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一种降低电磁辐射损伤的生物防护组合物及制备方法.pdf

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文档编号：6649047

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1、(10)授权公告号 CN 101780178 B (45)授权公告日 2011.11.09 CN 101780178 B *CN101780178B* (21)申请号 201010119377.0 (22)申请日 2010.03.05 A61K 31/715(2006.01) (73)专利权人中国科学院声学研究所地址 100190 北京市海淀区北四环西路 21 号中国科学院声学研究所 (72)发明人温建强刘美丽 (74)专利代理机构北京法思腾知识产权代理有限公司 11318 代理人高宇杨小蓉 CN 1568967 A,2005.01.26, 摘要 . 黄德娟等 . 天然抗辐射物。

2、质抗损伤作用研究进展 .中国辐射卫生 .2008, 第 17 卷 ( 第 4 期 ),511， 512. 张文雄等 . 螺旋藻酸性多糖的分离纯化和分析 .中草药 .2000, 第 31 卷 ( 第 5 期 ),326 328. (54) 发明名称一种降低电磁辐射损伤的生物防护组合物及制备方法 (57) 摘要本发明涉及一种抗辐射天然生物提取物组合物，其由以下四种天然生物提取物组成，所述四种天然生物提取物及重量百分配比如下：茶多酚 60-95wt ；灵芝多糖 1-20wt ；螺旋藻多糖 2-20wt；银杏黄酮 2-20wt；其组成组分具有相同或类似官能团的纯天然生。

3、物提取物，可产生复合协同增效作用，有效地调节受损细胞的凋亡，抑制受损细胞的增殖，从而显著地降低电磁辐射的损伤；可参与有机体生物化学代谢、减少日常生活中无所不在的电磁辐射损伤，促进电磁辐射损伤修复过程，具有安全无毒副作用的特点；而且具有原料获取方便，工艺简单成熟易行，便于推广使用等优点。 (51)Int.Cl. (56)对比文件审查员沈丽鸰 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利权利要求书 1 页说明书 8 页附图 1 页 CN 101780178 B1/1 页 2 1. 一种抗辐射天然生物提取物组合物，其由以下四种天然生物提取。

4、物组成，所述四种天然生物提取物及重量百分配比如下：茶多酚 60-95wt ；灵芝多糖 1-20wt ；螺旋藻多糖 2-20wt ；银杏黄酮 2-20wt。 2. 按权利要求 1 所述的抗辐射天然生物提取物的组合物，其特征在于，所述四种天然生物提取物的重量百分配比如下：所述茶多酚为 75wt ；所述灵芝多糖为 15wt ；所述螺旋藻多糖为 5wt ；所述银杏黄酮为 5wt。 3. 按权利要求 1 所述的抗辐射的天然生物提取物的组合物，其特征在于，所述茶多酚为来源于茶叶中的活性成分；所述螺旋藻多糖为来自海洋植物螺旋藻中提取的水溶性酸性杂多糖；所述灵芝多。

5、糖为来自灵芝子实体中提取的活性成分；所述银杏黄酮为来自银杏叶中提取的活性成分。权利要求书 CN 101780178 B1/8 页 3 一种降低电磁辐射损伤的生物防护组合物及制备方法技术领域 0001 本发明涉及一种降低电磁辐射损伤的生物防护组合物及制备方法，生物防护组合物为非化学合成的天然生物提取物的组合物，可有效降低电磁辐射损伤。背景技术 0002 随着科学技术的发展，通讯以及家用电器得到了快速的普及，伴随带来种种便利的同时，人们承受着越来越严重的长时间电磁辐射的危害，电磁辐射包括辐射损伤的近期效应、远期后果及遗传效应，甚至于辐射的致癌效应。 199。

6、9年5月7号国家环保总局正式对外宣告，电磁辐射对人体有极大的伤害。电磁辐射作用于机体后，可直接作用于DNA、蛋白及生物酶时，引起电离及化学键断裂，使分子变性，细胞结构破坏，也可作用于机体内水分子使其发生电离和激发，产生大量的具有强氧化性能的自由基，间接使组织细胞变性坏死，致使代谢紊乱，引起神经、免疫和内分泌系统的调节功能障碍。研究表明，经常接触电磁辐射的人群患白血病的概率比正常人高 2.9 倍，患脑肿瘤的概率是正常人的 3.26 倍。 0003 今天全球进入了数字化、网络化的信息时代，电脑、移动电话的应用已进入了人们工作、学习、生活的各个领域。

7、，无孔不入、无处不有。面对日益增多的电磁辐射机会，采取加强严格的管理措施或远离辐射源是最直接有效的办法。不过在科学技术进步的今天，繁忙工作和紧张学习的人们，不得不面临长时间地接触电磁辐射的现实。手机、电脑、微波炉等家用电器会产生各种不同频率的电磁波，这些电磁波充斥空间，无色、无味、无形，成为又一个无形的健康杀手。现阶段个人防护电磁辐射危害的手段十分有限，除了物理防护外，生物防护手段是一个不可缺少的选择。它是指用药物及其功能性食品来进行电磁辐射的防护，通过对新功能食品的经常服用，达到减少辐射损伤或对辐射损伤进行有效的修复。显然，开发具有抗电磁辐射。

8、的新型药物及其功能食品是目前面临的重要课题。国外采用的是化学合成法来寻找抗辐射药物，但即使有效，价格也非常昂贵，而且其成分大多含硫化合物 ( 如氨磷汀WR2721)，副作用大。能否开发一种天然、无毒副作用的具有实用价值的新型抗电磁辐射药物就成为研究者面前的重要课题。国内对抗电磁辐射的研究还不够重视，相关的报道不多。发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种用协同增效组合的天然生物提取物实现生物防护降低电磁辐射的方法。更确切的说是通过以茶多酚和螺旋藻多糖、灵芝多糖、银杏黄酮素四种天然植物提取物组合的复合混合液，选择性吸附和捕捉放射性物质并与其结合后排出体。

