含青蒿素及青蒿素类衍生物和BCL2抑制剂的药物组合物及其应用.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102552908 A (43)申请公布日 2012.07.11 CN 102552908 A *CN102552908A* (21)申请号 201010506509.5 (22)申请日 2010.10.12 A61K 45/00(2006.01) A61K 31/366(2006.01) A61K 31/357(2006.01) A61K 31/5377(2006.01) A61K 31/495(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 鼎泓国际投资 ( 香港 ) 有限公司 地址 中国香港九龙尖沙咀广东道 5 号海港 城海洋中心 9 。

2、楼 906 室 (72)发明人 赵镭 (74)专利代理机构 北京邦信阳专利商标代理有 限公司 11012 代理人 黄泽雄 崔华 (54) 发明名称 含青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂 的药物组合物及其应用 (57) 摘要 本发明涉及一种含有青蒿素及青蒿素类衍生 物与 Bcl-2 抑制剂的药物组合物及其在制备治疗 结肠癌、 肝癌、 肺癌、 肾癌、 胃癌、 脑瘤、 肉瘤、 胰腺 癌、 卵巢癌、 乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用， 本发明药物组合物具有显著的协同效应， 提高了 药物的疗效， 降低了给药剂量， 减少了副作用的发 生。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 24 。

3、页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 24 页 1/1 页 2 1. 一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物含有青蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂。 2. 根据权利要求 1 所述的药物组合物， 其特征在于， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 2.5-25.0 0.25-10.0， 优选所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 5.0-12.5 0.5-5.0。 3. 根据权利要求 2 所述的药物组合物， 其特征在于， 所述青蒿素及青蒿素类衍生 物为青蒿素、 青蒿琥酯、 双氢青蒿素。

4、、 蒿甲醚或蒿乙醚 ； 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-263 或 ABT-737。 4. 权利要求 1-3 任一所述的药物组合物在制备治疗结肠癌、 肝癌、 肺癌、 肾癌、 胃癌、 脑 瘤、 肉瘤、 胰腺癌、 卵巢癌、 乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用。 5. 根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于， 在制备治疗肝癌、 肉瘤的药物中的应用 中， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 5.0-10.0 0.75-2.0， 优选 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 7.5-10.0 1.5-2.0。 6. 根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在。

5、于， 在制备治疗结肠癌的药物中的应用中， 所 述青蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 5.0-12.5 0.5-5.0。 7. 根据权利要求 6 所述的应用， 其特征在于， 所述结肠癌为 HCT-116 类型结肠癌， 在 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-263 时， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔比为 7.5-10.01.0-1.5 ； 在所述Bcl-2抑制剂为ABT-737时， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-737 的摩尔比为 7.5-10.0 3.0-5.0。 8. 根据权利要求 6 所述的应用， 其特征在于， 所述结肠癌为 DLD1 类。

6、型结肠癌， 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-263， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔比为 7.5-12.5 0.75-1.25。 9. 根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于， 在制备治疗胰腺癌的药物的应用中， 所述 青蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 5.0-10.0 0.5-5.0。 10. 根据权利要求 9 所述的应用， 其特征在于， 所述胰腺癌为 Panc-1 类型胰腺癌， 在 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-263 时， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔比为 7.5-10.01.0-1.5 ； 在所述Bcl-2。

7、抑制剂为ABT-737时， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-737 的摩尔比为 7.5-10.0 3.0-5.0。 11. 根据权利要求 9 所述的应用， 其特征在于， 所述胰腺癌为 Panc-10.05 类型胰腺癌， 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-263 时， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔比为 7.5-10.0 1.0-1.5。 12. 根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于， 在制备治疗肾癌的药物的应用中， 所述 青蒿素及青蒿素类衍生物与Bcl-2抑制剂的摩尔比为5.0-10.00.5-1.25， 优选所述青蒿 素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制。

8、剂的摩尔比为 7.5-10.0 0.75-1.25。 13. 根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于， 在制备治疗乳腺癌的药物的应用中， 所 述青蒿素及青蒿素类衍生物与Bcl-2抑制剂的摩尔比为5.0-10.00.75-1.5， 优选所述青 蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 7.5-10.0 1.0-1.5。 14. 根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于， 所述药物组合物中的青蒿素及青蒿素类 衍生物和 Bcl-2 抑制剂同时使用或以任何先后的顺序使用。 权 利 要 求 书 CN 102552908 A 2 1/24 页 3 含青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 。

