技术领域
本发明涉及饲料添加剂领域，尤其是涉及含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂制备方法。
技术背景
鳖甲是鳖科动物鳖的背甲。全年均可捕捉,以秋、冬二季为多，捕捉后杀死，置沸水中烫至背甲上的硬皮能剥落时，取出，剥取背甲，除去残肉，晒干。分布于等地。具有滋阴潜阳，退热除蒸,软坚散结之功效。常用于阴虚发热，骨蒸劳热,阴虚阳亢,头晕目眩，虚风内动，经闭，癥瘕，久疟疟母。呈椭圆形或卵圆形，背面隆起，长10-15cm，宽9-14cm。外表面黑褐色或墨绿色，略有光泽，具细网状皱纹及灰黄色或灰白色斑点，中间有一条纵棱，两侧各有左右对称的横凹纹8条，外皮脱落后，可见锯齿状嵌接缝。内表面类白色，中部有突起的脊椎骨，颈骨向内卷曲，两侧各有肋骨8条，伸出边缘，质坚硬，气微腥，味淡。
现有技术如授权公众号为CN 101502297 B的中国发明专利，公开了一种饲料添加剂，该添加剂是由鹰嘴豆豆荚、鹰嘴豆叶子、鹰嘴豆茎和稀释剂制成。该饲料添加剂中含有丰富的微量元素，虽然在配合饲料中的添加量极微，但效果十分显著：它可以提高饲料的利用率；改善饲料的适口性；促进畜禽的生长发育；改善饲料畜产品的品质；合理利用饲料资源。但是该发明方法中的饲料添加剂仅仅是鹰嘴豆的植株部分制成，无法起到增强动物免疫能力的作用，因此无法增强动物的体质。
发明内容
本发明的目的在于提供含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂制备方法，制备方法简单易行，饲料添加剂可以大大增强饲养动物的免疫能力，增强机体体质与活力，同时可以有效提高饲料的适口性与诱食性，促进动物摄食。
本发明方法中所用到的微生物及其所购买企业为：枯草芽孢杆菌、酵母菌，沧州莱森生物技术有限公司；鼠李糖乳杆菌，青州市向日葵生物科技有限公司。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂制备方法，包括：酶解、纯化、制备文蛤糖肽、制备鱼油微胶囊、复配饲料添加剂，具体包括以下步骤：
酶解：取鳖甲脱脂蛋白粉按照料液比1:7.5-8.0溶解于蒸馏水中，加入鳖甲蛋白粉重量3.5-4.8%的复合蛋白酶酶解，复合蛋白酶为重量比为2-4:1的胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的混合物，加入复合蛋白酶重量5.8-10.5‰的（2R，4R）-戊二醇，在pH为7.5-8.2、温度为50-55℃条件下，酶解45-60分钟，酶解结束后煮沸灭酶得酶解液，将酶解液在4500-5000r/min离心机上离心10-20分钟取上清液；以复合蛋白酶可以将鳖甲蛋白酶解为活性多肽，酶解更彻底，酶解体系中加入（2R，4R）-戊二醇可以降低酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，提高反应效率，加快酶解反应的进行，降低了时间成本；
纯化：用直径为50-100mm、孔径为0.35-0.45mm的醋酸纤维微孔滤膜对酶解步骤后的上清液进行抽滤，除去酶解液中的较粗颗粒；然后用超滤装置让酶解液依次通过30KD、10KD、3KD的超滤膜，收集>30KD、10-30KD、3-10KD、<3KD的四个分子段的酶解液，分别低温干燥后置于-25~-30℃低温冷藏；通过抽滤与超滤，将酶解产物中的寡肽与多肽分隔成四个不同的分子段，不仅避免了鳖甲活性多肽的浪费，还实现了鳖甲的高效率利用；
制备文蛤糖肽：取文蛤经吐沙、去壳、冻干、粉碎后获得文蛤干粉，按料液比1:12-15溶于蒸馏水中并匀浆，在2-4℃、2500-3000r/min离心25-30分钟，收集上清，再经中空纤维超滤柱超滤，超滤柱截留分子量为8×104，超滤收集小分子量超滤液，于-15~-18℃保存；在超滤液中加入2-3倍体积的氯仿及1-4倍体积的正丁醇，萃取3-4次；将萃取液透析、离心、真空干燥后得到文蛤糖肽粗品，粗品水溶后离心取上清，再以0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L氯化钠溶液梯度洗脱，得文蛤糖肽；所得文蛤糖肽的纯度超过96％，糖和蛋白质含量各54％和42％，文蛤糖肽具有优异的抗肿瘤活性、抑菌抗菌活性，可以有效增强机体的免疫能力，增强机体体质与活力；