9、外的同时，还原电磁辐射在人体内产生的大量氧自由基和各种有害过氧化物使其无害，阻断其对细胞遗传物质的破坏，提高造血机能和增强免疫功能，从而达到防护电磁辐射损伤的效果。 0005 本发明的目的是这样实现的： 0006 本发明提供的抗辐射天然生物提取物组合物，其由以下四种天然生物提取物组说明书 CN 101780178 B2/8 页 4 成，所述四种天然生物提取物及重量百分配比如下： 0007 茶多酚 60-95wt ； 0008 灵芝多糖 1-20wt ； 0009 螺旋藻多糖 2-20wt ； 0010 银杏黄酮 2-20wt。 0011 所述四种天然生物提取物的最佳。

10、重量百分配比如下： 0012 所述茶多酚为 75wt ； 0013 所述灵芝多糖为 15wt ； 0014 所述螺旋藻多糖为 5wt ； 0015 所述银杏黄酮为 5wt。 0016 本发明所述茶多酚为来源于茶叶中的活性成分，其包括黄烷醇类化合物、黄烷双醇化合物、黄酮类化合物和酚酸类化合物；所述螺旋藻多糖为来自海洋植物螺旋藻中提取的水溶性酸性杂多糖，其包括鼠李糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和葡糖醛酸；所述灵芝多糖为来自灵芝子实体中提取的活性成分，其包括型葡聚糖；所述银杏黄酮为来自银杏叶中提取的活性成分，其包括水溶性黄酮和油溶性黄酮。 0017 由。

11、于本发明的抗辐射天然生物提取物组合物中所用的茶多酚、螺旋藻多糖和灵芝多糖以及银杏黄酮四种天然生物提取物都含有大量的羟基和酚羟基结构，它们通过适当比例组合混合物，在相似的多元酚性羟基、多羟基结构基础上，产生清除活性氧和自由基的协同增效作用，控制细胞分裂分化，调节细胞生长，此外，所还能提高机体造血和调节免疫功能，显著提高抗辐射效果。 0018 本发明的抗辐射天然生物提取物组合物，通过从茶叶、螺旋藻、灵芝和银杏叶提取有用的活性成分，采用合理的比例组成以茶多酚、螺旋藻多糖、灵芝多糖和银杏黄酮素四种天然生物提取物的混合液，可选择性吸附和捕捉放射性物质并与其。

12、结合后排出体外，同时还可还原电磁辐射在人体内产生的大量氧自由基和各种有害过氧化物使其无害，阻断其对细胞遗传物质的破坏，从而达到防护电磁辐射损伤的效果。降低电磁辐射对生物组织特别是神经组织损伤。尤其适用于网民、网络应用群体、手机使用人群、接触放射线的医务人员以及暴露在射线、电磁辐射下的广大人群。 0019 本发明选用从天然生物中提取出的有效活性成分，采用合理的比例配成混合的天然的生物提取物，避免使用化学合成技术，还原电磁辐射产生的氧化基，阻断其对细胞遗传蛋白物质的破坏，减少电磁辐射损伤，是一种利用多种纯天然生物提取物组合的复合液产生的协同增效作用，实现有。

13、效防护电磁辐射的生物方法，迄今未见相关的报道。 0020 本发明中的按一定比例混合配制成不同剂量的抗辐射天然生物提取物组合物，具有协同增效抗电磁辐射的作用，可以制成浓缩液，也可以通过喷雾干燥制成粉末状或压成片剂，供经常接触电磁辐射的人群服用，以抗辐射或防辐射。 0021 由上可知，本发明优点如下： 0022 1、本发明所采用的是具有相同或类似官能团的纯天然生物提取物，可产生复合协同增效作用，有效地调节受损细胞的凋亡，抑制受损细胞的增殖，从而显著地降低电磁辐射的损伤。 0023 2、本发明以天然生物中所含的物质作为原料，以生物活性物质参与有机体生物化说明。

14、书 CN 101780178 B3/8 页 5 学代谢、减少日常生活中无所不在的电磁辐射损伤，促进电磁辐射损伤修复过程，具有安全无毒副作用的特点。 0024 3、本发明所采用的天然生物提取物，原料获取方便，工艺简单成熟易行。 0025 4、本发明避免了用化学技术合成抗辐射物，克服了制作中所面临的苛刻技术条件，便于推广使用。附图说明 0026 图 1 所示为大鼠皮层神经细胞辐照后在处理前后的 MTT 细胞活性检测结果对比图；实验中对电磁辐射 2 小时后的大鼠皮层神经细胞，用 10M 浓度的实施例 A、实施例 B、实施例 C、实施例 D、实施例 E 和实。

15、施例 F 混合液进行 4 小时处理后， MTT 法所做的 5 次细胞活性检测的统计结果。 0027 图 2 所示的是大鼠皮层神经细胞辐照后在处理前后的总 Bax 变化对比图；实验中对电磁辐射 2 小时后的大鼠皮层神经细胞用 10M 浓度的实施例 A、实施例 B、实施例 C、实施例 D、实施例 E 和实施例 F 混合液进行 4 小时处理后，采用 WesternBlot 法检测总 Bax 蛋白的变化，检测中 anti-actin(1 3000) 为内参， anti-Bax 抗体 N20(1 1000) 所做的 4 次实验的统计结果。 0028 图 3 所示的是大鼠皮层神经。