9、抑制剂的药物组合物 及其应用 技术领域 0001 本发明涉及一种药物组合物及其在制备治疗癌症的药物中的应用， 具体涉及含有 青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂的药物组合物及其在制备治疗结肠癌、 肝癌、 肺 癌、 肾癌、 胃癌、 脑瘤、 肉瘤、 胰腺癌、 卵巢癌、 乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用。 背景技术 0002 世界卫生组织调查报告表明， 全球癌症状况日益严重， 今后 20 年新患者的人数将 由目前的每年 1000 万增加到 1500 万， 因癌症而死亡的人数也将由每年的 600 万增加至 1000 万。原发性肝癌为发生在肝细胞与肝内胆管上皮细胞的癌变， 是人类最常见的恶性肿 瘤。

10、之一 ； 结肠癌的发病与环境、 生活习惯， 尤其是饮食方式有关， 一般认为高脂肪饮食和纤 维素不足是主要发病原因。 随着生活水平的提高， 饮食结构的改变， 结肠癌的发病率呈逐年 上升趋势 ； 胰腺癌多发生于胰头部， 90来源于胰管上皮细胞， 其余来自胰腺腺泡， 为消化 系统常见的恶性肿瘤 ； 肉瘤属恶性肿瘤， 肉瘤来源于间叶组织， 可发生于任何组织器官， 多 发生于年轻人， 恶性程度高， 愈后差。目前手术是主要治疗方法， 仅横纹肌肉瘤、 尤文氏瘤、 部分骨肉瘤等极少数肉瘤有较好疗效外， 其余肉瘤疗效均不理想 ； 肾癌全称为肾细胞癌， 是 泌尿生殖系常见恶性肿瘤之一， 约占成人恶性肿瘤的 3左右。

11、， 占癌症死亡的 2， 在人体 12 大实体恶性肿瘤中排在第十位。肾癌是泌尿系致死率最高的肿瘤， 约 40的肾癌患者会 因癌死亡 ； 乳腺癌跟人体内的雌性激素有关。 乳腺癌的发病， 与患者的遗传基因、 生活习惯、 常用食物、 生育状况等紧密相关， 不同人种、 地域的乳腺癌 发病率有着明显的区别。 乳腺癌 已经成为全球女性发病率最高的恶性肿瘤， 随着国民经济发展和人民生活水平提高， 中国 乳腺癌的发病率和死亡率都呈迅猛上升态势。 0003 目前已上市的抗肿瘤药物较多， 如烷化剂药物、 抗代谢药物、 抗肿瘤抗生素、 免疫 调节剂等， 但是大多药物由于毒性较大， 病人不耐受。大量的临床实践证明， 中。

12、药或中西医 结合能有效治疗恶性肿瘤， 同时能减轻放化疗的毒副作用。 运用现代医学手段， 发现一些活 性天然产物能有效抑制肿瘤细胞的生长， 有诱导细胞凋亡的作用。目前使用的众多抗生素 和抗肿瘤药物或直接来源于天然产物， 或经其结构改造而得。 因此， 安全性高的活性天然产 物运用于临床以治疗癌症将具有广阔的前景。 随着对肿瘤的发生发展的分子机制研究越来 越清楚， 分子靶向治疗多种恶性肿瘤受到了广泛的关注和高度重视。分子靶向药物选择性 高、 广谱有效， 其安全性优于细胞毒性化疗药物， 是目前肿瘤治疗领域发展的新方向。 0004 青蒿素是含有过氧桥的新型倍半萜内酯， 其衍生物有青蒿琥酯、 蒿甲醚和双氢。

13、青 蒿素等。青蒿素及其衍生物是一类高效、 低毒的抗疟药物， 随着研究的深入， 人们发现青 蒿素及青蒿素类化合物还具有其它很多重要的药理活性， 如抗血吸虫、 免疫调节、 抗心律失 常、 抗肿瘤等， 尤其是其抗肿瘤作用， 越来越引起研究者们的重视。 很多实验研究表明， 青蒿 素及青蒿素类化合物对多种肿瘤细胞的生长具有显著的抑制作用， 而且对正常组织细胞的 毒性很低， 作用机制可能与肿瘤细胞内自由基的产生及氧化应激， 延迟细胞周期， 诱导细胞 说 明 书 CN 102552908 A 3 2/24 页 4 凋亡和抗肿瘤血管生成有关。双氢青蒿素是青蒿素类药物中活性较强的衍生物， 青蒿琥酯 是青蒿素最重。

