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荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用.pdf

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文档编号：6717589

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510277836.0 (22)申请日 2015.05.27 (65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 104873616 A (43)申请公布日 2015.09.02 (73)专利权人广西壮族自冶区中国科学院广西植物研究所地址 541006 广西壮族自治区桂林市雁山区雁山街85号 (72)发明人杨子明李典鹏陈月圆黄永林张利颜小捷卢凤来刘金磊王磊 (74)专利代理机构广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 代理人杨立华 (51)I。

2、nt.Cl. A61K 36/77(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61K 131/00(2006.01) (56)对比文件 CN 103977332 A,2014.08.13, CN 1541701 A,2004.11.03, EP 1256335 A1,2002.11.13, 关小丽等.荔枝皮化学成分的研究（） . 广西植物 .2014,第34卷(第2期), 关小丽等.荔枝皮化学成分的研究（） . 广西植物 .2014,第34卷(第2期), 荣爽.荔枝壳原花青素对动脉粥样硬化的保护作用及其机制研究. 中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑 .2。

3、012, (第09期), E057-65. 荣爽.荔枝壳原花青素对动脉粥样硬化的保护作用及其机制研究. 中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑 .2012, (第09期), E057-65. 审查员陈典 (54)发明名称荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用 (57)摘要本发明公开了荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用。发明人通过大量实验发现，来自荔枝果皮的荔枝皮多酚可有效降低肝脏胆固醇、肝脏甘油三酯、肝脏低密度脂蛋白胆固醇，从而有效地减少肝脏中脂肪堆积，可用于治疗非酒精性脂肪肝等相关肝病。权利要求书1页说明书7页附。

4、图3页 CN 104873616 B 2018.05.04 CN 104873616 B 1.荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物中的应用，其特征在于：所述药物用于预防或治疗肝脏脂肪堆积；所述药物的组成为治疗有效量的荔枝皮多酚和辅料，荔枝皮多酚来自荔枝果皮醇提物；所述荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用 6倍量80乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏650g；取浸膏550g加水充分溶解后，采用Sephadex LH-20柱层析， 0 100甲醇进行梯度洗脱， 20为一个梯度，每一。

5、梯度2L及50、 60的丙酮各2L，每份收集 250mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份， 50以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。 2.荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物中的应用，其特征在于：所述药物用于预防或治疗非酒精性脂肪肝；所述药物的组成为治疗有效量的荔枝皮多酚和辅料，荔枝皮多酚来自荔枝果皮醇提物；所述荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用6倍量80乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏650g；取浸膏550g加水充分溶解后，采用Sephadex LH-20柱层析。

6、， 0 100甲醇进行梯度洗脱， 20为一个梯度，每一梯度2L及50、 60的丙酮各2L，每份收集 250mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份， 50以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。 3.荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物中的应用，其特征在于：所述药物用于预防或治疗酒精性脂肪肝；所述药物的组成为治疗有效量的荔枝皮多酚和辅料，荔枝皮多酚来自荔枝果皮醇提物；所述荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用 6倍量80乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏650g；取浸膏550g。

7、加水充分溶解后，采用Sephadex LH-20柱层析， 0 100甲醇进行梯度洗脱， 20为一个梯度，每一梯度2L及50、 60的丙酮各2L，每份收集 250mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份， 50以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。权利要求书 1/1 页 2 CN 104873616 B 2 荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用技术领域 0001 本发明属于荔枝的医药用途技术领域，尤其涉及荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用。背景技术 0002 非酒精性脂肪性肝病是指除酒精和其他明确的损肝因素所致的，以弥漫性肝细。

8、胞大泡性脂肪变为主要病理表现的遗传-代谢-病理临床综合征，具有影响全身多系统、病程持续进展的特点。非酒精性脂肪性肝的发病机制极为复杂，比较认可的是二次打击学说，初次打击是胰岛素抵抗，二次打击主要指各种原因所致的氧化应激及脂质过氧化损伤。脂肪肝的形成和脂代谢障碍有着密切关系：肝细胞中甘油三酯(TG)、极低密度脂蛋白的合成与排出不平衡是形成脂肪肝的主要原因。当进入肝脏的脂肪量超过肝脏的脂质和氧化能力，或肝脏合成低密度脂蛋白障碍，肝脏合成的内源性TG就不能以脂蛋白的形式进出肝脏，则在肝细胞内外堆积形成脂肪肝。目前，临床上尚无完全有效的药物治疗非酒精性脂肪性肝。

