技术领域
本发明提供一种替罗非班的新制剂，特别是替罗非班粉针剂。
背景技术
冠状动脉内粥样硬化斑块破裂以及随后血小板黏附、聚集、血栓形成是造成冠心病事件 中的最主要原因。血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受体存在于血小板膜表面，在血小板激活时大 量表达，是引起血小板聚集的最后通路。血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受体拮抗剂通过阻断血 小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受体与凝血因子的结合，从而产生抗血栓作用。替罗非班是一个强 有力的血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受体拮抗剂，它通过选择性的与血小板上糖蛋白GPIIb/IIIa 受体结合，占据了其上的结合位点，使血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受体不能与凝血因子结合， 从而抑制血小板聚集。
替罗非班最早由Peerlinck K等人于Circulation 1993oct：88(4pt1)：1512-7报道。Morrow DA等人于Am J Cardiol 2004sep 15：94(6)：774-776报道了替罗非班的临床应用。
替罗非班用于不稳定型心绞痛、非Q波心肌梗死和经皮冠脉成形术的病人，该产品的 水溶液注射剂目前已上市。实验发现，替罗非班的水溶液注射剂具有物理稳定性差、pH值 不稳定、澄明度不易保持等缺点。而且溶液型注射剂在运输、储藏和使用方面，特别是在寒 冷的地区和季节，并不方便。
发明内容
本发明的目的是，提供一种替罗非班粉针剂，以克服上述溶液型注射剂存在的不足。
本发明提供的替罗非班注射用粉针剂，由活性成分替罗非班、冻干支持剂和pH缓冲剂 组成。
上述的活性成分是药学有效量的替罗非班盐酸盐(Tirofiban Hydrochloride，C22H36N2O5S·HCl·H2O， Fw＝495.08，化学名为2-S-(正丁基磺酰氨基)-3-[4-(4-哌啶-4-基)丁氧基苯基] 丙酸盐酸盐—水合物)。
替罗非班盐酸盐的化学结构式：
上述的冻干支持剂可以是甘露醇、山梨醇、乳糖、环糊精、可溶性淀粉、氯化钠、葡萄 糖、果糖、蔗糖、木糖醇、右旋糖酐、水解明胶中的一种或多种，优选甘露醇。
上述的pH缓冲剂可以是磷酸盐、硼酸盐或醋酸盐，优选磷酸盐。
本发明的磷酸盐缓冲剂配方提供稳定的pH值，本粉针剂在冻干前的溶液的pH值在 5.8-6.2，优选5-7。为提供稳定的pH值，可使用适量的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠。
本发明的粉针剂在使用前需用注射用溶媒(以下简称复溶溶媒)复溶。复溶溶媒可选用 注射用水、0.9％氯化钠注射液、5％的葡萄糖注射液、10％葡萄糖注射液、复方葡萄糖氯化 钠注射液、木糖醇注射液、右旋糖酐注射液、甘露醇注射液。复溶溶媒用量为50ml-500ml。
本发明的粉针剂用以下方法制备：
按照文献Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公开的技术方案，以酪氨酸、丁磺酰氯为原 料合成替罗非班。
称取处方量的磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、冻干支持剂，加注射用水使溶解，加入适量的 针用活性炭，搅拌，过滤，加入处方量的盐酸替罗非班，加水至1000ml，将此药液按无菌 操作法除菌过滤，滤液送样进行半成品含量检查，然后分装，冻干，封口，加铝盖，即得本 发明的粉针剂。
替罗非班粉针剂用注射用溶媒复溶后，经静脉以恒定速率输液给药，优选的输液速率为 约0.01-0.25mmg/kg/min，如0.15mmg/kg/min，用于不稳定型心绞痛、非Q波心肌梗死和经 皮冠脉成形术的病人。
本发明的粉针剂性质稳定，开拓了替罗非班的新剂型，解决了该品种水针剂在使用和运 输中的缺点，复溶性好，复溶溶媒选择范围广，扩大了临床用药场合。
以下为本发明替罗非班粉针剂的长期稳定性和安全性实验资料
一、替罗非班粉针剂的长期稳定性实验资料
考察条件与项目：药物按实施例1的方法制备，在温度25℃条件下放置， 观察0个月、3个月、6个月、9个月、12个月.的外观、pH值、澄明度、无菌、热源、含 量。
