“三选两早一促”的苹果育种法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 103314840 B (45)授权公告日 2014.09.24 CN 103314840 B (21)申请号 201310205419.6 (22)申请日 2013.05.29 A01H 1/02(2006.01) (73)专利权人 山东农业大学 地址 271018 山东省泰安市岱宗大街 61 号 (72)发明人 陈学森 张宗营 冀晓昊 张芮 毛志泉 张艳敏 吴树敬 冯守千 刘大亮 高利平 张晶 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 关畅 (54) 发明名称 “三选两早一促” 的苹果育种法 (57) 摘要 本发明公开了一种 “三选。

2、两早一促” 的苹果 育种法。本发明提供的苹果育种方法， 包括如下 步骤 ：（1） 将新疆红肉苹果的花粉对去雄后的综 合性状优良的苹果品种进行授粉， 获得杂交种子 ； （2） 将杂交种子进行层积处理， 打破休眠后播种于 温室并进行育苗 ；（3） 将实生苗移栽至大田， 初果 期从实生苗中筛选红肉脆肉株系 ；（4） 将各个红 肉脆肉株系的花粉分别对去雄后的综合性状优良 的苹果品种进行授粉， 获得回交种子 ；（5） 将回交 种子进行层积处理， 打破休眠后播种于温室进行 育苗， 在幼苗期淘汰绿色叶片的单株、 保留红色叶 片的单株 ；（6） 将实生苗单株移栽至大田。本发明 2006 年至 2013 年已选。

3、出了 3 个新品系。如采用 传统的办法， 至少需要 20 30 年的时间。 (51)Int.Cl. 审查员 夏文静 权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 (10)授权公告号 CN 103314840 B CN 103314840 B 1/1 页 2 1. 一种苹果育种方法， 包括如下步骤 ： (1) 将新疆红肉苹果的花粉对去雄后的 红富士 苹果进行授粉， 获得杂交种子 ； (2)将步骤(1)得到的杂交种子进行1-3层积处理， 打破休眠后播种于温室并进行育 苗 ； (3) 将步骤 (2) 得。

4、到的实生苗移栽至大田， 于初果期从所述实生苗中筛选果皮及果肉 均为红色且果实脆度值 1.0kg/s 的株系， 即为红肉脆肉株系 ； (4) 将步骤 (3) 筛选得到的各个红肉脆肉株系的花粉分别对去雄后的 红富士 进行授 粉， 获得回交种子 ； (5) 将步骤 (4) 得到的回交种子进行 1-3层积处理， 打破休眠后播种于温室进行育 苗， 在幼苗期淘汰绿色叶片的单株、 保留红色叶片的单株 ； (6) 将步骤 (5) 得到的实生苗单株移栽至大田。 2.如权利要求1所述的方法， 其特征在于 ： 所述步骤(2)和/或所述(5)中,在所述温 室中进行育苗的条件为 ： 25、 每天光照12小时、 光照强度。

5、3000lx， 从种子萌发开始每7-10 天浇一次营养液 ； 所述营养液为将 MS 基本培养基的大量元素母液用水稀释至 10 倍体积得 到的溶液 ； 所述MS基本培养基的大量元素母液的制备方法 ： 将1650mg NH4NO3、 1900mg KNO3、 440mg CaCl22H2O、 370mg MgSO47H2O 和 170mg KH2PO4溶于水并用水定容至 1L。 3. 如权利要求 1 或 2 所述的方法， 其特征在于 ： 其特征在于 ： 所述步骤 (3) 和 / 或所述 (6) 中 , 在所述大田中进行栽培管理的方法如下 ： 在拟定植实生苗的大田中每亩施入有机 肥 6000kg 并。

