基于酵母、碳酸氢钠和激发子活性的柑橘生物保鲜剂.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102224843 B (45)授权公告日 2012.11.07 CN 102224843 B *CN102224843B* (21)申请号 201110114068.9 (22)申请日 2011.05.04 CGMCC NO.3589 2010.01.20 A23B 7/155(2006.01) (73)专利权人 浙江大学 地址 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路 38 号 (72)发明人 余挺 郑晓冬 努尔哈音 朱瑞瑜 蓝天演 钱成济 (74)专利代理机构 杭州中成专利事务所有限公 司 33212 代理人 金祺 CN 101822288 A,2010.09.0。

2、8, 全文 . CN 101019572 A,2007.08.22, 全文 . CN 101984834 A,2011.03.16, 全文 . CN 101412972 A,2009.04.22, 全文 . CN 101461419 A,2009.06.24, 全文 . 孙萍等 . 粘红酵母与金属离子结合使用对柑 橘采后青霉病的抑制效果 . 果树学报 .2003, 第 20 卷 ( 第 2 期 ),169-172. 罗杨等 . 拮抗微生物诱导采后果蔬抗病 性的机制 .食品科学 .2010, 第 31 卷 ( 第 9 期 ),297-300. (54) 发明名称 基于酵母、 碳酸氢钠和激发子活性。

3、的柑橘生 物保鲜剂 (57) 摘要 本发明公开了一种基于酵母、 碳酸氢钠和激 发子活性的柑橘生物保鲜剂， 该柑橘生物保鲜剂 由罗伦隐球酵母悬浮液、 粘红酵母悬浮液、 红冬 孢酵母悬浮液、 碳酸氢钠、 生长素、 水杨酸和水组 成， 每 1L 保鲜剂中含有 1101011012个罗伦 隐球酵母细胞、 1101011012个粘红酵母细胞、 1101011012个红冬孢酵母细胞、 550 克碳酸 氢钠、 10400mg生长素和1100mg水杨酸， 其余为 水 ； 罗伦隐球酵母保藏号为 CGMCC NO.3590， 红冬 孢酵母保藏号为 IMI394084， 粘红酵母保藏号为 CGMCC NO.3589。

4、。本发明的柑橘生物保鲜剂， 能在 不使用化学杀菌剂的前提下有效控制柑橘采后病 害。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 盛小波 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 6 页 1/1 页 2 1. 基于酵母、 碳酸氢钠和激发子活性的柑橘生物保鲜剂， 其特征是 ： 所述柑橘生物 保鲜剂由罗伦隐球酵母 （Cryptococcus laurentii ）悬浮液、 粘红酵母 （Rhodotorula glutinis） 悬浮液、 红冬孢酵母 （Rhodosporidium paludig。

5、enum Fell & Tallman） 悬浮液、 碳酸氢钠、 生长素、 水杨酸和水组成， 每 1L 保鲜剂中含有 11010 11012个罗伦隐球酵母 细胞、 11010 11012个粘红酵母细胞、 11010 11012个红冬孢酵母细胞、 550 克碳酸 氢钠、 10400 mg 生长素和 1100 mg 水杨酸， 其余为水 ； 所述罗伦隐球酵母为保藏号为 CGMCC NO.3590 的罗伦隐球酵母 ZJU 10 ； 所述红冬孢酵母是保藏号为 IMI 394084 的海洋酵母 ； 所述粘红酵母参椐的生物材料为 ZJU 11， 分类命名为粘红酵母， 保藏单位 ： 中国微生 物菌种保藏管理委员。

6、会普通微生物中心， 保藏地址 ： 北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号， 中 国科学院微生物研究所 ； 保藏日期 ： 2010 年 1 月 20 日， 保藏号 ： CGMCC NO.3589。 2. 根据权利要求 1 所述的基于酵母、 碳酸氢钠和激发子活性的柑橘生物保鲜剂， 其特 征是 ： 每1L保鲜剂中含有11011个罗伦隐球酵母细胞、 11011个粘红酵母细胞、 11011个 红冬孢酵母细胞、 550 克碳酸氢钠、 10400 mg 生长素和 1100 mg 水杨酸， 其余为水。 权 利 要 求 书 CN 102224843 B 2 1/6 页 3 基于酵母、 碳酸氢钠和激发子活性的柑橘。

