一种提高花生中Α‑生育酚含量的方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710662748.1 (22)申请日 2017.08.04 (71)申请人 华南理工大学 地址 510640 广东省广州市天河区五山路 381号 (72)发明人 刘国琴 李淑莹 (74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 代理人 何淑珍 (51)Int.Cl. A23L 25/00(2016.01) (54)发明名称 一种提高花生中-生育酚含量的方法 (57)摘要 本发明公开了一种提高花生中-生育酚含 量的方法。 该方法步骤为： 将花生种子用水清洗，。

2、 沥干后于0.51 .5wt%次氯酸钠溶液中浸泡5 15min消毒， 用水冲洗直至PH值为中性， 加入花生 质量24倍的水， 置于2030避光条件下浸泡4 12h； 于2632、 70100%湿度下避光发芽7天， 每 隔13小时喷淋水一次， 每次喷淋持续12分钟。 将花生芽真空冷冻干燥， 使其水分含量为2 3wt%， 粉碎后过4060目筛， 真空包装置于干燥箱 中保存用于测定。 本发明方法简便、 成本低、 大众 化， 可推广应用； 效果显著， 经处理后花生的- 生育酚含量为178.63g/g DW以上， 提高至少 4.87倍， 具有品种通用性。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 10。

3、7373568 A 2017.11.24 CN 107373568 A 1.一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： （1） 前处理： 将花生种子加入消毒液中浸泡消毒， 再用水反复冲洗直至PH值为中性， 然 后加入水， 进行避光浸泡； （2） 发芽处理： 将步骤 （1） 前处理后的花生种子置于避光条件下发芽， 得花生芽。 2.根据权利要求1所述的一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 步骤 （1） 所述花生种子为粤油13号、 豫花15号和鲁花11号花生种子中的一种以上。 3.根据权利要求1所述的一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 步骤 （1。

4、） 所述消毒液是浓度为0.51.5wt%的次氯酸钠溶液； 所述浸泡消毒的时间为515min。 4.根据权利要求1所述的一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中避光浸泡所用的水为花生种子质量的24倍； 所述避光浸泡的温度为2030， 时间为4 12h。 5.根据权利要求1所述的一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 步骤 （2） 所述发芽的温度为2632。 6.根据权利要求1所述的一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 步骤 （2） 所述发芽的湿度为70100%。 7.根据权利要求1所述的一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 步骤。

5、 （2） 所述发芽期间每隔13小时喷淋蒸馏水一次， 每次喷淋持续12分钟。 8.根据权利要求1所述的一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 步骤 （2） 所述发芽的时间为7天。 9.根据权利要求1所述的一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 将步骤 （2） 所述的花生芽经真空冷冻干燥， 使花生芽水分含量为23 wt%， 再粉碎后过4060目筛， 最后真空包装置于25干燥箱中保存。 10.根据权利要求1所述的一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 其特征在于， 步骤 （2） 所述花生芽中 -生育酚含量高达178.63 g/g DW267.52 g/g DW， 与未发芽花生种。

6、子中 - 生育酚含量相比， 提高了4.875.98倍。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107373568 A 2 一种提高花生中 -生育酚含量的方法 技术领域 0001 本发明涉及提高植物中 -生育酚含量领域， 具体涉及一种提高花生中 -生育酚含 量的方法。 背景技术 0002 维生素E （Vitamin E） 又称生育酚 （tocopherol） ， 是一种天然存在的脂溶性维生 素， 包括生育酚和生育三烯酚两类。 根据甲基的位置和个数又分为 -、 -、 -、 -生育酚及 -、 -、 -、 -生育三烯酚共8种。 其中， -生育酚的生物活性最高 （Kimberly Kline, Ka。

7、rla A. Law son, Wei ping Y u, et al. Vitamin E and CancerJ. Vitamin and Cancer, 2007, 76: 435-461. ） ， 优先被人体吸收利用 （Zingg J M. Vitamin E: An over view of major research directionsJ. Molecular Aspects of Medicine, 2007, 28(5-6): 400-422. ） 。 花生与大豆、 油菜、 向日葵并列为世界四大油料作物， 是我国最大的油料作物和 最重要的经济作物。 据报道， 花生及花生制品。

