技术领域
本发明涉及对生物体内与胰岛素有关的疾病例如糖尿病、肥胖症 等的治疗或预防有效的药物、食品、饮料或饲料。
背景技术
胰岛素是哺乳动物的正常碳水化合物、蛋白质和脂肪代谢所必需 的激素。I型糖尿病患者由于不能产生足够的维持生命的激素——胰 岛素，因此为了生存，需要由外部给予胰岛素。II型糖尿病患者因 胰岛素产生量不足、胰岛素抗性等原因而导致血糖量异常，为了将 该血糖量控制为适当量，需要给予胰岛素、给予胰岛素分泌促进药 物。但是，II型糖尿病患者中，对于以由高胰岛素血症或胰岛素受 体异常、胰岛素受体的下游信号异常等引起的胰岛素抗性为主要病 因的糖尿病患者来说，即使给予胰岛素或胰岛素分泌促进药物，也 未必见疗效。
近年来，为了解决胰岛素的副作用和上述问题，正在开发具有与 胰岛素相同的生理机能的物质(以下也可称为类胰岛素物质)，已经 证实合成的苯醌衍生物是类胰岛素物质(例如国际公开第99/51225 号公开小册子)、来自紫根的紫草素是类胰岛素物质(例如Kamei R. 等七人，Biochem.Biophys.Res.Commun.，2002年，Vol.292，642～ 651页)。这些类胰岛素物质不仅对I型糖尿病患者显示与胰岛素相 同的生理活性，而且对II型糖尿病患者、甚至以胰岛素抗性为主要 病因的II型糖尿病患者也显示出与胰岛素相同的生理活性，由此有 望改善其症状。
长果种黄麻(モロヘイヤ)，学名为Corchorus olitorius，是双子 叶类椴树科黄麻属(日文名称ツナソ属)的一年生草本植物。已知 长果种黄麻原产于埃及，是营养价值高的黄绿色蔬菜，作为其药理 作用，已知有免疫刺激作用。但是，对于抗糖尿病作用和抗肥胖作 用等类胰岛素作用至今仍不为人知。
莪术(紫ウコン)，学名为Curcuma zedoaria Rosc，属于姜科， 生长于亚热带地区的植物，自古以来，将其根茎用作药物。作为其 药理作用，已知有抗菌作用、胆汁分泌作用、抗溃疡作用、抗肿瘤 作用等。但是，对于抗糖尿病作用和抗肥胖作用等类胰岛素作用至 今仍不为人知。
茼蒿(别名，春菊、ムジンソウ、高丽菊)，学名为Chrysanthemum coronarium，属于菊科，原产于南欧、地中海沿岸的植物，已知含 有丰富的胡萝卜素、维生素B2、维生素C、钙、铁等营养成分。茼 蒿的药理作用已知有抗氧化作用、预防癌症或感冒、预防·改善贫 血作用、整肠作用等。但是，对于抗糖尿病作用和抗肥胖作用等类 胰岛素作用则至今仍不为人所知。
魁蒿，学名为Artemisia princeps pampan，是属于菊科的多年生 草本植物，在亚洲各国用于食用。魁蒿的药理作用已知有抗癌作用、 消除活性氧作用、血液净化作用、止血作用等。但是，对于抗糖尿 病作用和抗肥胖作用等类胰岛素作用则至今仍不为人所知。
木立芦荟，学名为Aloe arborescens，属于百合科、原产于非洲 的具有内质叶的多年生草本植物，通常栽培用作观赏、入药。其别 名称为“不用医生”，其药理作用已知有便秘、胃酸缺乏症、急性肠 炎、慢性肠炎、神经性肠炎、脑血管扩张引起的偏头痛、痛风等多 种药效。但是，对于抗糖尿病作用和抗肥胖作用等类胰岛素作用则 至今仍不为人所知。
水蓼，学名为Polygonum hydropiper，属于蓼科、一年生草本植 物，其药理作用有抗菌作用、抗真菌作用、防虫作用等。但是，对 于抗糖尿病作用和抗肥胖作用等类胰岛素作用则至今仍不为人所 知。
发明内容
本发明的目的在于开发一种来自植物的处理物，上述处理物来自 天然物质，可安全简便地摄取，适合用作食品材料、药物原料，具 有类胰岛素作用，并提供使用该处理物的药物、食品、饮料或饲料。
下面对本发明进行概述，本发明的第1发明涉及伴随胰岛素水平 或胰岛素应答异常的疾病的治疗药物或预防药物，其特征在于，含 有来自选自(a)椴树科、(b)姜科、(c)菊科、(d)百合科和(e) 蓼科中的至少一种植物的处理物作为有效成分。
本发明的第2方面涉及类胰岛素作用剂，其特征在于，含有来自 选自上述(a)～(e)中的至少一种植物的处理物作为有效成分。
本发明的第3发明涉及伴随胰岛素水平或胰岛素应答异常的疾 病的治疗用或预防用食品、饮料或饲料，其特征在于，含有来自选 自上述(a)～(e)中的至少一种植物的处理物作为有效成分。
本发明的第4发明涉及细胞摄取葡萄糖的促进剂，其特征在于， 含有来自选自上述(a)～(e)中的至少一种植物的处理物作为有效 成分。
本发明的第5发明涉及分化成脂肪细胞的诱导剂，其特征在于， 含有来自选自上述(a)～(e)中的至少一种植物的处理物作为有效 成分。
本发明的第1～5发明中，椴树科植物例如有长果种黄麻；姜科 植物例如有莪术；菊科植物例如有茼蒿和/或魁蒿；百合科植物例如 有木立芦荟；蓼科例如有水蓼。
附图说明
图1是表示由长果种黄麻水提取组分、长果种黄麻乙醇提取组分 和长果种黄麻乙酸乙酯提取组分分化诱导的脂肪细胞中甘油三酯生 合成量的图。
图2是表示长果种黄麻乙醇提取组分和长果种黄麻乙酸乙酯提 取组分促进葡萄糖摄入的作用的图。
图3是表示由莪术水提取组分、莪术乙醇提取组分和莪术乙酸乙 酯提取组分分化诱导的脂肪细胞中甘油三酯生合成量的图。
图4是表示莪术乙醇提取组分和莪术乙酸乙酯提取组分促进葡 萄糖摄入的作用的图。
图5是表示由茼蒿水提取组分分化诱导的脂肪细胞中甘油三酯 生合成量的图。
图6是表示茼蒿乙醇提取组分和茼蒿乙酸乙酯提取组分促进葡 萄糖摄入的作用的图。
图7是表示由魁蒿乙醇提取组分和魁蒿乙酸乙酯提取组分分化 诱导的脂肪细胞中甘油三酯生合成量的图。
图8是表示由魁蒿乙醇提取组分和魁蒿乙酸乙酯提取组分促进 葡萄糖摄入的作用的图。
图9是表示由水蓼乙醇提取组分和水蓼乙酸乙酯提取组分促进 葡萄糖摄入的作用的图。
图10是表示水蓼乙醇提取组分和胰岛素促进葡萄糖摄入活性的 协同效果的图。
图11是表示松胞菌素B阻断水蓼乙醇提取组分促进葡萄糖摄入 的作用的图。
具体实施方式
本发明提供的药品、食品、饮料或饲料等以选自上述(a)～(e) 中的至少一种植物的处理物作为有效成分。下述本发明所希望效果 的表达基于该有效成分发挥的类胰岛素作用。
在本发明中，作为椴树科植物，只要是属于被子植物椴树科的植 物即可，没有特别限定，例如有长果种黄麻、椴树、小花椴(ヘラ ノキ)、南京椴(ボダイジユ)、圆果种黄麻(ツナソ)、田麻(カラ スノゴマ)、刺蒴麻(ラセンソウ)、铺地刺蒴麻(ハテルマカズラ) 等。在本发明中特别优选使用长果种黄麻。
在本发明中，作为姜科植物，只要是属于被子植物姜科的植物即 可，没有特别限定，例如有莪术、郁金、荷(ミヨウガ)、美山姜 (クマタケラン)、艳山姜(ゲツトウ)、Alpinia bilamellata(チク リンカ)、姜、姜黄(春郁金)、山柰(バンウコン)等。在本发明 中特别优选使用莪术。
在本发明中，作为菊科植物，只要是属于被子植物菊科的植物即 可，没有特别限定，例如有茼蒿、魁蒿、红花(ベニバナ)、蒲公英、 向日葵、蓟(アザミ)、食用菊、牛蒡、蜂斗菜(フキ)等。在本发 明中特别优选使用茼蒿、魁蒿。
在本发明中，作为百合科植物，只要是属于被子植物百合科的植 物即可，没有特别限定，例如有木立芦荟、洋葱、葱、蒜、郁金香、 百合等。在本发明中特别优选使用木立芦荟。