9、，仅仅能够改善胰岛素抵抗，维护机体内环境脂质代谢、能量代谢和抗氧化物的平衡，促使机体保持在适应性反应阶段，延缓、阻止脂肪性肝病的病情进展。现阶段药物治疗主要针对不同病因进行诊治，如：对高血脂脂肪肝患者使用降脂药物，对糖尿病性脂肪肝患者使用降糖药。 0003 荔枝为无患子科常绿植物的果实，主产于我国广东、广西、福建等地，目前我国荔枝年产量约160万吨，占世界荔枝总产量80以上。在荔枝的深加工过程中产生了约40鲜果质量的果皮和果核废弃物，大量荔枝果皮作为大宗农产品废弃物至今未能得到有效开发和利用。研究表明，荔枝果皮中含有大量的多酚类化合物，实验证。

10、明多酚类物质具有抗氧化、抗肿瘤、预防心血管疾病、延缓衰老等多种生物活性。发明内容 0004 本发明要解决的技术问题是提供荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用，以用于治疗非酒精性脂肪肝和肝脏脂肪堆积等相关肝病。 0005 为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用。 0006 药物或保健品用于预防或治疗肝脏脂肪堆积。 0007 药物或保健品用于预防或治疗非酒精性脂肪肝。 0008 药物或保健品用于预防或治疗酒精性脂肪肝。 0009 降低肝脏甘油三酯的药物或保健品，含治疗有效量的荔枝皮多酚和辅料。 00。

11、10 荔枝皮多酚来自荔枝果皮醇提物。 0011 荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮，用80乙醇室温浸泡2次，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除叶绿素及蜡质后继续浓缩得浸膏，浸膏冷冻干燥后得到说明书 1/7 页 3 CN 104873616 B 3 干浸膏。 0012 荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用6倍量80乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏 650g；取浸膏550g加水充分溶解后，采用Sephadex LH-20柱层析， 0100MeOH进行梯度洗脱， 2。

12、0为一个梯度，每一梯度2L及50、 60的丙酮各2L，每份收集250mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份， 50以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。 0013 上述药物或保健品为口服剂型。 0014 口服剂型为胶囊剂、片剂或颗粒剂。 0015 发明人通过大量实验发现，来自荔枝果皮的荔枝皮多酚可有效降低肝脏胆固醇、肝脏甘油三酯、肝脏低密度脂蛋白胆固醇，从而有效地减少肝脏中脂肪堆积，可用于治疗非酒精性脂肪肝等相关肝病。附图说明 0016 图1是荔枝皮多酚(荔枝果皮醇提物)提取分离的工艺流程图。 0017 图2各组小鼠肝脏照片，图中： A空白组， B模型组， C阳性组。

13、， D荔枝皮多酚低剂量组， E荔枝皮多酚高剂量组。 0018 图3各组小鼠肝脏HE染色照片(HE100)，图中： A空白组， B模型组， C阳性组， D荔枝皮多酚低剂量组， E荔枝皮多酚高剂量组。具体实施方式 0019 1.实验材料与方法 0020 1.1药品和试剂 0021 新鲜的荔枝果皮： 2013年7月购于广西桂林市雁山区，经鉴定为无患子科荔枝 (litchi chinensis)的果皮；辛伐他汀片：广东彼迪药业有限公司，批号20141002；总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)测定试剂盒：长春汇力。

14、；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血糖(FBG)、胰岛素(INS)测定试剂盒：南京建成；其余试剂均为国产分析纯。 0022 1.2仪器 0023 TGL-16R型高速冷冻离心机，珠海黑马公司； RT-9100型半自动生化分析仪，深圳雷杜生命科学股份有限公司； MK3型全自动酶标仪，赛默飞世尔(上海)仪器有限公司；电子天平，梅特乐-托利多仪器上海有限公司。 0024 1.3实验动物及饲料 0025 昆明小鼠， SPF级，体重18-22g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。生产许可证号： SCXK(湘。

15、)2009-0004。基础饲料，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。生产证号： SCXK(湘)2009-0009。 0026 1.4荔枝皮多酚的制备 0027 取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用6倍量80乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏650g；取浸膏550g加水充分溶解后，采用Sephadex LH-20柱层析(8cm i.d.54cm， 0100MeOH， 20为一个梯度，每一梯说明书 2/7 页 4 CN 104873616 B 4 度2L及50、 60的丙酮各2L)进行梯度洗脱，每份收集250。

16、mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份， 50以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。具体工艺流程参见图1。 0028 研究表明，荔枝果皮各部位的多酚含量存在着差异，提取物经过Sephadex LH-20 柱层析纯化后，其多酚类成分主要集中在Fr.3、 Fr.4和Fr.5这三个部位中，总酚含量都达到 40以上，其中Fr.3的总酚含量44.02， Fr.4的总酚含量46.53， Fr.5的总酚含量 52.48，说明Sephadex LH-20对多酚类成分具有较好的富集作用。合并Fr.3、 Fr.4和Fr.5 这三个部位的干浸膏用于以下活性实验，测得合并后的干浸膏多酚含量45.。