16、细胞辐照后在处理前后的激活的 Bax 变化对比图；实验中对电磁辐射 2 小时后的大鼠皮层神经细胞用 10M 浓度的实施例 A、实施例 B、实施例 C、实施例 D、实施例 E 和实施例 F 混合液进行 4 小时处理后，采用 WesternBlot 法检测激活 Bax 蛋白的变化，免疫沉淀方法应用 6A7 抗体沉淀激活的 Bax 蛋白，然后经 anti-Bax 抗体 N20(1 1000) 进行 Western blot 检测，所做的 4 次实验的统计结果。具体实施方式 0029 下面结合附图和实施例进一步描述本发明。 0030 下面实施例中的茶多酚、灵芝多糖、螺旋藻多。

17、糖和银杏黄酮 ( 所述的茶多酚、灵芝多糖、螺旋藻多糖和银杏黄酮也可以直接从市场上购买 ) 的提取如下： 0031 1、茶多酚的提取： 0032 以野生茶或人工栽培的茶 ( 绿茶、乌龙茶、红茶 ) 叶和枝为原料，加入 4-8 倍质量比的热水 ( 温度在 60左右 ) 对原料进行浸泡提取二次，每次 1.5-2 小时，冷却或在 4-6 条件下自然沉淀 12-48 小时，过滤或全醇沉淀；过滤液经浓缩到 1/2 体积时，用真空快速干燥或喷雾干燥到含水量不超过 6wt的茶多酚粗品，再对该茶多酚粗品进行精制得到高浓度的茶多酚精品备用。 0033 2、灵芝多糖的提取：。

18、原料选用野生或人工栽培的灵芝子实体，对灵芝子实体经 4-8 倍质量比的热水 ( 温度在 60左右 ) 浸泡，再煮沸煎煮 30 分钟，反复 3 次以上收集滤液，浓缩，过离子交换柱，透析，真空干燥，得到灵芝多糖含量为 80wt的提取产物；除了本发明提供的热水浸提法，其他方法提取也可。 0034 3、螺旋藻多糖的提取：用螺旋藻干粉为原料，采用酶解 +Sevage 法除蛋白工艺流程，具体步骤如下： 0035 将螺旋藻粉加入20倍质量比的蒸馏水，在pH为10， 80水浴8h后，藻粉溶液中加说明书 CN 101780178 B4/8 页 6 入螺旋藻粉质。

19、量的 0.15wt的木瓜蛋白酶，在 pH6.5 和 60温度下进行酶解 2 小时，所得酶解液经过减压减缩成浓缩液后，经 Sevage 法除蛋白 5 次 (Sevage 法是去除蛋白的经典工艺，它是加入体积比为 1/5 氯仿和 1/15 的异戊醇有机溶剂后，振荡 10 小时，多次反复进行蛋白分离，最后离心取水相 )，用乙醇沉淀，再经丙酮洗涤后，用三氯醋酸法 (TCA) 除蛋白，上 sephadex.G.100 柱进行树脂分离纯化，用流速 0.3ml/min 的双蒸水进行等浓度洗脱，即得螺旋藻多糖。 0036 银杏黄酮的提取：用银杏叶作为原料，提取时采用纤维。

20、素酶酶解预处理与环糊精增溶作用相结合的方法来提取银杏叶总黄酮；其具体提取步骤如下： 0037 将银杏叶原料与纤维素酶液按质量配比为 1 60 进行混配，在温度 40， pH 7.0 进行纤维素酶解酶解预处理，纤维素酶浓度 0.2mg/ml，酶解时间 150 分钟； 0038 银杏叶原料经酶解预处理后，加入甲基化-环糊精水溶液(M-环糊精的浓度 2.1 ) 进行浸提，其提取温度 60，提取时间 180 分钟；银杏黄酮的得率可达 3wt。也可以采用水 - 乙醇溶液进行银杏黄铜提取液。 0039 注：除以上介绍的提取法外，也可以用其他成熟的提取法，例如溶剂提取法、。

21、超临界流体萃取法、超声波浸提法、微波浸提法等，还可以直接选用已商品化的提取物制剂。 0040 本发明的组合天然生物提取物在大脑皮层神经细胞的辐射实验中显示出优异的抗辐射作用，其实验步骤如下： 0041 1、大鼠皮层神经细胞的原代培养 0042 (1) 取大鼠脑组织：选取雌雄不限的新生 24 小时的 SD 大鼠数只， 75酒精全身消毒后断头处死，在无菌操作环境下分离出开大脑颞叶皮层组织，置于冰浴的 D-hanks 液中，剔除微血管后充分剪碎后，放入多聚赖氨酸包被好的培养板用中备用。 0043 (2) 消化：在培养板中加入同体积的质量浓度为 0.25的胰蛋白酶，。

22、然后用锡箔纸盖封好瓶口，在 37培养箱内进行 20 分钟左右的消化，期间轻摇数次； 0044 (3) 过滤：加入数滴胎牛血清终止消化，用尖头吸管轻轻吹打细胞数分钟，至液体成糊状即停止吹打，动作要轻柔，然后用 200 目网筛过滤收集细胞悬液； 0045 (4) 接种：在 4下以 1500rpm 的转速下，离心 5 分钟，然后倒去上清液，并用 DMEM 培养液重悬细胞，轻轻吹打，用台盼蓝染色技术在显微镜下快速计数，根据计数结果，调整细胞最终浓度为 106个 /ml，加入体积浓度为 10胎牛血清后，接种于培养瓶 ( 板 ) 中，置于 37、含体。