在本发明中，作为蓼科植物，只要是属于被子植物蓼科的植物即 可，没有特别限定，例如有水蓼、酸模(スイバ)、羊蹄(ギシギシ)、 大黄、扁蓄(ミチヤナギ)、红蓼(オオケタデ)、长鬃蓼(イヌタ デ)、麻布蓼(アザブタデ)、狭叶蓼(ホソバタデ)、腺花毛蓼(ボ ントクタデ)、丛枝蓼(ヤブタデ)、Persicaria erecto-minor(ヒメ タデ)、Persicaria trigonocarpa(Makino)Nakai(ホソバイヌタデ)、 细叶蓼(ヌカボタデ)、柳蓼(ヤナギヌカボ)、粘毛蓼(ケネバリ タデ)、八字蓼(ハルタデ)、早苗蓼(サナェタデ)、蓼蓝(アイ)、 樱蓼(サクラタデ)、香蓼(ニオイタデ)、两栖蓼(ェゾノミズタ デ)、尼泊尔蓼(タニソバ)、齿翅蓼(ツルタデ)、火炭母草(ツル ソバ)、虎仗(イタドリ)、荞麦(ソバ)等。在本发明中特别优选 使用水蓼。
本发明中使用的植物并没有特别限定，可以使用果实、种子、种 皮、花、叶、茎、根、根茎和/或将整株植物直接使用。
本发明中，作为有效成分使用的来自各种植物的处理物，可以是 对原料植物实施某种加工而得到的处理物，只要具有类胰岛素作用 即可，并没有特别限定，例如有提取物、粉碎物、榨汁液、破碎物、 化学处理物、酶处理物，特别优选提取物、粉碎物和榨汁液。
本发明中，类胰岛素作用是指至少显示胰岛素所具有的生理活性 之一，对此并没有特别限定，例如有促进细胞摄入糖、氨基酸，合 成糖原、蛋白质和抑制其分解等代谢调节作用。另外，关于类胰岛 素作用的有无，可以通过后述的实施例2或3记载的方法简便地进 行测定。
本发明中，提取物是指经过用提取溶剂对原料植物进行提取操作 的工序而得到的物质。提取可以按照公知的提取方法如下进行。例 如将原料粉碎或切细，然后用溶剂分批式或连续式进行提取。对于 获得提取物时的提取溶剂并没有特别限定，可以是水，氯仿，乙醇、 甲醇、异丙醇等醇类，丙酮、甲基乙基酮等酮类，乙酸甲酯、乙酸 乙酯等亲水性或亲油性的溶剂，可以根据要求单独或作为适当的混 合液进行使用。提取溶剂的量可以适当确定，通常相对于原料植物， 按照使用时原料植物的形态(例如如果原料植物是新鲜的植物，即 按照新鲜植物)的重量，优选使用0.1～100倍量的提取溶剂。提取 温度也可以根据目的适当确定，水提取的情况下，通常优选4～130 ℃，更优选25～100℃。另外，溶剂中含有乙醇时，优选4～60℃范 围。提取时间也可以考虑提取效率来确定。通常优选适当选取原料、 提取溶剂、设定提取温度，使提取时间为数秒～数日，更优选5分 钟～24小时的范围。提取操作例如可以边搅拌边进行，或静置进行， 还可以根据需要重复多次进行。通过上述操作，可得到本发明中使 用的来自各种植物的提取物(以下也可以称为本发明的提取物)。 根据需要，可对提取物进行过滤、离心分离、浓缩、超滤、分子筛 等处理，制备目标类胰岛素物质浓缩得到的提取物。提取物、浓缩 提取物的类胰岛素作用可按照后述实施例2或3的方法简便地测 定。另外，按照公知的方法，将本发明中使用的各种植物制成茶叶 状，只要其提取物也具有类胰岛素作用，则可作为本发明的提取物 使用。另外可以含有两种或以上这些提取物进行使用。本发明中， 可以含有两种或以上本发明中采用不同的提取方法由原料植物得到 的提取物进行使用。
本发明中，用公知的方法分馏本发明的提取物而得到的组分、或 通过多次重复分馏操作而得到的组分也包括在本发明的提取物中。 上述分馏方法有提取、分级沉淀、柱层析、薄层层析等。以类胰岛 素作用为指标，通过将所得组分进一步纯化，可以分离出类胰岛素 物质。
另外，可以是本发明中使用的来自各种植物的提取物，也可以是 本发明提取物以外的物质，例如可以举出本发明中使用的来自各种 植物的粉碎物(以下也可以称为本发明的粉碎物)。作为本发明的 粉碎物的制造方法，例如可以举出使植物干燥，使用粉碎机进行粉 碎，得到粉状来自各种植物的粉碎物的方法。另外，也可以利用冷 冻粉碎得到粉碎物。
另外，本发明中使用的来自各种植物的榨汁液也可以作为本发明 的处理物使用。作为该榨汁液的制造方法，只要是公知的植物榨汁 方法即可，没有特别限定，例如可以使用螺旋式、齿轮式、转刀式 等压榨机或果汁机来榨汁。作为前处理，可以切细或破碎，用上述 果汁机或布等压榨，获得榨汁液。
破碎物是指将原料植物破碎得到的物质，通常比粉碎物的组织片 要大，例如可使用破碎机来制备。化学处理物并没有特别限定，例 如指对原料植物进行酸处理、碱处理、氧化处理、还原处理等而得 到的物质，例如可将原料植物浸泡于含有盐酸、硫酸、硝酸、柠檬 酸、乙酸等无机酸或有机酸，或者氢氧化钠、氢氧化钾、氨等无机 碱或有机碱的水溶液中来制备。化学处理物包括来自经过了上述化 学处理的植物体的全部物质。酶处理物是指例如经果胶酶、纤维素 酶、木聚糖酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、葡糖苷酶等处理的酶处理物， 微生物处理的酶促反应产物(例如发酵产物)，例如可通过使上述 酶在适当的缓冲液中作用于原料植物来制备。酶处理物包括来自经 上述酶处理的植物体的全部物质。并且，作为本发明的来自植物的 处理物，还包括将原料植物的茎切断，由其断面得到的汁液。
本发明中，对于本发明的处理物的形状，只要在本发明的各种方 式中作为有效成分使用时，能发挥类胰岛素作用即可，并没有特别 限定，可以是粉末状、固态、液态的任意形状。另外也可以将该处 理物用公知的方法进行造粒，以得到的粒状固态物质进行使用。造 粒方法并没有特别限定，例如有转动造粒、搅拌造粒、流化床造粒、 气流造粒、挤出造粒、压缩成形造粒、破碎造粒、喷射造粒或喷雾 造粒等。将粉末状的该处理物溶解于液体例如水、醇等，制成液状， 这也可作为本发明的来自各种植物的处理物使用。
本发明中还提供高浓度或高纯度地含有本发明的处理物的食 品、饮料或饲料，这些食品、饮料或饲料与以往的食品、饮料或饲 料相比，高浓度和/或高纯度地含有类胰岛素物质。
本发明中，将本发明的处理物称为本发明的有效成分，也可以将 含有本发明的有效成分的、伴随胰岛素水平或胰岛素应答异常的疾 病的治疗药物或预防药物称为本发明的治疗药物或预防药物。另 外，本发明所称药物除了治疗药物或预防药物外，还包括类胰岛素 作用剂的情况。
如后所述，本发明的有效成分中未确认有毒性。另外也不用担心 产生副作用。因此，可安全且恰当地进行疾病的治疗或预防。因此 含有该有效成分构成的本发明的治疗药物、预防药物、食品、饮料 或饲料对于伴随胰岛素水平或胰岛素应答异常的疾病的治疗或预防 有效。
本发明中，伴随胰岛素水平或胰岛素应答异常的疾病是以血液中 胰岛素水平变化、胰岛素或胰岛素受体的活性水平变化、胰岛素受 体的下游信号异常、以及选自上述组合的因素为特征的疾病，例如 有糖尿病、肥胖症、高血压、动脉硬化、可卡因戒断症状、缺血性 心力衰竭、健忘症、心血管痉挛、脑血管痉挛、嗜铬细胞瘤、神经 节成神经细胞瘤、慢性进行性舞蹈病、高脂血症。糖尿病可列举出I 型糖尿病、II型糖尿病中的任一种。II型糖尿病也包括即使给予胰 岛素或促胰岛素分泌药物也不见治疗效果的以胰岛素抗性为主要病 因的疾病。
伴随胰岛素水平或胰岛素应答异常的疾病多数在其发病阶段，胰 岛素产生量不足、或胰岛素抗性的原因导致胰岛素的作用不充分。 本发明的有效成分显示类胰岛素作用，由此可以抑制伴随胰岛素水 平或胰岛素应答异常的疾病的发病，因此也可以期待对该疾病的预 防效果。