6、浇水沉实， 然后定植所述实生苗， 第二年春天在定植有实生苗的大田中每亩再 施入有机肥 6000kg 并及时浇水 ； 从定植实生苗至再施入有机肥前， 每两周用 0.3尿素水 溶液进行根外追肥一次， 每两周用 0.4磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次， 根外追肥和 叶面施肥交替进行 ； 从再施入有机肥后， 每两周用 0.4磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥 一次。 权 利 要 求 书 CN 103314840 B 2 1/6 页 3 “三选两早一促” 的苹果育种法 技术领域 0001 本发明涉及一种 “三选两早一促” 的苹果育种法。 背景技术 0002 遗传多样性不仅是维护生态安全的重要屏障， 也是现代农。

7、业可持续发展的物质基 础。调研结果表明， 在过去几十年国内外育成的 1000 多个苹果品种， 80% 是 金帅 、元帅 及 国光 品种的杂交、 实生或芽选后代， 这种 “近亲繁殖” 往往带来品种的遗传基础狭窄、 遗 传脆弱性加大、 适应性与抗逆性减退等问题。同时， 生产中对产量和外观性状的过分追求， 使得其他许多优良性状在历史长河中被淘汰。近年来， 消费者对安全及特色农产品的需求 使得生产实践中多抗和多样性果品成为产业发展的重要方向。 0003 新疆野苹果 （或塞威士苹果， Malus sieversii(Lebed.)Roem.） 是世界栽培苹果的 祖先种， 不仅遗传多样性丰富， 而且果实的。

8、总酚、 原花青素、 表儿茶素、 根皮苷、 绿原酸、 儿茶 素及 Ca 等功能成分含量均是 红星 苹果品种的 3 倍以上， 在检测到的 177 种香气成分中， 缩醛类和内酯类等 90 种成分为新疆野苹果特有成分。但由于农田开垦等原因， 新疆野苹果 资源正遭到严重破坏， 濒临灭绝。因此， 有效利用新疆野苹果开展苹果杂交育种， 不仅可扩 大栽培苹果品种的遗传多样性， 培育功能型苹果新品种， 而且有助于新疆野苹果资源的科 学保护与持续利用， 是苹果种质资源与遗传育种研究领域的重要方向之一。 0004 多年生的果树作物育种周期长、 占地多、 投入大， 而苹果功能成分育种的过程又是 多指标综合评价与选择的。

9、过程， 涉及外观和鲜食品质、 功能成分含量等多种性状， 采用少数 几个单项指标的传统选择方法， 很难对功能型苹果进行有效选择。因此研究建立功能型苹 果高效育种技术体系， 缩短育种周期， 对于加速功能型苹果新品种的选育与示范推广具有 重要意义。 0005 新疆红肉苹果 （Malus sieversii f.neidzwetzkyana(Dieck)Langenf） 是新疆野苹 果的变型， 抗旱力强， 结果年龄较早， 其枝、 叶、 花、 果皮及果肉均为红色， 富含花青苷， 具有 较高的观赏和医疗保健价值， 但其果肉容易软化变绵， 有待进一步改良。 发明内容 0006 本发明的目的是提供一种 “三选。

10、两早一促” 的苹果育种法。 0007 本发明提供了一种苹果育种方法， 包括如下步骤 ： 0008 （1） 将新疆红肉苹果的花粉对去雄后的综合性状优良的苹果品种 （第一选） 进行授 粉， 获得杂交种子 ； 0009 （2） 将步骤 （1） 得到的杂交种子进行 1-3层积处理， 打破休眠后播种于温室并进 行育苗 （第一早） ； 0010 （3） 将步骤 （2） 得到的实生苗移栽至大田， 于初果期从所述实生苗中筛选 （第二选） 果皮及果肉均为红色且果实脆度值 1.0kg/s 的株系， 即为红肉脆肉株系 ； 0011 （4） 将步骤 （3） 筛选得到的各个红肉脆肉株系的花粉分别对去雄后的所述综合性 说。

