抗癌组合
本申请是申请日为2002年9月3日的中国专利申请02817257.4(国 际申请号为PCT/GB02/04025的PCT国际申请进入中国国家阶段)的分 案申请。
技术领域
本发明涉及化合物5，6-二甲基占吨酮-4-乙酸(DMXAA)和选自铂 化合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑 制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物的协同组合，它们具 有抗肿瘤活性。优选本发明涉及化合物5，6-二甲基呫吨酮-4-乙酸 (DMXAA)和选自卡铂、吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺、依托 泊苷、长春新碱、多柔比星和伊立替康的化合物的组合。更具体地说， 本发明涉及这种组合在癌症治疗中的应用和包含这种组合的药物组合 物。
背景技术
5，6-二甲基呫吨酮-4-乙酸(DMXAA)由下式表示：
目前已完成DMXAA的I期临床试验，其中动态MRI(磁共振成像) 表明它在良好的耐受剂量下引起肿瘤血流明显减少。因此DMXAA是第 一批抗血管试剂之一，其活性(不可逆地抑制肿瘤血流)已在人肿瘤中 得到证实。这些发现与使用肿瘤或人肿瘤异种移植物的临床前研究一 致，显示出其抗血管活性产生长时间的抑制肿瘤血流作用，导致广泛 的出血性坏死区域。但是，在这些研究中由充分灌注的外周中的存活 细胞快速地再生出肿瘤。在大部分的临床前模型中所见的暂时的肿瘤 生长抑制作用与I期临床研究中所见的肿瘤消退的欠缺一致，表明 DMXAA不太可能具有作为单一试剂的临床用途。
卡铂(Paraplatin)是一种铂配位癌症化学治疗剂。
卡铂的化学名称是铂，二胺[1，1-环丁烷二羧酸合(2-)-0，0′]-， (SP-4-2)。
顺铂(Platinol)是一种用于治疗多种肿瘤类型的铂抗肿瘤剂。
吉西他滨(Gemzart)(HCl)是一种表现出抗癌活性的核苷类似物 抗代谢物。吉西他滨HCl是2′-脱氧-2′，2′-二氟胞苷一盐酸盐(β-异 构体)。
5-氟尿嘧啶(Adrucil)是一种可注射的抗肿瘤抗代谢物。它的化 学名称是5-氟-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮。
环磷酰胺(Cytoxan)可以作为用于注射的冻干饼或作为口服片剂 利用。环磷酰胺一种与氮芥化学上相关的合成抗肿瘤药物。环磷酰胺 的化学名称是2-[双(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-13，2-氧氮磷杂环己烯 -2-氧化物一水合物。
多柔比星HCl(Adriamycin)是一种从波赛链霉菌中分离的细胞 毒性蒽环霉素抗生素。它具有化学名称(8S，10S)-10-[(3-氨基- 2，3，6-三脱氧-a-L-来苏-吡喃糖基)氧]-8-羟乙酰基-7，8，9，10-四氢 -6，8，11-三羟基-1-甲氧基-5，12-并四苯二酮盐酸盐。
长春新碱(Oncovine，VincasarPFS，Vincrex)是一种长春花 属生物碱抗肿瘤药。
依托泊苷(VePesid)，(一般还称为VP-16)是一种拓扑异构酶II 抑制剂。它是一种鬼臼毒素的半合成衍生物。它是4′-去甲基表鬼臼毒 素-9-[4，6-0-(R)-亚乙基-(beta)-D-吡喃葡糖苷]。依托泊苷可用于 口服和静脉内给药。
伊立替康(Campto，Camptosar)是一种拓扑异构酶I抑制剂。它 是一种喜树碱的半合成衍生物。化学名称为(S)-4，11-二乙基- 3，4，12，14-四氢-4-羟基-3，14-二氧代-1H-吡喃并[3′，4′：6，7]-吲嗪 醇[1，2-b]喹啉-9-基-[1，4′-二哌啶]-1′-羧酸酯，一盐酸盐，三水合 物。
发明内容
现在令人惊奇地发现通过同时或顺序地组合DMXAA和选自铂化合 物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、 抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物，优选选自卡铂、吉西他滨、 顺铂、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺、依托泊苷、长春新碱、多柔比星和伊 立替康的化合物，实现了抗肿瘤活性的增强。
因此，本发明一方面提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括给 需要这种治疗的哺乳动物，包括人施用有效量的DMXAA或其药学上可 接受的盐或酯并同时或顺序地施用有效量的选自铂化合物、长春花属 生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和 拓扑异构酶II抑制剂的化合物。
另一方面，本发明提供DMXAA或其药学上可接受的盐或酯用于制 备与选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑 异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物同时或顺 序给药以治疗癌症的药物的应用。
