一种水青冈属植物组培的培养基及其培养方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711406837.6 (22)申请日 2017.12.22 (71)申请人 绵阳师范学院 地址 621000 四川省绵阳市高新区绵兴西 路166号 (72)发明人 胡进耀 蒋炜 别鹏飞 向莉 王虹 马月琴 (74)专利代理机构 北京众合诚成知识产权代理 有限公司 11246 代理人 夏艳 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称 一种水青冈属植物组培的培养基及其培养 方法 (57)摘要 本发明属于植物组培技术领域， 公开了一种 水青冈。

2、属植物组培的培养基及其培养方法， 一年 中取材时期是： 4月份； 启动培养的培养基： 叶， MS +2， 4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖25g/L； 茎， MS +2， 4-D 1.0mg/L+6-BA1.5mg/L+蔗糖30g/L； 对愈 伤组织的生长有促进作用的糖源为： 蔗糖30g/L 和食用白糖20g/L； 愈伤组织分化的培养基： MS+ 6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L； 生根的培 养基： 1/2MS+NAA1.5mg/L+蔗糖30g/L。 本发明筛 选出了短期内能培养出水青冈组培苗的培养基， 且可靠性高。 权利要求书1页 说明书6页 附。

3、图1页 CN 107969340 A 2018.05.01 CN 107969340 A 1.一种水青冈属植物组培的培养基， 其特征在于， 所述水青冈属植物组培的培养基包 括： 取材时期是： 4月份； 启动培养基： 叶， MS+2， 4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖25g/L； 茎， MS+2， 4-D 1.0mg/L+ 6-BA1.5mg/L+蔗糖30g/L； 对愈伤组织的生长的糖源为： 蔗糖30g/L和食用白糖20g/L； 愈伤组织分化的培养基： MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L； 生根的培养基： 1/2MS+NAA1.5mg/L+蔗糖3。

4、0g/L。 2.一种如权利要求1所述水青冈属植物组培的培养基的水青冈属植物的培养方法， 其 特征在于， 所述水青冈属植物的培养方法包括以下步骤： 步骤一， 水青冈属植物材料取材， 流水冲洗， 在无菌条件下用7075酒精表面消毒 30s； 在无菌条件下先用70酒精浸润30s， 用0.2HgCl2+吐温80消毒7min， 再用无菌水冲 洗8次； 步骤二， 培养基pH值为5.86.0； 步骤三， 叶片切成5mm2大的小块， 叶背面接触培养基接种在培养基上； 将茎段切成1 2cm长的小节接种在培养基上； 每个培养基接种2个外植体进行启动培养； 步骤四， 将愈伤组织转移到分化培养基上培养； 步骤五， 将。

5、仅有茎叶的祖培苗转移到生根培养基中， 进行后期继代培养。 3.如权利要求2所述的的培养基的水青冈属植物的培养方法， 其特征在于， 所述步骤一 中流水冲洗1h后， 用去污粉浸泡10min， 流水冲洗10min。 4.如权利要求2所述的的培养基的水青冈属植物的培养方法， 其特征在于， 所述步骤二 中培养箱条件为： 温度252， 空气湿度为4070， 光照时间12h/d， 光照强度为2000 3000lux。 5.如权利要求2所述的的培养基的水青冈属植物的培养方法， 其特征在于， 所述步骤三 中叶片和茎段愈伤组织的诱导分别需10d和16d。 6.一种利用权利要求1所述水青冈属植物组培的培养基培养的水。

6、青冈属植物。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107969340 A 2 一种水青冈属植物组培的培养基及其培养方法 技术领域 0001 本发明属于植物组培技术领域， 尤其涉及一种水青冈属植物组培的培养基及其培 养方法。 背景技术 0002 目前， 我国水青冈木材， 广泛用于装饰板、 贴面板、 地板、 墙板、 胶合板、 家具和建筑 材等， 同时还是很好的油料树种。 在林业生产上， 一方面由于水土流失、 环境污染日趋严重， 引致森林衰竭； 另一方面人为对森林资源过度采伐， 这些都造成了水青冈属植物数量急剧 减少。 水青冈属植物的木材多为珍贵木材， 由于历史的原因和传统的生产习惯， 目前，。

7、 以水 青冈属植物为原来的产品， 在国际、 国内市场供不应求， 除了精加工方面还存在问题外， 主 要原因是现存资源贫乏， 不利于产业化生产， 所以加速水青冈属植物的繁殖， 一方面可促进 我国创汇林业的发展， 另一方面可改善生态环境， 有助于可持续林业的形成和发展。 在生产 上， 水青冈属常用种子繁殖。 利用种子繁殖会使实生苗群体内存在遗传分化， 实生繁殖分化 大， 种苗生产成为该科植物产业开发的瓶颈。 为了选育生长一致性较好的种苗， 对生物量大 和精油含量高的优良单株进行繁殖显得十分必要。 0003 综上所述， 现有技术存在的问题是： 由于水青冈属植物具有较高的经济价值， 目前 被广泛开发利用。