14、要的衍生物之一， 具有水溶性好， 青蒿琥酯抗肿瘤机理与其对肿瘤细胞株有 直接杀伤作用、 或与诱导细胞凋亡有关， 还可能与其抑制肿瘤组织血管生成等有关。 青蒿素 及青蒿素类药物可以选择性杀伤肿瘤细胞， 并且与传统化疗药不存在交叉耐药， 能够逆转 肿瘤细胞的多药耐药现象。 0005 细胞凋亡 ( 程序细胞死亡 ) 是机体清除异常或不需要的细胞的自然途径， 若其受 到影响则可能导致各种疾病如癌症的发生。Bcl-2 家族蛋白 是凋亡的重要调节剂， 其中 Bcl-2 和 Bcl-xL 在多种类型的肿瘤中过量表达， 被认为可能与肿瘤的发生、 发展及耐药性 产生有关， 故针对Bcl-2和Bcl-xL抗凋亡蛋。

15、白的药物开发成为近年来抗肿瘤治疗的研究热 点。ABT-263 和 ABT-737 是由美国雅培 (Abbott) 制药开发的小分子 Bcl-2 抑制剂， 对多种 肿瘤作用显著， 且可口服使用， 具有良好的应用前景。 0006 随着肿瘤分子生物学的研究进展， 肿瘤分子靶向治疗已成为肿瘤研究的热点， 在 多种肿瘤的治疗中发挥了重要的作用。然而， 大部分肿瘤的生物学行为并非由单一信号传 导通路所支配， 而是多个信号传导通路共同起作用的， 中医药以其多基因多靶点的作用优 势正日益受到关注。 因此合理的联合用药， 有单用药物不可比拟的优越性， 联合用药针对多 靶点进行靶向治疗将不仅旨在减少或延缓耐药性的。

16、出现、 降低毒性， 而且通过多种药物对 癌细胞杀伤的协同作用取得更好的疗效。 发明内容 0007 针对以上技术缺陷， 本发明提供一种药物组合物及其在制备治疗结肠癌、 肝癌、 肺 癌、 肾癌、 胃癌、 脑瘤、 肉瘤、 胰腺癌、 卵巢癌、 乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用， 具体为含 有青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂的药物组合物及其在制备治疗结肠癌、 肝癌、 肺癌、 肾癌、 胃癌、 脑瘤、 肉瘤、 胰腺癌、 卵巢癌、 乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用。 0008 本发明含有青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂的药物组合物中， 所述青蒿 素及青蒿素类衍生物可以为青蒿素、 青蒿琥酯、。

17、 双氢青蒿素、 蒿甲醚或蒿乙醚 ； Bcl-2 抑制 剂可以为 ABT-263 或 ABT-737， 或两者相应的结构类似物、 衍生物。 0009 本发明药物组合物中的青蒿素及青蒿素类衍生物优选为青蒿琥酯、 双氢青蒿素， 其相应的结构式分别如式 I、 式 II 所示。 0010 0011 本发明药物组合物中， 所述组分不限于青蒿琥酯和双氢青蒿素药物本身， 还可以 说 明 书 CN 102552908 A 4 3/24 页 5 是其可药用的盐、 水合物或衍生物等。 0012 本发明中， 所述Bcl-2抑制剂可以为任何结构类型的Bcl-2抑制剂的药物， 优选为 ABT-263 或 ABT-737。。

18、 0013 其中 ABT-263 为 US 2007027135 中所记载的式 III 所示的化合物 ： 0014 0015 其中ABT-737为WO2005049594和WO2005049593中所记载的式IV所示的化合物 ： 0016 0017 本发明药物组合物中， 所述组分不限于上述ABT-263和ABT-737本身， 还可以是它 们的水合物、 类似物、 衍生物及其它有机或无机的盐。 0018 本发明含有青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂的药物组合物中， 青蒿素及 青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 2.5-25.0 0.25-10.0 ； 进一步优选青蒿素及 青蒿。