23、积浓度为 5 CO2的培养箱中培养； 0046 (5)换液：接种后24小时将培养液全量换成无血清DMEM培养液，第48小时时加入终浓度为10mol/L的阿糖胞苷，以抑制非神经元细胞的过度生长，随后每3天半量换液。 0047 (6) 观察：将培养皿分别置于倒置显微镜下观察记录细胞生长情况。 0048 2、电磁辐射损伤刺激实验 0049 用电磁辐射装置对培养瓶中的大鼠皮层神经细胞进行一定时间的辐射。并用电磁波辐射检测仪 TES-92(TES， China) 检测了电磁辐射装置置于培养器上时对细胞的辐射强度。实验中我们采用的是，连续接听中的诺基亚翻盖移动电话(Nokia。

24、6060v ； Fenland)作为电磁辐射装置，其辐射参数为：辐射频率 (GSM signal ； 900MHz)，功率平均强度为 790W/ cm2，功率密度为0.05mW/cm2，辐射时间为2小时。尽管在此描述的电磁辐射设备是一个移动电话，但应该注意的是，其他任何具有电磁辐射危害的电子设备，例如个人电脑，掌上电脑，说明书 CN 101780178 B5/8 页 7 膝上电脑，个人数字助手 (PDA) 或者 iphone 或电视，都适用于本发明中所指的电磁辐射。 0050 3、电磁辐射前后的细胞活性检测 0051 细胞活性检测用的是噻唑兰 (methy。

25、l thiazolyl tetrazolium，简称为 MTT) 法。它的原理是噻唑兰可以透过细胞膜进入细胞，活细胞中的琥珀酸脱氢酶能使噻唑兰还原为蓝紫色的甲臜，由于结晶并沉积在细胞中的甲臜能溶解于二甲基亚砜 (DMSO)，并且甲臜量的不同会对应于不同的光吸收值。通常是取 570nm 波长的光，用酶联免疫检测仪测定的光吸收值来间接反映细胞数量。 0052 实验中我们将培养 7 天的大鼠皮层神经元辐射后经天然提取物 4 小时处理后，在 180l 新鲜的培养基中，加入 20l MTT 溶液 (5mg/mL) 作用 4 小时，然后加入 150l 二甲基亚砜，在摇床上低速。

26、振荡10分钟，使结晶物充分溶解，最后在酶标仪570nm处检测吸光值。计算细胞存活数。 0053 4、电磁辐射前后的细胞凋亡检测 0054 细胞凋亡是表征电磁辐射对中枢神经细胞损伤状况的重要敏感指标之一。细胞凋亡表达的变化可以反映电磁辐射对神经细胞的受损状况，也可以反映受损神经细胞在组合生物天然物处理后的恢复情况。其中 Bax 蛋白是 Bcl-2 基因家族中与细胞凋亡关系密切的主要蛋白基因，在中枢神经系统中均有表达。当 Bax 蛋白有表达时，表征的是已经出现了神经细胞凋亡，表明神经细胞处于受到损伤的状态；当 Bax 蛋白过量表达时，表征的是神经细胞走向凋亡或死亡。

27、，表明神经细胞损伤严重；当 Bax 蛋白不表达或低表达时，表征的是受损神经细胞的凋亡得到了抑制或处于恢复状态。 0055 Bax 蛋白表达包括总 Bax 蛋白和激活 Bax 蛋白两种表达。总 Bax 蛋白表达的检测都可以用细胞生物学通用的 Western Blot 检测方法。它包括 (a) 皮层神经细胞内的蛋白提取 (b) 样品蛋白浓度的测定 (c) 样品蛋白的电泳 (SDS-PAGE)(d) 电印迹转移和免疫染色 (e)显影观测。激活Bax蛋白表达则需要在进行蛋白电泳前先进行样品的免疫沉淀后，然后用同上的 Western Blot 方法来进行检测。 0056 实验中我们用。

28、四种天然生物提取物的混合液对损伤后的神经细胞进行 4 小时的处理，通过提取神经细胞内的蛋白，测定其总 Bax 和激活 Bax 表达的变化，表征出神经细胞的变化特别是细胞凋亡变化情况。 0057 按照本发明如上所述的提取方法分别从绿茶、灵芝子实体、螺旋藻干粉、银杏叶中制备出茶多酚、灵芝多糖、螺旋藻多糖和银杏黄酮四种提取物，并以各组分的重量百分比分别按下表 1 所示进行称量，配制成实施例 A、实施例 B、实施例 C、实施例 D、实施例 E 和实施例F混合液，然后分别对电磁辐射作用后的原代培养的大鼠神经细胞进行4小时离心处理，对细胞凋亡进行 Bax 蛋白表达。

29、检测。 0058 说明书 CN 101780178 B6/8 页 8 0060 按照实施例 A、实施例 B、实施例 C、实施例 D、实施例 E 和实施例 F 所述配比配制抗辐射天然生物提取物组合物， MTT 和 Bax 的分析测试结果如下： 0061 0062 说明书 CN 101780178 B7/8 页 9 0063 0064 将以上的检测得到的 MTT 细胞活性、总 Bax 和激活蛋白表达结果分别用图表示为图 1、图 2、图 3 所示。 0065 在图 1 的 MTT 的统计结果、图 2 的总 Bax 统计结果和图 3 的激活 Bax 统计结果中， *p 0。

