技术领域
本发明属于功能性食品技术领域，涉及一种保健茶，具体涉及一种垂丝海棠茶，还涉及一种垂丝海棠茶水提物，同时还涉及该垂丝海棠茶水提物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。
背景技术
茶饮是中国的古老文化，随着社会经济的发展，人们追求的生活质量也不断的提高，当然对茶叶的要求也不例外。目前，人们不单单只是追求简单品尝，而是开始追求具有保健功能的茶叶来代替那种高档的礼品，也实行了“健康、绿色”饮用和送礼。
垂丝海棠 (Malus halliana Koehne) 为蔷薇科苹果属落叶乔木，是春季庭园重要的观赏树种，各地均有栽培，主要分布于陕西、四川、江苏、安徽、浙江和云南等地。其味淡，苦，性平。其花入药，具有调经活血之功效，多用于治疗吐血、尿血、便血、跌打损伤、骨折等疾病。垂丝海棠还具有一定的食用功能，它的果实酸甜可食，可以制成蜜饯。茶是一种天然健康饮料，给人体健康带来许多益处，将垂丝海棠叶炒制成茶和垂丝海棠其他药理活性至今未见报道。
糖尿病是一种以胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用不足引起的以高血糖为特征的慢性代谢性疾病，继发脂质和蛋白质代谢障碍。糖尿病是一种由于遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合症，临床上表现为：三多（多食、多饮、多尿）、一少（体重下降）、高血糖症状。由糖尿病导致的死亡率继心血管疾病和癌症之后列第三位，根据世界卫生组织1997年报道，全球已确诊的糖尿病患者约1.35亿，预计到2025年糖尿病患者将达到2.99亿。糖尿病及其并发症已成为严重危害社会和家庭的一种流行性非传染病，积极开展糖尿病及其并发症的防治已成为目前医学届研究的热点。常用的口服降血糖药主要有五类：磺脲类、双胍类、胰岛素增敏剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂和膳食调剂节。西药降血糖作用强、快，但往往缺乏整体的治疗效果，不利于糖尿病患者长期使用，且具有明显的副作用，从中药中寻找新的降血糖药物，有利于提高患者的整体状况。
糖尿病病发过程中往往先出现餐后高血糖，而后发展成糖尿病，即前者是后者的先期征兆。对于糖尿病患者，特别是Ⅱ型病人，餐后高血糖对机体的危害远远超过空腹高血糖，餐后高血糖不仅极易诱发各种并发症，还会极大地提高糖尿病的死亡率，所以降低餐后血糖是预防糖尿病，减少并发症和降低死亡率的重要措施之一。α-葡萄糖苷酶抑制剂是七十年代后期研究开发出的一类新型口服降血糖药物，其作用机理在于：通过竞争性抑制α-葡萄糖苷酶的活性，阻滞双糖水解成单糖，延缓糖的吸收，使血糖平稳并缓慢地维持在一定水平。有效的控制了餐后血糖的升高，并可预防糖尿病的发生，减少了并发症和降低了死亡率。α-葡萄糖苷酶抑制剂不仅对糖尿病有确切的疗效，而且对于肥胖症、慢性乙肝、艾滋病及肿瘤都有一定的治疗作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种垂丝海棠茶及其制作方法，还提供一种垂丝海棠茶水提物，同时还提供该垂丝海棠茶水提物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。
本发明采用以下技术方案：
一种垂丝海棠茶的制作方法，垂丝海棠叶经加工处理得到垂丝海棠茶。
