和5％PVP K-30的环中获得的释放，如在图7中所观察到的，其中比较了从在PVP K-30不存在下(SF-6)(三角形)或在15％PVP K-30存在下(SF-9)(正方形)具有1.0g DHEA的环中的释放与从包含2.5g DHEA和5％PVPK-30的环(菱形)中的释放。
类似地，包含2.0g DHEA但没有PVP K-30的环的释放水平比从包含更低剂量的DHEA(0.5g)且具有20％PVP K-30(SF-5)的环中的释放更低，如在图8中所观察到的和如在图4、5和6中将白色柱(0％PVP K-30)对带阴影线的柱(15％和20％PVP K-30)所进行比较的。
表8
(*)按照在表2中所示的普通配方11(GF-11)，用聚合物DDU 4340来制备这些阴道环。
2.4.其他的调整活性成分的释放的试剂
包含剂量为1.0g和2.0g的DHEA连同10％乳糖(SF-22和SF-24)、15％乳糖(SF-23和SF-25)、5％微晶纤维素(SF-26和SF-28)或15％微晶纤维素(SF-27和SF-29)的环，相比于包含DHEA但没有乳糖或没有微晶纤维素的环而言，在短时间内释放出更大量的DHEA；在更长的时间内达到与这些后者相同的释放水平。在图9中观察到10％和15％乳糖的效应，其在第1至22天之间产生更大的从环中的DHEA释放；但在第23至90天之间，释放水平在具有和没有乳糖的环之间不可区分。
包含2.0g DHEA且具有0.1％(SF-20)或0.5％(SF-21)十二烷基硫酸钠(SLS)的环也释放比不包含SLS的环更大量的药物，但仅在短时间内(第1至15天)。在第16至90天之间，在具有和没有 该试剂的环之间未观察到差异，如在图10中对于包含0.5％SLS的环和不包含其的环所观察到的。
还检验了更高浓度的SLS，但环未适当地固化，因此弃用它们。
从这些结果中得出结论：仅用PVP K-30，可能获得相比于不具有该试剂的环而言更大的活性成分释放，在短时间和长时间内(直至至少90天)。在所检验的试剂中，没有一个获得类似的效应，要么在聚合步骤中在制备期间环未固化，要么在长时间下不具有释放差异。
从包含PVP K-30作为调节释放的试剂的环中的最大的DHEA释放在甚至直至90天的时间内是持续的，其中所述释放总是比不包含该试剂的环的大。
这些结果是完全令人惊奇的，因为没有什么使得能够预测包含PVP K-30的环具有如所观察到的那样的、与经检验的所有其他试剂不同的释放特性曲线。
2.5.其他聚合物
测试了由聚合物C和D形成的环(参见表2，GF-11)，其包含不同剂量的DHEA但没有PVP K-30。作为可推荐用于人用产品，弃用这些环，这是由于其所具有的物理特性(参见下面和表8)。无论如何，评价了包含DHEA的环的释放特性曲线，并且观察到其在整个记录时间内释放出相比于用聚合物A制造的环而言更大量的活性成分。
这些结果证明，对于以阴道环形式的药学产品，所述环显示出具有高的且恒定的活性试剂释放速率的体外释放曲线是不够的，除了其他因素之外，其尤其还应当具有合适的物理特征，以符合终端产品的可接受性的要求。
实施例3.环的物理特性
除了对于达到使得能够获得治疗效果的组织水平来说所必需的活 性成分释放特征之外，包含DHEA的阴道环还应当具有使其适合于阴道内施用的其他特性，除了某些对于使用者的可接受性的要求外。在这些特性之中，所述环应当是柔韧的以便使用者可以按压它以给予其对于将其插入阴道来说所必需的形状。此外，所述环应当具有光滑、均一、触觉柔软的表面，没有粘性和规则的稠度，即具有一定程度的柔软性以促进其应用。
测试了具有各种不同剂量的DHEA的环，其以不同的浓度包含各种不同的调节活性成分的释放的试剂。在这些环中，评价了稠度(硬度)、柔韧性、多孔性、粘性和光泽度的特性。
包含DHEA且具有PVP K-30作为调节释放的试剂的环取决于该试剂的浓度和在所述环中DHEA的量而具有不同的物理特性。PVPK-30的添加逐步地增加硬度(稠度)，其中降低柔韧性和增加其多孔性。此外，在高剂量的PVP K-30和DHEA下，所述环的粘性明显地增加。
