所属技术领域
本发明涉及治疗高血脂症的新的组合物，特别是含有阿昔莫司和辛伐他汀及 药用辅料的组合物。
背景技术
随着医药科学的不断发展，人们认识到胆固醇、脂肪等含量过高是发生心血 管疾病的基本病因，高血脂是发生冠心病及高血压的主要危险因素。因此，人们 开始把血脂调节药的开发作为防治心血管疾病的重点。自20世纪80年代末起， 降血脂药物大量推出，其中他汀类药物受到人们好评，其临床疗效之佳是其它各 类调节血脂药物所不能相比的。十多年来，几个国际大规模冠心病防治试验的完 成，证实他汀类药物可以降低冠心病的发病率和死亡率，而且能使已经形成的动 脉粥样硬化斑块发展减缓，甚至减退，从而打破了冠心病不可逆转的传统观念， 由“他汀”引发的一场血脂革命正在全球兴起。目前，医药界对调脂药在防治心血 管疾病方面的作用充满信心，调脂疗法将成为21世纪预防心血管疾病的主要方 法。
辛伐他汀(Simvastatin)是国内外进行了广泛研究并已在多国上市的羟甲戊 二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，本品本身无活性，口服吸收后的水解 产物在体内竞争性地抑制胆固醇合成过程中的限速酶羟甲戊二酰辅酶A (HMG-CoA)还原酶，使胆固醇的合成减少，也使低密度脂蛋白受体合成增加， 主要作用部位在肝脏，结果使血胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平降低，中度降 低血清甘油三酯水平和增高血清高密度脂蛋白水平，由此可有效预防动脉粥样硬 化和冠心病。辛伐他汀一般耐受性良好，大部分不良反应轻微且为一过性。在临 床对照试验中只有＜2％的病人因不良反应而停药。在已有对照组的临床试验中， 与药物有关的发生率≥1％的不良反应有：腹痛、便秘、胃肠胀气，发生率在 0.5％～0.9％的不良反应有疲乏、无力、头痛，发现肌病的报告很罕见。
阿昔莫司(Acipimox)是一种人工合成的烟酸衍生物，能抑制脂肪组织的 分解，减少游离脂肪酸自脂肪组织释放，从而降低甘油三酯(TG)在肝脏中的 合成，并通过抑制极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的合成， 使血清中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的浓度下降。本品还可抑制肝脏脂 肪酶的活性，减少高密度脂蛋白(HDL)的分解。该药口服吸收迅速，药后2 小时内血药浓度即达峰值，半衰期为2小时。该药不与血浆蛋白结合，不被代谢， 主要以原形经尿排出。在临床上，阿昔莫司可有效治疗高甘油三酯症(IV型)、 高胆固醇血症(IIa型)及高甘油三酯合并高胆固醇血症(IIb型)，是一种安全、 有效、耐受性好的调血脂药。。
目前，该领域的研究趋势是将两种不同作用机制的调血脂药制成复方制剂， 从而使降脂作用更加全面，同时还可发挥协同作用，增强疗效，减少毒副作用。
美国专利US5260305A公开了HMG-CoA还原酶抑制剂普伐他汀和烟酸及其 衍生物的组合物，具体公开了规格为普伐他汀5mg、10mg、20mg、40mg和阿 昔莫司750mg的组合物的制备，但没有公开其有益效果及最佳配比的药理实验 数据。
中国专利申请CN1425374A公开了阿昔莫司和洛伐他汀组合物，公开的比例 是阿昔莫司和洛伐他汀的重量比为25～50∶1，优选的比例是25∶1或37.5∶1，但没 有公开阿昔莫司和辛伐他汀复方的最佳配比及相应药理实验数据。
发明目的
本发明的目的是通过一系列科学的筛选实验，提供一种新的治疗高脂血症的 药物组合物，其优点是作用全面和增强、毒副作用低和使用方便。本药物含有特 定比例的阿昔莫司和辛伐他汀，由于两药作用机制不同，组成组合物后降脂作用 将更加全面，并且两药合用有协同作用，其降脂作用明显优于相同剂量的单方； 此外，通过合理选择组合物中辛伐他汀的用量，使组合物在有效降低血脂水平的 同时又无明显的毒副作用，同时本组合物一日只需用药一次，用药方便，这将大 大提高患者的顺应性。
发明内容
本发明的组合物由阿昔莫司和辛伐他汀以及药用辅料组成，其中阿昔莫司和 辛伐他汀的重量比为10～80∶1，优选的比例的是10～40∶1，进一步优选的比例的 是15∶1。该组合物的药物制剂的剂型，包括片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸等 固体制剂，可以按照本领域公知的一般制剂方法制备，阿昔莫司含量相当于在将 组合物给药时约200～750mg的日剂量，辛伐他汀含量相当于5～80mg的日剂量， 其中优选辛伐他汀含量相当于10～30mg的日剂量。
本发明的组合物在制成固体制剂，如片剂或胶囊时，为达到持久的治疗效果， 优选地将有效量的阿昔莫司制成缓释部分，再与有效量的辛伐他汀共同制成缓释 制剂，如缓释片、缓释胶囊等。相应地，可药用的辅料包括稀释剂，如淀粉、乳 糖、甘露醇、预胶化淀粉、糊精、微晶纤维素；崩解剂，如羧甲基淀粉钠、羟丙 基淀粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠；缓释剂，如乙基纤维素、羟丙 基甲基纤维素-4M、羟丙基甲基纤维素-15M；优特奇RS-100、RL100、RS30D、 RL30D、NE30D，以及苏丽丝(Surelease，乙基纤维素的水分散体)粘合剂，如 聚乙烯吡咯烷酮，交联聚乙烯吡咯烷酮，润滑剂，如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅 胶等。