另一方面，本发明提供选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化 试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑 制剂的化合物用于制备与DMXAA或其药学上可接受的盐或酯同时或顺 序给药以治疗癌症的药物的应用。
在又一方面，本发明提供DMXAA或其药学上可接受的盐或酯与选 自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I 抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物的组合。
本发明的再一方面提供一种试剂盒，其中包含相关并分开给药的 DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选自铂化合物、长春花属生物碱、 烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构 酶II抑制剂的化合物。
适宜的铂化合物的实例为顺铂和卡铂。
适宜的长春花属生物碱的实例为长春新碱。
适宜的烷基化试剂的实例为环磷酰胺。
适宜的蒽环霉素的实例为多柔比星。
适宜的拓扑异构酶II抑制剂的实例为依托泊苷。
适宜的抗代谢物的实例为吉西他滨和5-氟尿嘧啶。
适宜的拓扑异构酶I抑制剂的实例为伊立替康。
因此，在本发明中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物可以是例如选自卡铂、吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、环 磷酰胺、依托泊苷、长春新碱、多柔比星和伊立替康的化合物。
在本发明一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷 基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶 II抑制剂的化合物是选自卡铂、吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、环磷 酰胺、依托泊苷、长春新碱和多柔比星的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、 烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构 酶II抑制剂的化合物是选自卡铂、吉西他滨、顺铂，环磷酰胺、依托 泊苷、长春新碱和伊立替康的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、 烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构 酶II抑制剂的化合物是选自卡铂、吉西他滨、顺铂，环磷酰胺、依托 泊苷和长春新碱的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、 烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构 酶II抑制剂的化合物是选自吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶，多柔比星 和伊立替康的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、 烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构 酶II抑制剂的化合物是选自吉西他滨、顺铂和伊立替康的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、 烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构 酶II抑制剂的化合物是选自吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶和多柔比星 的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，在不存在抗体的情况下，使用或 存在DMXAA，或者使用或存在DMXAA和选自铂化合物、长春花属生物 碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑 异构酶II抑制剂的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，如果选自铂化合物、长春花属生 物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓 扑异构酶II抑制剂的化合物是5-氟尿嘧啶或多柔比星，则在不存在抗 体的情况下，使用或存在DMXAA，或者使用或存在DMXAA和选自铂化 合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制 剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物。