制备鱼油微胶囊：称取1.5-1.8:1的低黏度辛烯基琥珀酸淀粉酯和麦芽糊精，用蒸馏水配成干物质计30-33%的悬浮液，沸水浴15-20分钟后冷却至室温；按芯壁比1:3.5-3.8将鱼油倒入悬浮液中，先用高速分散均质机在15000-18000r/min下初步混匀5-8分钟，后经高压均质机在30-60MPa均质压力下将混合液乳化均质10-20分钟；在进风温度190-200℃温度下将制备的乳液立即进行喷雾干燥，进料流量为230-232mL/h，喷雾压力0.2-0.5MPa，出风温度为82-85℃；喷雾干燥粉末收集于密封袋中，在1-4℃下避光储存；乳液的均质乳化，粒径小且分布峰集中，乳液均匀性、稳定性适中，包埋效果好；鱼油本身具有鱼腥味，不溶于水，所含的不饱和脂肪酸遇氧、光和热后极易氧化酸败，将鱼油微胶囊化不仅能隔离环境中的氧、光和热，抑制鱼油氧化，延长货架期，还便于鱼油的使用、运输和贮藏，并且确保了鱼油的保健功能不丧失；
复配饲料添加剂：称取10-12份鳖甲活性多肽、8-10份文蛤糖肽、15-20份鱼油微胶囊、5-6份卵黄抗体、2-3份丁酸钠、2-5份胡萝卜素、1-2份磺胺粉、4-6份酶制剂、5-8份微生物制剂，混合均匀后粉碎，过120-160目筛得含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂；将饲料添加剂与常规饲料混配后饲喂给养殖动物，饲料添加剂能够有效改善机体的脂肪酸组成，消除机体多余的自由基，有效增强机体的免疫能力，增强机体体质与活力，同时增强饲料的适口性与诱食性，有效促进动物摄食，加快养殖速率，降低养殖成本。
作为优选，酶制剂为果胶酶或葡聚糖酶或植酸酶或淀粉酶或高活性木聚糖酶或纤维素酶或中性蛋白酶；提高鱼类对饲料养分的消化吸收利用率，降低饵料系数，降低水体富营养化，减少水质污染，降低鱼类的发病率。
作为优选，微生物制剂为重量比为2-3:2-6:1的枯草芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌、酵母菌的混合菌剂；微生物制剂能够有效改善机体肠道的微生态结构，促进机体对饲料的消化吸收，增强机体体质，降低料肉比，降低饲养成本。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）以复合蛋白酶可以将鳖甲蛋白酶解为活性多肽，酶解更彻底，酶解体系中加入（2R，4R）-戊二醇可以降低酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，提高反应效率，加快酶解反应的进行，降低了时间成本；2）将饲料添加剂与常规饲料混配后饲喂给养殖动物，饲料添加剂能够有效改善机体的脂肪酸组成，消除机体多余的自由基，有效增强机体的免疫能力，增强机体体质与活力，同时增强饲料的适口性与诱食性，有效促进动物摄食，加快养殖速率，降低养殖成本。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂制备方法，包括以下步骤：
1）取鳖甲脱脂蛋白粉按照料液比1:7.5溶解于蒸馏水中，加入鳖甲蛋白粉重量3.5%的复合蛋白酶酶解，复合蛋白酶为重量比为2:1的胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的混合物，加入复合蛋白酶重量5.8‰的（2R，4R）-戊二醇，在pH为7.5、温度为50℃条件下，酶解45分钟，酶解结束后煮沸灭酶得酶解液，将酶解液在4500r/min离心机上离心10分钟取上清液；2）用直径为50mm、孔径为0.35mm的醋酸纤维微孔滤膜对酶解步骤后的上清液进行抽滤，除去酶解液中的较粗颗粒；然后用超滤装置让酶解液依次通过30KD、10KD、3KD的超滤膜，收集>30KD、10-30KD、3-10KD、<3KD的四个分子段的酶解液，分别低温干燥后置于-25℃低温冷藏；3）取文蛤经吐沙、去壳、冻干、粉碎后获得文蛤干粉，按料液比1:12溶于蒸馏水中并匀浆，在2℃、2500r/min离心25分钟，收集上清，再经中空纤维超滤柱超滤，超滤柱截留分子量为8×104，超滤收集小分子量超滤液，于-15℃保存；在超滤液中加入2倍体积的氯仿及1倍体积的正丁醇，萃取3次；将萃取液透析、离心、真空干燥后得到文蛤糖肽粗品，粗品水溶后离心取上清，再以0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