胰岛素抗性的状态下，因为胰岛素使胰岛素受体产生的信号被阻 断，胰岛素所具有的各种功能无法发挥，产生各种代谢异常。本发 明中使用的有效成分对胰岛素抗性症状也可以发挥类胰岛素效果。 即，对于以胰岛素抗性为主要病因的疾病，例如即使给予胰岛素或 促胰岛素分泌药物也不见治疗效果的II型糖尿病，通过使用本发明 的预防药物或治疗药物，也可以发挥治疗或预防效果。另外，本发 明的有效成分也可以发挥降低血中胰岛素水平的效果。即，可以将 本发明的药物用作在治疗或预防中需要降低胰岛素水平的疾病的治 疗药物或预防药物。对于该疾病并没有特别限定，例如有高胰岛素 血症、阿尔茨海默尔病等。另外，有报告指出：经由胰岛素受体的 刺激与寿命延长效果有密切关系(Science，vol.299，572～574页(2003 年)；Nature，vol.424，277～284页(2003年))，因此可以将本 发明的类胰岛素作用剂作为抗衰老药物使用。
已知胰岛素促进前脂肪细胞分化诱导为脂肪细胞，还已知成熟的 脂肪细胞会摄入葡萄糖，在细胞内蓄积甘油三酯(J.Biol.Chem.， Vol.253，No.20，7570～7578页(1978年))。即，利用该方法， 给予待检物质以取代胰岛素，通过测定向脂肪细胞的分化、或细胞 中的甘油三酯量，可以测定待检物质的类胰岛素作用。
已知胰岛素具有促进葡萄糖被摄入细胞内的作用，已知在成熟的 脂肪细胞中，通过胰岛素的作用，会促进葡萄糖摄入细胞内 (J.Biol.Chem.，Vol.253，No.20，7579～7583页(1978年))。即， 利用该方法，给予待检物质以取代胰岛素，通过测定成熟脂肪细胞 内葡萄糖的摄入量，可以测定待检物质的类胰岛素作用。
本发明的治疗药物或预防药物例如有：将本发明的上述有效成分 与公知的药用载体组合制成的制剂。作为本发明的治疗药物或预防 药物，还可以将上述有效成分和能够用于与上述有效成分相同用途 的其它成分配合，例如公知的胰岛素制剂、胰岛素分泌促进剂、胰 岛素抗性改善剂、饭后血糖改善剂、类胰岛素作用剂等。也可以配 合国际公开第04/014407号公开小册子中记载的具有类胰岛素作用 的来自伞形科植物的处理物。
本发明的治疗药物或预防药物的制造通常通过将上述有效成分 与可药用的液状或固体状载体混合而进行，可以根据需要加入溶 剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋型剂、粘合剂、崩解剂、 润滑剂等，制成片剂、颗粒剂、散剂、粉末剂、胶囊剂等固体制剂， 通常的溶液剂、混悬剂、乳剂等液体制剂。另外也可以制成在使用 前添加适当的载体而形成液状的干燥品、以及其他外用制剂。
药用载体可根据治疗药物或预防药物的给药形式和剂型选择。制 成由固体组合物构成的口服制剂时，可以制成片剂、丸剂、胶囊剂、 散剂、细粒剂、颗粒剂等，例如可利用淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、 羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等。另外，制备口服制剂时，还 可以混合粘合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、助流剂、矫味剂、 着色剂、香料等。例如制成片剂或丸剂时，可以根据需要用蔗糖、 明胶、羟丙基纤维素等糖衣或者胃溶性或肠溶性物质的薄膜包衣。 制成由液体组合物构成的口服制剂时，可以制成药理学上可接受的 乳悬剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂等，例如可以利用纯水、乙醇等 作为载体。另外还可以根据需要添加润湿剂、混悬剂等助剂、甜味 剂、风味剂、防腐剂等。
另一方面，制成非口服制剂时，可以按照常规方法，将本发明的 上述有效成分溶解或悬浮于作为稀释剂的注射用蒸馏水、生理盐 水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉 米油、丙二醇、聚乙二醇等中，根据需要，通过加入杀菌剂、稳定 剂、等渗剂、止痛剂等来制备。另外，也可以制备固体组合物，在 使用前溶解于无菌水或无菌注射用溶剂中使用。
外用制剂包括经皮给药或经粘膜(口腔、鼻腔)给药用固体、半 固体状或液状制剂。也包括栓剂等。例如可制成乳剂、洗剂等乳浊 剂，外用酊剂、经粘膜给药用溶液剂等液体状制剂，油性软膏、亲 水性软膏等软膏剂，膜剂、贴皮剂、糊剂等经皮给药或粘膜给药用 贴剂等。
以上各种制剂可分别利用公知的药用载体等，按照常规方法适当 地制备。所述制剂中有效成分的含量要考虑到给药形式、给药方法 等，优选只要是在后述的给药量范围内可给予该有效成分的量即 可，并没有特别限定。本发明的药物中有效成分的含量通常是1～100 重量％左右。
本发明的治疗药物或预防药物按照与制剂形式相适应的适当给 药途径进行给药。给药方法并没有特别限定，可以内服、外用和注 射。注射剂例如可以对静脉内、肌内、皮下、皮内等给药；作为外 用剂，例如栓剂，则可采用与栓剂相适应的给药方法进行给药。
本发明的治疗药物或预防药物的给药量根据其制剂形式、给药方 法、使用目的和该治疗药物或预防药物的给药对象患者的年龄、体 重、症状而适当设定，并非一成不变。通常制剂中含有的上述有效 成分的给药量，优选成人每天为0.1μg～10g/kg体重，更优选1μg～ 5g/kg体重，进一步优选10μg～1g/kg体重。当然给药量根据各种 条件而变化，因此，有比上述给药量少即足够的情形，也有需要超 出上述范围的情形。可以在所希望的给药量范围内，一天内给药1 次，或分多次给药。给药期间也是任意的。另外，本发明的治疗药 物或预防药物除了直接口服给药之外，还可以添加到任意的饮料食 品中进行日常摄取。
本发明还可提供含有上述有效成分的类胰岛素作用剂。该类胰岛 素作用剂可以是上述有效成分本身，也可以是含有上述有效成分的 组合物。该类胰岛素作用剂例如可以将上述有效成分和可用于与该 有效成分相同用途的其它成分，例如公知的胰岛素制剂、胰岛素分 泌促进剂、胰岛素抗性改善剂、饭后血糖改善剂、类胰岛素作用剂 等混合，按照上述治疗药物或预防药物的制备方法制成通常使用的 药剂形式。也可以配合国际公开第04/014407号公开小册子中记载的 具有类胰岛素作用的来自伞形科植物的处理物。该类胰岛素作用剂 中上述有效成分的含量要考虑该类胰岛素作用剂的给药方法、使用 目的等，只要是可得到表达本发明所需效果的量即可，并没有特别 限定。本发明的类胰岛素作用剂中有效成分的含量通常是1～100重 量％左右。该类胰岛素作用剂的用量只要是可得到表达本发明所需 的效果的量即可，并没有特别限定。给予生物体进行使用时，特别 优选以可在上述治疗药物或预防药物中的有效成分给药量的范围内 给予有效成分的量进行使用。类胰岛素作用剂对伴随胰岛素水平或 胰岛素应答异常的疾病有效。该类胰岛素作用剂还对伴随胰岛素水 平或胰岛素应答异常的疾病的药物筛选有用。并且该类胰岛素作用 剂在胰岛素对细胞的作用机理的研究、与该细胞的物理变化相关的 机能研究中有用。另外，类胰岛素作用剂可以代替血清或胰岛素制 剂、或者与它们共同添加到细胞·组织·器官培养用培养基中进行 使用。该培养基用作含有少量或不含血清、胰岛素制剂的细胞·组 织·器官培养用培养基是非常有用的。