同Kos Pharmaceuticals公司研制开发的缓释烟酸和洛伐他汀组成的复方制 剂相比，本发明药物组合物用阿昔莫司代替烟酸，阿昔莫司适用范围与烟酸相似， 但是与烟酸相比具有如下优点：①无初效反应，半衰期较长；②抗脂肪分解作用 的持续时间较长，效能较强，无非酯化脂肪酸的反跳现象；③能明显改善葡萄糖 耐受性，能降低空腹血糖15％左右，不与口服降糖药发生交互作用，故能用于 糖尿病患者；④不引起尿酸代谢变化，可用于高尿酸血症患者；⑤出现肝脏转氨 酶高者极少；⑥服药后有面部潮红及皮肤搔痒症状者仅6％左右，明显少于服烟 酸治疗者，且多数在服药几天后逐渐自行减轻或消失，一般不影响患者继续治疗。 另外，用辛伐他汀取代洛伐他汀，可以极大地减小后者带来的不良反应如肝毒性 和肌毒性。
本发明的组合物通过药理方面的研究工作，表明当采用本发明的组合物，尤 其是采用优选的配比时，与单独应用有效量的阿昔莫司或辛伐他汀相比，本发明 的组合物给出令人吃惊的更好效果，同时毒性没有增加，因而安全剂量范围大， 疗效持续时间长，综合效果好，使用方便。本发明的组合物可以每日1～2次给药， 优选为每日1次。
具体实施方式
现通过如下实例进一步说明本发明的内容，但本发明的应用范围不限于下列 实例。
实例1
a、 阿昔莫司 200g
空白丸芯 250g
7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 200g
制备工艺：将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包 衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，喷枪压力(CYL)3bar，雾化压力(CAP1) 0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm， 喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。
b、 辛伐他汀 5g
空白丸芯 30g
7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 30g
制备工艺：将辛伐他汀过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒 包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒 入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵6％，转盘转速160rpm，喷7％PVP 溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。
c、将a和b制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与 辛伐他汀的重量分别为200mg和5mg进行填充，即可。
实例2
a、 阿昔莫司 200g
乳糖 30g
羧甲基淀粉钠 30g
微晶纤维素 18g
6％PVP的无水乙醇溶液 100g
硬脂酸镁 2g
制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过80 目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加 入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入 处方量的硬脂酸镁。
b、 辛伐他汀 10g
羟丙基纤维素 15g
预胶化淀粉 10g
6％PVP的无水乙醇溶液 30g
山榆酸甘油酯 1g
制备工艺：辛伐他汀过100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过80目筛， 称取处方量的辛伐他汀和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入6％PVP的 无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的 山榆酸甘油酯。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片。
实例3
a、 阿昔莫司 200g
乳糖 30g
羧甲基淀粉钠 30g
微晶纤维素 18g
6％PVP的无水乙醇溶液 100g
硬脂酸镁 2g
制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过80 目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加 入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入 处方量的硬脂酸镁。
b、 辛伐他汀 20g
羟丙基纤维素 30g
预胶化淀粉 20g
6％PVP的无水乙醇溶液 50g
山榆酸甘油酯 2g