附图说明
图1例示在给小鼠单独施用(i.p.)(曲线中的圆圈点！)或与 DMXAA(80μmol/kg)共同施用(·)化学治疗药进行治疗之后MDAH-Mca-4 肿瘤的生长延迟。数值是关于6-8只小鼠的试验组的平均值±平均标准 误差，忽略死亡(d)或治愈(c)，其数字如括号内所示。*和**分别代表 p＜0.05和＜0.01，用于表示相对于对应的对照组(DMXAA)的生长延迟 的显著性。
图2.左图：单独施用(316μmol/kg)(·)或与DMXAA(80/μmol/kg) 共同施用(圆圈点！)卡铂之后游离铂的血浆浓度。右图：在单独施用 (31μmol/kg)(·)或与DMXAA(80/μmol/kg)共同施用(圆圈点！)卡铂 之后总铂的肿瘤浓度。
具体实施方式
DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选自铂化合物、长春花属生物 碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑 异构酶II抑制剂的化合物可以同时或顺序地给药。优选DMXAA或其药 学上可接受的盐或酯和选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、 蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的 化合物同时给药。
优选DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选自铂化合物、长春花 属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物 和拓扑异构酶II抑制剂的化合物以增效比率存在。
术语“增效比率”用于表示DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和 选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构 酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物以这样的比率 存在：组合的抗肿瘤活性大于单独的DMXAA或单独的选自铂化合物、 长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗 代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物的抗肿瘤活性，或者大于根据 各组分的活性而预期的组合的加合活性。因此，如果各组分以增效比 率存在，则它们的组合发生协同作用。
可以成功地用于治疗癌症的DMXAA和抗代谢物如吉西他滨和5-氟 尿嘧啶的增效比率的范围是1∶100-1∶2的DMXAA∶抗代谢物。适宜的增 效比率范围为1∶75-1∶5。进一步的增效比率范围为1∶50-1∶10。优选 的增效比率范围为1∶30-1∶15，更优选的范围为1∶25-1∶20的DMXAA∶ 抗代谢物。
可以成功地用于治疗癌症的DMXAA和铂化合物如卡铂或顺铂的增 效比率的范围为20∶1-1∶20。例如，在卡铂的情况下，可以成功地用 于治疗癌症的增效比率的范围是1∶20-1∶1的DMXAA∶卡铂。类似地， 在卡铂的情况下，增效比率的范围是1∶16-1∶2。在卡铂的情况下进一 步的增效比率的范围为1∶10-1∶2。在卡铂的情况下优选的增效比率的 范围为1∶8-1∶3，更优选的范围为1∶6-1∶4的DMXAA∶卡铂。类似地， 在顺铂的情况下，可以成功地用于治疗癌症的增效比率的范围是 20∶1-1∶1的DMXAA∶顺铂。在顺铂的情况下适宜的增效比率的范围为 10∶1-1∶1。在顺铂的情况下进一步的增效比率的范围是8∶1-1∶1。在 顺铂的情况下优选的增效比率的范围是6∶1-2∶1，更优选的范围是 4∶1-2∶1的DMXAA∶顺铂。
可以成功地用于治疗癌症的DMXAA和烷基化试剂如环磷酰胺的增 效比率是1∶100-1∶2的DMXAA∶烷基化试剂。适宜的增效比率范围为 1∶50-1∶5。进一步的增效比率范围为1∶30-1∶5。优选的增效比率范 围为1∶20-1∶8，更优选的范围为1∶16-1∶12的DMXAA∶烷基化试剂。
可以成功地用于治疗癌症的DMXAA和拓扑异构酶II抑制剂如依托 泊苷的增效比率的范围为10∶1-1∶10的DMXAA∶拓扑异构酶II抑制 剂。适宜的增效比率范围是5∶1-1∶5。进一步的增效比率范围为 5∶1-1∶3。优选的增效比率范围为3∶1-1∶2，更优选的范围为2∶1-1∶2 的DMXAA∶拓扑异构酶II抑制剂。
可以成功地用于治疗癌症的DMXAA和长春花属生物碱如长春新碱 的增效比率范围为200∶1-5∶1的DMXAA∶长春花属生物碱。适宜的增效 比率范围为150∶1-10∶1。进一步的增效比率范围为100∶1-40∶1。优 选的增效比率范围为100∶1-60∶1，更优选的范围为90∶1-70∶1的 DMXAA∶长春花属生物碱。