通过将本发明的类胰岛素作用剂给予人，有望降低血液中胰岛素 水平。即，可以将本发明的类胰岛素作用剂用作在治疗或预防中需 要降低胰岛素水平的疾病的治疗或预防药物。对于该疾病并没有特 别限定，例如有高胰岛素血症、阿尔茨海默尔病等。另外，有报告 指出：经由胰岛素受体的刺激与寿命延长效果有密切关系(Science， vol.299，572～574页(2003年)；Nature，vol.424，277～284页(2003 年))，因此可以将本发明的类胰岛素作用剂用作抗衰老药物。
如后所述，本发明的有效成分未确认有毒性。也不必担心副作 用。因此，在机体内可以安全且适当地表达类胰岛素作用。因此， 含有该有效成分的本发明的药物、食品、饮料或饲料对伴随胰岛素 水平或胰岛素应答异常的疾病的治疗或预防有效。
本发明还提供含有上述有效成分构成的伴随胰岛素水平或胰岛 素应答异常的疾病的治疗用或预防用食品、饮料或饲料。本发明的 食品、饮料或饲料通过其类胰岛素作用，对伴随胰岛素水平或胰岛 素应答异常的疾病的症状改善、预防极为有效。并且，本发明的食 品或饮料是具有降低血糖值的作用的降血糖用食品或饮料，对于需 要注意血糖值或体内脂肪的人是有效的功能性食品或饮料。
本发明的食品、饮料或饲料中，可以配合本发明的有效成分、和 已知具有抗糖尿病作用的其它物质，例如公知的类胰岛素作用剂、 具有胰岛素分泌促进作用的物质、具有改善胰岛素抗性作用的物 质、具有改善饭后血糖作用的物质等。例如也可以配合难消化性糊 精等。另外，也可以配合国际公开第04/014407号公开小册子中记载 的具有类胰岛素作用的来自伞形科植物的处理物。
在本发明的食品、饮料和试料中，“含有”是指含有、添加和/ 或稀释的意思。其中，“含有”是指食品、饮料或饲料中含有本发 明所使用的有效成分的形式；“添加”是指向食品、饮料或饲料原 料中加入本发明所使用的有效成分的形式；“稀释”是指向本发明 所使用的有效成分中加入食品、饮料或饲料的原料的形式。
本发明的食品、饮料或饲料的制造方法并没有特别限定，例如混 合、调制、加工等可按照通常的食品、饮料或饲料进行，可以通过 这些制造方法进行制造，所得食品、饮料或饲料只要含有具类胰岛 素作用的本发明的上述有效成分即可。
本发明的食品或饮料并没有特别限定，例如有：含有本发明的上 述有效成分的谷物加工制品(例如小麦粉加工制品、淀粉类加工制 品、预混加工制品、面类、通心粉类、面包类、豆馅包类、荞麦面 类、麦麸、米粉、粉丝、包装糯米糕点等)、油脂加工制品(例如 塑性油脂、天妇罗油、色拉油、蛋黄酱、调味酱等)、大豆加工制 品(例如豆腐类、豆酱、纳豆等)、食用肉类加工制品(例如火腿、 腊肉、压制火腿、红肠等)、水产制品(例如冷冻碎鱼肉、鱼糕、 圆筒状鱼糕、鱼糕片、炸胡萝卜鱼肉片、氽鱼丸、筋、鱼肉火腿、 肠、鲣鱼刨花、鱼卵加工制品、水产罐头、甜烹海味等)、乳制品 (例如原料乳、奶油、酸奶、黄油、干酪、炼乳、奶粉、冰激凌等)、 蔬菜·果实加工制品(例如糊类、果酱类、咸菜类、果实饮料、蔬 菜饮料、混合饮料等)、糕点类(例如巧克力、饼干类、糕点面包 类、蛋糕、糯米糕点(日式)、糯米饼干类等)、酒精类饮料(例 如日本酒、中国酒、葡萄酒、威士忌、烧酒、伏特加、白兰地、杜 松子酒、朗姆酒、啤酒、清凉酒精饮料、果酒、利口酒等)、嗜好 饮料(例如绿茶、红茶、乌龙茶、咖啡、清凉饮料、乳酸饮料等)、 调料(例如酱油、酱汁、醋、甜料酒等)、罐装·瓶装·袋装食品 (例如牛肉饭、盖浇饭、红豆饭、咖哩、其它各种已加工食品等)、 半干燥或浓缩食品(例如肝酱、其它调味酱、荞面·面条汁、浓缩 汤类等)、干燥食品(例如速食面类、速食咖哩、速溶咖啡、果汁 粉、汤粉末、速食酱汤、加工食品、加工饮料、加工汤等)、冷冻 食品(例如鸡素烧、蒸鸡蛋羹、烤鳗鱼、汉堡牛排、烧麦、饺子、 各种浓肉汤、果汁鸡尾酒等)、固态食品、液体食品(例如汤等)、 香辛料类等农产·林产加工制品、畜产加工制品、水产加工制品等。
本发明的食品或饮料含有、添加和/或稀释一种或多种上述有效 成分，其含量只要是相当于表达类胰岛素作用所必需的量即可，对 于其形状并没有特别限定，也包括可口服摄取的片状、颗粒状、胶 囊状等形状。另外，作为本发明的食品还包括将原料植物直接或与 适当的乳化剂等适宜混合而固化的物质。
本发明的饮料可以将本发明的有效成分与本发明中使用的植物 以外的植物(蔬菜或果实等)的榨汁液混合、或与本发明中使用的 植物同时榨汁，制成健康饮料。例如将本发明中使用的各种植物的 榨汁液用水稀释，与八丈芹、西芹、芹菜、甘草、胡萝卜、小松菜、 芜菁、青梗菜、西红柿、柑桔、柠檬、葡萄柚、奇异果、菠菜、小 萝卜、白萝卜、白菜、卷心菜、做沙拉的生菜、生菜、韭菜、秋葵、 菜椒、黄瓜、菜豆、毛豆、豌豆、玉米、蒜、芝麻菜、枇杷、桔子、 甘夏橘等的榨汁液，牛奶，豆浆等混合，制成具有类胰岛素作用的 健康饮料。
本发明的食品或饮料中上述有效成分的含量并没有特别限定，可 从其感官和活性表达方面考虑适当选择，例如在食品中优选0.1重量 ％以上，更优选0.5～95重量％，进一步优选1～90重量％；例如在 饮料中优选0.1重量％以上，更优选0.5～95重量％，进一步优选1～ 90重量％。对于本发明的食品或饮料中含有的有效成分，例如成人 每天可以摄取0.1μg～10g/kg体重，优选1μg～5g/kg体重，更优选 10μg～1g/kg体重。
本发明还提供含有，即含有、添加和/或稀释上述有效成分而得 到的具有类胰岛素作用的生物用饲料，并且作为另一个实施方案， 提供生物的饲养方法，其特征在于给予生物上述有效成分。作为本 发明的另一个实施方案，还提供生物饲养剂，其特征在于该生物饲 养剂中含有上述有效成分。
这些发明中，生物是指例如养殖动物、宠物等，养殖动物例如有 家畜、实验动物、家禽、鱼类、甲壳类或贝类。饲料例如有维持和/ 或改善身体状况的饲料。生物饲养剂例如有浸渍剂、饲料添加剂、 饮料添加剂。
根据这些发明，在适用该发明的以上例举的生物中，基于本发明 所使用的上述有效成分的类胰岛素作用，有望表达出与本发明的上 述治疗药物或预防药物同样的效果。即，本发明的饲料等能够发挥 治疗或预防该生物的伴随胰岛素水平或胰岛素应答异常的疾病的效 果。
通常，对每lkg对象生物的体重、每天优选给予0.01～2000mg 本发明所使用的上述有效成分。关于给予，例如可通过将该有效成 分添加并混合到供给对象生物的人工混合饲料的原料中，或与人工 混合饲料的粉末原料混合后再添加并混合到其他原料中来进行给 予。对于上述有效成分在饲料中的含量并没有特别限定，可根据目 的适当设定，优选0.001～15重量％的比例。生物饲养剂中本发明的 有效成分的含量也可以是相同的程度。
本发明的饲料的制造方法并没有特别限定，其混合可按照通常的 饲料进行，只要所制造的饲料中含有具有类胰岛素作用的本发明的 上述有效成分即可。也可以相同地制备生物饲养剂。
可适用本发明的生物并没有特别限定，广泛适用于养殖动物中的 马、牛、猪、羊、山羊、骆驼、驼羊等家畜；小鼠、大鼠、豚鼠、 兔等实验动物；鸡、鸭、火鸡、鸵鸟等家禽；以及作为宠物的狗、 猫等。
