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1、(10)申请公布号 CN 103392792 A (43)申请公布日 2013.11.20 CN 103392792 A *CN103392792A* (21)申请号 201310322132.1 (22)申请日 2013.07.29 A23B 7/155(2006.01) A01G 13/00(2006.01) (71)申请人 南京农业大学 地址 211225 江苏省南京市溧水区白马镇国 家农业科技园南京农业大学基地 (72)发明人 肖红梅 秦晓杰 高梦 姜梅 屠康 王晓霞 杨蓉 张艳芬 (74)专利代理机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 代理人 徐冬涛 傅婷婷 (54) 发明。
2、名称 一种提高草莓采后贮藏性的生物防治方法 (57) 摘要 本发明公开了一种提高草莓采后贮藏性的生 物防治方法。 分别配制10510 8CFU/mL葡萄有孢 汉逊酵母菌悬液及季也蒙毕赤酵母菌悬液， 按等 浓度等体积复配成 105108CFU/mL 复合拮抗酵母 菌悬液 ； 用复合拮抗酵母菌悬液分别对草莓果实 在采摘前 1-7 天进行喷施处理 ； 采摘后进行贮藏， 条件为2， 90%-95%RH ； 或常温销售。 该方法对人 体无毒副作用、 延长草莓贮藏期及货架期的生物 防治方法， 利用复合拮抗酵母菌对草莓进行田间 喷施处理， 能使贮藏期内的草莓保持较好品质， 同 时显著提高草莓商品率和相关抗病。
3、防御酶活性， 降低腐烂率。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 附图4页 (10)申请公布号 CN 103392792 A CN 103392792 A *CN103392792A* 1/1 页 2 1. 一种提高草莓采后贮藏性的生物防治方法， 其特征在于包括以下步骤 ： (1) 复合拮抗酵母菌菌悬液制备 : 分别配制 105 108CFU/mL 的葡萄有孢汉逊酵母菌 悬液 （H.uvarum） 及 105 108CFU/mL 的季也蒙毕赤酵母菌悬液 （P.guilli。
4、ermondii） ， 二者 混合， 复配成 105 108CFU/mL 复合拮抗酵母菌悬液 ； (2) 采前喷施处理方法 ： 用复合拮抗酵母菌悬液分别对草莓果实在采摘前 1-7 天进行 喷施处理 ； (3) 采摘后进行贮藏 ： 条件为 1 4， 90% 95%RH ； 或常温销售， 条件为 20 28， 90% 95%RH。 2. 根据权利要求 1 所述的提高草莓采后贮藏性的生物防治方法， 其特征在于所述的葡 萄有孢汉逊酵母菌悬液及季也蒙毕赤酵母菌悬液按等体积混合复配成 105 108CFU/mL 复 合拮抗酵母菌悬液。 权 利 要 求 书 CN 103392792 A 2 1/4 页 3 。
5、一种提高草莓采后贮藏性的生物防治方法 技术领域 0001 本发明属于农产品贮藏保鲜技术领域， 涉及一种提高草莓采后贮藏性的生物防治 方法。 背景技术 0002 草莓果实柔软多汁， 色泽艳丽， 营养价值极高， 深受消费者喜爱， 在我省种植面积 大、 产量高， 经济价值极高。由于其含水量高， 组织娇嫩， 在采摘和运输过程中极易受到机 械损伤及微生物侵染而腐烂变质。其中灰霉病 (Botrytis cinerea)、 软腐病 (Rhizopus stolonifer)、 炭疽病 (Colletotrichum acutatum)、 疫病 (Phytophthora cactorum)、 白粉 病 (O。
6、idium sp.) 是草莓果实腐烂变质的主要病害。目前控制腐烂最有效的措施是低温贮 藏结合化学防腐剂、 热、 辐射、 气调等。 尽管化学药剂防治草莓采后病害效果明显， 但长期的 使用化学药剂导致病菌产生的抗药性会降低化学药剂的防腐效果， 同时化学防腐剂对人体 健康和环境会产生不良影响。另一方面， 低温处理需要较大的投资并且容易造成草莓贮藏 中的冷害问题。因此， 必须加强对草莓保鲜技术的研究， 延长其保鲜期， 满足市场需求。 0003 近年来， 利用拮抗微生物防治果蔬采后病害已成为一种新的途径。其中酵母菌因 其具有生长繁殖能力强、 遗传稳定、 光谱抗菌性、 可与化学杀菌剂相容， 不产生对人体有。
7、害 的代谢物质等优点而成为拮抗微生物中最受关注的拮抗菌。 由于草莓在田间生长时很容易 被病原菌感染， 因此， 若能将生物防治的方法应用于草莓果实田间生长阶段， 则既能减轻有 害微生物对果实的侵染， 又能保护环境， 是生产安全性食品的有效方法。此外， 造成许多果 蔬采后病害的另一个重要原因是病原微生物通过在采摘及运输过程中造成的伤口浸染果 实， 若在果蔬采摘之前使用拮抗微生物则可以使拮抗菌在采摘前在果蔬表面定殖、 生长， 并 布满果蔬表面的空间， 从而有效防止在采摘及运输过程中病原微生物的入侵。近年来拮抗 酵母菌在草莓防腐保鲜中的研究主要偏于采后应用， 对采前应用的研究较少。 因此， 研究拮 抗。