8、是维生素E的极好来源， 尤其花生油和花生酱。 维生素E是良好的抗氧化剂， 能阻断油脂自由基链式氧化反应， 起到防止和减缓脂质过氧化 自由基对体内生物膜破坏的作用， 延长花生种子寿命， 更能提高花生制品的稳定性。 维生素 E是人体必需营养素， 具有较好的抗衰老、 改善脂质代谢、 软化心血管等生理功能。 与其他维 生素相比， 维生素E独特地具有维持生殖器官机能的作用。 随着对维生素E认识的逐步加深 及其安全性的认可， 维生素E已被广泛用于医药保健、 食品抗氧化剂、 化妆品等领域。 0003 然而， 在植物中提取出来的天然维生素E仍不足以满足营养学及医学方面的需求， 如何提高植物中维生素E （尤其活。

9、性最高的 -生育酚） 含量已成为科研工作者的热点。 通过 基因工程调控维生素E合成相关酶的基因进行培育改良是目前提高植物中维生素E含量的 主要方式及有效方式。 维生素E在植物体的生物合成途径为： 先由莽草酸途径得到尿黑酸 （HGA） ， 由非甲羟戊酸途径得到异戊烯基二磷酸 （PrDP） ， 再由HGA异戊二烯化通过一系列酶 催化合成而得 （Yang W, Cahoon R E, Hunter S C, et al. Vitamin E biosynthesis: functional characterization of the monocot homogentisate eranylger。

10、anyl transferase J. Plant J, 2011, 65(2): 206-217. ） 。 利用基因工程， 可通过上调相关 酶的基因， 如4-羟苯丙酮酸双加氧酶 （Tsegayea Y, Shintania DK, DellaPenna D. Over expression of the enzymes hydroxy phenylpy ruvate dioxygenase in Arabidopsis and its relationship to tocopherol biosynthesis J. Plant Physiol Biochem, 2002, 40: 913。

11、-920. ） ， 提高前体物质HGA的合成水平， 从而提高植物维生素E的总量。 亦可 通过调控维生素E 组分关键酶的基因表达， 如生育酚甲基转移酶 （Hunter S C, Cahoon E B. Enhancing vitamin E in oilseeds: unraveling tocopherol and tocotrienol biosynthesisJ. Lipids, 2007, 42(2): 97-108. ） ， 提高 -生育酚的比例， 从而提高维 生素E的活性。 中国专利申请号为201410744726.6 “一种花生维生素E合成关键基因及应 用” 采用改良的RACE技术。

12、， 克隆分离花生HPPD基因的cDNA序列， 构建超表达载体p35S: AhHPPD， 结果显示转化模式中烟草-生育酚含量增加了2-3倍。 中国专利申请号为 说 明 书 1/4 页 3 CN 107373568 A 3 201510141218.3 “花生维生素E合成相关基因APG1、 APG2在提高植物 -生育酚含量和耐盐 性中的应用” 将花生维生素E合成相关基因APG1、 APG2于花生中超量表达后培育， 结果显示 -生育酚含量分别提高1.74、 1.34倍。 虽然基因工程手段能有效地提高植物中 -生育酚含 量， 但是存在程序繁杂、 成本昂贵、 品种差异性等不少问题。 此外， 基因工程改良。

13、至今仍受争 议而未能普及应用。 0004 近年来， 国内外掀起一股 “芽类食品” 热潮。 芽类食品即指将经过适当发芽的谷物 种子作为原料制成的食品。 不少研究表明， 发芽能提高谷物蛋白的利用率， 降低脂肪含量， 改善功能因子， 提高种子的营养价值。 王琳珍将大豆避光发芽5天， 发现 -生育酚从2.29mg/ 100g DW提高到7.64mg/100g DW， 为本底值3.34倍。（王琳珍. 萌芽强化黄豆芽特殊营养品 质的研究D.华南理工大学,2016. ） 吴凤凤将三个品种糙米避光发芽5天， 发现维生素E比 发芽前提高了46%51%。（吴凤凤. 发芽对糙米主要营养成分、 生理功效和加工特性的影。