制备工艺：辛伐他汀过100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过80目筛， 称取处方量的辛伐他汀和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入6％PVP的 无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的 山榆酸甘油酯。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片。
实例4
a、 阿昔莫司 300g
羟丙基甲基纤维素-4M 40g
微晶纤维素 30g
8％PVP的无水乙醇溶液 150g
硬酯酸镁 2g
制备工艺：阿昔莫司过100目筛，羟丙基纤维素-4M、微晶纤维素过80目 筛，称取处方量的阿昔莫司和羟丙基纤维素-4M、微晶纤维素混合均匀，加入 8％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处 方量的硬脂酸镁。
b、 辛伐他汀 20g
羧甲基纤维素钠 30g
乳糖 20g
6％PVP的95％乙醇溶液 50g
硬酯酸镁 2g
制备工艺：辛伐他汀过100目筛，羧甲基纤维素钠、乳糖过80目筛，称取 处方量的辛伐他汀和羧甲基纤维素钠、乳糖混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇 溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。
实例5
a、 阿昔莫司 300g
空白丸芯 250g
7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 200g
制备工艺：将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒 包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒 入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷7％PVP 溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。
b、 a中制得的含阿昔莫司小丸
Surelease 90g
滑石粉 1g
纯水 50g
制备工艺：将a中制得的含阿昔莫司小丸倒入转盘，开造粒包衣机，入风 压力1.0bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：1.5bar，蠕泵5％，转盘转速 180rpm，喷入Surelease的纯水溶液。包衣结束，50℃烘干，出料。
c、按照实例5中b的要求制得辛伐他汀小丸，与本例b中制得的阿昔莫司 小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与辛伐他汀的重量分 别为300mg和10mg进行填充，即可。
实例6
a、 阿昔莫司 300g
空白丸芯 300g
7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 200g
制备工艺：将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒 包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入 空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷入7％PVP 溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。
b、 a中制得的含阿昔莫司小丸
乙基纤维素 40g
硬脂酸 70g
聚乙二醇-6000 6g
滑石粉 12g
95％乙醇 1000g
制备工艺：将a中制得的含阿昔莫司小丸倒入下料斗中。开造粒包衣机， 入风温度30℃，入风压力0.5bar，入风温度30℃， CYL3bar，CAP1 1.0bar， 蠕泵6％，转盘转速175rpm，喷入乙基纤维素、硬脂酸和聚乙二醇-6000的95％ 乙醇溶液。包衣结束，50℃烘干，出料。
c、 辛伐他汀 5g
空白丸芯 30g
7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 30g
制备工艺：将辛伐他汀过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中，开造粒包 衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入 空白丸芯，造粒。下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速120rpm，喷入7％PVP 溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。
d、将b与c制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫 司与辛伐他汀的重量分别为300mg和5mg进行填充，即可。
实例7
a、 阿昔莫司 400g
甘露醇 10g
乳糖 40g
微晶纤维素 20g
6％PVP的95％乙醇溶液 120g
硬酯酸镁 2g