30、.05 表示差异显著，*p 0.01 表示差异比较显著，*p 0.001 表示差异极显著；神经细胞活性表明检测到的存活的细胞；此外，由于 Bax 蛋白有表达时，表征的是已经出现了神经细胞凋亡，表明神经细胞处于受到损伤的状态；当 Bax 蛋白不表达或低表达时，表征的是受损神经细胞的凋亡得到了抑制或处于恢复状态，统计结果中差异越显著，表明受损神经细胞恢复得越好。 0066 在以上的实例中，经实施例 C 处理后的辐照组 M-3 的总 Bax 和激活 Bax 水平是下降最明显的，此外，细胞活性检测结果表明，按照实施例 C 配比配制抗辐射天然生物提取物组合物处。

31、理后的辐照组 M-3 的细胞活性是最佳的，相比于未处理辐照组 M-0 细胞存活率提高到 134。因此，在本发明中实施例 C 是最佳的质量配比。 0067 在辐射危害越来越多的今天，采用天然无毒的生物防护是有效降低电磁辐射的有说明书 CN 101780178 B8/8 页 10 效途径。本发明选用非化学技术提取的纯天然生物提取物，充分利其合理的配比下的纯天然药物的抗氧化活性，切断了自由基的破坏，抑制细胞凋亡、阻断细胞遗传物质受损的机会，减缓神经细胞的损伤或促进受损神经细胞的恢复，提高机体抗辐射功能，最终实现降低电磁辐射的危害、保护人们身体健康的目的，而且推广方便，简单易行，具有很好的经济和社会价值。说明书 CN 101780178 B1/1 页 11 图 1 图 2 图 3 说明书附图。

摘要
申请专利号：	CN201010119377.0	申请日：	20100305
公开号：	CN101780178B	公开日：	20111109
当前法律状态：		有效性：	失效
法律详情：
IPC分类号：	A61K31/715	主分类号：	A61K31/715
申请人：	中国科学院声学研究所
发明人：	温建强,刘美丽
地址：	100190 北京市海淀区北四环西路21号中国科学院声学研究所
优先权：	CN201010119377A
专利代理机构：	北京法思腾知识产权代理有限公司	代理人：	高宇;杨小蓉
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内容摘要

本发明涉及一种抗辐射天然生物提取物组合物，其由以下四种天然生物提取物组成，所述四种天然生物提取物及重量百分配比如下：茶多酚60-95wt％；灵芝多糖1-20wt％；螺旋藻多糖2-20wt％；银杏黄酮2-20wt％；其组成组分具有相同或类似官能团的纯天然生物提取物，可产生复合协同增效作用，有效地调节受损细胞的凋亡，抑制受损细胞的增殖，从而显著地降低电磁辐射的损伤；可参与有机体生物化学代谢、减少日常生活中无所不在的电磁辐射损伤，促进电磁辐射损伤修复过程，具有安全无毒副作用的特点；而且具有原料获取方便，工艺简单成熟易行，便于推广使用等优点。

权利要求书

1.一种抗辐射天然生物提取物组合物，其由以下四种天然生物提取物组成，所述四种天然生物提取物及重量百分配比如下：茶多酚 60-95wt％；灵芝多糖 1-20wt％；螺旋藻多糖 2-20wt％；银杏黄酮 2-20wt％。 2.按权利要求1所述的抗辐射天然生物提取物的组合物，其特征在于，所述四种天然生物提取物的重量百分配比如下：所述茶多酚为75wt％；所述灵芝多糖为15wt％；所述螺旋藻多糖为5wt％；所述银杏黄酮为5wt％。 3.按权利要求1所述的抗辐射的天然生物提取物的组合物，其特征在于，所述茶多酚为来源于茶叶中的活性成分；所述螺旋藻多糖为来自海洋植物螺旋藻中提取的水溶性酸性杂多糖；所述灵芝多糖为来自灵芝子实体中提取的活性成分；所述银杏黄酮为来自银杏叶中提取的活性成分。

说明书

技术领域

本发明涉及一种降低电磁辐射损伤的生物防护组合物及制备方法，生物防护组合物为非化学合成的天然生物提取物的组合物，可有效降低电磁辐射损伤。

背景技术

随着科学技术的发展，通讯以及家用电器得到了快速的普及，伴随带来种种便利的同时，人们承受着越来越严重的长时间电磁辐射的危害，电磁辐射包括辐射损伤的近期效应、远期后果及遗传效应，甚至于辐射的致癌效应。1999年5月7号国家环保总局正式对外宣告，电磁辐射对人体有极大的伤害。电磁辐射作用于机体后，可直接作用于DNA、蛋白及生物酶时，引起电离及化学键断裂，使分子变性，细胞结构破坏，也可作用于机体内水分子使其发生电离和激发，产生大量的具有强氧化性能的自由基，间接使组织细胞变性坏死，致使代谢紊乱，引起神经、免疫和内分泌系统的调节功能障碍。研究表明，经常接触电磁辐射的人群患白血病的概率比正常人高2.9倍，患脑肿瘤的概率是正常人的3.26倍。