外观、pH值、澄明度、无菌、热源按中国药典2000版要求检测。含量用HPLC法检测， 用十八烷基硅键合硅胶为填充剂，乙腈-水-0.2mol/L醋酸钠(30∶70∶5)为流 动相，检测波长为226nm。 批号 时间 (月) 外观 pH值 澄明度 无菌 热源 含量(％) 030801 0 无色澄明液体 6.06 符合规定 符合规定 符合规定 99.2 3 无色澄明液体 6.04 符合规定 符合规定 符合规定 99.6 6 无色澄明液体 6.03 符合规定 符合规定 符合规定 99.4 9 无色澄明液体 6.08 符合规定 符合规定 符合规定 99.3 12 无色澄明液体 6.02 符合规定 符合规定 符合规定 99.5 030802 0 无色澄明液体 6.05 符合规定 符合规定 符合规定 99.3 3 无色澄明液体 6.04 符合规定 符合规定 符合规定 99.5 6 无色澄明液体 6.07 符合规定 符合规定 符合规定 99.2 9 无色澄明液体 6.08 符合规定 符合规定 符合规定 99.4 12 无色澄明液体 6.00 符合规定 符合规定 符合规定 99.1 030803 0 无色澄明液体 6.04 符合规定 符合规定 符合规定 99.0 3 无色澄明液体 6.00 符合规定 符合规定 符合规定 99.2 6 无色澄明液体 6.05 符合规定 符合规定 符合规定 99.4 9 无色澄明液体 6.02 符合规定 符合规定 符合规定 99.1 12 无色澄明液体 6.01 符合规定 符合规定 符合规定 99.3
结论：替罗非班粉针剂稳定性好。可以室温长期保存。
二、替罗非班粉针剂的安全性试验资料
1、试验目的
观察替罗非班粉针剂多次给药对家兔的刺激性，豚鼠的过敏性，以及对家兔血的溶血性 反应情况，为临床提供安全性依据。
2、试剂和仪器
生理盐水(武汉滨湖双鹤药业有限公司)，5％葡萄糖(武汉滨湖双鹤药业有限公司)， 卵清蛋白(武汉中健科技发展有限公司)，10％甲醛；组织切片仪，恒温培养箱，注射器、 离心机。
3、受试动物
大耳白兔，4只，体重2.0-2.5kg。华中科技大学同济医学院动物试验中心提供。合格证 号：TJLA-2004-253。豚鼠，雄性，体重250-300g，由同济医科大学动物试验中心提供。 合格证号：TJLA-2004-254。饲养条件：保持室温23±2℃，相对湿度60％～65％，自然光照， 自由进水。
4、试验方法
(1)、血管刺激性试验
取大耳白兔4只，体重2.0-2.5kg，第一只未用任何药物，作空白平行对照观察。另3 只采用自身同体异位对照试验。将药物以5％葡萄糖注射液稀释为0.01％(0.1mg/ml)，对家 兔静脉滴注给药，给药组将配成后的替罗非班粉针剂用一次性灭菌输液装置经左耳缘静脉以 2ml/kg(由人50ml/60kg体表面积折算而来)，注射速度为0.5ml/分；对照组经右侧耳缘静脉 滴注2ml/kg的等量5％葡萄糖注射液。每天一次，连续五天，给药期间每日观察血管注射部 位及整个外耳壳有无变化，并与对照组进行比较。在末次给药后24小时处死动物，取给药 处血管及周围组织，以10％甲醛液固定，经脱水、透明、石蜡包埋、H·E染色。切片部位 为进针部位向心端距进针部位1-5cm，分0-1cm及4-5cm两段取材。
(2)、溶血性试验
替罗非班粉针剂，以5％葡萄糖注射液稀释为0.01％(0.1mg/ml)。取家兔1只，心脏取血 20ml，置于量筒中，用波棒搅动，除去纤维蛋白，静置，取出血液，加等量生理盐水，离心， 制备2％红细胞混悬液备用。再取试管7支，按表1加入各种注射液，其中第6、7管分别 为生理盐水注射液对照管和溶血的阳性对照管。将各管摇匀，37℃水浴内温育3小时，按表 1进行体外溶血试验观察。
表1体外溶血试验加样表
(3)、过敏性试验
替罗非班粉针剂，以5％葡萄糖注射液稀释为0.01％(0.1mg/ml)，取健康无伤豚鼠18只， 体重250-300kg，随机均分成3组。按无菌操作，给药组、生理盐水注射液组、阳性致敏 组分别隔日腹腔注射替罗非班粉针剂、生理盐水注射液、5％卵清蛋白各0.5ml/只，共3次。 首次注射后的第14日，每组分别取3只豚鼠，分别由前肢静脉注射替罗非班粉针剂、生理 盐水注射液、5％卵清蛋白各1ml/只进行攻击。每组余下3只动物于首次注射后的第21日 按以上方法进行第二次攻击，观察过敏反应。
5、数据处理
(1)、血管刺激性试验：病理切片观察生理盐水注射部位与替罗非班粉针剂注射部位血管 结构，比较药物注射部位的血管组织是否有病理改变。
(2)、溶血性试验：按表2标准判断各管在0.5-3小时内是否出现溶血或凝聚现象。
表2体外溶血结果判断 程度 标识 现象 无溶血 部分溶血 全溶血 凝聚 - ± + 红细胞全部下沉，上层液体无色澄明 溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留 溶液澄明红色，管底无细胞残留 红细胞凝聚，振摇后不能分散
(3)、过敏性试验：按表3的过敏反应分级来判断动物是否有过敏反应。
表3豚鼠过敏反应分级 反应级数 反应症状 0 1 2 3 4 无明显反应 只有轻微抓鼻。颤抖或竖毛 有几次咳嗽、有抓鼻、颤抖或竖毛 多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难或痉挛、抽搐 痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡
反应级数2级以上(包括2级)时，可认为过敏试验不合格。
6、试验结果
(1)、血管刺激性试验：肉眼观察结果表明：给药组未见血管充血、出血，组织水肿、坏 死。生理盐水注射液对照组血管也未见血管充血、出血，组织水肿、坏死等异常病理改变。
病理组织检查结果表明：给药组、生理盐水注射液对照组动物耳缘静脉血管结构正常， 血管内皮细胞无损伤，周围组织未见水肿或坏死等异常改变。表明替罗非班粉针剂对家兔静 脉血管无明显刺激作用。
(2)、溶血性试验：试验结果表明：替罗非班粉针剂各浓度在0.5～3小时内对家兔红细胞 均无溶血或凝集反应。见表4
表4替罗非班粉针剂体外溶血试验结果
(3)、过敏性试验：如表5所示：重复使用替罗非班粉针剂，未引起受试动物出现明显过 敏反应。5％卵清蛋白组受试动物给药后15分钟内全部抽搐死亡。
表5替罗非班粉针剂过敏试验结果
7、结论
本发明提供的替罗非班粉针剂无血管刺激性、溶血性、过敏性反应，安全可靠，可用于 静脉注射。
根据国家药品监督管理局《药品注册管理办法》(试行)的规定，本发明产品属于新药 注册中的5类，即属于“注册分类5、改变国内已上市销售药品的剂型，但不改变给药途径 的制剂。”，根据该局的相关规定，本品的药效学与原有剂型相当。
具体实施方式：
实施例1
制备替罗非班粉针剂
1.按照文献Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公开的技术方案，以酪氨酸、丁磺酰氯为 原料合成替罗非班。
2.按下表准备原料：
成分 量
盐酸替罗非班 5.6g
磷酸二氢钠 8.0g
磷酸氢二钠 20.4g
甘露醇 50g
注射用水 1000ml
3.制备工艺：
称取处方量的磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、甘露醇，加注射用水800ml使溶解，加入适量 的针用活性炭，搅拌，过滤，加入处方量的盐酸替罗非班，用0.1mol/LHCl和0.1mol/LNaOH调节pH值5.0-7.0加注射用水至1000ml。将此药液按无菌操作法除菌，用0.22μ微孔滤膜过 滤，滤液送样进行半成品含量检查，然后按等量分装1000支，置-40℃预冻2小时，抽真空 至真空度为10Kpa，加温干燥，30小时升温至30℃，保持真空2小时，然后，于冻干箱内 全自动加塞封口，加铝盖，即得本发明产品替罗非班粉针剂。
实施例2
制备替罗非班粉针剂
1.按照文献Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公开的技术方案，以酪氨酸、丁磺酰氯为 原料合成替罗非班。
2.按下表准备所需原料：
成分 量
盐酸替罗非班 14.0g
磷酸二氢钠 8.0g
磷酸氢二钠 20.4g
甘露醇 50g
注射用水 1000ml
3.制备工艺：
制备方法除加入的盐酸替罗非班的量不同外，其他同实施例1。
实施例3
制备替罗非班粉针剂
1.按照文献Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公开的技术方案，以酪氨酸、丁磺酰氯为 原料合成替罗非班。
2.按下表准备原料：
成分 量
盐酸替罗非班 5.6g
磷酸二氢钠 8.0g
磷酸氢二钠 20.4g
山梨醇 50g
注射用水 1000ml
3.制备工艺：
制备方法除加入的辅料不同外，其他同实施例1。
实施例4
制备替罗非班粉针剂
1.按照文献Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公开的技术方案，以酪氨酸、丁磺酰氯为 原料合成替罗非班。
2.按下表准备原料：
成分 量
盐酸替罗非班 14.0g
磷酸二氢钠 8.0g
磷酸氢二钠 20.4g
山梨醇 50g
注射用水 1000ml
3.制备工艺：
制备方法除加入的盐酸替罗非班的量不同外，其他同实施例3。
实施例5
制备替罗非班粉针剂
1.按照文献Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公开的技术方案，以酪氨酸、丁磺酰氯为 原料合成替罗非班。
2.按下表准备原料：
成分 量
盐酸替罗非班 5.6g
磷酸二氢钠 8.0g
磷酸氢二钠 20.4g
乳糖 50g
注射用水 1000ml
3..制备工艺：
制备方法除加入的辅料不同外，其他同实施例1。
实施例6
制备替罗非班粉针剂
1.按照文献Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公开的技术方案，以酪氨酸、丁磺酰氯为 原料合成替罗非班。
2.按下表准备原料：
成分 量
盐酸替罗非班 14.0g
磷酸二氢钠 8.0g
磷酸氢二钠 20.4g
乳糖 50g
注射用水 1000ml
3.制备工艺：
制备方法除加入的盐酸替罗非班的量不同外，其他同实施例5。