制备工艺：阿昔莫司过100目筛，甘露醇、乳糖、微晶纤维素过80目筛， 称取处方量的阿昔莫司和甘露醇、乳糖、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP的 95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬 脂酸镁。
b、 辛伐他汀 5g
预胶化淀粉 50g
甘露醇 50g
乳糖 40g
6％PVP的95％乙醇溶液 100g
微粉硅胶 5g
制备工艺：辛伐他汀过100目筛，预胶化淀粉、甘露醇、乳糖过80目筛， 称取处方量的辛伐他汀和预胶化淀粉、甘露醇、乳糖混合均匀，加入6％PVP的 95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬 脂酸镁。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。
实例8
a、 阿昔莫司 400g
乳糖 30g
羟丙基甲基纤维素-15M 20g
8％PVP的95％乙醇溶液 150g
山榆酸甘油酯 2g
制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羟丙基甲基纤维素-15M过80目筛， 称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羟丙基甲基纤维素-15M混合均匀，加入8％PVP 的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量 的山榆酸甘油酯。
b、 辛伐他汀 10g
羟丙基纤维素 25g
糊精 20g
6％PVP的95％乙醇溶液 50g
滑石粉 2g
制备工艺：辛伐他汀过100目筛，羟丙基纤维素、糊精过80目筛，称取处 方量的辛伐他汀和羟丙基纤维素、糊精混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液 适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的滑石粉。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。
实例9阿昔莫司和辛伐他汀复方治疗大鼠高血脂症的复方筛选
摘要：
本试验的目的在于通过筛选来确定毒性低、作用强、使用方便的阿昔莫司和 辛伐他汀复方制剂的组成。采用高脂饲料诱发大鼠高脂血症模型，给模型大鼠连 续灌服阿昔莫司(100～400mg/kg)和(或)辛伐他汀(2.5～30mg/kg)14天。结 果发现，阿昔莫司和辛伐他汀伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显的治疗 作用，降脂效果与两种药物的剂量相关，阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀10mg/kg、 阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀20mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀 20mg/kg联合用药组效果显著，可显著降低大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密 度脂蛋白胆固醇水平，显著升高高密度脂蛋白胆固醇水平，并对上述指标均表现 出协同作用。其中阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀20mg/kg联合用药组效果最显 著，优选阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀20mg/kg组成的复方。在本实验剂量范 围内，联合用药组对与肝毒性和肌毒性相关的血清酶活性无明显影响。
1试验目的
通过筛选确定阿昔莫司和辛伐他汀复方制剂的组成，以达到复方制剂毒副 作用低、作用全面、效果增强、使用方便之目的。
2受试药物
2.1烟酸衍生物
药品名称：阿昔莫司(Acipimox)
批 号：0207002
纯 度：大于99.7％
生产单位：鲁南制药股份有限公司
保存条件：阴凉干燥处保存，有效期1年半。
配制方法：临用前用1％羧甲基纤维素钠(CMC)混匀，配成试验所需浓度。
2.2他汀类药物
药品名称：辛伐他汀(Simvastatin)
批 号：021002
纯 度：大于99.0％
生产单位：浙江瑞邦大药厂
保存条件：阴凉干燥处保存，有效期2年。
配制方法：临用前用1％CMC混匀，配成试验所需浓度。
3动物
3.1品系和来源
Wistar大鼠，军事医学科学院医学实验动物中心繁殖，实验动物质量许可证 号为医动字D01-3039。
3.2体重和性别
年龄9周～10周，体重180-220g，雄性。
3.3饲养条件
动物实验室空气定时排风、光照良好，常温。每笼饲养5只动物，饲以本院 实验动物中心专门为大鼠配制的膨化饲料，自由饮水。动物实验条件合格证号为 医动字D01-2051。试验开始前，观察动物进食、活动及粪便等1周，选择健康 动物进入试验。
4大鼠高脂血症模型制备[1]
大鼠高脂血症模型采用高脂饲料致高脂血症法。高脂饲料配方如下：基础 饲料86.3％、胆固醇3％、猪油10％、甲基硫氧嘧啶0.2％、猪胆盐0.5％，保证 各成分混合均匀。连续2周。给药期间隔天给予高脂饲料。