17、62(其中以锁状多聚体多酚为主，接近90，小分子多酚含量只有11.02)。 0029 1.5非酒精脂肪肝动物模型的建立 0030 将小鼠随机分为两组，对照组小鼠(20只)喂饲基础饲料，模型组小鼠(60只)喂饲高脂饲料(66.9基础饲料、 10猪油、 10酪蛋白、 10蔗糖、 2胆固醇、 1胆酸盐、 0.1丙基硫氧嘧啶)，自由摄食、饮水。连续喂养8周后，与对照组比较，造模小鼠肝脏明显肿大、肝脏指数明显升高，肝组织病理切片观察可见肝细胞脂肪变性。 0031 1.6分组及给药 0032 将造模后的小鼠随机分成4组：模型组、阳性组(辛伐他汀)、荔枝皮多酚低剂量组、荔。

18、枝皮多酚高剂量组。对照组和模型组灌胃蒸馏水，阳性对照组(辛伐他汀5mg/kg)，荔枝皮多酚低剂量组(200mg/kg)，荔枝皮多酚高剂量组(400mg/kg)，给药体积0.2mL/10g，连续给药8周，每周记录小鼠体质量。 0033 1.7指标测定 0034 所有小鼠在末次给药后，禁食不禁水12h，眼球取血， 3500r/min离心10min，血清于-20低温保存，用于检测各项生化指标。小鼠脱颈处死，剖腹，迅速取肝脏，拍照，称质量。剪下一叶肝脏用冰冷的0.9的生理盐水充分灌流、洗净血液和血迹至白陶土样，用滤纸吸干，称重，快速地用剪刀将组织剪碎。

19、，加入冰冷的(4)0.9的生理盐水制成匀浆液， 4 ， 4000r/min离心15分钟，弃去沉淀，留下上清液-20低温保存，用于检测各项生化指标。剪下一叶肝脏用冰冷的0.9的生理盐水充分灌流、洗净血液和血迹至白陶土样，用滤纸吸干，称重，快速地用剪刀将组织剪碎，加入异丙醇制成匀浆液，过夜，离心，取上清液测定各项生化指标。剪下一叶肝脏置福尔马林溶液中固定， HE染色，切片，显微镜观察病理变化。计算肝脏指数和胰岛素抵抗指数，公式分别为：肝脏指数肝脏湿质量*1000/体质量；胰岛素抵抗指数(IRI)FBG*INS/22.5。 0035 1.8统计学方法。

20、0036 采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，实验数据均以xs表示，两个独立样本均数比较采用t检验，多个样本之间的两两比较采用单因素方差分析， P0.05为具有统计学意义。 0037 2.结果 0038 2.1肝组织病理学观察 0039 2.1.1大体观察 0040 由图2可知：空白对照组肝脏肉眼观察呈鲜红色，边缘锐利，表面光滑。非酒精性脂肪肝模型对照组肉眼见肝脏体积增大，边缘变钝，颜色呈土黄色，质软，与周围组织有黏连，切面油腻状。阳性辛伐他汀组肝脏体积增大，边缘变钝，颜色呈土黄色，肉眼见比模型组颜说明书 3/7 页 5 CN 1048736。

21、16 B 5 色减轻。荔枝皮多酚低、高剂量组肝脏接近正常，表面呈鲜红色，油腻状减轻，指压有弹性，肝脏体积还是增大。说明荔枝皮多酚可以有效的减轻模型组小鼠肝脏脂肪的堆积。 0041 2.1.2HE染色光镜观察 0042 由图3可知：正常组肝细胞肝小叶结构清晰，肝细胞以中央静脉为中心，向周围放射状分布，胞浆红染均匀一致，肝窦清晰可见，肝索排列整齐。非酒精性脂肪肝模型对照组大量肝细胞肿胀，气球样变，多数肝细胞内可见大小不等的脂滴空泡，肝索排列紊乱，汇管区伴有炎细胞浸润以及部分点状肝细胞坏死。阳性辛伐他汀组肝脏的损伤程度比模型组减轻，水样变性和脂肪变性减。

22、少，可见脂肪滴空泡。荔枝皮多酚低、高剂量组肝脏的损伤程度比模型组明显减轻，肝细胞脂肪变性显著减少，未见明显的气球样变性和脂肪变性，汇管区无明显炎细胞浸润。说明荔枝皮多酚可以有效的减轻模型组小鼠肝脏脂肪的堆积，减轻肝脏损伤。 0043 2.2荔枝皮多酚对小鼠体重、肝重和肝指数的影响 0044 从表1中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组体重无明显差异，肝重与肝指数明显升高，有统计学意义(P0.01)，说明模型组小鼠肝脏肿大；与模型组比较，辛伐他汀组与荔枝皮多酚低、高剂量组体重、肝重、肝指数都无明显差异，说明辛伐他汀与荔枝皮多酚都不会。