本发明中，例如，通过摄取含有具有类胰岛素作用的本发明中使 用的上述有效成分的饲料，或将对象生物浸泡于含有具有类胰岛素 作用的本发明中使用的上述有效成分的液体(例如，将上述浸泡剂 溶解于水中得到的液体)中，可以良好地维持或改善家畜、实验动 物、家禽、宠物等的身体状况。这些方式是本发明生物饲养方法的 一种方式。
本发明也可以提供含有上述有效成分的细胞摄入葡萄糖的促进 剂。该葡萄糖摄入促进剂可以是上述有效成分本身，也可以是含有 上述有效成分的组合物。该葡萄糖摄入促进剂例如可以将上述有效 成分和可用于与该有效成分相同用途的其它成分，例如公知的胰岛 素作用剂、胰岛素分泌促进剂、胰岛素抗性改善剂、饭后血糖水平 改善剂、类胰岛素作用剂等混合，按照上述治疗药物或预防药物的 制造方法制成通常使用的试剂的形式。也可以配合国际公开第 04/014407号公开小册子中记载的具有促进细胞摄入葡萄糖作用的来 自伞形科植物的处理物。该葡萄糖摄入促进剂中上述有效成分的含 量要考虑到该葡萄糖摄入促进剂的给予方法、使用目的等，只要是 可表达本发明所希望的效果的量即可，并没有特别限定。本发明的 葡萄糖摄入促进剂中有效成分的含量通常是1～100重量％左右。另 外，该葡萄糖摄入促进剂的使用量只要是可表达本发明所希望的效 果的量即可，对此并没有特别限定。当给予生物体进行使用时，特 别优选以可在上述治疗药物或预防药物中的有效成分给药量的范围 内给予有效成分的量进行使用。该葡萄糖摄入促进剂对于在治疗或 预防中需要促进细胞摄入葡萄糖作用的疾病的治疗或预防有效。关 于该疾病，除了上述在治疗或预防中需要类胰岛素作用的疾病之 外，例如还有心脏疾病，特别是心肌梗塞、缺血后的心脏损伤等。 另外，由于该葡萄糖摄入促进剂促进细胞摄入葡萄糖，因此，通过 在肌肉细胞中发挥该作用，可以产生增强肌肉的作用、消除疲劳的 作用。该葡萄糖摄入促进剂可用于上述疾病的治疗用或预防用食 品、饮料或饲料的制造。这些食品、饮料或饲料可以基于本发明的 上述食品、饮料或饲料进行使用。该葡萄糖摄入促进剂对于在上述 治疗或预防中需要细胞摄入葡萄糖促进作用的疾病的药物筛选有 用。并且该葡萄糖摄入促进剂在细胞摄入葡萄糖的作用机理研究、 该细胞的物理变化等机能研究中也有用。
本发明也可提供含有上述有效成分的分化成脂肪细胞的诱导 剂。关于可由该分化诱导剂分化诱导为脂肪细胞的前脂肪细胞，只 要是可分化为脂肪细胞的细胞即可，并没有特别限定，例如除前脂 肪细胞外，还有纤维母细胞、间叶干细胞等。该分化诱导剂可以是 上述有效成分本身，也可以是含有上述有效成分的组合物。该分化 诱导剂例如可以将上述有效成分和可用于与该有效成分相同用途的 其它成分，例如公知的胰岛素作用剂、胰岛素分泌促进剂、胰岛素 抗性改善剂、饭后血糖水平改善剂、类胰岛素作用剂等混合，按照 上述治疗药物或预防药物的制造方法制成通常使用的药剂的形式。 也可以配合国际公开第04/014407号公开小册子中记载的具有分化 诱导成脂肪细胞的作用的来自伞形科植物的处理物。该分化诱导剂 中上述有效成分的含量要考虑该分化诱导剂的给药方法、使用目的 等，只要是可表达本发明所希望的效果的量即可，并没有特别限定。 本发明的分化成脂肪细胞的诱导剂中有效成分的含量通常是1～100 重量％左右。另外，该分化诱导剂的使用量只要是可表达本发明所 希望的效果的量即可，对此并没有特别限定。当给予生物体进行使 用时，特别优选以可在上述治疗药物或预防药物中的有效成分给药 量的范围内给予有效成分的量进行使用。该分化诱导剂对于在治疗 或预防中需要分化诱导为脂肪细胞作用的疾病的治疗或预防有效。 关于该疾病，除了在上述治疗或预防中需要类胰岛素作用的疾病之 外，例如还可以是痛风、脂肪肝、胆结石、月经不调、不孕症等。 该分化诱导剂可用于制造上述疾病的治疗用或预防用食品、饮料或 饲料。这些食品、饮料或饲料可以基于本发明的上述食品、饮料或 饲料进行使用。该分化诱导剂对于上述在治疗或预防中需要分化为 脂肪细胞的诱导剂的疾病的药物筛选有用。并且该分化诱导剂在分 化诱导为脂肪细胞作用的机理研究及其该物理变化等的机能研究也 有用。
对于本发明中使用的上述有效成分，即使给予表达其作用的有效 量，也未确认有毒性。例如口服给予时，将长果种黄麻、木立芦荟、 莪术、茼蒿、水蓼、魁蒿的乙醇提取物分别以1g/kg体重单次给予 小鼠，也未见死亡例。上述有效成分在口服给予大鼠时，即使口服 单次给予1g/kg，也未见死亡例。
实施例
下面例举实施例更具体地说明本发明，但本发明并不受下述记载 的任何限定。如无特别说明，实施例中的％全部表示容量％。
实施例1长果种黄麻提取组分的制备
向每2g长果种黄麻干燥粉末中加入40ml蒸馏水、乙醇或乙酸 乙酯，室温下提取30分钟，离心分离提取液和残余物。接着对残余 物用30ml相同的溶剂重复2次提取操作。水提在60℃进行，乙醇 提取、乙酸乙酯提取在室温下进行。收集所得提取液，用旋转蒸发 器浓缩。最终，将水提取液溶解于20ml蒸馏水，得到长果种黄麻的 水提取组分。将乙醇提取液溶解于5ml二甲基亚砜，得到长果种黄 麻的乙醇提取组分。将乙酸乙酯提取液溶解于5ml二甲基亚砜，得 到长果种黄麻的乙酸乙酯提取组分。
实施例2长果种黄麻提取组分对分化诱导为脂肪细胞的作用
(1)分化诱导为脂肪细胞
分化诱导为脂肪细胞是将前述Rubin C.S.等人的方法 (J.Biol.Chem.，Vol.253，No.20，7570～7578页(1978年))部分 改进而进行的。在含有200μM抗坏血酸的含10％胎牛血清(GIBCO 公司制)的达尔伯克改良伊格尔培养基(SIGMA公司，D6046)(以 下称为A-D-MEM培养基)中以4×103个/ml悬浮前脂肪细胞株 3T3-L1(ATCC CCL-92.1)，在12孔微量滴定板的孔内各加入2ml， 在5％二氧化碳存在下，在37℃培养7天。在第2、4天用相同的培 养基进行培养基更换。第7天，更换为含有0.25μM地塞米松的A- D-MEM培养基，然后添加实施例1中制备的长果种黄麻的水提取组 分，使终浓度为0.1％，或添加实施例1中制备的长果种黄麻乙醇提 取组分的二甲基亚砜溶液，使终浓度为0.067％，或添加实施例1中 制备的长果种黄麻乙酸乙酯提取组分的二甲基亚砜溶液，使终浓度 为0.067％。将添加4μL 5mg/ml胰岛素(TAKARA BIO公司制) 水溶液的组作为阳性对照，将添加二甲基亚砜的组作为阴性对照。 在45小时后更换为A-D-MEM培养基，与上述相同，分别向各孔中 添加长果种黄麻的水提取组分，使终浓度为0.1％，添加长果种黄麻 乙醇提取组分的二甲基亚砜溶液，使终浓度为0.067％，添加长果种 黄麻乙酸乙酯提取组分的二甲基亚砜溶液，使终浓度为0.067％，作 为阳性对照添加2μL 5mg/ml胰岛素水溶液，作为阴性对照添加二 甲基亚砜，再培养7天。在第2、4天更换培养基，与上述相同分别 向各孔中添加长果种黄麻的水提取组分，使终浓度为0.1％，添加长 果种黄麻乙醇提取组分的二甲基亚砜溶液，使终浓度为0.067％，添 加长果种黄麻乙酸乙酯提取组分的二甲基亚砜溶液，使终浓度为 0.067％，作为阳性对照添加了2μL 5mg/ml胰岛素水溶液，作为阴 性对照添加了二甲基亚砜。
(2)甘油三酯生合成量的测定