11、 明 书 CN 103314840 B 3 2/6 页 4 状优良的苹果品种进行授粉 （第二早） ， 获得回交种子 ； 0012 （5） 将步骤 （4） 得到的回交种子进行 1-3层积处理， 打破休眠后播种于温室进行 育苗， 在幼苗期 （即从种子萌发开始计时， 3 个月以内的植株） 淘汰绿色叶片的单株、 保留红 色叶片的单株 （第三选） ； 0013 （6） 将步骤 （5） 得到的实生苗单株移栽至大田。 0014 所述步骤 （2） 和 / 或所述 （5） 中 , 在所述温室中进行育苗的条件为 ： 25、 每天光 照12小时、 光照强度3000lx， 从种子萌发开始每7-10天浇一次营养液。 所。

12、述营养液具体可 为将 MS 基本培养基的大量元素母液用水稀释至 10 倍体积得到的溶液。 0015 所述步骤 （2） 中， 所述育苗的方法具体如下 ： 将打破休眠后的种子播种于装有育 苗基质的营养钵 （每个营养钵播种 3-5 粒种子） 培养至实生苗高度为 8-15cm、 根颈处木质化 （通常为播种 2-3 个月） ， 然后将实生苗移栽至新的装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵移栽 1 株） 进行培养 ； 本步骤中的培养条件为 ： 25、 每天光照 12 小时、 光照强度 3000lx， 从种子 萌发开始每 7-10 天浇一次所述营养液、 每次每个营养钵浇 40-50ml。 0016 所述步骤 （。

13、5） 中， 所述育苗的方法具体如下 ： 将打破休眠后的种子播种于装有育 苗基质的营养钵 （每个营养钵播种 3-5 粒种子） 培养至实生苗高度为 8-15cm、 根颈处木质化 （通常为播种 2-3 个月） 后进行筛选， 淘汰绿色叶片的单株、 保留红色叶片的单株 ； 然后将筛 选得到的实生苗移栽至新的装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵移栽 1 株） 进行培养 ； 本步 骤中的培养条件为 ： 25、 每天光照 12 小时、 光照强度 3000lx， 从种子萌发开始每 7-10 天 浇一次所述营养液、 每次每个营养钵浇 40-50ml。 0017 所述步骤 （3） 和 / 或所述 （6） 中 , 在所。

14、述大田中进行 “促长促花缩童期” 处理 （一 促） 。 0018 所述步骤 （3） 和 / 或所述 （6） 中 , 在所述大田中进行栽培管理的方法如下 ： 在拟定 植实生苗的大田中每亩施入有机肥 6000kg 并浇水沉实， 然后定植所述实生苗， 第二年春天 在定植有实生苗的大田中每亩再施入有机肥 6000kg 并及时浇水 ； 从定植实生苗至再施入 有机肥前， 每两周用0.3%尿素水溶液进行根外追肥一次， 每两周用0.4%磷酸二氢钾水溶液 进行叶面施肥一次， 根外追肥和叶面施肥交替进行 ； 从再施入有机肥后， 每两周用 0.4% 磷 酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次。 0019 所述步骤 （3） 。

15、中， 在所述大田中进行栽培管理的方法如下 ： 在拟定植实生苗的大 田中每亩施入有机肥 （如充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并浇水沉实， 然后定植所述实生苗， 第 二年春天在定植有实生苗的大田中每亩再施入有机肥 （如充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并及 时浇水 ； 从定植实生苗至再施入有机肥前， 每两周用 0.3% 尿素水溶液进行根外追肥一次 （每次每亩施入 5-10L） ， 每两周用 0.4% 磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次 （每次每亩施 入 5-10L） ， 根外追肥和叶面施肥交替进行 ； 从再施入有机肥后， 每两周用 0.4% 磷酸二氢钾 水溶液进行叶面施肥一次 ( 每次每亩加入 5。

16、-10L)。 0020 所述步骤 （6） 中， 在所述大田中进行栽培管理的方法如下 ： 在拟定植实生苗的大 田中每亩施入有机肥 （如充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并浇水沉实， 然后定植所述实生苗， 第 二年春天在定植有实生苗的大田中每亩再施入有机肥 （如充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并及 时浇水 ； 从定植实生苗至再施入有机肥前， 每两周用 0.3% 尿素水溶液进行根外追肥一次 （每次每亩施入 5-10L） ， 每两周用 0.4% 磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次 （每次每亩施 说 明 书 CN 103314840 B 4 3/6 页 5 入 5-10L） ， 根外追肥和叶面施肥交替进。