今天全球进入了数字化、网络化的信息时代，电脑、移动电话的应用已进入了人们工作、学习、生活的各个领域，无孔不入、无处不有。面对日益增多的电磁辐射机会，采取加强严格的管理措施或远离辐射源是最直接有效的办法。不过在科学技术进步的今天，繁忙工作和紧张学习的人们，不得不面临长时间地接触电磁辐射的现实。手机、电脑、微波炉等家用电器会产生各种不同频率的电磁波，这些电磁波充斥空间，无色、无味、无形，成为又一个无形的健康杀手。现阶段个人防护电磁辐射危害的手段十分有限，除了物理防护外，生物防护手段是一个不可缺少的选择。它是指用药物及其功能性食品来进行电磁辐射的防护，通过对新功能食品的经常服用，达到减少辐射损伤或对辐射损伤进行有效的修复。显然，开发具有抗电磁辐射的新型药物及其功能食品是目前面临的重要课题。国外采用的是化学合成法来寻找抗辐射药物，但即使有效，价格也非常昂贵，而且其成分大多含硫化合物(如氨磷汀WR2721)，副作用大。能否开发一种天然、无毒副作用的具有实用价值的新型抗电磁辐射药物就成为研究者面前的重要课题。国内对抗电磁辐射的研究还不够重视，相关的报道不多。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用协同增效组合的天然生物提取物实现生物防护降低电磁辐射的方法。更确切的说是通过以茶多酚和螺旋藻多糖、灵芝多糖、银杏黄酮素四种天然植物提取物组合的复合混合液，选择性吸附和捕捉放射性物质并与其结合后排出体外的同时，还原电磁辐射在人体内产生的大量氧自由基和各种有害过氧化物使其无害，阻断其对细胞遗传物质的破坏，提高造血机能和增强免疫功能，从而达到防护电磁辐射损伤的效果。

本发明的目的是这样实现的：

本发明提供的抗辐射天然生物提取物组合物，其由以下四种天然生物提取物组成，所述四种天然生物提取物及重量百分配比如下：

茶多酚60-95wt％；

灵芝多糖1-20wt％；

螺旋藻多糖2-20wt％；

银杏黄酮2-20wt％。

所述四种天然生物提取物的最佳重量百分配比如下：

所述茶多酚为75wt％；

所述灵芝多糖为15wt％；

所述螺旋藻多糖为5wt％；

所述银杏黄酮为5wt％。

本发明所述茶多酚为来源于茶叶中的活性成分，其包括黄烷醇类化合物、黄烷双醇化合物、黄酮类化合物和酚酸类化合物；所述螺旋藻多糖为来自海洋植物螺旋藻中提取的水溶性酸性杂多糖，其包括鼠李糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和葡糖醛酸；所述灵芝多糖为来自灵芝子实体中提取的活性成分，其包括β型葡聚糖；所述银杏黄酮为来自银杏叶中提取的活性成分，其包括水溶性黄酮和油溶性黄酮。

由于本发明的抗辐射天然生物提取物组合物中所用的茶多酚、螺旋藻多糖和灵芝多糖以及银杏黄酮四种天然生物提取物都含有大量的羟基和酚羟基结构，它们通过适当比例组合混合物，在相似的多元酚性羟基、多羟基结构基础上，产生清除活性氧和自由基的协同增效作用，控制细胞分裂分化，调节细胞生长，此外，所还能提高机体造血和调节免疫功能，显著提高抗辐射效果。

本发明的抗辐射天然生物提取物组合物，通过从茶叶、螺旋藻、灵芝和银杏叶提取有用的活性成分，采用合理的比例组成以茶多酚、螺旋藻多糖、灵芝多糖和银杏黄酮素四种天然生物提取物的混合液，可选择性吸附和捕捉放射性物质并与其结合后排出体外，同时还可还原电磁辐射在人体内产生的大量氧自由基和各种有害过氧化物使其无害，阻断其对细胞遗传物质的破坏，从而达到防护电磁辐射损伤的效果。降低电磁辐射对生物组织特别是神经组织损伤。尤其适用于网民、网络应用群体、手机使用人群、接触放射线的医务人员以及暴露在射线、电磁辐射下的广大人群。

本发明选用从天然生物中提取出的有效活性成分，采用合理的比例配成混合的天然的生物提取物，避免使用化学合成技术，还原电磁辐射产生的氧化基，阻断其对细胞遗传蛋白物质的破坏，减少电磁辐射损伤，是一种利用多种纯天然生物提取物组合的复合液产生的协同增效作用，实现有效防护电磁辐射的生物方法，迄今未见相关的报道。

本发明中的按一定比例混合配制成不同剂量的抗辐射天然生物提取物组合物，具有协同增效抗电磁辐射的作用，可以制成浓缩液，也可以通过喷雾干燥制成粉末状或压成片剂，供经常接触电磁辐射的人群服用，以抗辐射或防辐射。

由上可知，本发明优点如下：

1、本发明所采用的是具有相同或类似官能团的纯天然生物提取物，可产生复合协同增效作用，有效地调节受损细胞的凋亡，抑制受损细胞的增殖，从而显著地降低电磁辐射的损伤。

2、本发明以天然生物中所含的物质作为原料，以生物活性物质参与有机体生物化学代谢、减少日常生活中无所不在的电磁辐射损伤，促进电磁辐射损伤修复过程，具有安全无毒副作用的特点。

3、本发明所采用的天然生物提取物，原料获取方便，工艺简单成熟易行。

4、本发明避免了用化学技术合成抗辐射物，克服了制作中所面临的苛刻技术条件，便于推广使用。

附图说明

图1所示为大鼠皮层神经细胞辐照后在处理前后的MTT细胞活性检测结果对比图；实验中对电磁辐射2小时后的大鼠皮层神经细胞，用10μM浓度的实施例A、实施例B、实施例C、实施例D、实施例E和实施例F混合液进行4小时处理后，MTT法所做的5次细胞活性检测的统计结果。

图2所示的是大鼠皮层神经细胞辐照后在处理前后的总Bax变化对比图；实验中对电磁辐射2小时后的大鼠皮层神经细胞用10μM浓度的实施例A、实施例B、实施例C、实施例D、实施例E和实施例F混合液进行4小时处理后，采用WesternBlot法检测总Bax蛋白的变化，检测中anti-β-actin(1∶3000)为内参，anti-Bax抗体N20(1∶1000)所做的4次实验的统计结果。