8、微生物采前应用有助于人们从果蔬生产的源头控制病害， 既能减轻有害微生物对果蔬的 侵染， 又能保护环境和人体健康， 也有助于实现对果蔬类产品 “从田间对餐桌” 的安全性保 障， 是生产安全性食品的有效方法。 0004 拮抗酵母菌葡萄有孢汉逊酵母(Hanseniasporauvarum)、 季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii) 均安全， 无毒， 能有效防治草莓采后病害。由于单独一种拮抗酵母菌其抗 菌谱较窄， 而草莓果实的致病菌却有多种， 故一种拮抗菌不可能有效地防治果实上所有的 病原菌。 发明内容 0005 为解决上述草莓保鲜问题上所存在的不足， 本发明提供一种提高草莓采后。
9、贮藏性 的生物防治方法。 0006 本发明可通过如下技术方案实现 ： 0007 (1) 复合拮抗酵母菌菌悬液制备 说 明 书 CN 103392792 A 3 2/4 页 4 0008 分别配制105-108CFU/mL葡萄有孢汉逊酵母菌悬液(H.uvarum)及季也蒙毕赤酵母 菌悬液 (P.guilliermondii)， 复配成 105-108CFU/mL 复合拮抗酵母菌悬液 ； 0009 (2) 采前喷施处理方法 0010 用复合拮抗酵母菌悬液分别对草莓果实在采摘前 1-7 天进行喷施处理 ； 0011 (3) 采摘后进行贮藏， 条件为 2， 90 -95 RH ； 或常温销售 ( 条 。
10、0012 件为 25， 90 -95 RH)。 0013 有益效果 ： 0014 1) 本发明的复合拮抗酵母菌比单一拮抗酵母菌能够更好的在草莓果实表皮定殖， 占据空间防治病害菌的侵入， 除了营养与空间的竞争， 还能在病源菌表面吸附， 两者相结合 增强了与病原菌的竞争， 抑制了病源菌生长。 0015 2) 提高草莓贮藏期间抗病性防御酶活性 0016 果蔬自身抗病性的诱导是拮抗微生物发挥生物防治功效的作用机理之一， 通过使 用本发明， 有效地提高超氧化物歧化酶 (SOD)、 过氧化物酶 (POD)、 多酚氧化酶 (PPO)、 过氧 化氢酶 (CAT) 等自由基防御酶活性， 诱导几丁质酶、 -1， 。
11、3- 葡聚糖酶等植物病害抗性酶， 从而提高果实的抗病性。 0017 3) 保持品质， 提高草莓商品率， 延长贮藏期 0018 使用本发明方法， 可以提高贮藏期内草莓的硬度及商品率 ： 常温贮藏 5 天时， 商品 率 80， 而未处理草莓商品率 20； 低温贮藏 15 天时商品率为 85， 显著高于未处理组 的 25。使用本发明方法， 降低腐烂率， 且维持可溶性固形物、 维生素 C 含量， 稳定 pH， 保持 草莓果实的品质， 延长保鲜期。 0019 4) 显著降低酵母菌的使用浓度 0020 使用本发明方法， 显著缩减了酵母菌的使用浓度， 106CFU/mL 复合拮抗酵母菌菌悬 液采前处理的果实。
12、商品率显著高于 108CFU/mL 单一拮抗酵母菌处理的果实商品率， 产生了 协同增效作用。 附图说明 0021 图中所表示复合拮抗酵母处理的最佳组别与单一拮抗酵母菌处理及对照组比较 0022 表 1 拮抗酵母菌采前喷施对采后草莓果实自然病害及商品率的影响 0023 图 1 拮抗酵母菌采前喷施处理对冷藏草莓果实自然病害的防治效果 0024 图 2 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草莓果实硬度的影响 0025 图 3 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草莓果实可溶性固形物含量 (TSS) 的影响 0026 图 4 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草莓果实维生素 C 含量的影响 0027 图 5 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草。
13、莓果实可滴定酸含量的影响 0028 图 6 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草莓果实 MDA 含量的影响 0029 图 7 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草莓果实 SOD 酶活性的影响 0030 图 8 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草莓果实 POD 酶活性的影响 0031 图 9 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草莓果实 PPO 酶活性的影响 0032 图 10 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草莓果实 CAT 酶活性的影响 0033 图 11 拮抗酵母菌采前喷施对冷藏草莓果实 -1， 3- 葡聚糖 (glucanase) 酶活性 说 明 书 CN 103392792 A 4 3/4 页 5 的影响 具体实施方案 0034 1。