19、素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 5.0-12.5 0.5-5.0。 0019 本发明含有青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂的药物组合物可以用于治 疗各种肿瘤， 所述肿瘤包括但不限于结肠癌、 肝癌、 肺癌、 肾癌、 胃癌、 脑瘤、 肉瘤、 胰腺癌、 卵 巢癌、 乳腺癌或前列腺癌。 0020 本发明优选青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂的药物组合物用于制备治 说 明 书 CN 102552908 A 5 4/24 页 6 疗肝癌、 肉瘤、 结肠癌、 胰腺癌、 肾癌及乳腺癌的药物中的应用。 0021 本发明药物组合物在制备治疗肝癌或肉瘤的药物中的应用中， 青蒿素及青蒿。

20、素类 衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 5.0-10.0 0.75-2.0 ； 优选青蒿素及青蒿素类衍生物 与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 7.5-10.0 1.5-2.0 ； 更进一步优选青蒿素及青蒿素类衍生物 与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 10.0 2.0。 0022 本发明药物组合物在制备治疗结肠癌的药物中的应用中， 所述青蒿素及青蒿素类 衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 5.0-12.5 0.5-5.0。其中， 在制备治疗 HCT-116 类 型结肠癌的药物的应用中， 所述 Bcl-2 抑制 剂为 ABT-263 时， 所述青蒿素及青蒿素类衍 生物与 ABT-263 。

21、的摩尔比为 5.0-10.0 0.75-1.5 ； 进一步优选所述青蒿素及青蒿素类衍 生物与 ABT-263 的摩尔比为 7.5-10.0 1.0-1.5 ； 最佳为所述青蒿素及青蒿素类衍生物 与 ABT-263 的摩尔比为 10.0 1.5 ； 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-737 时， 所述青蒿素及青蒿 素类衍生物与 ABT-737 的摩尔比为 5.0-10.0 1.0-5.0 ； 进一步优选所述青蒿素及青蒿 素类衍生物与 ABT-737 的摩尔比为 7.5-10.0 3.0-5.0 ； 最佳为所述青蒿素及青蒿素类 衍生物与 ABT-737 的摩尔比为 10.0 5.0。在制备治疗 。

22、DLD1 类型结肠癌的药物的应用 中， 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-263 时， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔比 为 5.0-12.5 0.5-1.25 ； 进一步优选所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔比 为 7.5-12.5 0.75-1.25 ； 最佳为所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔比为 12.5 1.25。 0023 本发明药物组合物在制备治疗胰腺癌的药物中的应用中， 所述青蒿素及青蒿素 类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 5.0-10.0 0.5-5.0。其中， 在制备治疗 Panc-1 类 型胰腺癌的药物的。

23、应用中， 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-263 时， 所述青蒿素及青蒿素类衍生 物与 ABT-263 的摩尔比为 5.0-10.0 0.75-1.5 ； 进一步优选所述青蒿素及青蒿素类衍生 物与 ABT-263 的摩尔比为 7.5-10.0 1.0-1.5 ； 最佳为所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔比为 10.0 1.5 ； 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-737 时， 所述青蒿素及青蒿素 类衍生物与 ABT-737 的摩尔比为 5.0-10.0 2.0-5.0 ； 进一步优选所述青蒿素及青蒿素 类衍生物与 ABT-737 的摩尔比为 7.5-10.0 3.0-5。

24、.0 ； 最佳为所述青蒿素及青蒿素类衍 生物与 ABT-737 的摩尔比为 10.0 5.0。在制备治疗 Panc-10.05 类型胰腺癌的药物的应 用中， 所述 Bcl-2 抑制剂为 ABT-263 时， 所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔 比为 5.0-10.0 0.5-1.5 ； 进一步优选所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔 比为 7.5-10.0 1.0-1.5 ； 最佳为所述青蒿素及青蒿素类衍生物与 ABT-263 的摩尔比为 10.0 1.5。 0024 本发明药物组合物在制备治疗肾癌的药物中的应用中， 青蒿素及青蒿素类衍生 物与 Bcl-2 抑。

25、制剂的摩尔比为 5.0-10.0 0.5-1.25 ； 优选青 蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 7.5-10.0 0.75-1.25 ； 更进一步优选青蒿素及青蒿素类衍生物 与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 10.0 1.25。 0025 本发明药物组合物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用中， 青蒿素及青蒿素类衍 生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 5.0-10.0 0.75-1.5 ； 优选青蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 7.5-10.0 1.0-1.5 ； 更进一步优选青蒿素及青蒿素类衍生物与 Bcl-2 抑制剂的摩尔比为 10.0 1.5。 说。