图3所示的是大鼠皮层神经细胞辐照后在处理前后的激活的Bax变化对比图；实验中对电磁辐射2小时后的大鼠皮层神经细胞用10μM浓度的实施例A、实施例B、实施例C、实施例D、实施例E和实施例F混合液进行4小时处理后，采用WesternBlot法检测激活Bax蛋白的变化，免疫沉淀方法应用6A7抗体沉淀激活的Bax蛋白，然后经anti-Bax抗体N20(1∶1000)进行Western blot检测，所做的4次实验的统计结果。

具体实施方式

下面结合附图和实施例进一步描述本发明。

下面实施例中的茶多酚、灵芝多糖、螺旋藻多糖和银杏黄酮(所述的茶多酚、灵芝多糖、螺旋藻多糖和银杏黄酮也可以直接从市场上购买)的提取如下：

1、茶多酚的提取：

以野生茶或人工栽培的茶(绿茶、乌龙茶、红茶)叶和枝为原料，加入4-8倍质量比的热水(温度在60℃左右)对原料进行浸泡提取二次，每次1.5-2小时，冷却或在4-6℃条件下自然沉淀12-48小时，过滤或全醇沉淀；过滤液经浓缩到1/2体积时，用真空快速干燥或喷雾干燥到含水量不超过6wt％的茶多酚粗品，再对该茶多酚粗品进行精制得到高浓度的茶多酚精品备用。

2、灵芝多糖的提取：原料选用野生或人工栽培的灵芝子实体，对灵芝子实体经4-8倍质量比的热水(温度在60℃左右)浸泡，再煮沸煎煮30分钟，反复3次以上收集滤液，浓缩，过离子交换柱，透析，真空干燥，得到灵芝多糖含量为80wt％的提取产物；除了本发明提供的热水浸提法，其他方法提取也可。

3、螺旋藻多糖的提取：用螺旋藻干粉为原料，采用酶解+Sevage法除蛋白工艺流程，具体步骤如下：

将螺旋藻粉加入20倍质量比的蒸馏水，在pH为10，80℃水浴8h后，藻粉溶液中加入螺旋藻粉质量的0.15wt％的木瓜蛋白酶，在pH6.5和60℃温度下进行酶解2小时，所得酶解液经过减压减缩成浓缩液后，经Sevage法除蛋白5次(Sevage法是去除蛋白的经典工艺，它是加入体积比为1/5氯仿和1/15的异戊醇有机溶剂后，振荡10小时，多次反复进行蛋白分离，最后离心取水相)，用乙醇沉淀，再经丙酮洗涤后，用三氯醋酸法(TCA)除蛋白，上sephadex.G.100柱进行树脂分离纯化，用流速0.3ml/min的双蒸水进行等浓度洗脱，即得螺旋藻多糖。

银杏黄酮的提取：用银杏叶作为原料，提取时采用纤维素酶酶解预处理与环糊精增溶作用相结合的方法来提取银杏叶总黄酮；其具体提取步骤如下：

将银杏叶原料与纤维素酶液按质量配比为1∶60进行混配，在温度40℃，pH＝7.0进行纤维素酶解酶解预处理，纤维素酶浓度0.2mg/ml，酶解时间150分钟；

银杏叶原料经酶解预处理后，加入甲基化β-环糊精水溶液(M-β-环糊精的浓度2.1％)进行浸提，其提取温度60℃，提取时间180分钟；银杏黄酮的得率可达3wt％。也可以采用水-乙醇溶液进行银杏黄铜提取液。

注：除以上介绍的提取法外，也可以用其他成熟的提取法，例如溶剂提取法、超临界流体萃取法、超声波浸提法、微波浸提法等，还可以直接选用已商品化的提取物制剂。

本发明的组合天然生物提取物在大脑皮层神经细胞的辐射实验中显示出优异的抗辐射作用，其实验步骤如下：

1、大鼠皮层神经细胞的原代培养

(1)取大鼠脑组织：选取雌雄不限的新生24小时的SD大鼠数只，75％酒精全身消毒后断头处死，在无菌操作环境下分离出开大脑颞叶皮层组织，置于冰浴的D-hanks液中，剔除微血管后充分剪碎后，放入多聚赖氨酸包被好的培养板用中备用。

(2)消化：在培养板中加入同体积的质量浓度为0.25％的胰蛋白酶，然后用锡箔纸盖封好瓶口，在37℃培养箱内进行20分钟左右的消化，期间轻摇数次；

(3)过滤：加入数滴胎牛血清终止消化，用尖头吸管轻轻吹打细胞数分钟，至液体成糊状即停止吹打，动作要轻柔，然后用200目网筛过滤收集细胞悬液；

(4)接种：在4℃下以1500rpm的转速下，离心5分钟，然后倒去上清液，并用DMEM培养液重悬细胞，轻轻吹打，用台盼蓝染色技术在显微镜下快速计数，根据计数结果，调整细胞最终浓度为106个/ml，加入体积浓度为10％胎牛血清后，接种于培养瓶(板)中，置于37℃、含体积浓度为5％CO2的培养箱中培养；

(5)换液：接种后24小时将培养液全量换成无血清DMEM培养液，第48小时时加入终浓度为10μmol/L的阿糖胞苷，以抑制非神经元细胞的过度生长，随后每3天半量换液。