14、响 D.江南大学,2013. ） 然而， 目前利用发芽方式提高花生中 -生育酚的文章及专利鲜见报 道。 发明内容 0005 本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种简单、 方便、 成本 低、 大众化的能提高花生中 -生育酚含量的方法。 0006 本发明的目的通过以下技术方案来实现。 0007 一种提高花生中 -生育酚含量的方法， 包括以下步骤： （1） 前处理： 将花生种子加入消毒液中浸泡消毒， 再用水反复冲洗直至PH值为中性， 然 后加入水， 进行避光浸泡； （2） 发芽处理： 将步骤 （1） 前处理后的花生种子置于避光条件下发芽， 得花生芽。 0008 优选的， 步骤 （1）。

15、 所述花生种子为粤油13号、 豫花15号和鲁花11号花生种子中的一 种以上。 0009 优选的， 步骤 （1） 所述消毒液是浓度为0.51.5wt%的次氯酸钠溶液； 所述浸泡消毒 的时间为515min。 0010 优选的， 步骤 （1） 中避光浸泡所用的水为花生种子质量的24倍； 所述避光浸泡的 温度为2030， 时间为412h。 0011 优选的， 步骤 （2） 所述发芽的温度为2632。 0012 优选的， 步骤 （2） 所述发芽的湿度为70100%； 所述发芽期间每隔13小时喷淋蒸馏 水一次， 每次喷淋持续12分钟。 。 0013 进一步优选的， 步骤 （2） 所述发芽的时间为7天。 0。

16、014 优选的， 所述发芽的时间为7天。 0015 优选的， 将步骤 （2） 所述的花生芽真空冷冻干燥， 使花生芽水分含量为23 wt%， 再 高速粉碎后过4060目筛， 真空包装置于25干燥箱中保存。 0016 优选的， 步骤 （2） 所述花生芽的 -生育酚含量高达178.63 g/g DW267.52 g/g DW， 与未发芽花生种子中的 -生育酚含量相比， 提高了4.875.98倍。 0017 优选的， 一种提高花生中 -生育酚含量方法， 该方法具体步骤为： （1） 前处理： 挑选外观饱满、 大小一致、 无霉变的优质新鲜花生种子， 用蒸馏水清洗去除 说 明 书 2/4 页 4 CN 10。

17、7373568 A 4 表面杂质， 沥干后于0.51.5%次氯酸钠溶液浸泡515min进行消毒， 用蒸馏水反复冲洗直至 PH值为中性， 加入花生质量24倍蒸馏水， 置于2030避光条件下浸泡412h； （2） 发芽处理： 于2632、 70100%湿度下避光发芽7天， 每隔13小时喷淋蒸馏水一次， 喷淋持续12分钟； （3） 样品处理及测定： 将花生芽真空冷冻干燥， 使其水分含量为23%， 高速粉碎后过40 60目筛， 真空包装置于25干燥箱保存。 在实验色谱条件下进行高效液相色谱法测定， 利用 -生育酚标准品作为对照， 根据峰面积计算花生芽中的 -生育酚含量。 0018 与现有技术相比， 本。

18、发明具有以下优点和技术效果： 1、 方法简便、 成本低、 大众化， 可推广应用； 2、 效果显著。 经过本方法发芽处理7天的花生 -生育酚含量高达178.63 g/g DW以上， 与未发芽花生种子中 -生育酚含量相比， 提高至少4.87倍。 0019 3、 品种通用性。 本发明已实施用于粤油13号、 豫花15号、 鲁花11号， 皆能有效提高 花生中 -生育酚含量。 附图说明 0020 图1为40 g/mL -生育酚标准品的液相色谱图； 图2为实施例1中粤油13号花生的液相色谱图； 图3为实施例1中粤油13号花生发芽2、 4、 6天的液相色谱对比图。 具体实施方式 0021 以下结合具体实施例对。

19、本发明的实施作进一步说明， 但本发明的实施方式不限于 此。 0022 实施例1 （1） 前处理： 挑选外观饱满、 大小一致、 无霉变的优质新鲜粤油13号花生种子， 用蒸馏水 清洗去除表面杂质， 沥干后置于浓度为1wt%的次氯酸钠溶液中浸泡10min进行消毒， 用蒸馏 水反复冲洗直至PH值为中性， 加入花生质量3倍蒸馏水， 置于25避光条件下浸泡6h； （2） 发芽处理： 将步骤 （1） 处理后的花生置于27、 95%湿度下避光发芽7天， 每隔1小时 喷淋蒸馏水一次， 每次喷淋持续1分钟； （3） 样品处理及测定： 将步骤 （2） 所得花生芽真空冷冻干燥， 使其水分含量为2.74 wt%， 高速。