5阿昔莫司和辛伐他汀对正常大鼠血脂水平的影响
5.1剂量设置依据
临床上阿昔莫司的剂量为250m/g次(按人体重60kg计算，上述剂量为 4.2mg/kg)，2～3次/日，每日量最大不超过1200mg[2]。按体表面积为单位的剂量 等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为50mg/kg/day。再结合文献 报道[3]，将本试验中阿昔莫司的剂量设定为100、200、300、400mg/kg。
临床上辛伐他汀的剂量为10mg/次(按人体重60kg计算，上述剂量为 0.17mg/kg)，1次/日，每日量最大不超过80mg[4]。按体表面积为单位的剂量等 效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为0.85mg/kg。文献报道，在高 脂饲料导致的动物高脂血症模型上辛伐他汀5mg/kg能使血清中低密度脂蛋白胆 固醇和甘油三酯水平显著降低[5、6、7]，将本试验中辛伐他汀的剂量设定为2.5、5、 10、20、30mg/kg。
5.2组别设置
依据上述剂量设置，按血清总胆固醇水平均衡原则，将正常动物随机分为： (1)正常对照组；(2)阿昔莫司100mg/kg组；(3)阿昔莫司200mg/g组；(4) 阿昔莫司300mg/kg组；(5)阿昔莫司400mg/kg组；(6)辛伐他汀2.5mg/kg组； (7)辛伐他汀5mg/kg组；(8)辛伐他汀10mg/kg组；(9)辛伐他汀20mg/kg 组；(10)辛伐他汀30mg/kg组；(11)阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀5mg/kg 组；(12)阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀10mg/kg组；(13)阿昔莫司200mg/kg 和辛伐他汀20mg/kg组；(14)阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀5mg/kg组；(15) 阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀10mg/kg组；(16)阿昔莫司300mg/kg和辛伐 他汀20mg/kg组；(17)阿昔莫司400mg/kg和辛伐他汀5mg/kg组；(18)阿昔 莫司400mg/kg和辛伐他汀10mg/kg组。每组10只。
5.3给药
临床拟用的给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药，连续灌胃4天。灌 胃均在动物进食后进行。每天1次。给药体积为0.3ml/100g体重。
5.4检测指标
血清化学指标包括总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸 激酶(CK)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂 蛋白胆固醇(HDL-L)。其中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶(CK) 检测试剂采用北京中生生物工程高技术公司产品，用SABA/18全自动生 化分析仪测定；其余试剂采用日本罗氏试剂公司产品，用日立7020自 动生化分析仪测定。测定方法参照试剂说明书取血样前禁食16小时。
6阿昔莫司和辛伐他汀对高脂血症大鼠血脂水平的影响
6.1剂量设置依据
同5.1正常大鼠实验。
6.2组别设置
依据上述剂量设置，按血清总胆固醇水平均衡原则，将模型大鼠随机分为； (1)正常对照组；(2)模型对照组；(3)阿昔莫司100mg/kg组；(4)阿昔莫司 200mg/kg组；(5)阿昔莫司300mg/kg组；(6)阿昔莫司400mg/kg组；(7)辛 伐他汀2.5mg/kg组；(8)辛伐他汀5mg/kg组；(9)辛伐他汀10mg/kg组；(10) 辛伐他汀20mg/kg组；(11)辛伐他汀30mg/kg组；(12)阿昔莫司200mg/kg和 辛伐他汀5mg/kg组；(13)阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀10mg/kg组；(14) 阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀20mg/kg组；(15)阿昔莫司300mg/kg和辛伐 他汀5mg/kg组；(16)阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀10mg/kg组；(17)阿昔 莫司300mg/kg和辛伐他汀20mg/kg组；(18)阿昔莫司400mg/kg和辛伐他汀 5mg/kg组；(19)阿昔莫司400mg/kg和辛伐他汀10mg/kg组。每组10只。
6.3给药
临床拟用的给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药，连续灌胃14天。 灌胃均在动物进食后进行。每天1次。给药体积为0.3ml/100g体重。
6.4检测指标
同5.4正常大鼠实验。
7阿昔莫司和辛伐他汀复方不同组分相互影响试验
7.1组别设置