23、减轻模型组小鼠的肝脏肿大。 0045表1荔枝皮多酚对小鼠体重、肝重和肝指数的影响(n12,) 0046 0047 注：与正常组比较， *p0.05， *p0.01；与模型组比较， #P0.05，#P0.01。 0048 2.3荔枝皮多酚对小鼠肝脏脂肪的影响： 0049 从表2中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组肝脏TG、 TC、 HDLC、 LDLC升高，有统计学意义(P0.05， P0.01)，说明小鼠形成了脂肪肝，造模成功。与模型组比较，辛伐他汀能够显著降低肝脏TC、 LDLC含量，有统计学意义(P0.05)，能降低TG含量，但无显著意义，这。

24、与辛伐他汀的药理学意义相符合(辛伐他汀是羟甲基戊二酰辅酶还原酶抑制剂，抑制内源性胆固醇的合成，可降低胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等，降甘油三酯的效果较弱)，说明实验结果是真实可信的。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组都可以显著降低TG、 TC、 HDLC、 LDLC含量，有统计学意义(P0.05， P0.01)，说明荔枝皮多酚可有效的降低肝脏脂肪，治疗非酒精性脂肪肝。 0050表2荔枝皮多酚对小鼠肝脏脂肪的影响(n12,) 说明书 4/7 页 6 CN 104873616 B 6 0051 0052 注：与正常组比较， *p0.05， *p0.01；与模型。

25、组比较， #P0.05，#P0.01。 0053 2.4荔枝皮多酚对小鼠血脂的影响 0054 从表3中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组血中TC、 HDLC、 LDLC升高，有统计学意义(P0.01)，从前面的数据中，可知小鼠已经形成了脂肪肝，但血中的甘油三酯并没有升高，这与人的情况相似，很多非酒精性脂肪肝患者，血脂并没有升高，在正常范围。模型组TC升高，是因为在高脂饮食中，我们加入了大量的胆固醇。与模型组比较，辛伐他汀能够显著降低TC含量，有统计学意义(P0.05)，这也与辛伐他汀的药理学意义相符合 (辛伐他汀可降低血中胆固醇)，说。

26、明实验结果是真实可信的。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组对TG、 TC、 HDLC、 LDLC含量都没有显著性影响，说明荔枝皮多酚对血脂不起作用。 0055表3荔枝皮多酚对小鼠血脂的影响(n12,) 0056 0057 注：与正常组比较， *p0.05， *p0.01；与模型组比较， #P0.05，#P0.01。 0058 2.5荔枝皮多酚对小鼠血清转氨酶的影响 0059 从表4中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组ALT活性升高，有统计学意义(P0.01)，说明非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏具有一定损伤。与模型组比较，辛伐他汀不能够降低ALT，。

27、这也与辛伐他汀的药理学意义相符合(辛伐他汀具有一定的治疗脂肪肝作用，但有时可升高血清转氨酶)。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组都能够降低血清 ALT活性，有统计学意义(P0.01)，说明荔枝皮多酚在降低肝脏脂肪的同时，减轻了肝脏损伤。与正常组比较，模型组AST活性没有显著性变化。与模型组比较，辛伐他汀组、荔枝皮多酚低、高剂量组AST活性都没有显著性变化。 0060表4荔枝皮多酚对小鼠血清转氨酶的影响(n12) 说明书 5/7 页 7 CN 104873616 B 7 0061 0062 注：与正常组比较， *p0.05， *p0.01；与模型组比较，。

28、 #P0.05，#P0.01。 0063 2.6荔枝皮多酚对小鼠血糖、胰岛素的影响 0064 从表5中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组血糖、胰岛素抵抗指数升高，有统计学意义(P0.05， P0.01)，说明非酒精性脂肪肝模型小鼠产生了胰岛素抵抗。与模型组比较，辛伐他汀不能够降低血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数，这与辛伐他汀的药理学意义相符合(辛伐他汀能够治疗脂肪肝是因为辛伐他汀是胆固醇合成抑制剂)。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组对血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数都没有影响，说明荔枝皮多酚治疗非酒精性脂肪肝的作用机制与减轻胰岛素抵抗没有。