测定细胞中甘油三酯的生合成量作为分化诱导为成熟脂肪细胞 的指标，和作为对类胰岛素作用的评价。培养结束后，去掉培养基， 用磷酸缓冲盐溶液洗涤细胞2次，加入1ml己烷：异丙醇＝3∶2的 溶剂，在室温下放置30分钟，然后回收上清液。再次重复该操作， 将得到的2ml上清液浓缩干燥固化。将沉淀溶解于100μL异丙醇 中，然后用甘油三酯G-测定仪(和光纯药公司制、型号276-69801) 测定10μL溶液中含有的甘油三酯量。全部测定2次。
由结果确认与添加二甲基亚砜的组比较，长果种黄麻的水提取组 分、长果种黄麻的乙醇提取组分或长果种黄麻乙酸乙酯提取组分添 加组与胰岛素添加组同样，诱导了甘油三酯的生合成。即表明：长 果种黄麻的水提取组分、长果种黄麻的乙醇提取组分或长果种黄麻 乙酸乙酯提取组分添加组有分化诱导为脂肪细胞的作用。图1的横 轴表示各样品，纵轴表示甘油三酯的生合成量(μg/ml)。
实施例3长果种黄麻提取组分对葡萄糖摄入的促进作用
(1)成熟脂肪细胞的制备
分化诱导为成熟脂肪细胞是将前述Rubin C.S.等人的方法部分 改进而进行的。在含有200μM抗坏血酸的含10％胎牛血清达尔伯克 改良伊格尔培养基(SIGMA公司制，D6046)中以4×103个/ml悬浮 3T3-L1细胞，在12孔微量滴定板的孔内各加入2ml，在5％二氧化 碳存在下，在37℃培养7天。第7天，更换为2ml含有200μM抗 坏血酸、0.25μM地塞米松和10μg/ml胰岛素、0.5mM 3-异丁基1- 甲基黄嘌呤(Nacalai Tesque公司制、19624-44)的含10％胎牛血清 的达尔伯克改良伊格尔培养基。45小时后，更换为2ml含有200μM 抗坏血酸和5μg/ml胰岛素的含10％胎牛血清的达尔伯克改良伊格 尔培养基，2天后、4天后更换同样的培养基，培养7天，制备成熟 脂肪细胞。
(2)测定对成熟脂肪细胞摄入葡萄糖的促进作用
测定当样品(上述长果种黄麻提取组分)刺激成熟脂肪细胞时细 胞内2-脱氧葡萄糖的摄入量，以此作为对葡萄糖摄入促进作用的评 价或作为对类胰岛素作用的评价。
培养结束后，去掉培养基，用含有0.1％(w/v)牛血清白蛋白 (SIGMA公司制，A8022)的达尔伯克改良伊格尔培养基洗涤细胞2 次，然后分别向各孔中添加1ml相同培养基，上述培养基以0.2％或 0.1％的终浓度含有实施例1中制备的为长果种黄麻乙醇提取组分二 甲基亚砜溶液、或以0.1％的终浓度含有长果种黄麻乙酸乙酯提取组 分二甲基亚砜溶液，在5％二氧化碳存在下，在37℃培养一夜。以未 添加样品的组作为阴性对照。培养一夜后，用赫佩斯缓冲盐溶液(140 mM NaCl、5mM KCl、2.5mM MgS04、1mM CaCl2、20mM HEPES-Na(pH 7.4))洗涤细胞2次，在各孔中分别添加0.9ml相 同缓冲液，该缓冲液以0.2％或0.1％的终浓度含有实施例1中制备的 长果种黄麻乙醇提取组分二甲基亚砜溶液、或以0.1％的终浓度含有 长果种黄麻乙酸乙酯提取组分二甲基亚砜溶液，37℃培养75分钟。 此时，在经过45分钟时未添加样品的孔中添加胰岛素，使终浓度为 1μg/ml，以该组作为阳性对照。之后，加入100μL含有0.5μCi/ml 2- 脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖(Perkin Elmer Life Science公司制、 NET549A)、1mM 2-脱氧葡萄糖(Nacalai Tesque公司制、10722- 11)的赫佩斯盐缓冲液，再在37℃培养10分钟。培养结束后，去掉 上清液，用冷却至4℃的磷酸缓冲液洗涤细胞3次，然后加入0.5ml 含有1％ Nonidet P-40的磷酸盐缓冲液，溶解细胞，使摄入到细胞中 的2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖溶出。用25μL上清液，以Aquasol-2 (Perkin Elmer Life Science公司制、6NE9529)作为闪烁液，通过 液体闪烁计数器LS 6500(Beckman Coulter公司制)测定放射活性。
结果可见，与阴性对照相比较，各浓度的长果种黄麻乙醇提取组 分或长果种黄麻乙酸乙酯提取组分添加组与胰岛素添加组同样，促 进了2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖的摄入。即表明：长果种黄麻乙醇 提取组分和长果种黄麻乙酸乙酯提取组分的组具有促进葡萄糖摄入 的活性。结果示于图2。图2中，横轴表示各样品，纵轴表示2-脱氧 -[1，2-3H(N)]-葡萄糖量(dpm)。
实施例4莪术提取组分的制备
向每2g莪术干燥粉末中加入40ml蒸馏水、乙醇或乙酸乙酯， 提取30分钟，离心分离提取液和残余物。接着对残余物用30ml相 同的溶剂重复2次提取操作。水提在60℃进行，乙醇提取、乙酸乙 酯提取在室温下进行。收集所得提取液，用旋转蒸发器浓缩。最终， 将水提取液溶解于10ml蒸馏水，得到莪术的水提取组分。将乙醇提 取液溶解于5ml二甲基亚砜，得到莪术的乙醇提取组分。将乙酸乙 酯提取液溶解于5ml二甲基亚砜，得到莪术的乙酸乙酯提取组分。
实施例5莪术提取组分对分化诱导成脂肪细胞的作用
按照实施例2的方法测定由实施例4制备的莪术的水提取组分、 莪术的乙醇提取组分、莪术的乙酸乙酯提取组分对分化诱导成脂肪 细胞的作用(类胰岛素活性)。
即，向各孔中添加终浓度为0.1％的莪术水提取组分水溶液，终 浓度分别为0.2％、0.067％或0.022％的莪术乙醇提取组分的二甲基 亚砜溶液，或终浓度分别为0.2％、0.067％或0.022％的莪术乙酸乙 酯提取组分的二甲基亚砜溶液，以上述组作为样品。以添加4μL 5 mg/ml胰岛素水溶液的组作为阳性对照，以添加二甲基亚砜的组作为 阴性对照。之后与实施例2的方法同样地进行培养基和样品的更换， 添加样品7天后，测定细胞中的甘油三酯量。
结果可见，莪术的水提取组分、各浓度的莪术的乙醇提取组分和 莪术乙酸乙酯提取组分添加组诱导了甘油三酯的生合成。即，表明 莪术的水提取组分、莪术的乙醇提取组分和莪术乙酸乙酯提取组分 有分化诱导为成熟脂肪细胞的作用。结果示于图3。图3的横轴表示 各样品，纵轴表示甘油三酯的生合成量(μg/ml)。
实施例6莪术提取组分对葡萄糖摄入的促进作用
按照实施例3记载的方法测定当样品(下述莪术提取组分)刺激 成熟脂肪细胞时细胞内2-脱氧葡萄糖的摄入量，以此作为实施例4 制备的莪术的乙醇提取组分和莪术的乙酸乙酯提取组分对葡萄糖摄 入的促进作用的评价，或作为对类胰岛素作用的评价。
即，向各孔中添加终浓度分别为0.2％或0.1％的莪术乙醇提取组 分的二甲基亚砜溶液、或终浓度为0.1％的莪术乙酸乙酯提取组分的 二甲基亚砜溶液，以这些组作为样品。以未添加样品的组作为阴性 对照，以添加终浓度为1μg/ml的胰岛素的组作为阳性对照。之后同 样地测定摄入到细胞中的2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量。
结果可见，与阴性对照比较，各浓度的莪术的乙醇提取组分和莪 术的乙酸乙酯提取组分添加组与胰岛素添加组同样，促进了2-脱氧- [1，2-3H(N)]-葡萄糖的摄入。即，表明莪术的乙醇提取组分和莪术 的乙酸乙酯提取组分具有促进葡萄糖摄入的活性。结果示于图4。图 4中，横轴表示各样品，纵轴表示2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量 (dpm)。