所述加工处理时的步骤为：1）将垂丝海棠叶用清水洗净，沥干，摊放，使叶质变柔软；2）采用锅炒进行杀青，锅温控制在80-100℃，杀青时间为15-20分钟；3）再用湿布包闷15-25分钟，形成一个茶团，朝一个方向滚揉，进行初揉2-3分钟，再复揉2-3分钟，以芽叶揉紧成条、茶汁溢出为适度；4）当水分搓揉到5至6成干的时候，进行理条；5）干燥即得垂丝海棠茶。
所述垂丝海棠叶的采摘标准为一芽两叶；摊放时厚度为1-2cm，摊放时间1-2小时，每隔20-30min翻动一次；滚揉时分两次进行，初揉2-3分钟，再复揉2-3分钟，过程中解块1-2次；干燥时温度控制在90-100℃之间，时间6-8分钟。
所述加工处理时的步骤为：1）一芽二叶初展的柔嫩新鲜的垂丝海棠叶用清水漂洗除去灰尘，沥干，适当地摊放（摊放时厚度约为1-2cm，摊放时间1-2小时，并且每隔20-30min翻动一次，薄摊轻翻，以免损伤芽叶），蒸发一部分水分，使叶质变柔软；2）采用锅炒进行杀青，锅温控制在80-100℃，鲜叶下锅有轻微爆声并有香气出来，待水气大量蒸发，芽叶萎软时，即应降温，不再有爆声为宜，杀青时间为15-20分钟左右；3）杀青后芽叶保持一定的含水量便于手工揉捻，用湿布包闷20分钟左右，茶叶回软一致形成一个茶团，朝一个方向滚揉，手势要轻，避免揉碎芽叶，进行初揉2-3分钟，再复揉2-3分钟，滚揉过程中解块1-2次，以防闷黄，以芽叶揉紧成条，茶汁溢出为适度；4）当茶叶水分搓揉到5至6成干的时候，用手掌将包好的茶团来回轻轻的搓，搓揉到茶叶可以自然的从手掌掉入锅里，慢慢定型；5）将整理好约为6-7成干度的茶叶，用热风烘干机进行高温干燥，温度控制在90-100℃之间，时间6-8分钟，烘干后包装即得垂丝海棠茶。
垂丝海棠茶经水提、浓缩制得垂丝海棠茶水提物。
垂丝海棠茶先粉碎，然后用蒸馏水100℃煎煮提取2次，每次1-2h，然后过滤、合并水煎液，浓缩。
粉碎时粒度80-100目，每次煎煮时蒸馏水的用量为垂丝海棠茶质量10-15倍。
垂丝海棠茶水提物在制备降血糖和治疗糖尿病药物方面的应用
垂丝海棠茶水提物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。
本发明经过特殊的制茶工艺制成了垂丝海棠茶，去除了新鲜垂丝海棠叶的涩味，垂丝海棠茶泡制后呈青绿色，味道清香、淡淡的苦味后稍有甜味；本发明的制茶工艺既保证了垂丝海棠茶泡茶时的口感，又不破坏其中的有效成分，使垂丝海棠茶能发挥一定的保健与治疗作用，可以作为糖苷酶抑制剂降低餐后血糖。
本发明对所制得的垂丝海棠茶进行了深层次的研究，对垂丝海棠茶进行水提值得了垂丝海棠茶水提物，并对垂丝海棠茶水提物的功效进行了研究验证，经体外实验以阿卡波糖为阳性对照，观察垂丝海棠茶水提物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用，实验结果表明垂丝海棠茶水提物对α-葡萄糖苷酶具有明显的抑制作用，而且在一定浓度下呈量效关系，抑制率随浓度的升高而逐渐增大，垂丝海棠茶水提物α-葡萄糖苷酶的抑制活性极好（IC50=267.36 mg·L-1），远高于阳性对照阿卡波糖（IC50=1213.38 mg·L-1）。
附图说明
图1为垂丝海棠茶水提物浓度对α-葡萄糖苷酶抑制效果的影响曲线图。
具体实施方式
实施例1
垂丝海棠茶的制备过程：
采摘：采摘垂丝海棠的柔嫩新鲜芽叶，标准为一芽二叶初展，不采摘病虫害嫩叶或枯叶、不采摘老梗、花蕾芽叶和不达标的芽叶；