从疗效较显著的阿昔莫司和辛伐他汀剂量组中，确定阿昔莫司和辛伐他汀复 方的剂量：(1)正常对照组；(2)模型对照组；(3)阿昔莫司200mg/kg；(4) 阿昔莫司300mg/kg；(5)辛伐他汀10mg/kg；(6)辛伐他汀20mg/kg；(7)阿昔 莫司200mg/kg和辛伐他汀10mg/kg组复方组；(8)阿昔莫司200mg/kg和辛伐 他汀20mg/kg组复方组；(9)阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀20mg/kg组复方组。 每组10只。分组前测定血清总胆固醇水平，按均衡原则随机分组。每组10只。
7.2给药和检测指标
同前述5.3和5.4。
8试验结果
8.1阿昔莫司和辛伐他汀对正常大鼠血脂水平的影响
正常大鼠给药4天后，阿昔莫司、辛伐他汀和联合用药组的总胆固醇和低密 度脂蛋白胆固醇均有所降低，高密度脂蛋白胆固醇水平升高，给药后血清甘油三 酯略有下降，但无统计学差异，见表1。
表1 阿昔莫司和辛伐他汀及复方对正常大鼠血脂的影响 组别 血清总胆固醇 (mmol/L) 血清甘油三酯 (mmol/L) 低密度脂蛋白胆固醇 (mmol/L) 高密度脂蛋白胆固醇 (mmol/L) 正常对照组 阿昔莫司100mg/kg 阿昔莫司200mg/kg 阿昔莫司300mg/kg 阿昔莫司400mg/kg 辛伐他汀2.5mg/kg 辛伐他汀5mg/kg 辛伐他汀10mg/kg 辛伐他汀20mg/kg 辛伐他汀30mg/kg 阿200+辛5mg/kg 阿200+辛10mg/kg 阿200+辛20mg/kg 阿300+辛5mg/kg 阿300+辛10mg/kg 阿300+辛20mg/kg 阿400+辛5mg/kg 阿400+辛10mg/kg 1.68±0.20 1.52±0.31 1.56±0.26 1.41±0.23* 1.44±0.27* 1.53±0.27 1.47±0.25 1.44±0.26* 1.46±0.24* 1.41±0.29* 1.45±0.32 1.38±0.24** 1.35±0.26** 1.42±0.28* 1.41±0.30* 1.31±0.22** 1.49±0.27 1.44±0.30 0.69±0.26 0.64±0.27 0.62±0.26 0.6±0.31 0.59±0.25 0.68±0.25 0.61±0.23 0.62±0.32 0.65±0.24 0.57±0.26 0.67±0.28 0.54±0.25 0.51±0.27 0.57±0.16 0.52±0.31 0.58±0.27 0.62±0.30 0.57±0.30 0.3±0.15 0.27±0.14 0.25±0.15 0.2±0.11 0.25±0.14 0.28±0.15 0.25±0.19 0.21±0.13 0.21±0.09 0.22±0.11 0.24±0.12 0.23±0.09 0.17±0.06* 0.21±0.09 0.20±0.09 0.16±0.10* 0.25±0.14 0.22±0.12 0.92±0.13 0.98±0.17 0.95±0.17 1.04±0.20 1.12±0.19* 0.91±0.10 0.95±0.12 0.96±0.11 1.05±0.13 1.01±0.16 1.03±0.17 1.12±0.20* 1.16±0.29* 1.05±0.21 1.07±0.26 1.15±0.27* 1.11±0.18* 1.16±0.24*
注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
8.2阿昔莫司和辛伐他汀对模型大鼠血脂水平的影响
大鼠饲以高脂饲料14天后分组给药。阿昔莫司的剂量范围为100～ 400mg/kg，辛伐他汀的剂量范围为2.5～30mg/kg，组成联合用药组。给药14天 后，与模型对照组比较，阿昔莫司和辛伐他汀各剂量组血清总胆固醇、甘油三酯、 低密度脂蛋白胆固醇均有不同程度的下降，高密度脂蛋白胆固醇水平均有所升 高，见表2。
与模型对照组相比，阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀10mg/kg、阿昔莫司 200mg/kg和辛伐他汀20mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀20mg/kg三个联 合用药组大鼠的血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平均显著降低， 高密度脂蛋白胆固醇水平均显著升高。与相同剂量的阿昔莫司或辛伐他汀单方组 比较，上述三个联合用药组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平 均显著降低，高密度脂蛋白胆固醇水平均显著升高，并对上述指标均表现出协同 作用。其中以阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀20mg/kg联合用药组效果最为显著。