29、关系。 0065表5荔枝皮多酚对小鼠血糖、胰岛素的影响(n12) 0066 0067 注：与正常组比较， *p0.05， *p0.01；与模型组比较， #P0.05，#P0.01 0068 2.7荔枝皮多酚对小鼠肝脏SOD、 MDA的影响 0069 从表6中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组MDA含量升高，有统计学意义(P0.05)， SOD没有显著性变化，说明非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏产生了一定的氧化应激。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组都能降低MDA含量，有统计学意义(P 0.05)，说明荔枝皮多酚在治疗非酒精性脂肪肝的同时减轻了肝脏氧化应激。

30、，这也可能是荔枝皮多酚能够防治非酒精性脂肪肝的作用机制之一。 0070表6荔枝皮多酚对小鼠小鼠肝脏SOD、 MDA的影响(n12) 说明书 6/7 页 8 CN 104873616 B 8 0071 0072 注：与正常组比较， *p0.05， *p0.01；与模型组比较， #P0.05，#P0.01。说明书 7/7 页 9 CN 104873616 B 9 图1 说明书附图 1/3 页 10 CN 104873616 B 10 图2 说明书附图 2/3 页 11 CN 104873616 B 11 图3 说明书附图 3/3 页 12 CN 104873616 B 12 。

摘要
申请专利号：	CN201510277836.0	申请日：	20150527
公开号：	CN104873616B	公开日：	20180504
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	A61K36/77,A61P1/16,A61K131/00	主分类号：	A61K36/77,A61P1/16,A61K131/00
申请人：	广西壮族自冶区中国科学院广西植物研究所
发明人：	杨子明,李典鹏,陈月圆,黄永林,张利,颜小捷,卢凤来,刘金磊,王磊
地址：	541006 广西壮族自治区桂林市雁山区雁山街85号
优先权：	CN201510277836A
专利代理机构：	广西南宁公平知识产权代理有限公司	代理人：	杨立华
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内容摘要

本发明公开了荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用。发明人通过大量实验发现，来自荔枝果皮的荔枝皮多酚可有效降低肝脏胆固醇、肝脏甘油三酯、肝脏低密度脂蛋白胆固醇，从而有效地减少肝脏中脂肪堆积，可用于治疗非酒精性脂肪肝等相关肝病。

权利要求书

1.荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物中的应用，其特征在于：所述药物用于预防或治疗肝脏脂肪堆积；所述药物的组成为治疗有效量的荔枝皮多酚和辅料，荔枝皮多酚来自荔枝果皮醇提物；所述荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用6倍量80％乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏650g；取浸膏550g加水充分溶解后，采用SephadexLH-20柱层析，0–100％甲醇进行梯度洗脱，20％为一个梯度，每一梯度2L及50％、60％的丙酮各2L，每份收集250mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份，50℃以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。 2.荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物中的应用，其特征在于：所述药物用于预防或治疗非酒精性脂肪肝；所述药物的组成为治疗有效量的荔枝皮多酚和辅料，荔枝皮多酚来自荔枝果皮醇提物；所述荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用6倍量80％乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏650g；取浸膏550g加水充分溶解后，采用SephadexLH-20柱层析，0–100％甲醇进行梯度洗脱，20％为一个梯度，每一梯度2L及50％、60％的丙酮各2L，每份收集250mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份，50℃以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。 3.荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物中的应用，其特征在于：所述药物用于预防或治疗酒精性脂肪肝；所述药物的组成为治疗有效量的荔枝皮多酚和辅料，荔枝皮多酚来自荔枝果皮醇提物；所述荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用6倍量80％乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏650g；取浸膏550g加水充分溶解后，采用SephadexLH-20柱层析，0–100％甲醇进行梯度洗脱，20％为一个梯度，每一梯度2L及50％、60％的丙酮各2L，每份收集250mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份，50℃以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。

说明书

技术领域

本发明属于荔枝的医药用途技术领域，尤其涉及荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用。

背景技术

非酒精性脂肪性肝病是指除酒精和其他明确的损肝因素所致的，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要病理表现的遗传-代谢-病理临床综合征，具有影响全身多系统、病程持续进展的特点。非酒精性脂肪性肝的发病机制极为复杂，比较认可的是二次打击学说，初次打击是胰岛素抵抗，二次打击主要指各种原因所致的氧化应激及脂质过氧化损伤。脂肪肝的形成和脂代谢障碍有着密切关系：肝细胞中甘油三酯(TG)、极低密度脂蛋白的合成与排出不平衡是形成脂肪肝的主要原因。当进入肝脏的脂肪量超过肝脏的脂质和氧化能力，或肝脏合成低密度脂蛋白障碍，肝脏合成的内源性TG就不能以脂蛋白的形式进出肝脏，则在肝细胞内外堆积形成脂肪肝。目前，临床上尚无完全有效的药物治疗非酒精性脂肪性肝，仅仅能够改善胰岛素抵抗，维护机体内环境脂质代谢、能量代谢和抗氧化物的平衡，促使机体保持在适应性反应阶段，延缓、阻止脂肪性肝病的病情进展。现阶段药物治疗主要针对不同病因进行诊治，如：对高血脂脂肪肝患者使用降脂药物，对糖尿病性脂肪肝患者使用降糖药。