17、行 ； 从再施入有机肥后， 每两周用 0.4% 磷酸二氢钾 水溶液进行叶面施肥一次 ( 每次每亩加入 5-10L)。 0021 所述综合性状优良的苹果品种具体可为 红富士 苹果。 0022 所述 （6） 中， 还可包括从所述实生苗中筛选具有优良性状的品系的步骤。所述具 有优良性状的品系具体可为果实中的总酚含量和类黄酮含量均高于 红富士 苹果的果实 的实生苗。 0023 所述方法中， 为了体现大样本， 需确保每个回交组合有 1000 株以上的实生苗定植 于选种圃。 0024 本发明的发明人在对新疆野苹果生存现状、 群体遗传结构、 遗传多样性及核心种 质构建等进行研究的基础上， 进行了多项育种技术。

18、创新研究， 采用多组合、 大群体的育种策 略， 于 2006 年在国内率先构建了 红富士 苹果 新疆红肉苹果的杂种一代 （F1） 分离群 体， 2007 年定植的杂种一代 （F1） 分离群体实生苗， 采用早播种及促长促花缩童期措施， 实生 苗于 2009 年陆续开花坐果。2009 2013 年， 每年从 F1分离群体中选出 5-10 个红肉脆肉 株系与 红富士 等苹果品种回交， 依据叶色与未来果肉颜色相关的原理， 在回交一代群体 杂种实生苗的幼苗期， 及时进行早期选择， 淘汰绿色单株， 确保每个回交组合有 1000 株以 上的杂种实生苗定植于选种圃， 目前已在选种圃定植了 20 个杂交组合的回。

19、交一代 （BC1） 杂 种实生苗 3 万， 其中 2009 年杂交、 2010 年定植的实生苗， 2012 年已陆续开花坐果， 并已从中 选出了 3 个新品系。如果采用传统的办法， 获得以上成果至少需要 20 30 年的时间。以 上数据表明， 本发明所提供的功能型苹果 “三选两早一促” 高效育种法是十分有效的。 附图说明 0025 图 1 为杂交一代苹果的照片。 0026 图 2 为回交一代苹果的照片。 具体实施方式 0027 以下的实施例便于更好地理解本发明， 但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法， 如无特殊说明， 均为常规方法。 下述实施例中所用的试验材料， 如无特殊说明， 均为自 。

20、常规生化试剂商店购买得到的。 以下实施例中的定量试验， 均设置三次重复实验， 结果取平 均值。实施例中所用的营养钵容积约为 350mL。 0028 新疆红肉苹果， 为遗传多样性丰富的栽培苹果祖先种， 提及新疆红肉苹果的参考 文献 ： 王延玲， 陈学森等， 新疆红肉苹果 MYB 转录因子 MsMYB10 的克隆、 序列分析及原核表 达， 中国农业科学， 2010， 43（13） :2735-2743。 0029 红富士 苹果， 提及的参考文献 ： 王传增， 陈学森等， 苹果红色芽变香气组分及脂 肪酸代谢相关酶活性分析， 园艺学报， 2012， 39（12） ： 2447-2456。 0030 M。

21、S 基本培养基的大量元素母液的制备方法 ： 将 1650mg NH4NO3、 1900mg KNO3、 440mg CaCl22H2O、 370mg MgSO47H2O 和 170mg KH2PO4溶于水并用水定容至 1L。 0031 实施例 1、 0032 实验地点 ： 步骤 1 和步骤 5 的实验地点为山东牟平， 步骤 2、 步骤 3、 步骤 4 和步骤 6 的实验地点为在山东泰安， 步骤 7 和步骤 8 的实验地点为山东冠县。 说 明 书 CN 103314840 B 5 4/6 页 6 0033 1、 杂交 0034 2006 年将新疆红肉苹果的花粉对去雄后的 红富士 苹果进行授粉， 。