14、. 实验材料 0035 草莓果实 (Fragaria ananassa Duch)， 商品名 “红颜” 。 0036 拮抗酵母菌 ： 葡萄有孢汉逊酵母 (H.uvarum)， 菌种保藏编号为 CGMCC2.3970 ； 季也 蒙毕赤酵母 (P. guilliermondii)， 菌种保藏编号为 CGMCC2.3943 均由中国普通微生物菌 种保藏中心购买获得。 0037 2. 实验仪器 0038 冷库 ( 南京吉良制冷设备有限公司 ) ； 紫外可见光分光光度计 UV-2802PCS( 北京 莱伯泰科有限公司 ) ； 便携式色差仪 ( 上海汉谱光电科技有限公司 ) ； 手持糖量仪 WYT-4 型。
15、 ( 泉州光学仪器厂 ) ； TA.XT2i 质构分析仪 ( 英国 Stable Micro Systems 公司 ) ； TGL20M 台 式高速冷冻离心机 ( 湘仪离心机仪器有限公司 ) ； 光学显微镜 Nikon102(JapanNikon Co.， Ltd.) ； 全温振荡培养箱 ( 太仓市实验设备厂 ) 0039 3. 实验步骤 0040 1) 复合拮抗酵母菌菌悬液制备 0041 常规方法制备葡萄有孢汉逊酵母菌悬液 (H.uvarum) 和季也蒙毕赤酵母菌悬液 (P. guilliermondii)， 浓度为 1106CFU/mL， 然后等体积配制成 1106CFU/mL 的复合拮抗。
16、 菌悬液， 待用。 0042 2) 采前处理方法 0043 草莓果实商业成熟采摘之前 3 天， 用 1106CFU/mL 的复合拮抗酵母菌菌悬液对草 莓进行喷洒 (PJ 组 ) ； 用 1108CFU/mL 的葡萄有孢汉逊酵母菌菌悬液对草莓进行喷洒 (P 组 ) ； 用 1108CFU/mL 的季也蒙毕赤酵母菌菌悬液对草莓进行喷洒 (J 组 ) ； 草莓果实商业 成熟采摘之前不做任何处理， 作为对照(CK)。 商业成熟后采摘， 采摘时轻拿轻放以避免可能 造成的果实机械损伤。采摘完毕后于 3h 内置 2， 25 RH90 -95条件下贮藏。 0044 3) 测定病害腐烂指数及腐烂率 0045 4。
17、) 测定品质及理化指标 0046 硬度、 可溶性固形物 (TSS)、 维生素 C、 可滴定酸 (TA) 品质指标及 MDA、 POD、 SOD、 PPO、 CAT、 -1， 3- 葡聚糖酶理化指标。 0047 5) 结果判定 0048 在低温贮藏 15 天后， 对照组草莓果实的腐烂指数 (Decay index) 为 0.73， 商品率 达 25 ； PJ 拮抗酵母菌复配处理组腐烂指数为 0.35， 显著低于对照组 (P 0.05) 及单独 拮抗酵母菌处理组， 商品率达85。 贮藏期间， 复合拮抗酵母菌处理组的草莓果实能够保持 较高的硬度， 尤其在第 9， 15 天时， 处理组果实的硬度显著高。
18、于对照组 (P 0.05) ； 可溶性 固形物含量及维生素 C 含量均显著高于对照组 (P 0.05)。MDA 含量的多少以及其积累程 度常被作为衡量膜脂过氧化程度的指标。复合拮抗酵母菌处理组的草莓果实 MDA 含量明显 低于对照组 (P 0.05)。在整个贮藏过程中， 处理组的果实 SOD， POD， PPO， CAT， -1， 3- 葡 聚糖酶活性均显著高于对照组 (P 0.05)， 更加充分地说明了复合拮抗酵母菌能提高草莓 贮藏的抗病性防御酶， 延长了草莓的贮藏期。 说 明 书 CN 103392792 A 5 4/4 页 6 0049 在常温贮藏条件下， 对照组草莓果实的腐烂指数 (D。
19、ecay index) 为 0.62， 商品率 达 15 ； PJ 拮抗酵母菌复配处理组腐烂指数为 0.26， 显著低于对照组 (P 0.05) 及单独 拮抗酵母菌处理组， 商品率达 80。 0050 表 1 0051 说 明 书 CN 103392792 A 6 1/4 页 7 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103392792 A 7 2/4 页 8 图 3 图 4 图 5 说 明 书 附 图 CN 103392792 A 8 3/4 页 9 图 6 图 7 图 8 说 明 书 附 图 CN 103392792 A 9 4/4 页 10 图 9 图 10 图 11 说 明 书 附 图 CN 103392792 A 10 。