可以成功地用于治疗癌症的DMXAA和蒽环霉素如多柔比星的增效 比率范围为50∶1-1∶1的DMXAA∶蒽环霉素。适宜的增效比率范围为 25∶1-1∶1。进一步的增效比率范围为16∶1-2∶1。优选的增效比率范围 为8∶1-2∶1，更优选的范围为6∶1-4∶1的DMXAA∶蒽环霉素。
优选DMXAA的药学上可接受的盐是钠盐。
在一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物是卡铂。
在一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物是吉西他滨。
在一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物是顺铂。
在一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物是5-氟尿嘧啶。
在一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物是环磷酰胺。
在一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物是依托泊苷。
在一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物是长春新碱。
在一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物是多柔比星。
在一个实施方案中，选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试 剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制 剂的化合物是伊立替康。
有效地作为抗癌剂所需的DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选 自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I 抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物的组合数量当然会 变化，并最终由医师来决定。需要考虑的因素包括给药的途径和制剂 的性质、哺乳动物的体重、年龄和总体状况以及待治疗的疾病的性质 和严重程度。
用于和选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、 拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物一起 同时或顺序地对人给药以治疗癌症的DMXAA或其药学上可接受的盐的 适宜的有效剂量的范围例如为500-4900mg/m2。例如为600- 4900mg/m2，适宜为600-3100mg/m2，更适宜为1000-2500mg/m2，特别 是1100-1500mg/m2。或者是，DMXAA或其药学上可接受的盐的数量可 以例如为2500-4000mg/m2，适宜为1200-3500mg/m2，更适宜为 2000-3000mg/m2，进一步更适宜为1200-2500mg/m2，特别是2500- 3500mg/m2，尤其是2250-2750mg/m2。优选DMXAA或其药学上可接受 的盐每周或每3周一次静脉内给药。
用于和DMXAA或其药学上可接受的盐一起同时或顺序地对人给药 以治疗癌症的铂化合物如卡铂或顺铂的适宜的有效剂量的范围例如为 10-500mg/m2。
在卡铂的情况下，与DMXAA或其药学上可接受的盐一起同时或顺 序地对人给药以治疗癌症的适宜的有效剂量的范围例如为100- 500mg/m2。例如为100-300mg/m2，适宜为250-400mg/m2，更适宜为 150-350mg/m2，特别是150-250mg/m2，尤其是175-225mg/m2。
类似地，在顺铂的情况下，与DMXAA或其药学上可接受的盐一起 同时地或顺序地对人给药以治疗癌症的适宜的有效剂量的范围例如为 10-200mg/m2。例如为20-150mg/m2，适宜为30-120mg/m2，更适宜为 40-100mg/m2，特别是40-80mg/m2，尤其是60-100mg/m2，最好是75- 100m/m2。
优选铂化合物如卡铂或顺铂每4周进行一次静脉内给药。
与DMXAA或其药学上可接受的盐一起同时或顺序地对人给药以治 疗癌症的抗代谢物如吉西他滨或5-氟尿嘧啶的适宜的有效剂量的范围 例如为400-2000mg/m2。例如为500-1500mg/m2，适宜为600- 1200mg/m2，更适宜为600-1000mg/m2，特别是800-1200mg/m2，尤其 是800-1000mg/m2，优选为750-980mg/m2，更优选为750-965mg/m2。
与DMXAA或其药学上可接受的盐一起同时或顺序地对人给药以治 疗癌症的抗代谢物如吉西他滨或5-氟尿嘧啶的适宜的有效剂量的范围 例如为2-20mg/kg。例如为2-15mg/kg，适宜为2-8mg/kg，更适 宜为6-12mg/kg，特别是4-10mg/kg，优选为4-6mg/kg。
优选吉西他滨每周进行一次静脉内给药，而5-氟尿嘧啶则优选进 行大约2周时间的隔日给药。