荔枝为无患子科常绿植物的果实，主产于我国广东、广西、福建等地，目前我国荔枝年产量约160万吨，占世界荔枝总产量80％以上。在荔枝的深加工过程中产生了约40％鲜果质量的果皮和果核废弃物，大量荔枝果皮作为大宗农产品废弃物至今未能得到有效开发和利用。研究表明，荔枝果皮中含有大量的多酚类化合物，实验证明多酚类物质具有抗氧化、抗肿瘤、预防心血管疾病、延缓衰老等多种生物活性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用，以用于治疗非酒精性脂肪肝和肝脏脂肪堆积等相关肝病。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：荔枝皮多酚在制备降低肝脏甘油三酯的药物或保健品中的应用。

药物或保健品用于预防或治疗肝脏脂肪堆积。

药物或保健品用于预防或治疗非酒精性脂肪肝。

药物或保健品用于预防或治疗酒精性脂肪肝。

降低肝脏甘油三酯的药物或保健品，含治疗有效量的荔枝皮多酚和辅料。

荔枝皮多酚来自荔枝果皮醇提物。

荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮，用80％乙醇室温浸泡2次，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除叶绿素及蜡质后继续浓缩得浸膏，浸膏冷冻干燥后得到干浸膏。

荔枝果皮醇提物按以下方法制备：取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用6倍量80％乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏650g；取浸膏550g加水充分溶解后，采用Sephadex LH-20柱层析，0–100％MeOH进行梯度洗脱，20％为一个梯度，每一梯度2L及50％、60％的丙酮各2L，每份收集250mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份，50℃以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。

上述药物或保健品为口服剂型。

口服剂型为胶囊剂、片剂或颗粒剂。

发明人通过大量实验发现，来自荔枝果皮的荔枝皮多酚可有效降低肝脏胆固醇、肝脏甘油三酯、肝脏低密度脂蛋白胆固醇，从而有效地减少肝脏中脂肪堆积，可用于治疗非酒精性脂肪肝等相关肝病。

附图说明

图1是荔枝皮多酚(荔枝果皮醇提物)提取分离的工艺流程图。

图2各组小鼠肝脏照片，图中：A空白组，B模型组，C阳性组，D荔枝皮多酚低剂量组，E荔枝皮多酚高剂量组。

图3各组小鼠肝脏HE染色照片(HE×100)，图中：A空白组，B模型组，C阳性组，D荔枝皮多酚低剂量组，E荔枝皮多酚高剂量组。

具体实施方式

1.实验材料与方法

1.1药品和试剂

新鲜的荔枝果皮：2013年7月购于广西桂林市雁山区，经鉴定为无患子科荔枝(litchi chinensis)的果皮；辛伐他汀片：广东彼迪药业有限公司，批号20141002；总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)测定试剂盒：长春汇力；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血糖(FBG)、胰岛素(INS)测定试剂盒：南京建成；其余试剂均为国产分析纯。

1.2仪器

TGL-16R型高速冷冻离心机，珠海黑马公司；RT-9100型半自动生化分析仪，深圳雷杜生命科学股份有限公司；MK3型全自动酶标仪，赛默飞世尔(上海)仪器有限公司；电子天平，梅特乐-托利多仪器上海有限公司。

1.3实验动物及饲料

昆明小鼠，SPF级，体重18-22g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。生产许可证号：SCXK(湘)2009-0004。基础饲料，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。生产证号：SCXK(湘)2009-0009。

1.4荔枝皮多酚的制备

取新鲜荔枝果皮6.68Kg，用6倍量80％乙醇室温浸泡2次，每次7天，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，滤除蜡质及叶绿素后继续浓缩得浸膏650g；取浸膏550g加水充分溶解后，采用Sephadex LH-20柱层析(8cm i.d.×54cm，0–100％MeOH，20％为一个梯度，每一梯度2L及50％、60％的丙酮各2L)进行梯度洗脱，每份收集250mL，经硅胶薄层层析跟踪检测，合并相近流份，50℃以下旋转蒸发仪真空减压至干的浸膏。具体工艺流程参见图1。