L氯化钠溶液梯度洗脱，得文蛤糖肽；4）称取1.5:1的低黏度辛烯基琥珀酸淀粉酯和麦芽糊精，用蒸馏水配成干物质计30%的悬浮液，沸水浴15分钟后冷却至室温；按芯壁比1:3.5将鱼油倒入悬浮液中，先用高速分散均质机在15000r/min下初步混匀5分钟，后经高压均质机在30MPa均质压力下将混合液乳化均质10分钟；在进风温度190℃温度下将制备的乳液立即进行喷雾干燥，进料流量为230mL/h，喷雾压力0.2MPa，出风温度为82℃；喷雾干燥粉末收集于密封袋中，在1℃下避光储存；5）称取10份鳖甲活性多肽、8份文蛤糖肽、15份鱼油微胶囊、5份卵黄抗体、2份丁酸钠、2份胡萝卜素、1份磺胺粉、1份果胶酶、1份葡聚糖酶、1份植酸酶、1份淀粉酶、2份枯草芽孢杆菌、2份鼠李糖乳杆菌、1份酵母菌，混合均匀后粉碎，过120目筛得含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂。
实施例2：
含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂制备方法，包括以下步骤：
1）酶解：取鳖甲脱脂蛋白粉按照料液比1:8.0溶解于蒸馏水中，加入鳖甲蛋白粉重量4.8%的复合蛋白酶酶解，复合蛋白酶为重量比为4:1的胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的混合物，加入复合蛋白酶重量10.5‰的（2R，4R）-戊二醇，在pH为8.2、温度为55℃条件下，酶解60分钟，酶解结束后煮沸灭酶得酶解液，将酶解液在5000r/min离心机上离心20分钟取上清液；以复合蛋白酶可以将鳖甲蛋白酶解为活性多肽，酶解更彻底，酶解体系中加入（2R，4R）-戊二醇可以降低酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，提高反应效率，加快酶解反应的进行，降低了时间成本；
2）纯化：用直径为100mm、孔径为0.45mm的醋酸纤维微孔滤膜对酶解步骤后的上清液进行抽滤，除去酶解液中的较粗颗粒；然后用超滤装置让酶解液依次通过30KD、10KD、3KD的超滤膜，收集>30KD、10-30KD、3-10KD、<3KD的四个分子段的酶解液，分别低温干燥后置于-30℃低温冷藏；通过抽滤与超滤，将酶解产物中的寡肽与多肽分隔成四个不同的分子段，不仅避免了鳖甲活性多肽的浪费，还实现了鳖甲的高效率利用；
3）制备文蛤糖肽：取文蛤经吐沙、去壳、冻干、粉碎后获得文蛤干粉，按料液比1:15溶于蒸馏水中并匀浆，在4℃、3000r/min离心30分钟，收集上清，再经中空纤维超滤柱超滤，超滤柱截留分子量为8×104，超滤收集小分子量超滤液，于-18℃保存；在超滤液中加入3倍体积的氯仿及4倍体积的正丁醇，萃取4次；将萃取液透析、离心、真空干燥后得到文蛤糖肽粗品，粗品水溶后离心取上清，再以0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L氯化钠溶液梯度洗脱，得文蛤糖肽；所得文蛤糖肽的纯度超过96％，糖和蛋白质含量各54％和42％，文蛤糖肽具有优异的抗肿瘤活性、抑菌抗菌活性，可以有效增强机体的免疫能力，增强机体体质与活力；
4）制备鱼油微胶囊：称取1.8:1的低黏度辛烯基琥珀酸淀粉酯和麦芽糊精，用蒸馏水配成干物质计33%的悬浮液，沸水浴20分钟后冷却至室温；按芯壁比1:3.8将鱼油倒入悬浮液中，先用高速分散均质机在18000r/min下初步混匀8分钟，后经高压均质机在60MPa均质压力下将混合液乳化均质20分钟；在进风温度200℃温度下将制备的乳液立即进行喷雾干燥，进料流量为232mL/h，喷雾压力0.5MPa，出风温度为85℃；喷雾干燥粉末收集于密封袋中，在4℃下避光储存；乳液的均质乳化，粒径小且分布峰集中，乳液均匀性、稳定性适中，包埋效果好；鱼油本身具有鱼腥味，不溶于水，所含的不饱和脂肪酸遇氧、光和热后极易氧化酸败，将鱼油微胶囊化不仅能隔离环境中的氧、光和热，抑制鱼油氧化，延长货架期，还便于鱼油的使用、运输和贮藏，并且确保了鱼油的保健功能不丧失；