实施例7茼蒿提取组分的制备
向每2g茼蒿干燥粉末中加入40ml蒸馏水、乙醇或乙酸乙酯， 提取30分钟，离心分离提取液和残余物。接着对残余物用30ml相 同的溶剂重复2次提取操作。水提在60℃进行，乙醇提取、乙酸乙 酯提取在室温下进行。收集所得提取液，用旋转蒸发器浓缩。最终， 将水提取液溶解于10ml蒸馏水，得到茼蒿的水提取组分。将乙醇提 取液溶解于5ml二甲基亚砜，得到茼蒿的乙醇提取组分。将乙酸乙 酯提取液溶解于5ml二甲基亚砜，得到茼蒿的乙酸乙酯提取组分。
实施例8茼蒿提取组分分化诱导成脂肪细胞的作用
按照实施例2的方法测定由实施例7制备的茼蒿的水提取组分分 化诱导成脂肪细胞的作用(类胰岛素活性)。
即，向各孔中添加终浓度为0.4％、0.2％或0.1％的茼蒿水提取 组分水溶液，以这些组作为样品。以添加4μL 5mg/ml胰岛素水溶 液的组作为阳性对照，以添加二甲基亚砜的组作为阴性对照。之后 与实施例2的方法同样地进行培养基和样品的更换，添加样品7天 后，测定细胞中的甘油三酯量。
结果可见，各浓度的茼蒿水提取组分添加组诱导了甘油三酯的生 合成。即，表明茼蒿的水提取组分有分化诱导为成熟脂肪细胞的作 用。结果示于图5。图5的横轴表示各样品，纵轴表示甘油三酯的生 合成量(μg/ml)。
实施例9茼蒿提取组分对葡萄糖摄入的促进作用
按照实施例3记载的方法测定当样品(下述茼蒿提取组分)刺激 成熟脂肪细胞时细胞内2-脱氧葡萄糖的摄入量，以此作为由实施例7 制备的茼蒿的乙醇提取组分和茼蒿的乙酸乙酯提取组分对葡萄糖摄 入的促进作用的评价，或作为对类胰岛素作用的评价。
即，向各孔中添加终浓度分别为0.2％或0.1％的茼蒿乙醇提取组 分的二甲基亚砜溶液、或终浓度为0.1％的茼蒿乙酸乙酯提取组分的 二甲基亚砜溶液，以这些组作为样品。以未添加样品的组作为阴性 对照，以添加终浓度为1μg/ml的胰岛素的组作为阳性对照。之后同 样地测定摄入到细胞中的2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量。
结果可见，与阴性对照比较，各浓度的茼蒿的乙醇提取组分和茼 蒿的乙酸乙酯提取组分添加组与胰岛素添加组同样，促进了2-脱氧- [1，2-3H(N)]-葡萄糖的摄入。即，表明茼蒿的乙醇提取组分和茼蒿 的乙酸乙酯提取组分具有促进葡萄糖摄入的活性。结果示于图6。图 6中，横轴表示各样品，纵轴表示2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量 (dpm)。
实施例10魁蒿提取组分的制备
向每2g魁蒿干燥粉末中加入40ml乙醇或乙酸乙酯，室温下提 取30分钟，离心分离提取液和残余物。接着对残余物用30ml相同 的溶剂重复2次提取操作。收集所得提取液，用旋转蒸发器浓缩。 最终，将乙醇提取液溶解于5ml二甲基亚砜中，得到魁蒿的乙醇提 取组分。将乙酸乙酯提取液溶解于5ml二甲基亚砜，得到魁蒿的乙 酸乙酯提取组分。
实施例11魁蒿提取组分分化诱导成脂肪细胞的作用
按照实施例2的方法测定由实施例10制备的魁蒿的乙醇提取组 分、魁蒿的乙酸乙酯提取组分分化诱导成脂肪细胞的作用(类胰岛 素活性)。
即，向各孔中添加终浓度分别为0.2％、0.067％或0.022％的魁 蒿乙醇提取组分的二甲基亚砜溶液、或终浓度分别为0.2％、0.067％ 或0.022％的魁蒿乙酸乙酯提取组分的二甲基亚砜溶液，以这些组作 为样品。以添加4μL 5mg/ml胰岛素水溶液的组作为阳性对照，以 添加二甲基亚砜的组作为阴性对照。之后与实施例2的方法同样地 进行培养基和样品的更换，添加样品7天后，测定细胞中的甘油三 酯量。
结果可见，各浓度的魁蒿的乙醇提取组分和魁蒿乙酸乙酯提取组 分添加组诱导了甘油三酯的生合成。即，表明魁蒿的乙醇提取组分 和魁蒿乙酸乙酯提取组分有分化诱导为成熟脂肪细胞的作用。结果 示于图7。图7的横轴表示各样品，纵轴表示甘油三酯的生合成量 (μg/ml)。
实施例12魁蒿提取组分对葡萄糖摄入的促进作用
按照实施例3记载的方法测定当样品刺激成熟脂肪细胞时细胞 内2-脱氧葡萄糖的摄入量，以此作为由实施例10制备的魁蒿的乙醇 提取组分和魁蒿的乙酸乙酯提取组分对葡萄糖摄入的促进作用的评 价，或作为对类胰岛素作用的评价。
即，向各孔中添加终浓度分别为0.2％或0.1％的魁蒿乙醇提取组 分的二甲基亚砜溶液、或终浓度为0.1％的魁蒿乙酸乙酯提取组分的 二甲基亚砜溶液，以这些组作为样品。以未添加样品的组作为阴性 对照，以添加终浓度为1μg/ml的胰岛素的组作为阳性对照。之后同 样地测定摄入到细胞中的2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量。
结果可见，与阴性对照比较，各浓度的魁蒿的乙醇提取组分和魁 蒿的乙酸乙酯提取组分添加组与胰岛素添加组同样，促进了2-脱氧- [1，2-3H(N)]-葡萄糖的摄入。即，表明魁蒿的乙醇提取组分和魁蒿 的乙酸乙酯提取组分具有促进葡萄糖摄入的活性。结果示于图8。图 8中，横轴表示各样品，纵轴表示2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量 (dpm)。
实施例13木立芦荟提取组分的制备
向每2g木立芦荟干燥粉末中加入40ml乙醇或乙酸乙酯，室温 下提取30分钟，离心分离提取液和残余物。接着对残余物用30ml 相同的溶剂重复2次提取操作。收集所得提取液，用旋转蒸发器浓 缩。最终，将乙醇提取液溶解于5ml二甲基亚砜中，得到木立芦荟 的乙醇提取组分。将乙酸乙酯提取液溶解于5ml二甲基亚砜，得到 木立芦荟的乙酸乙酯提取组分。
实施例14木立芦荟提取组分对葡萄糖摄入的促进作用
按照实施例3记载的方法测定当样品(下述木立芦荟提取组分) 刺激成熟脂肪细胞时细胞内2-脱氧葡萄糖的摄入量，以此作为由实 施例13制备的木立芦荟的乙醇提取组分和木立芦荟的乙酸乙酯提取 组分对葡萄糖摄入的促进作用的评价，或作为对类胰岛素作用的评 价。
即，向各孔中添加终浓度为0.05％的木立芦荟乙醇提取组分的二 甲基亚砜溶液、或终浓度为0.05％的木立芦荟乙酸乙酯提取组分的二 甲基亚砜溶液，以这些组作为样品。以未添加样品的组作为阴性对 照，以添加终浓度为1μg/ml的胰岛素的组作为阳性对照。之后同样 地测定摄入到细胞中的2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量。
结果可见，与阴性对照比较，木立芦荟的乙醇提取组分和木立芦 荟的乙酸乙酯提取组分添加组与胰岛素添加组同样，促进了2-脱氧- [1，2-3H(N)]-葡萄糖的摄入。即，表明木立芦荟的乙醇提取组分和 木立芦荟的乙酸乙酯提取组分具有促进葡萄糖摄入的活性。
实施例15水蓼提取组分的制备
向每2g水蓼干燥粉末中加入40ml蒸馏水、乙醇或乙酸乙酯， 提取30分钟，离心分离提取液和残余物。接着对残余物用30ml相 同的溶剂重复2次提取操作。水提在60℃进行，乙醇提取、乙酸乙 酯提取在室温下进行。收集所得提取液，用旋转蒸发器浓缩。最终， 将水提取液溶解于10ml蒸馏水，得到水蓼的水提取组分。将乙醇提 取液溶解于5ml二甲基亚砜，得到水蓼的乙醇提取组分。将乙酸乙 酯提取液溶解于5ml二甲基亚砜，得到水蓼的乙酸乙酯提取组分。