7、生物保鲜剂 技术领域 0001 本发明涉及果实采后病害防治技术领域， 更具体的是一种用于防治柑橘果实病害 的生物防腐保鲜技术。 背景技术 0002 化学杀菌剂是目前控制柑橘果实采后腐烂的主要和最有效方法。 但鉴于化学杀菌 剂对食品安全和环境污染的不利影响， 国内外对开发非杀菌剂型的保鲜技术都非常重视。 特别是利用安全且有拮抗病原菌活性的酵母防治果实病害的技术被认为是最有希望的替 代化学杀菌剂的方法之一。 但现有生防酵母的对病害的控制效力与化学杀菌剂相比仍有较 大差距。 0003 罗伦隐球酵母 (Cryptococcus laurentii) 是国内外较广泛研究的采后生物防 治酵母菌株。中国发明。

8、授权专利 一种酵母拮抗菌的培养方法及其专用培养基 ， 专利号 ZL200510090063.1， 公开了一种罗伦隐球酵母的培养基配方 ； 中国发明授权专利 酵母拮 抗菌 C.laurentii 的真空冷冻干燥制品及其制备方法 ， 专利号 ZL200510090065.0， 公开 了一种罗伦隐球酵母冷冻干燥制品的制备方法 ； 中国发明申请专利 一种生物拮抗菌及 其应用 ， 申请号 200310115336.4， 公开了一种利用罗伦隐球酵母和杀菌剂及氯化钙等防 治甜樱桃、 冬枣及苹果果实病害的方法 ； 中国发明申请专利 一种生物活性果蔬保鲜膜 ， 申请号 200810128441.4， 公开了一种。

9、利用罗伦隐球酵母和海藻酸钠等保鲜苹果和圣女果 等果实的方法 ； 中国发明申请专利 葡萄果实采后病害或果粒脱落的防治方法及其专用 防治剂 ， 申请号 200910078858.9， 公开一种利用罗伦隐球酵母和硼酸盐等防治葡萄果实 病害或脱粒的方法 ； 中国发明申请专利 一种隐球酵母属菌胶囊剂及其制备方法 ， 申请号 200910079774.7， 公开了一种制备罗伦隐球酵母常温保存的胶囊剂制备方法。 0004 粘红酵母 (Rhodotorula glutinis) 也是国内外研究较多的采后生防酵母菌 株。中国发明申请专利 一种用于防治柑橘采后病害的酵母生物制剂制备方法 ， 申请号 2004100。

10、15947.6， 公开了一种用于防治柑橘采后病害的酵母生物制剂制备方法。中国发明 申请专利 一种活性粘红酵母粉的制备方法 ， 申请号 201010242120.4， 公开了一种活性粘 红酵母粉发酵剂冻干菌粉末的制备方法。中国发明申请专利 一种用于防治水果采后病害 的方法 ， 申请号 200910233684.9， 公开了一种用罗伦隐球酵母或粘红酵母与微波结合防治 水果采后病害的方法。中国发明申请专利 提高粘红酵母对水果采后病害生物防治效力的 方法 ， 申请号 201010240638.4， 公开了一种用壳聚糖提高粘红酵母对水果采后病害生物防 治效力的方法。 0005 酵母菌株 Rhodospo。

11、ridium p aludigenum Fell & Tallman 是一株从海洋中分离 得到的新型果实病害生防酵母。中国发明授权专利 一株水果蔬菜的生物保鲜剂及其制备 方法 ， 专利号 200610155209.0， 公开了一种基于红冬孢酵母和尼泊金乙酯钠或尼泊金丁酯 钠制备水果蔬菜的生物杀菌剂的方法。中国发明授权专利 用于果蔬采后病害生物防治的 海洋酵母及其制备方法和用途 ， 专利号 ZL 200610155062.5， 公开了一种用海洋酵母菌株 说 明 书 CN 102224843 B 3 2/6 页 4 Rhodosporidium p aludigenum Fell & Tallma。