与DMXAA或其药学上可接受的盐一起同时或顺序地对人给药以治 疗癌症的烷基化试剂如环磷酰胺的适宜的有效剂量的范围例如为100- 1000mg/m2。例如为200-800mg/m2，适宜为200-500mg/m2，更适宜为 350-700mg/m2，特别是450-650mg/m2，尤其是500-600mg/m2，最好是 550-650mg/m。
优选烷基化试剂如环磷酰胺每4周进行一次静脉内给药。
与DMXAA或其药学上可接受的盐一起同时或顺序地对人给药以治 疗癌症的拓扑异构酶II抑制剂如依托泊苷的适宜的有效剂量的范围例 如为5-150mg/m2。例如为5-120mg/m2，适宜为10-100mg/m2，更适宜 为15-50mg/m2，特别是60-120mg/m2，尤其是35-75mg/m2，最好是 30-60mg/m2
优选拓扑异构酶II抑制剂如依托泊苷每天静脉内给药进行4-7天。
与DMXAA或其药学上可接受的盐一起同时或顺序地对人给药以治 疗癌症的长春花属生物碱如长春新碱的适宜的有效剂量的范围例如为 0.1-2.0mg/m2。例如为0.125-1.75mg/m2，适宜为0.15-1.5mg/m2，更 适宜为0.2-1.4mg/m2，特别是0.6-1.4mg/m2，尤其是0.8-1.4mg/m2， 最好是0.5-1.0mg/m2。
优选长春花属生物碱如长春新碱每周进行一次静脉内给药。
与DMXAA或其药学上可接受的盐一起同时或顺序地对人给药以治 疗癌症的蒽环霉素如多柔比星的适宜的有效剂量的范围例如为5- 100mg/m2。例如为10-80mg/m2，适宜为20-60mg/m2，更适宜为40- 75mg/m2，特别是20-50mg/m2，尤其是15-35mg/m2，最好是40-60mg/m2。
优选蒽环霉素如多柔比星每3-4周进行一次静脉内给药。
DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选自铂化合物、长春花属生物 碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑 异构酶II抑制剂的化合物可以任何适宜的形式给药。但是，对于本发 明的应用，DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选自铂化合物、长春花 属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物 和拓扑异构酶II抑制剂的化合物的组合优选作为药物制剂存在。
药物制剂包含活性成分(即DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选 自铂化合物、长春花属生物碱，烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I 抑制剂，抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物的组合)以及一种 或多种药学上可接受的载体和任选存在的其它治疗和/或预防成分。载 体必须在下述意义上是可接受的，即，它可以与配方中其它成分相容 并对它的受试者无毒。
因此，本发明提供一种药物制剂，其中包含DMXAA或其药学上可 接受的盐或酯和选自铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环 霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合 物的组合以及一种或多种药学上可接受的载体。
本发明还提供一种用于制备药物制剂的方法，所述方法包括将 DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选自铂化合物、长春花属生物碱、 烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构 酶II抑制剂的化合物的组合与一种或多种药学上可接受的载体组合。
药物制剂包括适于口、局部(包括皮肤、颊和舌下)、直肠和肠胃 外(包括皮下、真皮内、肌内和静脉内)给药以及通过鼻饲管给药的药 物制剂。如果合适的话，所述的制剂可以方便地以分离的剂量单元形 式存在，并可以通过任何药学技术中众所周知的方法制备。所有的方 法都包括以下步骤：使活性成分与药学上可接受的载体如液体载体或 细分的固体载体或者二者结合，然后如果需要的话使产物成形为目标 制剂。
优选药物制剂适合于肠胃外给药，最优选适合静脉内给药。例如， 可以使用本领域已知的每一种化合物的制剂对化合物进行静脉内给 药。
其中的载体为固体的适于口服的药物制剂最优选作为各自包含预 定量的活性成分的单元剂型如大丸剂、胶囊或片剂存在。可以通过任 选与一种或多种辅助成分一起压制或模制而制备片剂。可以通过在适 宜的机器中压制自由流动形式如粉末或颗粒的活性化合物而制备压制 片剂，所述化合物任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表 面活性剂或分散剂混合。模制片剂可以通过模制惰性液体稀释剂而制 备。片剂可以任选包衣，如果未包衣的话可以任选进行刻痕。可以通 过将单独的或与一种或多种辅助成分混合的活性成分填充到胶囊壳， 然后以常规的方式将它们密封而制备胶囊。扁囊剂类似于胶囊，其 中将活性成分与任何辅助成分一起密封在米纸封套中。还可以将 DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选自铂化合物、长春花属生物碱、 烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构 酶II抑制剂的化合物的组合制成可分散的颗粒，可以在给药前将它悬 浮在水中，或者将它撒在食物上。可以将颗粒包装，例如装在小袋中。