摊放：鲜叶用清水漂洗，除去灰尘，沥干，适当摊放，让其“青气”和“表面水”慢慢散发，使叶质变柔软，摊放厚度约为1cm，摊放时间1 h，并且约隔半小时翻动一次，薄摊轻翻，以免损伤芽叶；
杀青：采用锅炒进行杀青，锅温控制在80℃，鲜叶下锅时有轻微爆声并有香气出来，待水气大量蒸发，芽叶萎软时，即应降温，不再有爆声为宜，杀青时间为20 min左右；
揉捻：杀青后芽叶保持一定的含水量便于手工揉捻，将炒好的芽叶用湿布包闷15分钟形成一个茶团，朝一个方向滚揉，手势要轻，避免揉碎芽叶，进行初揉2分钟，再复揉3分钟，解块2次，以防闷黄，以芽叶揉紧成条，茶汁溢出为适度；
理条：当茶叶水分搓揉到5至6成干的时候，用手掌来回轻轻的搓，搓揉到茶叶可以自然的从手掌掉入锅里，慢慢定型；
烘干：将整理好约为6-7成干度的茶叶，用热风烘干机进行高温干燥，烘干机温度控制在90℃，时间约为8 分钟，冷却至室温后包装成垂丝海棠茶。
取以上制得的垂丝海棠茶100 g，粉碎至80目后，分别1000g蒸馏水100℃煎煮提取2次，依次为2 h和1.5 h，过滤、合并水煎液，浓缩为垂丝海棠茶水提物（相对密度0.98）。垂丝海棠茶水提物得率30.2%。
实施例2
垂丝海棠茶的制备过程：
采摘：采摘垂丝海棠的柔嫩新鲜芽叶，标准为一芽二叶初展，不采摘病虫害嫩叶或枯叶、不采摘老梗、花蕾芽叶和不达标的芽叶；
摊放：鲜叶用清水漂洗，除去灰尘，沥干，适当摊放，让其“青气”和“表面水”慢慢散发，使叶质变柔软，摊放厚度约为2cm，摊放时间2h，并且约隔20min翻动一次，薄摊轻翻，以免损伤芽叶；
杀青：采用锅炒进行杀青，锅温控制在100℃，鲜叶下锅时有轻微爆声并有香气出来，待水气大量蒸发，芽叶萎软时，即应降温，不再有爆声为宜，杀青时间为15min左右；
揉捻：杀青后芽叶保持一定的含水量便于手工揉捻，将炒好的芽叶用湿布包闷20分钟形成一个茶团，朝一个方向滚揉，手势要轻，避免揉碎芽叶，进行初揉3分钟，再复揉2分钟，解块1次，以防闷黄，以芽叶揉紧成条，茶汁溢出为适度；
理条：当茶叶水分搓揉到5至6成干的时候，用手掌来回轻轻的搓，搓揉到茶叶可以自然的从手掌掉入锅里，慢慢定型；
烘干：将整理好约为6-7成干度的茶叶，用热风烘干机进行高温干燥，烘干机温度控制在100℃，时间约为6 分钟，冷却至室温后包装成垂丝海棠茶。
取以上制得的垂丝海棠茶100 g，粉碎至80目后，分别1500g蒸馏水100℃煎煮提取2次，每次1h，过滤、合并水煎液，浓缩为垂丝海棠茶水提物（相对密度1.0）。垂丝海棠茶水提物得率33.1%。
实施例3
垂丝海棠茶的制备过程：
采摘：采摘垂丝海棠的柔嫩新鲜芽叶，标准为一芽二叶初展，不采摘病虫害嫩叶或枯叶、不采摘老梗、花蕾芽叶和不达标的芽叶；
摊放：鲜叶用清水漂洗，除去灰尘，沥干，适当摊放，让其“青气”和“表面水”慢慢散发，使叶质变柔软，摊放厚度约为1cm，摊放时间1 h，并且约隔半小时翻动一次，薄摊轻翻，以免损伤芽叶；
杀青：采用锅炒进行杀青，锅温控制在90℃，鲜叶下锅时有轻微爆声并有香气出来，待水气大量蒸发，芽叶萎软时，即应降温，不再有爆声为宜，杀青时间为18 min左右；
揉捻：杀青后芽叶保持一定的含水量便于手工揉捻，将炒好的芽叶用湿布包闷25分钟形成一个茶团，朝一个方向滚揉，手势要轻，避免揉碎芽叶，进行初揉3分钟，再复揉3分钟，解块1次，以防闷黄，以芽叶揉紧成条，茶汁溢出为适度；