20、粉碎后过40目筛， 真空包装置于25干燥箱保存。 准确称取2g花生芽粉， 加入10mL正己 烷， 旋涡振荡后超声 （40KHz， 150W） 30min， 在8000rpm下离心15min， 提取过程重复三次， 合并 上清液在40下旋蒸， 用2mL色谱级正己烷复溶。 高效液相色谱测定条件： 色谱柱为反相C18 柱 （150mm 3.9mm， 4 m， WATERS Nova-Pak C18） ； 流动相为纯甲醇； 流速为0.9 mL/min进 行等度洗脱； 检测器为紫外检测器， 检测波长为294 nm； 柱温为40 ； 进样量为10 L。 在此 实验色谱条件下进行高效液相色谱法测定， 利用 -。

21、生育酚标准品作为对照， 根据峰面积计 算花生芽中的 -生育酚含量 （ -生育酚标准品的液相色谱图见图1， 粤油13号样品的液相色 谱图见图2） 。 检测发现， 未发芽花生仁的 -生育酚含量为45.03 g/g DW， 发芽7天后花生芽 的 -生育酚含量为269.23 g/g DW， 提高为本底值5.98倍。 图3为粤油13号花生发芽2、 4、 6天 的液相色谱对比图， 可见 -生育酚对应色谱峰的峰面积显著升高， 即花生芽中 -生育酚含 说 明 书 3/4 页 5 CN 107373568 A 5 量逐渐提高。 0023 实施例2 （1） 前处理： 挑选外观饱满、 大小一致、 无霉变的优质新鲜豫。

22、花15号花生种子， 用蒸馏水 清洗去除表面杂质， 沥干后置于浓度为1.5 wt%的次氯酸钠溶液中浸泡5min进行消毒， 用蒸 馏水反复冲洗直至PH值为中性， 加入花生质量2倍蒸馏水， 置于23避光条件下浸泡12h； （2） 发芽处理： 将步骤 （1） 处理后的花生置于32、 100%湿度下避光发芽7天， 每隔2小时 喷淋蒸馏水一次， 每次喷淋持续2分钟； （3） 样品处理及测定： 将步骤 （2） 所得花生芽真空冷冻干燥， 使其水分含量为2.52 wt%， 高速粉碎后过40目筛， 真空包装置于25干燥箱保存。 花生中 -生育酚含量的测定方法同 实施例1。 检测发现， 未发芽花生仁的 -生育酚含量。

23、为36.68 g/g DW， 发芽7天后花生芽的 - 生育酚含量为178.63 g/g DW， 提高为本底值4.87倍。 0024 实施例3 （1） 前处理： 挑选外观饱满、 大小一致、 无霉变的优质新鲜鲁花11号花生种子， 用蒸馏水 清洗去除表面杂质， 沥干后置于浓度为0.5 wt%的次氯酸钠溶液中浸泡15min进行消毒， 用 蒸馏水反复冲洗直至PH值为中性， 加入花生质量4倍蒸馏水， 置于27避光条件下浸泡4h； （2） 发芽处理： 将步骤 （1） 处理后的花生置于29、 90%湿度下避光发芽7天， 每隔3小时 喷淋蒸馏水一次， 每次喷淋持续2分钟； （3） 样品处理及测定： 将步骤 （2） 所得花生芽真空冷冻干燥， 使其水分含量为2.48 wt%， 高速粉碎后过60目筛， 真空包装置于25干燥箱保存。 花生中 -生育酚含量的测定方法同 实施例1。 检测发现， 未发芽花生仁的 -生育酚含量为50.28 g/g DW， 发芽7天后花生芽的 - 生育酚含量为272.52 g/g DW， 提高为本底值5.42倍。 说 明 书 4/4 页 6 CN 107373568 A 6 图1 图2 说 明 书 附 图 1/2 页 7 CN 107373568 A 7 图3 说 明 书 附 图 2/2 页 8 CN 107373568 A 8 。