5）复配饲料添加剂：称取12份鳖甲活性多肽、10份文蛤糖肽、20份鱼油微胶囊、6份卵黄抗体、3份丁酸钠、5份胡萝卜素、2份磺胺粉、1份果胶酶、1份葡聚糖酶、1份淀粉酶、1份高活性木聚糖酶、1份纤维素酶、1份中性蛋白酶、2.4份枯草芽孢杆菌、4.8份鼠李糖乳杆菌、0.8酵母菌，混合均匀后粉碎，过160目筛得含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂；将饲料添加剂与常规饲料混配后饲喂给养殖动物，饲料添加剂能够有效改善机体的脂肪酸组成，消除机体多余的自由基，有效增强机体的免疫能力，增强机体体质与活力，同时增强饲料的适口性与诱食性，有效促进动物摄食，加快养殖速率，降低养殖成本。
实施例3：
含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂制备方法，包括：酶解、纯化、制备文蛤糖肽、制备鱼油微胶囊、复配饲料添加剂，具体包括以下步骤：
酶解：取鳖甲脱脂蛋白粉按照料液比1:7.6溶解于蒸馏水中，加入鳖甲蛋白粉重量4.0%的复合蛋白酶酶解，复合蛋白酶为重量比为3:1的胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的混合物，加入复合蛋白酶重量6.5‰的（2R，4R）-戊二醇，在pH为7.8、温度为52℃条件下，酶解50分钟，酶解结束后煮沸灭酶得酶解液，将酶解液在4600r/min离心机上离心15分钟取上清液；以复合蛋白酶可以将鳖甲蛋白酶解为活性多肽，酶解更彻底，酶解体系中加入（2R，4R）-戊二醇可以降低酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，提高反应效率，加快酶解反应的进行，降低了时间成本；
纯化：用直径为80mm、孔径为0.40mm的醋酸纤维微孔滤膜对酶解步骤后的上清液进行抽滤，除去酶解液中的较粗颗粒；然后用超滤装置让酶解液依次通过30KD、10KD、3KD的超滤膜，收集>30KD、10-30KD、3-10KD、<3KD的四个分子段的酶解液，分别低温干燥后置于-28℃低温冷藏；通过抽滤与超滤，将酶解产物中的寡肽与多肽分隔成四个不同的分子段，不仅避免了鳖甲活性多肽的浪费，还实现了鳖甲的高效率利用；
制备文蛤糖肽：取文蛤经吐沙、去壳、冻干、粉碎后获得文蛤干粉，按料液比1:14溶于蒸馏水中并匀浆，在3℃、2800r/min离心25分钟，收集上清，再经中空纤维超滤柱超滤，超滤柱截留分子量为8×104，超滤收集小分子量超滤液，于-16℃保存；在超滤液中加入2.5倍体积的氯仿及3倍体积的正丁醇，萃取4次；将萃取液透析、离心、真空干燥后得到文蛤糖肽粗品，粗品水溶后离心取上清，再以0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L氯化钠溶液梯度洗脱，得文蛤糖肽；所得文蛤糖肽的纯度超过96％，糖和蛋白质含量各54％和42％，文蛤糖肽具有优异的抗肿瘤活性、抑菌抗菌活性，可以有效增强机体的免疫能力，增强机体体质与活力；
制备鱼油微胶囊：称取1.6:1的低黏度辛烯基琥珀酸淀粉酯和麦芽糊精，用蒸馏水配成干物质计32%的悬浮液，沸水浴18分钟后冷却至室温；按芯壁比1:3.6将鱼油倒入悬浮液中，先用高速分散均质机在16000r/min下初步混匀6分钟，后经高压均质机在50MPa均质压力下将混合液乳化均质15分钟；在进风温度195℃温度下将制备的乳液立即进行喷雾干燥，进料流量为230mL/h，喷雾压力0.4MPa，出风温度为84℃；喷雾干燥粉末收集于密封袋中，在2℃下避光储存；乳液的均质乳化，粒径小且分布峰集中，乳液均匀性、稳定性适中，包埋效果好；鱼油本身具有鱼腥味，不溶于水，所含的不饱和脂肪酸遇氧、光和热后极易氧化酸败，将鱼油微胶囊化不仅能隔离环境中的氧、光和热，抑制鱼油氧化，延长货架期，还便于鱼油的使用、运输和贮藏，并且确保了鱼油的保健功能不丧失；
复配饲料添加剂：称取10份鳖甲活性多肽、8份文蛤糖肽、16份鱼油微胶囊、5份卵黄抗体、2份丁酸钠、4份胡萝卜素、2份磺胺粉、2份葡聚糖酶、1份植酸酶、1份淀粉酶、1份纤维素酶、1.8份枯草芽孢杆菌、3.6份鼠李糖乳杆菌、0.6份酵母菌，混合均匀后粉碎，过140目筛得含有鳖甲活性多肽的饲料添加剂；将饲料添加剂与常规饲料混配后饲喂给养殖动物，饲料添加剂能够有效改善机体的脂肪酸组成，消除机体多余的自由基，有效增强机体的免疫能力，增强机体体质与活力，同时增强饲料的适口性与诱食性，有效促进动物摄食，加快养殖速率，降低养殖成本。
本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。