8、， 造成资源贫乏， 在市场上供不应求； 种子繁殖发芽率低， 自然发芽率不足 3， 人工处理， 发芽率仅30； 种子繁殖遗传分化大， 不能保持母株优良性状， 且种苗生长 一致性差。 发明内容 0004 针对现有技术存在的问题， 本发明提供了一种水青冈属植物组培的培养基及其培 养方法。 0005 本发明是这样实现的， 一种水青冈属植物组培的培养基， 所述水青冈属植物组培 的培养基包括： 取材时期是： 4月份； 0006 启动培养基： 叶， MS+2， 4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖25g/L； 茎， MS+2， 4-D 1.0mg/L+6-BA1.5mg/L+蔗糖30g/L； 。

9、0007 对愈伤组织的生长的糖源为： 蔗糖30g/L和食用白糖20g/L； 0008 愈伤组织分化的培养基： MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L； 0009 生根的培养基： 1/2MS+NAA1.5mg/L+蔗糖30g/L。 0010 本发明的另一目的在于提供一种所述水青冈属植物组培的培养基的水青冈属植 物的培养方法， 所述水青冈属植物的培养方法包括以下步骤： 0011 步骤一， 水青冈属植物材料取材， 流水冲洗， 在无菌条件下用7075酒精表面 消毒30s； 在无菌条件下先用70酒精浸润30s， 用0.2HgCl2+吐温80消毒7min， 再用无菌 水冲洗8次。

10、； 0012 步骤二， 培养基pH值为5.86.0； 说 明 书 1/6 页 3 CN 107969340 A 3 0013 步骤三， 叶片切成5mm2大的小块， 叶背面接触培养基接种在培养基上； 将茎段切成 12cm长的小节接种在培养基上； 每个培养基接种2个外植体进行启动培养； 0014 步骤四， 将愈伤组织转移到分化培养基上培养； 0015 步骤五， 将仅有茎叶的祖培苗转移到生根培养基中， 进行后期继代培养。 0016 进一步， 所述步骤一中流水冲洗1h后， 用去污粉浸泡10min， 流水冲洗10min。 0017 进一步， 所述步骤二中培养箱条件为： 温度252， 空气湿度为4070，。

11、 光照 时间12h/d， 光照强度为20003000lux。 0018 进一步， 所述步骤三中叶片和茎段愈伤组织的诱导分别需10d和16d。 0019 本发明的另一目的在于提供一种利用所述水青冈属植物组培的培养基培养的水 青冈属植物。 0020 本发明消毒后茎段存活率可以达到54， 叶存活率达到80。 诱导后叶片和茎段 成愈率分别为86.0和75.5， 所需时间分别是10d和16d。 分化培养20d后， 愈伤组织开始 有褐变现象， 但也有肉眼可见的绿色芽点。 生根培养30天即可成苗， 可以进行炼苗移栽。 整 个培养期共3个月左右。 后期培养可以通过反复培养、 分离愈伤组织， 然后通过分化培养和。

12、 生根培养， 产生大量组培苗。 理论上， 只要设备、 资金充足， 可以无限增殖。 0021 本发明利用组织培养技术繁殖苗木， 不受季节、 时间的影响， 可大大提高繁殖系数 和工作效率， 进行规模化和商业化生产； 利用微型繁殖所得的材料建立采种园， 迅速获得大 量优质枝条； 微型繁殖材料的低温保存不仅节约空间， 一旦有需要即可恢复生长， 扩大繁 殖； 利用微型繁殖技术还能获得高度一致同时具有良好表型的群体， 可获得无病毒苗木， 在 种质资源保存和加速良种化进程等方面具有十分重要的意义。 同时组织培养是生物技术的 一个平台， 已经成为现代植物科隆技术中必不可少的环节。 0022 本发明采用单因子试。

13、验和正交试验， 通过培养基营养条件对巴山水青冈愈伤组织 诱导及植株再生的影响， 用生长诱导值来综合评估愈伤组织诱导及生长过程中的情况， 能 在短期内准确筛选出适宜培养基， 且可靠性高。 附图说明 0023 图1是本发明实施例提供的水青冈属植物组培的培养基的培养方法流程图。 具体实施方式 0024 为了使本发明的目的、 技术方案及优点更加清楚明白， 以下结合实施例， 对本发明 进行进一步详细说明。 应当理解， 此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明， 并不用于 限定本发明。 0025 组培技术以其繁殖系数高、 效率高、 速度快和遗传性状一致而倍受科研和生产单 位的青睐。 通过组织培养和其他常规。

14、育苗技术紧密结合， 实现水青冈属植物苗木快速繁殖， 更快解决大面积造林苗木缺乏问题， 这无疑是一条很好的出路。 0026 下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。 0027 本发明实施例提供的水青冈属植物组培的培养基包括： 一年中最佳的取材时期 是： 4月份； 启动培养的培养基： 叶， MS+2， 4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖25g/L； 茎， MS+2， 4- D 1.0mg/L+6-BA1.5mg/L+蔗糖30g/L； 对愈伤组织的生长有促进作用的糖源为： 蔗糖30g/L 说 明 书 2/6 页 4 CN 107969340 A 4 和食用白糖20g/L； 愈伤组。