这些观察结果在表8中清楚可见，其中紧邻调节所述活性成分的释放的试剂的浓度，列出了所使用的DHEA浓度。
与阴道内施用的环所应当具有的特性相一致地，弃用具有较大稠度、不具有光泽度、很不柔韧或一点也不柔韧的以及明显多孔和粘性的那些环。如此，包含高浓度的DHEA和/或PVP K-30的环，即具有2.5g DHEA和10％PVP K-30的环、具有2.0g DHEA和15％PVPK-30的环以及具有0.5g DHEA和20％PVP K-30的环，对于阴道内施用来说是不合适的(表8)。
所测试的其他调整释放的试剂也改变了包含DHEA的环的物理特性。在相同剂量的DHEA的情况下，包含乳糖的环具有与在具有PVP K-30的环中所观察到的相似的稠度，如通过比较表8与表9的数据而观察到的。包含2.0g DHEA和乳糖的环的柔韧性比包含1.0gDHEA且具有该试剂(10％或15％)的环小得多。具有乳糖的环具有高的多孔性以及低水平的粘性和光泽度。在仅考虑物理特性的情况下，作为最终产品，包含高剂量的DHEA(2.0g)和乳糖(15％)的环不 是值得推荐的(表9)。
具有DHEA和0.5％微晶纤维素的环具有适合于通过经阴道途径进行施用的稠度、柔韧性、粘性和光泽度的物理特性，尽管具有一定程度的多孔性。具有高剂量的微晶纤维素(15％)的环由于其高的稠度(硬度)和高的多孔性(粗糙的表面)而结果是不值得推荐作为最终产品(表9)。
还测试了包含2.0g DHEA和0.1％或0.5％十二烷基硫酸钠(SLS)的环。在这两种情况下，所述环均具有良好的物理特性(表9)，因此如果仅考虑这些参数，值得推荐它们作为最终产品。
表9
另一方面，用于制造环的备选聚合物(聚合物C和D，在表2中所定义的)也影响其物理特性。在制造过程中，在注射模子时，已经观察到包含这些聚合物的混合物比具有其他聚合物(聚合物A和B)的混合物显著地更浓稠和粘滞，这使其注射和模子充填由于不得不施加的压力而变得困难。所述环发生聚合(固化)，但结果是非常刚性、坚硬和很不柔韧，这使得使其保持折叠以模拟其阴道内施用情形是困难的。因此，由于高的稠度(硬度)、很低的柔韧性、一定的多孔性 和粘性(表8)，这些环不值得推荐作为最终产品。
实施例4.体内DHEA释放研究
为了评价通过阴道途径的体内DHEA释放和吸收，在九位年龄大于38岁的健康女性志愿者中施用3种具有不同制剂的环。在施用包含DHEA(具有或没有调节试剂)的环后，测量活性试剂的血浆和子宫内膜水平。
在该研究中所使用的环包括：1)1.0g DHEA，没有调节试剂；2)2.0g DHEA，没有调节试剂；和3)1.0g DHEA+15％PVP K-30。将这些环中的每一种在三位志愿者中进行施用。活性试剂和调节试剂的这些剂量是为体内研究而选择的，这是由于在体外释放研究中，在整个记录时间期间(1-90天)在它们之间具有在释放的DHEA量方面的显著差异，和此外还由于各个环的优异的物理特性。这些特征的整体使得值得推荐它们作为可能的最终产品。
在其月经周期的第3至5天时或者一旦其月经的大量出血结束，所述女性安放阴道环。在下列时间(在环施用后的小时)处抽取每位志愿者的血液样品：1、2、6、24、72、120、168、216、360、372、528和720。还在环施用后第3、7、15和22天抽取子宫内膜液的样品。向志愿者指明，所述环可以在下一个月经周期期间继续安放，但如果它们由于大量流出物而引起不适，可以将其撤走。
弃用不得不撤走阴道环的志愿者的在720小时(30天)之时的血浆水平数据。两位志愿者(一位来自第1组，和另一位来自第3组)撤走了环。其余女性保持安放有环至少60天。分析直至30天的所获得的数据，目的是使评价标准化。
在图11中，显示了在施用具有1.0g DHEA但没有调节试剂的环后所获得的血浆和子宫内膜DHEA水平。在血浆中DHEA的量比在子宫内膜中DHEA的量更低，具有接近20nmol/L的最大值。在子宫内膜中的DHEA水平(正方形)显著地更高，其中达到56.2nmol/L 的值。观察到，血浆DHEA水平在环施用后216小时(9天)之后趋向于保持恒定，其中达到13nmol/L的值。