26、 明 书 CN 102552908 A 6 5/24 页 7 0026 含有青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂组合物在制备治疗结肠癌、 肝癌、 肺癌、 肾癌、 胃癌、 脑瘤、 肉瘤、 胰腺癌、 卵巢癌、 乳腺癌或前列腺癌的药物的应用中， 在将本 发明组合物制成同时给药的药剂的方案中， 青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂可以 含在同一种药物制剂如片剂或胶囊中， 也可以将青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂 分别做成制剂， 如分别做成片剂或胶囊， 并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一 起， 患者然后按照药品说明书的指示同时服用 ； 在将本发明组合物制成先后给药的药。

27、剂的 方案中， 可以将青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂分别做成不同的制剂， 并采用本 领域常规的方式将它们包装或结合在一起， 患者然后按照药品说明书指示的先后顺序进行 服用， 或将上述组合物中的两种成分制成一种控释的制剂， 先释放组合物中的一种成分、 然 后再释放组合物中的另一种成分， 患者只需要服用该控释组合物制剂 ； 在将本发明组合物 制备成交叉给药的药剂的方案中， 可以将青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂分别做 成不同的制剂， 并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起， 患者然后按照药品说 明书指示的交叉顺序服用， 或者将该药物组合物制备成青蒿素及青蒿素类衍生物。

28、和 Bcl-2 抑制剂交叉释放的控释制剂。 0027 青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂组合物在制备治疗结肠癌、 肝癌、 肺癌、 肾癌、 胃癌、 脑瘤、 肉瘤、 胰腺癌、 卵巢癌、 乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用中， 所述组合物 中的青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂可以同时使用或以任何先后的顺序使用， 如 可以将青蒿素及 青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂同时给患者服用 ； 也可以先将青蒿素及 青蒿素类衍生物药物给患者服用、 然后服用 Bcl-2 抑制剂， 或先服用 Bcl-2 抑制剂、 然后服 用青蒿素及青蒿素类衍生物药物， 对于两者服用的时间间隔没有特别要求， 但优。

29、选服用两 种药物的时间间隔不超过一天 ； 或者两种药物交替给药。 0028 本发明中， 可将本发明青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂采用本领域常规 的方法制备成适于胃肠道给药或非胃肠道给药的药物制剂， 本发明优选将青蒿素及青蒿 素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂制成胃肠道给药的药物制剂， 其制剂形式可以为常规片剂或 胶囊、 或控释、 缓释制剂。在本发明青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂组合物的药 物制剂中， 根据不同的制剂形式和制剂规格， 所述组合物在制剂中的含量可以为质量计为 1-99， 优选为 10 -90 ； 制剂使用的辅料可采用本领域常规的辅料， 以不和本发明组合 物。

30、发生反应或不影响本发明药物的疗效为前提 ； 所述制剂的制备方法可采用本领域常规的 制备方法进行制备。 0029 本发明中， 组合物的制备方法没有特别限制， 青蒿素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂两者可以进行直接混合然后做成制剂， 或分别和 / 或相应的辅料混合分别做成制 剂， 然后再按照本领域常规的方式包装在一起， 或分别和相应的辅料混合然后再混合做成 制剂。 0030 本发明中的药物组合物的给药剂量根据给药对象、 给药途径或药物的制剂形式不 同可以进行适当的变化， 但以保证该药物组合物在哺乳动物体内能够达到有效的血药浓度 为前提。 0031 本发明分别进行了青蒿素及青蒿素类衍生物和 B。

31、cl-2 抑制剂组合杀死 Hep3B( 肝 癌细胞株 )、 U2-OS( 肉瘤细胞株 )、 HCT-116、 DLD1( 结肠癌细胞株 )、 Panc-1、 Panc-10.05( 胰 腺癌细胞株 )、 ACHN( 肾癌细胞株 ) 和 T47D( 乳腺癌细胞株 ) 的试验， 结果表明， 本发明青蒿 说 明 书 CN 102552908 A 7 6/24 页 8 素及青蒿素类衍生物和 Bcl-2 抑制剂组合治疗肝癌、 肉瘤、 结肠癌、 胰腺癌、 肾癌及乳腺癌 具有显著的协同效应， 提高了药物的疗效， 降低了用药剂量， 减少了副作用的发生。 具体实施方式 0032 结合以下实施例对本发明作进一步的。