实施例16水蓼提取组分分化诱导成脂肪细胞的作用
按照实施例2的方法测定由实施例15制备的水蓼的水提取组分 分化诱导成脂肪细胞的作用(类胰岛素活性)。
即，向各孔中添加终浓度分别为0.2％或0.1％的水蓼水提取组分 水溶液，以这些组作为样品。以添加4μL 5mg/ml胰岛素水溶液的 组作为阳性对照，以添加二甲基亚砜的组作为阴性对照。之后与实 施例2的方法同样地进行培养基和样品的更换，添加样品7天后， 测定细胞中的甘油三酯量。
结果可见，各浓度的水蓼水提取组分添加组诱导了甘油三酯的生 合成。即，表明水蓼的水提取组分有分化诱导为成熟脂肪细胞的作 用。
实施例17水蓼提取组分对葡萄糖摄入的促进作用
按照实施例3记载的方法测定当样品(下述水蓼提取组分)刺激 成熟脂肪细胞时细胞内2-脱氧葡萄糖的摄入量，以此作为由实施例 15制备的水蓼的乙醇提取组分和水蓼的乙酸乙酯提取组分对葡萄糖 摄入的促进作用的评价，或作为对类胰岛素作用的评价。
即，向各孔中添加终浓度分别为0.025％、0.0125％或0.0063％ 的水蓼乙醇提取组分的二甲基亚砜溶液、或终浓度为0.008％的水蓼 乙酸乙酯提取组分的二甲基亚砜溶液，以这些组作为样品。以未添 加样品的组作为阴性对照，以添加终浓度为1μg/ml的胰岛素的组作 为阳性对照。另外，还设定添加胰岛素的组和同时添加水蓼乙醇提 取组分的二甲基亚砜溶液的组(短时间处理)。即，设定代替胰岛 素添加终浓度为0.03％、0.01％或0.003％的水蓼乙醇提取组分的二 甲基亚砜溶液的组。之后同样地测定摄入到细胞中的2-脱氧-[1，2-3H (N)]-葡萄糖量。
结果可见，与阴性对照比较，各浓度的水蓼的乙醇提取组分、水 蓼的乙酸乙酯提取组分添加组以及与胰岛素同时添加了各浓度水蓼 乙醇提取组分的组与胰岛素添加组同样，促进了2-脱氧-[1，2-3H(N)]- 葡萄糖的摄入。即，表明水蓼的乙醇提取组分和水蓼的乙酸乙酯提 取组分具有促进葡萄糖摄入的活性。另外，水蓼的乙醇提取组分即 使经过短时间处理，也具有促进葡萄糖摄入的活性。这些结果示于 图9。图9中，横轴表示各样品，纵轴表示2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡 萄糖量(dpm)。
实施例18水蓼的乙醇提取组分和胰岛素对葡萄糖摄入的协同 促进作用
按照实施例17的方法的一部分，测定当样品(下述水蓼提取组 分和胰岛素)刺激成熟脂肪细胞时细胞内2-脱氧葡萄糖的摄入量， 以此作为由实施例15制备的水蓼的乙醇提取组分和低浓度胰岛素对 葡萄糖摄入的协同促进作用的评价。成熟脂肪细胞的制备按照实施 例3的方法进行。
培养结束后，去掉培养基，用含有0.1％(w/v)牛血清白蛋白的 达尔伯克改良伊格尔培养基洗涤细胞2次，然后在5％二氧化碳存在 下，在37℃培养一夜。培养一夜后，用赫佩斯缓冲盐溶液(140mM NaCl、5mM KCl、2.5mM MgSO4、1mM CaCl2、20mM HEPES- Na(pH 7.4))洗涤细胞2次，添加0.9ml相同缓冲液，37℃培养 45分钟。接着，添加水蓼乙醇提取组分，使终浓度为0.013％，再添 加胰岛素使终浓度为0.01μg/ml，培养30分钟。此时，在未添加水 蓼乙醇提取组分的孔中添加胰岛素，使终浓度为0.01μg/ml，和在未 添加胰岛素的孔中添加水蓼乙醇提取组分，使终浓度为0.013％，以 此作为对照。另外，以未添加样品的组作为阴性对照。之后，与实 施例3的方法同样地测定摄入到细胞中的2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄 糖量。
结果可见，与阴性对照相比较，水蓼乙醇提取组分添加组与胰岛 素添加组同样，促进了2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖的摄入，但同时 添加了胰岛素的组与胰岛素单独添加组和水蓼乙醇提取组分单独添 加组中的任一组相比，均确认促进了葡萄糖的摄入。即，表明同时 添加水蓼乙醇提取组分和胰岛素，具有协同增大促进葡萄糖摄入活 性的作用。结果示于图10。图10中，横轴表示各样品，纵轴表示2- 脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量(dpm)。
实施例19松胞菌素B阻断水蓼乙醇提取组分对葡萄糖摄入的促 进作用
对于葡萄糖转运蛋白阻断剂——松胞菌素B是否阻断实施例15 得到的水蓼乙醇提取组分对葡萄糖摄入的促进作用进行试验，按照 实施例17的方法，就松胞菌素B对当样品刺激成熟脂肪细胞时细胞 内2-脱氧葡萄糖的摄入的影响进行试验。
即，以添加了终浓度为0.05％的水蓼乙醇提取组分的二甲基亚砜 溶液的组(短时间处理)作为样品。以未添加样品的组作为阴性对 照，以添加终浓度为1μg/ml的胰岛素的组作为阳性对照。在各组中， 设定在添加胰岛素或样品的同时添加终浓度为40μM的松胞菌素B (Nacalai Tesque公司制、10435-81)的添加组。之后同样地测定摄 入到细胞中的2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量。
结果可见，与阴性对照比较，水蓼乙醇提取组分添加组与胰岛素 添加组同样，促进了2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖的摄入，但各组因 添加松胞菌素B而使2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖的摄入几乎完全被 阻断。即，表明水蓼乙醇提取组分促进葡萄糖摄入的活性与胰岛素 同样，是经由葡萄糖转运蛋白进行的。结果示于图11。图11中，横 轴表示各样品，纵轴表示2-脱氧-[1，2-3H(N)]-葡萄糖量(dpm)
产业实用性
本发明提供伴随胰岛素水平或胰岛素应答异常的疾病的治疗用 或预防用药物、食品、饮料或饲料，其特征在于，含有来自选自(a) 椴树科、(b)姜科、(c)菊科、(d)百合科和(e)蓼科中的至少一 种植物的处理物作为有效成分。
该药物可有效用作糖尿病或肥胖症等伴随胰岛素水平或胰岛素 应答异常的疾病的治疗药物或预防药物。另外，该食品或饮料通过 作为日常饮料食品摄取，可改善伴随胰岛素水平或胰岛素应答异常 的疾病的症状等。因此，含有来自上述各种植物的处理物的本发明 的饮料食品为功能性饮料食品，通过其类胰岛素作用，有效维持生 物体的稳态。本发明还提供含有来自上述各种植物的处理物的类胰 岛素作用剂，该类胰岛素作用剂用于胰岛素的功能研究、与胰岛素 相关的疾病的药物筛选。本发明也提供含有来自上述各种植物的处 理物的细胞摄入葡萄糖促进剂，该葡萄糖摄入促进剂用于在治疗或 预防中需要促进细胞摄入葡萄糖作用的疾病的治疗或预防，用于制 造该疾病的治疗或预防用食品、饮料或饲料，用于筛选需要促进葡 萄糖摄入作用的疾病的药物。本发明也提供含有来自上述各种植物 的处理物的分化诱导成脂肪细胞的制剂，该分化诱导剂用于在治疗 或预防中需要分化诱导为脂肪细胞作用的疾病的治疗或预防，用于 制造该疾病的治疗或预防用食品、饮料或饲料，用于筛选需要该分 化诱导作用的疾病的药物。