在施用包含1.0g DHEA和15％PVP K-30的环后所获得的子宫内膜DHEA水平比用具有相同剂量的DHEA但没有PVP K-30的环所获得的更高。在图12中，清楚地分辨出该效应。当施用包含调节试剂的环时，在样品中发现的DHEA量(三角形)平均为用没有调节试剂的环所获得的DHEA量(正方形)的1.9倍。另一方面，包含1.0g DHEA且具有15％PVP K-30的环(三角形)诱导出为包含2.0g DHEA但没有调节试剂的环(十字)的1.5倍的平均增加。在这些结果中，可能分辨出在阴道环施用后7天时在子宫内膜中的DHEA水平的峰值。可能的是，该峰值不是准确地出现在该时间处，其可以处于隐藏状态，这是由于在该时间在女性中可能获得的子宫内膜液样品的低数目。尽管如此，结果是结论性的，并且使得能够指明用包含PVP K-30的阴道环在子宫内膜中所达到的DHEA量比用不包含该试剂的环所达到的DHEA量显著地更大，对于具有1.0g和2.0g DHEA的环均是如此。这些结果与在体外释放试验中所获得的结果是相当的。包含1.0gDHEA且具有15％PVP K-30的环相对于没有该试剂的环而言的在第5至30天之间体外DHEA释放的增加(参见图5)平均为1.8倍(而在子宫内膜中为1.9倍)，并且相对于包含2.0g DHEA但没有PVPK-30的环而言为1.6倍(而在子宫内膜中为1.5倍，图12)。也就是说，从阴道环中在子宫内膜中获得的DHEA水平可以从在体外释放中获得的DHEA量得到反映。
在测量在血浆中的DHEA水平时，观察到与在子宫内膜液中所观察到的不同的行为。另一方面，用1.0g DHEA的剂量发现的血浆水平对于包含调整试剂PVP K-30的环比对于不包含其的环更高(图13，十字对圆圈)，具有1.4倍的增加；这与在体外释放试验中所获得的结果相一致，后者给出在这两种类型的环之间的1.8倍的差异(参见图5，带点的柱)。另一方面，对于具有1.0g DHEA和15％PVP K-30的环，可以预测相对于包含更大剂量的DHEA(2.0g)但没有调整试 剂的环而言高至1.6倍的血浆水平，基于其在体外释放中的行为(图5，涉及15％PVP K-30的带点的柱对涉及0％PVP K-30的白色柱)；但对于血浆水平的效应颠倒过来，因为对于包含2.0g DHEA的环比对于具有1.0g DHEA和15％PVP K-30的环更高(图13，三角形对十字)。
这些结果是完全出乎意料的和不可预测的，因为在体外释放中观察到在15％PVP-K30存在下相对于所有DHEA剂量但没有该试剂而言更大的DHEA释放。这无法使得能够反映出，用具有PVP K-30的环相比于用没有该试剂且具有更大剂量的DHEA的环而言在体内获得更高的组织DHEA浓度，但获得更低的血浆浓度。
从体外释放结果中预期，在相同的DHEA浓度下，具有PVP K-30的环提供比没有PVP K-30的环更高的DHEA浓度，在血浆和子宫内膜水平上均是如此；但是已经获得了令人惊奇的结果，其显示用包含PVP K-30的环在原位组织中达到了更高的药物水平，而不以同样的级别增加血浆浓度，但用不包含PVP K-30的环则不是这样。
在增加环中的DHEA量(没有添加PVP K-30)以便获得在子宫内膜中的更高的浓度时，血浆药物浓度也将增加(图13)。因此，为了获得更高的组织浓度而不同样地影响血浆浓度，在环中共施用DHEA和PVP而不增加环中的DHEA剂量就足够了(图13)。
备选地，所发现的结果使得能够表明，包含其他调节释放的试剂例如乳糖、SLS和微晶纤维素的阴道环也可用于将DHEA释放到子宫内膜中，因为体外试验显示，所述活性试剂持续地释放直至至少30至90天。而且，这些试剂还至少在头15至22天期间诱导从包含其的环中的更大的DHEA释放。
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