22、收获 F1杂交 种子， 将F1杂交种子洗净后放到1-3冰箱保鲜室层积处理60d左右 （目的是通过满足需冷 量来解除种子休眠） 。 0035 2、 温室育苗 （早播种） 0036 2006 年 12 月， 将完成步骤 1 的种子播种于装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵播 种 3-5 粒种子） 培养至实生苗高度为 8-15cm、 根颈处木质化 （通常为播种 2-3 个月） ， 然后将 实生苗移栽至新的装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵移栽 1 株） 进行培养 ； 本步骤中的培 养条件为 ： 25、 每天光照 12 小时、 光照强度 3000lx， 从种子萌发开始每 7-10 天浇一次营 养液 （将。

23、 MS 基本培养基的大量元素母液用水稀释至 10 倍体积即为营养液） 、 每次每个营养 钵浇 40-50ml。 0037 3、“促长促花缩童期” 处理 0038 2007 年 2 月， 在拟定植实生苗的选种圃 （大田） 中每亩施入有机肥 （本实施例中采 用的为充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并浇水沉实 ； 2007 年 4 月将完成步骤 2 的实生苗定植于 选种圃， 2008 年 4 月在定植有实生苗的选种圃中每亩再施入有机肥 （本实施例中采用的为 充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并及时浇水 ； 从定植实生苗至 2008 年 4 月施入有机肥前， 每两 周用 0.3% 尿素水溶液进行根外追。

24、肥一次， 每次每亩施入 5-10L ； 每两周用 0.4% 磷酸二氢 钾水溶液进行叶面施肥一次， 每次每亩施入 5-10L， 根外追肥和叶面施肥交替进行 ； 从 2008 年 4 月施入有机肥后， 每两周用 0.4% 磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次， 每次每亩施入 5-10L。 0039 4、 2009 年， 步骤 3 的部分实生苗开花， 取所有红色花的花粉并混合。 0040 5、 回交 （早回交） 0041 2009 年， 将步骤 4 得到的花粉对去雄后的 红富士 苹果进行授粉， 收获 BC1杂交 种子， 将 BC1杂交种子洗净后放到 1-3冰箱保鲜室层积处理 60d 左右。 0042 6。

25、、 温室育苗 0043 2009 年 12 月， 将完成步骤 5 的种子播种于装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵播 种 3-5 粒种子） 培养至实生苗高度为 8-15cm、 根颈处木质化 （通常为播种 2-3 个月） 后进行 筛选 （淘汰绿色叶片的单株、 保留红色叶片的单株） ， 从实生苗中筛选到 600 株 ； 然后将筛选 得到的实生苗移栽至新的装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵移栽 1 株） 进行培养 ； 本步骤 中的培养条件为 ： 25、 每天光照 12 小时、 光照强度 3000lx， 从种子萌发开始每 7-10 天浇 一次营养液、 每次每个营养钵浇 55-60ml。 0044 7、“。

26、促长促花缩童期” 处理 0045 2010 年 2 月， 在拟定植实生苗的选种圃 （大田） 中每亩施入有机肥 （本实施例中采 用的为充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并浇水沉实 ； 2010 年 4 月完成步骤 6 的实生苗定植于选 种圃， 2011 年 4 月在定植有实生苗的选种圃中每亩再施入有机肥 （本实施例中采用的为充 分腐熟的奶牛粪） 6000kg并及时浇水 ； 从定植实生苗至2011年4月施入有机肥前， 每两周用 0.3% 尿素水溶液进行根外追肥一次， 每次每亩施入 5-10L ； 每两周用 0.4% 磷酸二氢钾水溶 液进行叶面施肥一次， 每次每亩施入 5-10L， 根外追肥和叶面施。