表2 阿昔莫司和辛伐他汀及复方对模型大鼠血脂的影响 组别 血清总胆固醇 (mmol/L) 血清甘油三酯 (mmol/L) 低密度脂蛋白胆固醇 (mmol/L) 高密度脂蛋白胆固醇 (mmol/L) 正常对照组 模型对照组 阿昔莫司100mg/kg 阿昔莫司200mg/kg 阿昔莫司300mg/kg 阿昔莫司400mg/kg 辛伐他汀2.5mg/kg 辛伐他汀5mg/kg 辛伐他汀10mg/kg 辛伐他汀20mg/kg 辛伐他汀30mg/kg 阿200+辛5mg/kg 阿200+辛10mg/kg 阿200+辛20mg/kg 阿300+辛5mg/kg 阿300+辛10mg/kg 阿300+辛20mg/kg 阿400+辛5mg/kg 阿400+辛10mg/kg 1.58±0.25 11.75±2.01### 11.30±1.60 10.32±0.76* 9.44±1.51** 8.58±0.81*** 11.65±1.91 10.14±1.04* 8.70±1.61** 7.85±0.90*** 7.93±0.95*** 9.02±0.79* 6.33±0.59*** 5.30±1.30*** 8.36±0.99*** 6.19±0.41*** 4.16±1.41*** 7.25±0.67*** 6.65±0.77*** 0.43±0.08 2.19±0.52### 2.25±0.67 2.00±1.44 1.67±0.51* 1.54±0.35** 2.23±0.37 2.12±0.45 1.75±0.40* 1.64±0.21** 1.27±0.60** 2.05±0.49 1.41±0.23*** 1.15±0.25*** 1.72±0.33* 1.58±0.29** 0.88±0.26*** 1.62±0.29** 1.58±0.65* 0.13±0.08 8.06±1.17### 7.88±1.27 7.15±0.59* 7.1 2±0.70* 6.75±1.36* 7.96±1.21 7.63±0.44 6.89±0.50** 6.79±0.66** 6.71±0.48** 7.07±0.70* 5.51±0.70*** 5.31±0.64*** 6.93±0.46* 5.61±0.46*** 5.22±1.31*** 6.95±1.20* 5.65±0.47*** 1.05±0.12 3.34±0.55### 3.42±0.57 3.47±0.58 3.89±0.63 3.95±0.65* 3.38±0.36 3.41±0.58 3.46±0.65 3.69±0.59 3.94±0.64* 3.54±0.45 3.94±0.64* 3.93±0.59* 3.68±0.70 3.82±0.56 4.36±0.80** 3.67±0.67 3.93±0.43*
注：与正常对照组比较，###P＜0.001；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
8.3阿昔莫司和辛伐他汀对模型大鼠血清酶活性的影响
本实验通过测定用药14天后高血脂模型大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和肌 酸激酶的水平，来评价阿昔莫司和辛伐他汀及复方对模型大鼠肝脏功能和骨骼肌 组织的影响。结果表明，与模型对照组相比，阿昔莫司各剂量(10～400mg/kg) 组模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶水平均无显著差异(P＞0.05)；辛 伐他汀各剂量(2.5～30mg/kg)组模型大鼠血清中上述指标亦未见显著差异 (P＞0.05)，辛伐他汀和阿昔莫司各联合用药组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和血 清肌酸激酶均无明显变化(P＞0.05)，见表3。
表3 阿昔莫司和辛伐他汀及复方对模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸激
酶的影响 组别 丙氨酸氨基转移酶 (nmol.s-1/L) 肌酸激酶 (U/L) 正常对照组 模型对照组 阿昔莫司100mg/kg 阿昔莫司200mg/kg 阿昔莫司300mg/kg 阿昔莫司400mg/kg 辛伐他汀2.5mg/kg 辛伐他汀5mg/kg 辛伐他汀10mg/kg 辛伐他汀20mg/kg 辛伐他汀30mg/kg 阿200+辛5mg/kg 阿200+辛10mg/kg 阿200+辛20mg/kg 阿300+辛5mg/kg 阿300+辛10mg/kg 阿300+辛20mg/kg 阿400+辛5mg/kg 阿400+辛10mg/kg 604.6±107.2 678.1±140.4 619.6±110.4 649.3±78.3 660.2±130.1 647.6±116.8 642.3±121.6 586.8±121.9 617.6±104.0 651.4±104.5 672.0±151.6 659.7±118.1 636.9±107.3 640.3±134.8 655.7±119.2 644.0±124.7 608.1±111.5 625.5±145.2 653.3±129.7 365.3±248.6 327.7±105.5 361.4±100.9 324.8±102.7 336.1±118.3 357.7±122.8 364.6±105.9 370.7±131.2 372.2±100.1 382.2±103.8 376.8±122.8 376.1±108.1 365.3±119.4 360.3±112.1 371.4±113.5 378.1±107.7 360.6±112.6 368.6±108.4 369.9±116.2
8.4阿昔莫司和辛伐他汀复方中不同组分相互影响试验