12、n 抑制链格孢、 灰葡萄孢、 扩展青霉、 指状青 霉、 多毛孢等多种果蔬采后主要真菌病害的生物防治方法。 中国发明授权专利 一种海洋酵 母的用途和相应微生物燃料电池及制备方法 。授权公告号 CN101552340B， 公开了一种利 用红冬孢酵母制备微生物燃料电池的方法。中国发明申请专利 一种防治果蔬病害的生物 保鲜剂及其制备方法 ， 申请号 200910095643.8， 公开了一种基于红冬孢酵母和羧甲基纤维 素钠等物质防治果蔬病害的生物保鲜方法。中国发明申请专利 海洋酵母 Rhodosporidum paludigenum Fell&Tallman 的专用甘蔗糖蜜培养基 ， 申请号 2010。

13、101485270， 公开了一种 海洋酵母 Rhodosporidum paludigenum Fell&Tallman 液体培养的方法。中国发明申请 专利 海洋酵母 Rhodosporidum paludigenum Fell&Tallman 的真空冷冻干燥制 ， 申请号 2010101400817， 公开了一种红冬孢酵母活性干粉制备的方法。中国发明申请专利 一种诱 导提高海洋红冬孢酵母对果实病害防治效力的方法 ， 申请号 201010551754.8， 公开了一种 利用几丁质物质诱导提高红冬孢酵母生防效力的方法。 0006 诱导抗性是当前国内外关注的新型采后病害控制方法之一。研究表明， 植。

14、物包括 采后果蔬， 经过预先接种或采用一些物理的、 化学的因子处理后， 可诱导产生抗病性， 从而 减少病害发生。能引起植物产生抗病性的因素根据其来源分为生物型和非生物型激发子。 其中水杨酸是研究最为广泛的激发子之一， 而细胞分裂素、 生长素、 赤霉素等植物激素对果 实抗性影响的研究尚少。 碳酸氢钠即小苏打， 是公认安全物质， 已广泛应用于日常水果一般 性保鲜处理等。 发明内容 0007 本发明要解决的技术问题是提供一种在不使用化学杀菌剂前提下能有效控制柑 橘果实采后病害的生物防腐保鲜剂。 0008 为了解决上述技术问题， 本发明提供一种基于酵母、 碳酸氢钠和激发子活性的柑 橘生物保鲜剂， 该柑。

15、橘生物保鲜剂由罗伦隐球酵母悬浮液、 粘红酵母悬浮液、 红冬孢酵母悬 浮液、 碳酸氢钠、 生长素、 水杨酸和水组成， 每 1L 保鲜剂中含有 11010 11012个罗伦隐 球酵母细胞、 11010 11012个粘红酵母细胞、 11010 11012个红冬孢酵母细胞、 5 50 克碳酸氢钠、 10 400mg 生长素 (IBA) 和 1 100mg 水杨酸 (SA)， 其余为水 ； 0009 罗伦隐球酵母为保藏号为 CGMCC NO.3590 的罗伦隐球酵母 Cryptococcus laurentii ZJU 10 ； 0010 红冬孢酵母是保藏号为 IMI 394084 的海洋酵母 Rhod。

16、osporidium paludigenum Fell &Tallman ； 0011 粘红酵母参椐的生物材料为 ZJU 11， 分类命名为粘红酵母 Rhodotorula glutinis， 保藏单位 ： 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏地址 ： 北京市 朝阳区北辰西路 1 号院 3 号， 中国科学院微生物研究所 ； 保藏日期 ： 2010 年 1 月 20 日， 保藏 号 ： CGMCC NO.3589。 0012 作为本发明的基于酵母、 碳酸氢钠和激发子活性的柑橘生物保鲜剂的改进 ： 每 1L 保鲜剂中含有 11011个罗伦隐球酵母细胞、 11011个粘红酵母细胞、 1。

17、1011个红冬孢酵 母细胞、 5 50 克碳酸氢钠、 10 400mg 生长素 (IBA) 和 1 100mg 水杨酸 (SA)， 其余为 水。 说 明 书 CN 102224843 B 4 3/6 页 5 0013 本发明所选用的罗伦隐球酵母的保藏名称为 ： 罗伦隐球酵母 (Cryptococcus laurentii)ZJU 10， 保藏单位 ： 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏日 期 ： 2010 年 1 月 20 日， 保藏号 ： CGMCC NO.3590。保藏地址 ： 北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号， 中国科学院微生物研究所。该罗伦隐球酵母在申请号为 20。