32、阐述， 但本发明并不受限于此。 0033 实施例 0034 试剂和方法 ： 0035 细胞 ： Hep3B( 肝癌细胞株 )、 U2-OS( 肉瘤细胞株 )、 HCT-116、 DLD1( 结肠癌细胞 株 )、 Panc-1、 Panc-10.05( 胰腺癌细胞株 )、 ACHN( 肾癌细胞株 ) 和 T47D( 乳腺癌细胞株 )， 均购自 American Type Culture Collection(ATCC)， Rockville， MD， USA。 0036 药品 ： 以下实施例中所用药物组合物均按下列方法 1 或方法 2 所述来制备 ； 青蒿 素及青蒿素类衍生物购自 Sigma ；。

33、 Bcl-2 抑制剂均按文献合成而得， ABT-263 和 ABT-737 合 成参考文献为 ： Synthesis， 15， 2398-2404， WO2005049594， WO2005049593和US2007027135。 0037 方法 1 ： 准确称量相应的药物组合物的各组分， 以二甲基亚砜分别溶解， 各自配成 10mM 的贮存液， 在 -20下保存， 使用时用新鲜的培养基稀释到合适的浓度， 然后各自取 1 微升的各组分的溶液， 混合在一起备用。所有的试验中， 二甲基亚砜的最终浓度应 5g/L， 以便不影响细胞的活性。 0038 将所有的细胞于含 10小牛血清、 100kU/L 青。

34、霉素、 100mg/L 链霉素的 RPMI 1640 培养基中， 37、 5 CO2的湿度条件下培养， 在加药的前一天， 在六孔板上进行细胞接种 2105/ 孔， 然后向细胞中加入按上述方法制备的药物组合物溶液， 使各组分达到其工作浓 度， 具体见表 1 中第 1-30。 0039 药物处理后， 通过台盼蓝 (Trypan Blue) 测定细胞死亡， 细胞通过在 37用胰蛋 白酶钠 /EDTA 进行胰酶化作用 10 分钟。因为死亡的细胞从培养器上脱落进入培养基中， 通 过在 1200 转 / 分钟下离心收集所有的细胞， 然后再用培养基重新悬浮沉淀物， 与台盼蓝染 料混合。染色之后， 用光学显微。

35、镜和血细胞计数器进行计数。被染料染成蓝色的计为死亡 细胞。随机选取 500 个细胞进行计数， 死亡的细胞以占总计数细胞的百分比来表达。 0040 方法 2 ： 准确称量相应的药物组合物的各组分， 以二甲基亚砜分别溶解， 各自配成 10mM 的贮存液， 在 -20下保存。使用时用新鲜的培养基稀释到合适的浓度， 然后各自取 1 微升的各组分的溶液备用。 所有的试验中， 二甲基亚砜的最终浓度应5g/L， 以便不影响细 胞的活性。 0041 将所有的细胞于含 10小牛血清、 100kU/L 青霉素、 100mg/L 链霉素的 RPMI 1640 培养基中， 37、 5 CO2的湿度条件下培养， 在加药。

36、的前一天， 在六孔板上进行细胞接种 2105/ 孔， 然后以任意次序向细胞中加入按上述方法制备的药物组合物的各组分溶液， 使 各组分达到其工作浓度， 具体见表 1 中第 31-60。 0042 药物处理后， 通过台盼蓝 (Trypan Blue) 测定细胞死亡， 细胞通过在 37用胰蛋 白酶钠 /EDTA 进行胰酶化作用 10 分钟。因为死亡的细胞从培养器上脱落进入培养基中， 通 过在 1200 转 / 分钟下离心收集所有的细胞， 然后再用培养基重新悬浮沉淀物， 与台盼蓝染 料混合。染色之后， 用光学显微镜和血细胞计数器进行计数。被染料染成蓝色的计为死亡 细胞。随机选取 500 个细胞进行计数。

37、， 死亡的细胞以占总计数细胞的百分比来表达。 说 明 书 CN 102552908 A 8 7/24 页 9 0043 下列表 1 所示的药物组合中， 第 1-30 的组合按方法 1 制备， 第 31-60 的组合按方 法 2 制备。 0044 表 1 0045 0046 说 明 书 CN 102552908 A 9 8/24 页 10 0047 说 明 书 CN 102552908 A 10 9/24 页 11 0048 实施例 1 不同比例的青蒿琥酯与 ABT-263 的组合协同增效促进 Hep3B 细胞死亡试 验， 见表 2。 0049 表 2 0050 说 明 书 CN 1025529。