理条：当茶叶水分搓揉到5至6成干的时候，用手掌来回轻轻的搓，搓揉到茶叶可以自然的从手掌掉入锅里，慢慢定型；
烘干：将整理好约为6-7成干度的茶叶，用热风烘干机进行高温干燥，烘干机温度控制在95℃，时间约为7 分钟，冷却至室温后包装成垂丝海棠茶。
取以上制得的垂丝海棠茶100 g，粉碎至100目后，分别1200g蒸馏水100℃煎煮提取2次，每次1.5h，过滤、合并水煎液，浓缩为垂丝海棠茶水提物（相对密度1.1）。垂丝海棠茶水提物得率29.8%。
活性实验
采用实施例1的垂丝海棠茶水提物进行体外抑制α-糖苷酶活性试验
方法：96微孔板筛选方法
原理：α-D-葡萄糖苷酶催化水解4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNP-G），产生硝基苯酚（PNP，黄色物质，在400 m左右有最大吸收），α-糖苷酶抑制剂可抑制α-葡萄糖苷酶与底物结合从而降低PNP的释放量。以一定时间内反应体系中PNP的含量变化来计算水提物的酶抑制活性。
仪器：LRH-150恒温培养箱(上海一恒科技有限公司)；Multiskan MK3酶标仪（Thermo Electron）；DELTA 320型PH计（Mettler-Toledo）；电子天平（Mettler-Toledo）；旋转蒸发仪（Heidolph）。
试剂：α-葡萄糖苷酶（Sigma公司，EC 3.2.1.20，from baker’s yeast，批号：105K1313），4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG，Sigma公司，批号：026K1516），阿卡波糖（卡博平，杭州中美华东制药有限公司，批号：110704），磷酸盐缓冲液（PH 6.8），其他试剂均为分析纯。
检测方法：112 L磷酸钾缓冲液(pH 6.8)，加入20 μL（浓度为0.2 U/mL）的α-葡萄糖苷酶，8 μL样品溶液，37℃恒温15 min，加入20 μL2.5 mmol/L 4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷，37℃恒温反应15 min。再加入80 μL (浓度为 0.2 mol/L) 的终止剂Na2CO3溶液，于405 nm波长下测OD值。实验设置4组，分别为：a.阴性对照组；b.空白组；c.样品测定组；d.样品对照组。按照下述公式计算出抑制率，并用Origin软件求出相应IC50值。
抑制率：
分别利用上述测定方法测定垂丝海棠茶水提物和阳性对照阿卡波糖的IC50值。
实验结果如表1所示：
表1垂丝海棠水提物的α-葡萄糖苷酶抑制活性
（1）由表1可以看出，垂丝海棠茶水提物对α-葡萄糖苷酶的抑制率大于阿卡波糖，并且其IC50值（IC50=267.36 μg/mL) 远小于阳性对照药物阿卡波糖（IC50=1213.38μg/mL)，显示垂丝海棠茶水提物具有很好的α-葡萄糖苷酶抑制作用。
（2）图1显示，垂丝海棠茶水提物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性均呈剂量依赖性，该水提物在浓度为46.875mg/mL时，其对α-葡萄糖苷酶的抑制率为7.03%，随着浓度的增大，水提物的抑制率不断增加，当水提物在浓度为1.5mg/mL时，抑制率达到93.93%。实验结果表明，垂丝海棠茶水提物能很好的抑制α-葡萄糖苷酶活性，可以用于制备降血糖药物。