15、织分化的培养基： MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L； 生根 的培养基： 1/2MS+NAA1.5mg/L+蔗糖30g/L。 0028 如图1所示， 本发明实施例提供的水青冈属植物组培的培养基的培养方法包括以 下步骤： 0029 S101： 材料预处理， 流水冲洗约1h后， 用去污粉浸泡10min， 流水冲洗10min， 在无菌 条件下用7075酒精表面消毒30s； 在无菌条件下先用70酒精浸润30s， 用0.2 HgCl2+吐温80消毒7min， 再用无菌水冲洗8次左右； 0030 S102： 培养条件， 培养基pH值为5.86.0； 培养箱条件为： 温度25。

16、2， 空气湿度 为4070， 光照时间12h/d， 光照强度为20003000lux； 0031 S103： 愈伤组织的诱导， 将叶片切成约5mm2大的小块， 叶背面接触培养基接种在培 养基上； 将茎段切成12mm长的小节接种在培养基上； 每个培养基接种2个外植体进行启动 培养； 培养基配方最佳配方为： 叶， MS+2， 4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖25g/L； 茎， MS+2， 4- D 1.0mg/L+6-BA1.5mg/L+蔗糖30g/L； 叶片和茎段愈伤组织的诱导分别只需10d和16d； 0032 S104： 愈伤组织的分化， 将愈伤组织转移到分化培养基上培养， 。

17、愈伤组织分化的最 佳配方： MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L； 接种后20d， 培养基中的愈伤组织开始有 褐变现象， 但也有肉眼可见的绿色芽点， 绿色芽点再经过一段时间的培养可以分化成无根 组培苗； 0033 S105： 生根培养， 将仅有茎叶的祖培苗转移到生根培养基中。 生根的最佳配方： 1/ 2MS+NAA1.5mg/L+蔗糖30g/L； 30d后， 生根率达到80.95根的质量也较好， 表现为芽的生根 数、 根较细、 较长。 且后期继代培养时， 能较长时期保持生活力。 0034 下面结合试验对本发明的应用原理作进一步的描述。 0035 一、 材料来源 0。

18、036 本试验所用材料为2006年10月采自四川南江米苍山国家森林公园的野生巴山水 青冈幼苗。 0037 二、 方法 0038 1材料预处理 0039 流水冲洗约1h后， 用去污粉浸泡10min， 然后流水冲洗10min， 在无菌条件下用70 75酒精表面消毒30s， 经过不同消毒方式消毒后(见表1)， 再立即用无菌水冲洗8次左 右， 将叶片切成约5mm2大的小块， 叶背面接触培养基接种在培养基上； 将茎段切成12cm长 的小节接种在培养基上。 每个培养基接种2个外植体进行启动培养。 0040 表1外植体消毒的不同方式 说 明 书 3/6 页 5 CN 107969340 A 5 0041 0。

19、042 2培养条件 0043 培养基pH值为5.86.0。 培养箱条件为： 温度252， 空气湿度为4070， 光 照时间12h/d， 光照强度为20003000lux。 0044 3试验设计 0045 1)愈伤组织的诱导 0046 单因子试验： 生长素(2， 4-D、 NAA)、 碳源(蔗糖、 白糖、 葡萄糖)、 TDZ对外植体愈伤组 织诱导的影响， 基本培养基类型(MS、 B5、 WPM)对外植体愈伤组织诱导的影响(见表2)。 L9 (34)正交试验： 不同种类激素浓度及配比对愈伤组织启动培养的影响(见表3、 表4)。 0047 2)愈伤组织的分化 0048 先采用单因子试验， 细胞分裂素。

20、(6-BA、 KT、 TDZ)、 有机附加物质对愈伤组织分化的 影响(见表2)； 再采用正交设计， 激素及碳源浓度配比对愈伤组织分化的影响(见表5)。 0049 表2不同营养条件对愈伤组织诱导及分化影响的单因子试验 说 明 书 4/6 页 6 CN 107969340 A 6 0050 0051 表3茎段愈伤组织启动培养激素配比的正交设计因素水平表 0052 0053 注： 基本培养基为MS。 0054 表4叶片愈伤组织启动培养激素配比的正交设计因素水平表 0055 0056 注： 基本培养基为MS。 0057 表5不同激素浓度及配比对愈伤组织芽分化的正交设计因素水平表 说 明 书 5/6 页 7 CN 107969340 A 7 0058 0059 注： 基本培养基为MS。 0060 3)生根培养 0061 不同NAA浓度(0.5mg/L、 1.0mg/L、 1.5mg/L、 2.0mg/L)对芽生根的效应。 0062 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精 神和原则之内所作的任何修改、 等同替换和改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 6/6 页 8 CN 107969340 A 8 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 9 CN 107969340 A 9 。