高血脂模型大鼠连续给药14天后，与相同剂量的单方相比，阿昔莫司和辛 伐他汀联合用药组均能明显降低模型大鼠血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂 蛋白胆固醇水平以及明显升高高密度脂蛋白胆固醇水平，见表4。
综合分析，与模型对照组相比，阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀10mg/kg、 阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀20mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀 20mg/kg联合用药组效果显著，可显著降低大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密 度脂蛋白胆固醇水平，显著升高高密度脂蛋白胆固醇水平。与相同剂量的阿昔莫 司或辛伐他汀单方组比较，上述三个联合用药组血清总胆固醇、甘油三酯、低密 度脂蛋白胆固醇水平均显著降低，高密度脂蛋白胆固醇水平均显著升高，三个联 合用药组对上述指标均表现出协同作用。其中阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀 20mg/kg联合用药组效果最显著，因此优选阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀 20mg/kg组成的复方。
表4 阿昔莫司和辛伐他汀复方中不同组分治疗大鼠高脂血症的效果 组别 血清总胆固醇 (mmol/L) 血清甘油三酯 (mmol/L) 低密度脂蛋白胆固醇 (mmol／L) 高密度脂蛋白胆固醇 (mmol/L) 正常对照组 模型对照组 阿昔莫司200mg/kg 阿昔莫司300mg/kg 辛伐他汀10mg/kg 辛伐他汀20mg/kg 阿200+辛10mg/kg 阿200+辛20mg/kg 阿300+辛20mg/kg 1.84±0.40 11.56±2.53### 9.51±1.48* 8.74±1.48** 8.88±1.16** 7.72±1.47*** 5.85±1.53***，！！！，@@@ 4.45±1.40***，！！！，&&& 3.14±1.41***，^^^，&&& 0.66±0.24 2.28±0.62### 1.95±0.63 1.69±0.57* 1.71±0.52* 1.43±O.64** 1.15±0.39***，！！，@ 0.82±0.26***，！！！，& 0.52±0.16***，^^^，&&& O.24±0.08 8.18±1.43### 7.05±0.72* 6.87±1.54* 6.85±0.46* 6.61±O.74** 5.17±1.56***，！！，@@ 4.92±0.78***，！！！，&&& 4.71±1.33***，^^，&& 1.00±0.28 2.83±0.55### 3.24±0.47 3.34±0.67* 3.48±0.73* 3.60±0.58** 4.22±0.42***，！！！，@ 4.35±0.55***，！！！，& 4.49±0.42***，^^^，&&
注：与正常对照组比较，###P＜0.001，##P＜0.01，#P＜0.05
与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
与阿昔莫司200mg/kg组比较，！！！P＜0.001，！！P＜0.01
与辛伐他汀10mg/kg组比较，@P＜0.05，@@P＜0.01，@@@P＜0.001
与阿昔莫司300mg/kg组比较，^^^P＜0.001
与辛伐他汀20mg/kg组比较，&&&P＜0.001，&P＜0.05
9结论
阿昔莫司和辛伐他汀伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显的治疗作 用，降脂效果与两种药物的剂量相关，阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀10mg/kg、 阿昔莫司200mg/kg和辛伐他汀20mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀 20mg/kg联合用药组效果显著，可显著降低大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密 度脂蛋白胆固醇水平，显著升高高密度脂蛋白胆固醇水平，并对上述指标均表现 出协同作用。其中阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀20mg/kg联合用药组效果最显 著，优选阿昔莫司300mg/kg和辛伐他汀20mg/kg组成的复方。在本实验剂量范 围内，联合用药组对血清酶活性无明显影响，初步表明对肝和横纹肌无明显的毒 性作用。此外，目前阿昔莫司单方的临床用法为3次/日，本实验证明，阿昔莫 司1次/日仍有显著的降血脂作用，且毒性小，这为阿昔莫司和辛伐他汀组成复 方后一日仅用药1次提供了可靠的实验依据，这必将大大方便患者服用，提高患 者的顺应性。
参考文献
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