38、08 A 11 10/24 页 12 0051 在考察相关化合物导致肝癌细胞株 Hep3B 细胞死亡的试验中， 发现当单独使用 10.0M 青蒿琥酯或更低浓度、 2.0M ABT-263 或更低浓度时只有约 10的细胞死亡 ； 而 当两者在较低浓度下合用时(7.5M青蒿琥酯+1.5M ABT-263)则产生明显的协同作用， 导致 39的癌细胞死亡 ； 当两者以 10.0M 青蒿琥酯 +2.0M ABT-263 的比例合用时， 则 产生更加显著的协同作用， 导致 59的癌细胞死亡。 0052 实施例 2 不同比例的双氢青蒿素与 ABT-263 的组合协同增效促进 Hep3B 细胞死亡 试验， 见。

39、表 3。 0053 表 3 0054 0055 说 明 书 CN 102552908 A 12 11/24 页 13 0056 在考察相关化合物导致肝癌细胞株 Hep3B 细胞死亡的试验中， 发现当单独使用 10.0M 双氢青蒿素或更低浓度、 2.0M ABT-263 或更低浓度时只有约 13的细胞死亡 ； 而当两者在较低浓度下合用时 (7.5M 双氢青蒿素 +1.5M ABT-263) 则产生明显的协同 作用， 导致 42的癌细胞死亡 ； 当两者以 10.0M 双氢青蒿素 +2.0M ABT-263 的比例合 用时， 则产生更加显著的协同作用， 导致 63的癌细胞死亡。 0057 实施例 3。

40、 不同比例的青蒿琥酯与 ABT-263 的组合协同增效促进 U2-OS 细胞死亡试 验， 见表 4。 0058 表 4 0059 0060 在考察相关化合物导致肉瘤细胞株 U2-OS 细胞死亡的试验中， 发现当单独使用 10.0M 青蒿琥酯只有约 20的细胞死亡， 单独使用 2.0MABT-263 或更低浓度时只有很 少量的细胞死亡 ； 而当两者在较低浓度下合用时(7.5M青蒿琥酯+1.5M ABT-263)则产 生明显的协同作用， 导致44的癌细胞死亡 ； 当两者以10.0M青蒿琥酯+2.0M ABT-263 说 明 书 CN 102552908 A 13 12/24 页 14 的比例合用时。

41、， 则产生更加显著的协同作用， 导致 76的癌细胞死亡。 0061 实施例 4 不同比例的双氢青蒿素与 ABT-263 的组合协同增效促进 U2-OS 细胞死亡 试验， 见表 5。 0062 表 5 0063 0064 在考察相关化合物导致肉瘤细胞株 U2-OS 细胞死亡的试验中， 发现当单独使用 10.0M 双氢青蒿素只有约 20的细胞死亡， 单独使用 2.0MABT-263 或更低浓度时只有 很少量的细胞死亡 ； 而当两者在较低浓度下合用时 (7.5M 双氢青蒿素 +1.5MABT-263) 则产生明显的协同作用， 导致 48的癌细胞死亡 ； 当两者以 10.0M 双氢青蒿素 +2.0MA。

42、BT-263 的比例合用时， 则产生更加显著的协同作用， 导致 81的癌细胞死亡。 0065 实施例 5 不同比例的青蒿琥酯与 ABT-263 的组合协同增效促进 HCT-116 细胞死亡 试验， 见表 6。 0066 表 6 0067 说 明 书 CN 102552908 A 14 13/24 页 15 0068 在考察相关化合物导致结肠癌细胞株 HCT-116 细胞死亡的试验中， 发现当单独使 用 10.0M 青蒿琥酯或 1.5MABT-263 时只有约 20的细胞死亡 ； 而当两者在较低浓度下 合用时 (7.5M 青蒿琥酯 +1.0MABT-263) 则产生明显的协同作用， 导致 63的。

43、癌细胞死 亡 ； 当两者以 10.0M 青蒿琥酯 +1.5MABT-263 的比例合用时， 则产生更加显著的协同作 用， 导致 92的癌细胞死亡。 0069 实施例 6 不同比例的双氢青蒿素与 ABT-263 的组合协同增效促进 HCT-116 细胞死 亡试验， 见表 7。 0070 表 7 0071 0072 说 明 书 CN 102552908 A 15 14/24 页 16 0073 在考察相关化合物导致结肠癌细胞株 HCT-116 细胞死亡的试验中， 发现当单独使 用 10.0M 双氢青蒿素或 1.5M ABT-263 时只有约 20的细胞死亡 ； 而当两者在较低浓 度下合用时 (7.。