研究表明，荔枝果皮各部位的多酚含量存在着差异，提取物经过Sephadex LH-20柱层析纯化后，其多酚类成分主要集中在Fr.3、Fr.4和Fr.5这三个部位中，总酚含量都达到40％以上，其中Fr.3的总酚含量44.02％，Fr.4的总酚含量46.53％，Fr.5的总酚含量52.48％，说明Sephadex LH-20对多酚类成分具有较好的富集作用。合并Fr.3、Fr.4和Fr.5这三个部位的干浸膏用于以下活性实验，测得合并后的干浸膏多酚含量45.62％(其中以锁状多聚体多酚为主，接近90％，小分子多酚含量只有11.02％)。

1.5非酒精脂肪肝动物模型的建立

将小鼠随机分为两组，对照组小鼠(20只)喂饲基础饲料，模型组小鼠(60只)喂饲高脂饲料(66.9％基础饲料、10％猪油、10％酪蛋白、10％蔗糖、2％胆固醇、1％胆酸盐、0.1％丙基硫氧嘧啶)，自由摄食、饮水。连续喂养8周后，与对照组比较，造模小鼠肝脏明显肿大、肝脏指数明显升高，肝组织病理切片观察可见肝细胞脂肪变性。

1.6分组及给药

将造模后的小鼠随机分成4组：模型组、阳性组(辛伐他汀)、荔枝皮多酚低剂量组、荔枝皮多酚高剂量组。对照组和模型组灌胃蒸馏水，阳性对照组(辛伐他汀5mg/kg)，荔枝皮多酚低剂量组(200mg/kg)，荔枝皮多酚高剂量组(400mg/kg)，给药体积0.2mL/10g，连续给药8周，每周记录小鼠体质量。

1.7指标测定

所有小鼠在末次给药后，禁食不禁水12h，眼球取血，3500r/min离心10min，血清于-20℃低温保存，用于检测各项生化指标。小鼠脱颈处死，剖腹，迅速取肝脏，拍照，称质量。剪下一叶肝脏用冰冷的0.9％的生理盐水充分灌流、洗净血液和血迹至白陶土样，用滤纸吸干，称重，快速地用剪刀将组织剪碎，加入冰冷的(4℃)0.9％的生理盐水制成匀浆液，4℃，4000r/min离心15分钟，弃去沉淀，留下上清液-20℃低温保存，用于检测各项生化指标。剪下一叶肝脏用冰冷的0.9％的生理盐水充分灌流、洗净血液和血迹至白陶土样，用滤纸吸干，称重，快速地用剪刀将组织剪碎，加入异丙醇制成匀浆液，过夜，离心，取上清液测定各项生化指标。剪下一叶肝脏置福尔马林溶液中固定，HE染色，切片，显微镜观察病理变化。计算肝脏指数和胰岛素抵抗指数，公式分别为：肝脏指数＝肝脏湿质量*1000/体质量；胰岛素抵抗指数(IRI)＝FBG*INS/22.5。

1.8统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，实验数据均以x±s表示，两个独立样本均数比较采用t检验，多个样本之间的两两比较采用单因素方差分析，P＜0.05为具有统计学意义。

2.结果

2.1肝组织病理学观察

2.1.1大体观察

由图2可知：空白对照组肝脏肉眼观察呈鲜红色，边缘锐利，表面光滑。非酒精性脂肪肝模型对照组肉眼见肝脏体积增大，边缘变钝，颜色呈土黄色，质软，与周围组织有黏连，切面油腻状。阳性辛伐他汀组肝脏体积增大，边缘变钝，颜色呈土黄色，肉眼见比模型组颜色减轻。荔枝皮多酚低、高剂量组肝脏接近正常，表面呈鲜红色，油腻状减轻，指压有弹性，肝脏体积还是增大。说明荔枝皮多酚可以有效的减轻模型组小鼠肝脏脂肪的堆积。

2.1.2HE染色光镜观察

由图3可知：正常组肝细胞肝小叶结构清晰，肝细胞以中央静脉为中心，向周围放射状分布，胞浆红染均匀一致，肝窦清晰可见，肝索排列整齐。非酒精性脂肪肝模型对照组大量肝细胞肿胀，气球样变，多数肝细胞内可见大小不等的脂滴空泡，肝索排列紊乱，汇管区伴有炎细胞浸润以及部分点状肝细胞坏死。阳性辛伐他汀组肝脏的损伤程度比模型组减轻，水样变性和脂肪变性减少，可见脂肪滴空泡。荔枝皮多酚低、高剂量组肝脏的损伤程度比模型组明显减轻，肝细胞脂肪变性显著减少，未见明显的气球样变性和脂肪变性，汇管区无明显炎细胞浸润。说明荔枝皮多酚可以有效的减轻模型组小鼠肝脏脂肪的堆积，减轻肝脏损伤。