18、1010152108.4 的专利中有 明确告知。 0014 本发明所选用的海洋酵母 (Rhodosporidium paludigenum Fell & Tallman) 被保藏于英国国际真菌研究所国际农业与生物中心基因资源保藏中心 (International Mycological Institute， CABI Genetic Resource Collection)， 保藏地址 ： 英国TW20 9TY 萨里郡艾格镇贝克汉姆路国际农业与生物中心英国中心， 保藏日期 ： 2006.4.19， 保藏编号 ： IMI 394084。该菌株已经在申请号为 200610155209.0 的专利中。

19、被公开。 0015 在本发明中， 水杨酸为邻羟基苯甲酸， 生长素为吲哚丁酸。 0016 本发明的生物防腐保鲜剂只有在确保酵母活性的基础上才能发挥最佳的防腐效 应， 因此所用的酵母悬浮液是指经过菌种活化、 并配制成的具有抑菌效果且浓度适宜的酵 母菌悬液， 其有效浓度为 1107细胞 / 毫升 1109细胞 / 毫升。 0017 酵母、 碳酸氢钠和果实抗性激发子的复合处理是指将碳酸氢钠、 果实抗性激发子 成分直接添加到酵母菌菌悬液中而制成的生物防腐保鲜剂。碳酸氢钠的有效浓度为 ： 每 1L 保鲜剂中含有 5 50g 的碳酸氢钠。果实抗性激发子是指水杨酸 (SA)、 生长素 (IBA)， 其有 效浓。

20、度分别为， 每 1L 保鲜剂中含有 1 100mg 的 SA、 10 400mg IBA。 0018 本发明所设定的果实抗性激发子的有效浓度是指其使用量确保不抑制拮抗酵母 的生长和繁殖， 并能发挥果实抗性激发子特定生理功能的浓度。 0019 本发明的柑橘生物保鲜剂有效整合了 3 种生防酵母的活性、 碳酸氢钠对病原菌的 抑制活性、 吲哚丁酸和水杨酸对果实抗性激发的活性， 从而能显著抑制柑橘果实病害的发 生和发展 ； 由于能根据具体情况大幅度降低拮抗酵母的使用量， 从而显著降低成本。 0020 本发明的柑橘生物保鲜剂具有安全高效、 环境友好、 病害防治效果突出等优点。 使 用本发明的生物防腐保鲜剂。

21、， 能转变长期以来依赖化学杀菌剂为主的果实真菌病害控制方 法， 对确保食品安全、 环境保护和农业增效、 农民增收和经济社会可持续的发展等具有重要 意义。 0021 实际使用时， 可任选以下任意一种处理方式对果实进行处理 ： 0022 处理方式一 ： 选择无机械损伤、 未感染、 大小和成熟度等外观品质基本一致的果 实， 用自来水冲洗、 并在室温 (25左右 ) 下放干。将果实在本发明的柑橘生物保鲜剂中浸 泡3分钟后， 取出放干， 然后放入保鲜薄膜袋中在室温(25左右)下保持2024小时， 接 着将果实从薄膜袋中取出， 装箱贮藏。 0023 处理方式二 ： 采前采用喷壶喷洒的处理方法， 将本发明的。

22、柑橘生物保鲜剂喷在果 实表面 ( 湿润即可 )， 待干后取下果实放入保鲜薄膜袋中在室温 (25左右 ) 下保持 20 24 小时， 再将果实从薄膜袋中取出， 装箱贮藏。 具体实施方式 0024 以下实施例中的果实为正常商业成熟度的柑橘 (Citrus unshiu Marc.) 果实， 试 验品种为早桔。选择无机械损伤、 未感染、 大小和成熟度等外观品质基本一致的果实， 用质 说 明 书 CN 102224843 B 5 4/6 页 6 量浓度为 0.1次氯酸钠溶液浸泡消毒 1-2 分钟后， 用自来水冲洗， 在室温下 (20-25 ) 放 干后备用。 0025 拮 抗 酵 母 为 罗 伦 隐 。

23、球 酵 母 (Cryptococcus laurentii ZJU 10)、 粘 红 酵 母 (Rhodotorula glutinis ZJU 11)， 红冬孢酵母 (Rhodosporidium paludigenum Fell & Tallman) ； 病原菌为病原菌为指状青霉 (Penecillium digitatum)。SA， 分析纯 AR， 上海化 学试剂采购供应五联化工厂 ； IBA， 化学纯 CP， 国药集团化学试剂有限公司 ； 碳酸氢钠， 分析 纯试剂。 0026 3 种酵母悬浮液的制备方法分别如下 ： 0027 以下所用的 NYDA 培养基为 ： 牛肉浸膏 8g， 酵母粉。