27、肥交替进行 ； 从 2008 年 4 月 施入有机肥后， 每两周用 0.4% 磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次， 每次每亩加入 5-10L。 说 明 书 CN 103314840 B 6 5/6 页 7 0046 8、 2012年， 步骤7的部分实生苗开花坐果， 从中筛选出了2个具有红色果肉性状的 株系。 0047 实施例 2、 0048 实验地点 ： 步骤 1 和步骤 5 的实验地点为山东牟平， 步骤 2、 步骤 3、 步骤 4 和步骤 6 的实验地点为在山东泰安， 步骤 7 和步骤 8 的实验地点为山东冠县。 0049 1、 杂交 0050 2006 年将新疆红肉苹果的花粉对去雄后的 红富。

28、士 苹果进行授粉， 收获 F1杂交 种子， 将F1杂交种子洗净后放到1-3冰箱保鲜室层积处理60d左右 （目的是通过满足需冷 量来解除种子休眠） 。 0051 2、 温室育苗 （早播种） 0052 2006 年 12 月， 将完成步骤 1 的种子播种于装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵播 种 3-5 粒种子） 培养至实生苗高度为 8-15cm、 根颈处木质化 （通常为播种 2-3 个月） ， 然后将 实生苗移栽至新的装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵移栽 1 株） 进行培养 ； 本步骤中的培 养条件为 ： 25、 每天光照 12 小时、 光照强度 3000lx， 从种子萌发开始每 7-10 天。

29、浇一次营 养液 （将 MS 基本培养基的大量元素母液用水稀释至 10 倍体积即为营养液） 、 每次每个营养 钵浇 40-50ml。 0053 本步骤中由于采用温室育苗， 在2006年12月份即可开始， 与传统的春天大田播种 育苗相比， 可以显著提高成苗率， 加速实生苗的生长， 有利于缩短童期， 提早结果。 0054 3、“促长促花缩童期” 处理 0055 2007 年 2 月， 在拟定植实生苗的选种圃 （大田） 中每亩施入有机肥 （本实施例中采 用的有机肥为充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并浇水沉实 ； 2007 年 4 月将 1200 株完成步骤 2 的 实生苗定植于选种圃 （株行距为 1。

30、m2m， 每亩约定植 333 株） ， 2008 年 4 月在定植有实生苗 的选种圃中每亩再施入有机肥 （本实施例中采用的有机肥为充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并 及时浇水 ； 从定植实生苗至2008年4月施入有机肥前， 每两周用0.3%尿素水溶液进行根外 追肥一次 （每次每亩施入 5-10L） ， 每两周用 0.4% 磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次 （每 次每亩施入 5-10L） ， 根外追肥和叶面施肥交替进行 ； 从 2008 年 4 月施入有机肥后， 每两周 用 0.4% 磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次 ( 每次每亩加入 5-10L)。 0056 关于缩短童期、 提早结果， 曾有。

31、人提出过 “前促后控” 的总原则 ： 即在实生苗生长的 童期， 利用良好的自然环境条件 （如温室培养等） ， 并采取合理有效的农业措施来加速实生 苗的营养生长， 使实生苗尽快达到一定的高度 （或节位） ， 并具有一定的枝叶量 ； 而当实生苗 进入过渡期以后， 采用矮化砧等农业技术措施来控制实生苗的营养生长， 促进营养物质的 积累转化及花芽分化， 从而缩短童期、 提早结果。本发明的发明人在实际工作中发现， 实生 苗提早结果的关键是前促， 只要实生苗达到了一定的高度或节位， 无需后控也能开花坐果。 由于步骤2进行了加强光照， 及时浇营养液的处理， 步骤3中定植后的实生苗无需缓苗期直 接生长， 再加。