(6)观察：将培养皿分别置于倒置显微镜下观察记录细胞生长情况。

2、电磁辐射损伤刺激实验

用电磁辐射装置对培养瓶中的大鼠皮层神经细胞进行一定时间的辐射。并用电磁波辐射检测仪TES-92(TES，China)检测了电磁辐射装置置于培养器上时对细胞的辐射强度。实验中我们采用的是，连续接听中的诺基亚翻盖移动电话(Nokia6060v；Fenland)作为电磁辐射装置，其辐射参数为：辐射频率(GSM signal；900MHz)，功率平均强度为790μW/cm2，功率密度为0.05mW/cm2，辐射时间为2小时。尽管在此描述的电磁辐射设备是一个移动电话，但应该注意的是，其他任何具有电磁辐射危害的电子设备，例如个人电脑，掌上电脑，膝上电脑，个人数字助手(PDA)或者iphone或电视，都适用于本发明中所指的电磁辐射。

3、电磁辐射前后的细胞活性检测

细胞活性检测用的是噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium，简称为MTT)法。它的原理是噻唑兰可以透过细胞膜进入细胞，活细胞中的琥珀酸脱氢酶能使噻唑兰还原为蓝紫色的甲臜，由于结晶并沉积在细胞中的甲臜能溶解于二甲基亚砜(DMSO)，并且甲臜量的不同会对应于不同的光吸收值。通常是取570nm波长的光，用酶联免疫检测仪测定的光吸收值来间接反映细胞数量。

实验中我们将培养7天的大鼠皮层神经元辐射后经天然提取物4小时处理后，在180μl新鲜的培养基中，加入20μl MTT溶液(5mg/mL)作用4小时，然后加入150μl二甲基亚砜，在摇床上低速振荡10分钟，使结晶物充分溶解，最后在酶标仪570nm处检测吸光值。计算细胞存活数。

4、电磁辐射前后的细胞凋亡检测

细胞凋亡是表征电磁辐射对中枢神经细胞损伤状况的重要敏感指标之一。细胞凋亡表达的变化可以反映电磁辐射对神经细胞的受损状况，也可以反映受损神经细胞在组合生物天然物处理后的恢复情况。其中Bax蛋白是Bcl-2基因家族中与细胞凋亡关系密切的主要蛋白基因，在中枢神经系统中均有表达。当Bax蛋白有表达时，表征的是已经出现了神经细胞凋亡，表明神经细胞处于受到损伤的状态；当Bax蛋白过量表达时，表征的是神经细胞走向凋亡或死亡，表明神经细胞损伤严重；当Bax蛋白不表达或低表达时，表征的是受损神经细胞的凋亡得到了抑制或处于恢复状态。

Bax蛋白表达包括总Bax蛋白和激活Bax蛋白两种表达。总Bax蛋白表达的检测都可以用细胞生物学通用的Western Blot检测方法。它包括(a)皮层神经细胞内的蛋白提取(b)样品蛋白浓度的测定(c)样品蛋白的电泳(SDS-PAGE)(d)电印迹转移和免疫染色(e)显影观测。激活Bax蛋白表达则需要在进行蛋白电泳前先进行样品的免疫沉淀后，然后用同上的Western Blot方法来进行检测。

实验中我们用四种天然生物提取物的混合液对损伤后的神经细胞进行4小时的处理，通过提取神经细胞内的蛋白，测定其总Bax和激活Bax表达的变化，表征出神经细胞的变化特别是细胞凋亡变化情况。

按照本发明如上所述的提取方法分别从绿茶、灵芝子实体、螺旋藻干粉、银杏叶中制备出茶多酚、灵芝多糖、螺旋藻多糖和银杏黄酮四种提取物，并以各组分的重量百分比分别按下表1所示进行称量，配制成实施例A、实施例B、实施例C、实施例D、实施例E和实施例F混合液，然后分别对电磁辐射作用后的原代培养的大鼠神经细胞进行4小时离心处理，对细胞凋亡进行Bax蛋白表达检测。

按照实施例A、实施例B、实施例C、实施例D、实施例E和实施例F所述配比配制抗辐射天然生物提取物组合物，MTT和Bax的分析测试结果如下：

将以上的检测得到的MTT细胞活性、总Bax和激活蛋白表达结果分别用图表示为图1、图2、图3所示。

在图1的MTT的统计结果、图2的总Bax统计结果和图3的激活Bax统计结果中，*p＜0.05表示差异显著，**p＜0.01表示差异比较显著，***p＜0.001表示差异极显著；神经细胞活性表明检测到的存活的细胞；此外，由于Bax蛋白有表达时，表征的是已经出现了神经细胞凋亡，表明神经细胞处于受到损伤的状态；当Bax蛋白不表达或低表达时，表征的是受损神经细胞的凋亡得到了抑制或处于恢复状态，统计结果中差异越显著，表明受损神经细胞恢复得越好。

在以上的实例中，经实施例C处理后的辐照组M-3的总Bax和激活Bax水平是下降最明显的，此外，细胞活性检测结果表明，按照实施例C配比配制抗辐射天然生物提取物组合物处理后的辐照组M-3的细胞活性是最佳的，相比于未处理辐照组M-0细胞存活率提高到134％。因此，在本发明中实施例C是最佳的质量配比。

在辐射危害越来越多的今天，采用天然无毒的生物防护是有效降低电磁辐射的有效途径。本发明选用非化学技术提取的纯天然生物提取物，充分利其合理的配比下的纯天然药物的抗氧化活性，切断了自由基的破坏，抑制细胞凋亡、阻断细胞遗传物质受损的机会，减缓神经细胞的损伤或促进受损神经细胞的恢复，提高机体抗辐射功能，最终实现降低电磁辐射的危害、保护人们身体健康的目的，而且推广方便，简单易行，具有很好的经济和社会价值。