2.2荔枝皮多酚对小鼠体重、肝重和肝指数的影响

从表1中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组体重无明显差异，肝重与肝指数明显升高，有统计学意义(P<0.01)，说明模型组小鼠肝脏肿大；与模型组比较，辛伐他汀组与荔枝皮多酚低、高剂量组体重、肝重、肝指数都无明显差异，说明辛伐他汀与荔枝皮多酚都不会减轻模型组小鼠的肝脏肿大。

表1荔枝皮多酚对小鼠体重、肝重和肝指数的影响(n＝12,)

注：与正常组比较，*p<0.05，**p<0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

2.3荔枝皮多酚对小鼠肝脏脂肪的影响：

从表2中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组肝脏TG、TC、HDLC、LDLC升高，有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，说明小鼠形成了脂肪肝，造模成功。与模型组比较，辛伐他汀能够显著降低肝脏TC、LDLC含量，有统计学意义(P<0.05)，能降低TG含量，但无显著意义，这与辛伐他汀的药理学意义相符合(辛伐他汀是羟甲基戊二酰辅酶还原酶抑制剂，抑制内源性胆固醇的合成，可降低胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等，降甘油三酯的效果较弱)，说明实验结果是真实可信的。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组都可以显著降低TG、TC、HDLC、LDLC含量，有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，说明荔枝皮多酚可有效的降低肝脏脂肪，治疗非酒精性脂肪肝。

表2荔枝皮多酚对小鼠肝脏脂肪的影响(n＝12,)

注：与正常组比较，*p<0.05，**p<0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

2.4荔枝皮多酚对小鼠血脂的影响

从表3中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组血中TC、HDLC、LDLC升高，有统计学意义(P<0.01)，从前面的数据中，可知小鼠已经形成了脂肪肝，但血中的甘油三酯并没有升高，这与人的情况相似，很多非酒精性脂肪肝患者，血脂并没有升高，在正常范围。模型组TC升高，是因为在高脂饮食中，我们加入了大量的胆固醇。与模型组比较，辛伐他汀能够显著降低TC含量，有统计学意义(P<0.05)，这也与辛伐他汀的药理学意义相符合(辛伐他汀可降低血中胆固醇)，说明实验结果是真实可信的。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组对TG、TC、HDLC、LDLC含量都没有显著性影响，说明荔枝皮多酚对血脂不起作用。

表3荔枝皮多酚对小鼠血脂的影响(n＝12,)

注：与正常组比较，*p<0.05，**p<0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

2.5荔枝皮多酚对小鼠血清转氨酶的影响

从表4中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组ALT活性升高，有统计学意义(P<0.01)，说明非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏具有一定损伤。与模型组比较，辛伐他汀不能够降低ALT，这也与辛伐他汀的药理学意义相符合(辛伐他汀具有一定的治疗脂肪肝作用，但有时可升高血清转氨酶)。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组都能够降低血清ALT活性，有统计学意义(P<0.01)，说明荔枝皮多酚在降低肝脏脂肪的同时，减轻了肝脏损伤。与正常组比较，模型组AST活性没有显著性变化。与模型组比较，辛伐他汀组、荔枝皮多酚低、高剂量组AST活性都没有显著性变化。

表4荔枝皮多酚对小鼠血清转氨酶的影响(n＝12)

注：与正常组比较，*p<0.05，**p<0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

2.6荔枝皮多酚对小鼠血糖、胰岛素的影响

从表5中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组血糖、胰岛素抵抗指数升高，有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，说明非酒精性脂肪肝模型小鼠产生了胰岛素抵抗。与模型组比较，辛伐他汀不能够降低血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数，这与辛伐他汀的药理学意义相符合(辛伐他汀能够治疗脂肪肝是因为辛伐他汀是胆固醇合成抑制剂)。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组对血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数都没有影响，说明荔枝皮多酚治疗非酒精性脂肪肝的作用机制与减轻胰岛素抵抗没有关系。

表5荔枝皮多酚对小鼠血糖、胰岛素的影响(n＝12)

注：与正常组比较，*p<0.05，**p<0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

2.7荔枝皮多酚对小鼠肝脏SOD、MDA的影响

从表6中可以看出，在连续给药8周后，与正常组比较，模型组MDA含量升高，有统计学意义(P<0.05)，SOD没有显著性变化，说明非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏产生了一定的氧化应激。与模型组比较，荔枝皮多酚低、高剂量组都能降低MDA含量，有统计学意义(P<0.05)，说明荔枝皮多酚在治疗非酒精性脂肪肝的同时减轻了肝脏氧化应激，这也可能是荔枝皮多酚能够防治非酒精性脂肪肝的作用机制之一。

表6荔枝皮多酚对小鼠小鼠肝脏SOD、MDA的影响(n＝12)

注：与正常组比较，*p<0.05，**p<0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。