32、上步骤 3 中的加强肥水管理， 实生苗定植后的第三年即开花坐果， 并且均是腋 花芽结果， 童期比传统的办法缩短 2 3 年。 0057 4、 2009 年， 步骤 3 的实生苗开花坐果， 于初果期从实生苗中筛选出果皮及果肉均 为红色、 肉质脆 （质构仪测定脆度值 1.0kg/s） 的株系， 即为红肉脆肉株系。筛选出 2 个红 肉脆肉株系， 1 个红肉脆肉株系的苹果果实的的照片见图 1（A 为剖开图 ,B 为外观图。 说 明 书 CN 103314840 B 7 6/6 页 8 0058 由于基因重组， 果树杂种一代的果实大小及成熟期等数量性状， 往往需要 3-5 年 才能稳定， 但发明人前期的。

33、研究结果表明， 新疆红肉苹果与其它苹果品种的杂种一代就出 现了红肉 / 白肉和绵肉 / 脆肉等相对性状的分离。这些带有质量性状特点的相对性状比较 容易稳定， 所以在初果期即可进行筛选， 缩短了育种时间。 0059 5、 回交 （早回交） 0060 2010 年， 分别将步骤 4 筛选得到的 2 个红肉脆肉株系的花粉对去雄后的 红富士 苹果进行授粉， 分别收获 BC1杂交种子， 将 BC1杂交种子洗净后放到 1-3冰箱保鲜室层积 处理 60d 左右。 0061 6、 温室育苗 0062 2010 年 12 月， 将完成步骤 5 的种子播种于装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵播 种3-5粒种子） 。

34、培养至实生苗高度为8-15cm、 根颈处木质化 （通常为播种2-3个月） 后进行筛 选 （即依据叶色与未来果肉颜色相关的原理， 淘汰绿色叶片的单株、 保留红色叶片的单株， 以减少土地占用、 降低育种成本） ， 筛选到 3000 株具有红色叶片的单株 ； 然后将筛选得到的 实生苗移栽至新的装有育苗基质的营养钵 （每个营养钵移栽 1 株） 进行培养 ； 本步骤中的培 养条件为 ： 25、 每天光照 12 小时、 光照强度 3000lx， 从种子萌发开始每 7-10 天浇一次营 养液 （将 MS 基本培养基的大量元素母液用水稀释至 10 倍体积即为营养液） 、 每次每个营养 钵浇 40-50ml。 。

35、0063 7、“促长促花缩童期” 处理 0064 2011 年 2 月， 在拟定植实生苗的选种圃 （大田） 中每亩施入有机肥 （本实施例中采 用的有机肥为充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并浇水沉实 ； 2011 年 4 月将完成步骤 6 的实生苗 定植于选种圃， 2012 年 4 月在定植有实生苗的选种圃中每亩再施入有机肥 （本实施例中采 用的有机肥为充分腐熟的奶牛粪） 6000kg 并及时浇水 ； 从定植实生苗至 2012 年 4 月施入 有机肥前， 每两周用 0.3% 尿素水溶液进行根外追肥一次 ( 每次每亩施入 5-10L), 每两周用 0.4%磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次(每次每。

36、亩施入5-10L)， 根外追肥和叶面施肥交 替进行 ； 从2012年4月施入有机肥后， 每两周用0.4%磷酸二氢钾水溶液进行叶面施肥一次 ( 每次每亩加入 5-10L)。 0065 8、 2013 年， 步骤 7 的部分实生苗开花坐果， 从中筛选到 3 个苹果新品系。 0066 3 个苹果新品系的果肉均为红色、 脆度值均 1.0kg/s， 总酚含量分别为 6.4mg/g、 5.2mg/g 和 3.1mg/g， 类黄酮含量分别为 3.0mg/g、 2.3mg/g 和 2.0mg/g。 红富士 苹果的总 酚含量为 1.6mg/g， 类黄酮含量为 0.4mg/g。其中 1 个苹果新品系的苹果果实的照片见图 2 （A 为剖开图 ,B 为外观图） 。 0067 总酚和类黄酮含量的检测方法见王燕， 陈学森等，紫红1号 红肉苹果果肉抗氧化 性及花色苷分析， 园艺学报， 2012， 39（9） ： 1551-1558。 说 明 书 CN 103314840 B 8 1/1 页 9 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103314840 B 9 。