24、 5g， 葡萄糖 10g， 琼脂 20 克， 水定 容至 1000ml， 高压 (1kg/cm2)121灭菌 30 分钟。 0028 所用的 NYDB 种子培养基为 ： 牛肉浸膏 8g、 酵母粉 5g、 葡萄糖 10g， 水定容至 1000ml， 高压 (1kg/cm2)121灭菌 30 分钟。 0029 罗伦隐球酵母、 粘红酵母， 红冬孢酵母分别在低温(4)下保存在NYDA培养基中。 培养程序依次为 ： 0030 、 活化 ： 先在 NYDA 培养基中 28培养 48 小时， 然后重复传代培养 2 次 ( 每次均 为在 NYDA 培养基中 28培养 48 小时 ) ； 将上述重复传代培养 2。

25、 次所得的活化好的酵母用 接种环接到 NYDB 种子培养基中， 28下培养 24 小时 ； 然后在相同条件下重复培养 1 次 ( 即 将 NYDB 种子培养基中培养而得的酵母再次用接种环接到 NYDB 种子培养基中， 28下培养 24 小时 ) ； 0031 、 液体培养 ： 用步骤活化所得的酵母按照5(重量比)的接种量接到NYDB种 子培养基中， 在 200rpm、 28条件下培养 24 小时 ； 0032 、 离心分离 ： 将步骤液体培养后的所得物在 3000rpm 条件下， 离心 10 分钟， 并 用灭菌蒸馏水洗 2 次， 以去除培养介质 ； 0033 、 悬浮和确定浓度 ： 用无菌蒸馏。

26、水重新悬浮酵母细胞， 用血球记数板的方法确定 酵母的浓度， 并用无菌蒸馏水调整到试验所需要的浓度。 0034 实施例 1、 基于酵母、 碳酸氢钠和激发子活性的柑橘生物保鲜剂 ： 0035 先分别单独活化、 培养罗伦隐球酵母、 粘红酵母， 红冬孢酵母 ； 将 3 种酵母的浓度 分别调整到 2109个细胞 /ml， 取 0.5 升体积的罗伦隐球酵母悬浮液， 加入 0.5 升体积的粘 红酵母悬浮液， 搅拌混匀 3 分钟 ； 然后加入 0.5 升体积的红冬孢酵母悬浮液， 完毕后继续搅 拌混匀 3 分钟， 缓慢加入浓度为 1000mg/L 的 SA 溶液 1000 毫升， SA 溶液加入完毕后搅拌混 匀。

27、5分钟 ； 然后缓慢加入浓度为1000mg/L的IBA溶液100毫升， 搅拌混匀5分钟 ； 缓慢加入 浓度为80g/L的碳酸氢钠溶液2500毫升， 溶液加入完毕后搅拌混匀5分钟加水稀释到10升 备用。该最终所得的每 L 柑橘生物保鲜剂中分别含有 11011个罗伦隐球酵母、 11011个 粘红酵母， 11011个红冬孢酵母细胞， 100mg/L SA， 10mg/L IBA， 20g/L碳酸氢钠， 其余为水。 0036 实施例 2、 调整实施例 1 中 SA 溶液、 碳酸氢钠溶液和 IBA 溶液的用量 ； 从而使最 终所得的每 L 柑橘生物保鲜剂中分别含有 11011个罗伦隐球酵母、 11011。

28、个粘红酵母， 11011个红冬孢酵母细胞， 50mg/L SA， 200mg/L IBA， 25g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0037 实施例 3、 调整实施例 1 中 SA 溶液、 碳酸氢钠溶液和 IBA 溶液的用量 ； 从而使最 终所得的每 L 柑橘生物保鲜剂中分别含有 11011个罗伦隐球酵母、 11011个粘红酵母， 说 明 书 CN 102224843 B 6 5/6 页 7 11011个红冬孢酵母细胞， 10mg/L SA， 400mg/L IBA， 50g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0038 对比例 1、 取消实施例 1 中 SA 溶液、 碳酸氢钠溶液和 IBA 溶液的使用，。