44、5M 双氢青蒿素 +1.0MABT-263) 则产生明显的协同作用， 导致 56的癌 细胞死亡 ； 当两者以10.0M双氢青蒿素+1.5M ABT-263的比例合用时， 则产生更加显著 的协同作用， 导致 94的癌细胞死亡。 0074 实施例 7 不同比例的青蒿琥酯与 ABT-737 的组合协同增效促进 HCT-116 细胞死亡 试验， 见表 8。 0075 表 8 0076 0077 在考察相关化合物导致结肠癌细胞株 HCT-116 细胞死亡的试验中， 发现当单独使 用 10.0M 青蒿琥酯或 5.0MABT-737 时只有约 20的细胞死亡 ； 而当两者在较低浓度下 合用时 (7.5M 青。

45、蒿琥酯 +3.0MABT-737) 则产生明显的协同作用， 导致 51的癌细胞死 亡 ； 当两者以10.0M青蒿琥酯+5.0M ABT-737的比例合用时， 则产生更加显著的协同作 用， 导致 85的癌细胞死亡。 说 明 书 CN 102552908 A 16 15/24 页 17 0078 实施例 8 不同比例的双氢青蒿素与 ABT-737 的组合协同增效促进 HCT-116 细胞死 亡试验， 见表 9。 0079 表 9 0080 0081 在考察相关化合物导致结肠癌细胞株 HCT-116 细胞死亡的试验中， 发现当单独使 用 10.0M 双氢青蒿素或 5.0M ABT-737 时只有约 。

46、20的细胞死亡 ； 而当两者在较低浓 度下合用时 (7.5M 双氢青蒿素 +3.0MABT-737) 则产生明显的协同作用， 导致 54的癌 细胞死亡 ； 当两者以 10.0M 双氢青蒿素 +5.0MABT-737 的比例合用时， 则产生更加显著 的协同作用， 导致 91的癌细胞死亡。 0082 实施例 9 不同比例的青蒿琥酯与 ABT-263 的组合协同增效促进 DLD1 细胞死亡试 验， 见表 10。 0083 表 10 0084 说 明 书 CN 102552908 A 17 16/24 页 18 0085 在考察相关化合物导致结肠癌细胞株 DLD1 细胞死亡的试验中， 发现当单独使用 。

47、12.5M青蒿琥酯时只有很少量的细胞死亡， 单独使用1.25MABT-263时也只有约20的 细胞死亡 ； 而当两者在较低浓度下合用时 (7.5M 青蒿琥酯 +0.75M ABT-263) 则产生明 显的协同作用， 导致 51的癌细胞死亡 ； 当两者以 12.5M 青蒿琥酯 +1.25M ABT-263 的 比例合用时， 则产生更加显著的协同作用， 导致 84的癌细胞死亡。 0086 实施例 10 不同比例的双氢青蒿素与 ABT-263 的组合协同增效促进 DLD1 细胞死亡 试验， 见表 11。 0087 表 11 0088 0089 说 明 书 CN 102552908 A 18 17/2。

48、4 页 19 0090 在考察相关化合物导致结肠癌细胞株 DLD1 细胞死亡的试验中， 发现当单独使用 12.5M 双氢青蒿素时只有约 10的细胞死亡， 单独使用 1.25M ABT-263 时也只有约 20的细胞死亡 ； 而当两者在较低浓度下合用时 (7.5M 双氢青蒿素 +0.75MABT-263) 则产生明显的协同作用， 导致 56的癌细胞死亡 ； 当两者以 12.5M 双氢青蒿素 +1.25M ABT-263 的比例合用时， 则产生更加显著的协同作用， 导致 87的癌细胞死亡。 0091 实施例 11 不同比例的青蒿琥酯与 ABT-263 的组合协同增效促进 Panc-1 细胞死亡 试验， 见表 12。 0092 表 12 0093 0094 在考察相关化合物导致胰腺癌细胞株 Panc-1 细胞死亡的试验中， 发现当单独使 用 10.0M 青蒿琥酯或 1.5M ABT-263 时也只有约 15的细胞死亡 ； 而当两者在较低浓 度下合用时(7.5M青蒿琥酯+1.0M ABT-263)则产生明显的协同作用， 导致54的癌细 胞死亡 ； 当两者以10.0M青蒿琥酯+1.5M ABT。