29、 从而使最 终所得的每 L 生物防腐保鲜剂中分别含有 11011个罗伦隐球酵母、 11011个粘红酵母， 11011个红冬孢酵母细胞。 0039 对比例 2、 取消实施例 1 中碳酸氢钠溶液的使用， 该最终所得的每 L 生物防腐保 鲜剂中分别含有 11011个罗伦隐球酵母、 11011个粘红酵母， 11011个红冬孢酵母细胞， 100mg/L SA， 10mg/L IBA， 其余为水。 0040 对比例 3、 取消实施例 1 中 SA 的使用， 从而使最终所得的每 L 生物防腐保鲜剂中 分别含有 11011个罗伦隐球酵母、 11011个粘红酵母， 11011个红冬孢酵母细胞， 10mg/ LI。

30、BA， 20g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0041 对比例 4、 取消实施例 1 中 IBA 的使用， 从而使最终所得的每 L 生物防腐保鲜剂中 分别含有 11011个罗伦隐球酵母、 11011个粘红酵母， 11011个红冬孢酵母细胞， 100mg/ LSA， 20g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0042 对比例 5、 取消罗伦隐球酵母的使用， 调整粘红酵母的用量， 从而使最终所得的每 L柑橘生物保鲜剂中分别含有21011个粘红酵母、 11011个红冬孢酵母细胞， 100mg/L SA， 10mg/L IBA， 20g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0043 对比例 6、 取消罗伦隐球酵母的使。

31、用， 调整红冬孢酵母的使用， 从而使最终所得的 每 L 柑橘生物保鲜剂中分别含有 11011个粘红酵母、 21011个红冬孢酵母细胞， 100mg/L SA， 10mg/L IBA， 20g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0044 对比例 7、 取消粘红酵母的使用， 调整罗伦隐球酵母的用量， 从而使最终所得的每 L 柑橘生物保鲜剂中分别含有 21011个罗伦隐球酵母、 11011个红冬孢酵母细胞， 100mg/ LSA， 10mg/L IBA， 20g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0045 对比例 8、 取消粘红酵母的使用， 调整红冬孢酵母的用量， 从而使最终所得的每 L 柑橘生物保鲜剂中分别含。

32、有 11011个罗伦隐球酵母、 21011个红冬孢酵母细胞， 100mg/L SA， 10mg/L IBA， 20g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0046 对比例 9、 取消红冬孢酵母的使用， 调整罗伦隐球酵母的用量， 从而使最终所得的 每 L 柑橘生物保鲜剂中分别含有 21011个罗伦隐球酵母、 11011个粘红酵母细胞， 100mg/ LSA， 10mg/L IBA， 20g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0047 对比例 10、 取消红冬孢酵母的使用， 调整粘红酵母的用量， 从而使最终所得的每 L 柑橘生物保鲜剂中分别含有 11011个罗伦隐球酵母、 21011个粘红酵母细胞， 100mg。

33、/L SA， 10mg/L IBA， 20g/L 碳酸氢钠， 其余为水。 0048 为了证明本发明的生物防腐保鲜效果， 发明人进行了如下实验 ： 0049 实验、 柑橘果实生物防腐保鲜剂的效果实验 0050 用消过毒的打孔器在每个果实表面形成统一大小和的深度的伤口。 将上述不同的 组合试剂 50l 分别添加到不同的果实伤口处。病原菌接种在以上处理 2 小时后在每个伤 口加入等量 (30l) 的病原菌孢子悬浮液 (Penecillium digitatum 浓度为 104 spores/ ml)。处理完毕后在常温 (23 24 ) 下贮藏， 并用 PE 塑料膜密封作保湿处理。每个处理 每重复 1。

34、2 个果实， 每处理重复 3 次。 0051 表 1. 试验结果 说 明 书 CN 102224843 B 7 6/6 页 8 0052 0053 0054 从表1的结果可以看出， 实施例实施例3对柑橘果实病害能产生强烈的抑制， 其 效力已达到甚至超过杀菌剂对照的控制效果。 从对比例110可以看出， 当取消碳酸氢钠、 SA、 IBA 或其中任何一种生防酵母的配方后， 其对果实病害的控制效力均导致降低。 0055 最后， 还需要注意的是， 以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然， 本发 明不限于以上实施例， 还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容 直接导出或联想到的所有变形， 均应认为是本发明的保护范围。 说 明 书 CN 102224843 B 8 。