其中的载体为液体的适于口服的制剂可以作为在含水液体或非水 液体中的溶液或悬浮液或水包油型液体乳剂存在。
口服制剂包括控释剂型，例如其中的活性成分配制在适宜的控释 基质中或用适宜的控释薄膜包衣的片剂。这些制剂可以特别方便地用 于预防性应用。
还可以将活性成分配制成适于通过鼻饲管给药的溶液或悬浮液。
其中的载体为固体的适于直肠给药的药物制剂最优选采用单元剂 量栓剂的形式。适宜的载体包括可可油和本领域中常用的其它材料。 栓剂可以方便地通过将活性组合物与软化或熔化的载体混合，然后在 模子中冷却成形得到。
适于肠胃外给药的药物制剂包括在水性或油性赋形剂中的活性组 合物的无菌溶液或悬浮液。注射制剂可以适于快速浓注或连续输液。 这些制剂可以方便地在单元剂量或多剂量容器中提供，这些容器在加 入制剂之后密封直至需要使用之时。或者是，活性成分可以是在使用 前与适宜的赋形剂如无菌、不含热原的水组合的粉末形式。
药物制剂可以是例如脂质体制剂形式。
还可以将DMXAA或其药学上可接受的盐或酯和选自铂化合物、长 春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构酶I抑制剂、抗代 谢物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物的组合制成长效贮库制剂，它可 以通过肌内注射或植入，例如皮下或肌内植入而给药。贮库制剂可以 包括适宜的聚合或疏水材料或离子交换树脂。这些长效制剂对于预防 性应用特别方便。
应该理解，除了上述的载体成分之外，如果合适的话，上述的用 于各种给药途径的药物制剂可以包括一种或多种附加的载体成分如稀 释剂、缓冲剂、调味剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防 腐剂(包括抗氧化剂)等，以及用于使制剂与目标受试者的血液等渗的 物质。
可以根据Journal of Medicinal Chemistry 34(1)：217-22， 1991年1月所述的方法制备DMXAA，这里引用该文献的内容作为参考。
铂化合物、长春花属生物碱、烷基化试剂、蒽环霉素、拓扑异构 酶I抑制剂、抗代谢物和拓扑异构酶II抑制剂，例如卡铂、吉西他滨、 顺铂、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺、依托泊苷、长春新碱、多柔比星和伊 立替康是已知的化合物，并可以用本领域技术人员已知的方法制备。
应该理解本发明覆盖上述的适宜和优选的组群的所有组合。
可以根据本发明治疗的癌症包括但不限于实体瘤，例如非小细胞 肺癌、小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌和 胃癌。
现在将通过以下实施例例示本发明，而不是用来对其进行限定。
实施例
实施例1：
材料和方法
化合物：在磷酸盐缓冲盐水中制备在奥克兰癌症协会研究中心 (Auckland Cancer Society Research Centre)合成的DMXAA的储备 液，避光保护并冷冻储存。将顺铂(Sigma Chemical Co.，St Louis， MO)溶于0.9％盐水。用无菌水稀释卡铂和5-氟尿嘧啶(Bristol Myers Squibb，Sermonita，Italy)和环磷酰胺(Mead Johnson Oncology Products，Princeton，NJ)的储备液。用0.9％盐水稀释多柔比星 (Farmitalia Carlo Erba Pty Ltd，Clayton North，Australia)、 依托泊苷和长春新碱(Bristol-Myers Squibb，Sermonita，Italy)。 所有化合物均按0.01ml/g体重以腹膜内注射方式对小鼠给药。
动物和肿瘤：使鼠乳房癌MDAH-Mca-4肿瘤在液氮下储藏的处在第 六移植世代的储备物中生长。肿瘤(使用时为第八个移植世代)在20μl 细胞悬浮液(7mg填充的细胞)中生长，i.m.(肌内)接种于雌性C3H/HeN 小鼠(在治疗时为22-25g)的右腓肠肌。在肿瘤+腿直径达到10-11 mm(0.5-0.7g肿瘤)时开始对小鼠进行随机治疗。
宿主毒性和抗肿瘤活性：用一定的剂量范围内的化学治疗药治疗 小鼠，采用1.33倍增量，直至预期的MTD(最大耐受剂量，在预试验 中估计或根据文献估计)。将毒性评价为致死率和治疗后第4天测定的 体重损失。处死任何濒死的动物并在分析中作与药物有关的死亡对 待。在治疗后每周测定长有肿瘤的腿的直径3次。对于治疗组和对照 组，由定义为达到13mm(1.5g肿瘤)的时间差的肿瘤生长延迟来评价抗 肿瘤活性。如果动物在治疗后120天没有明显的肿瘤则将反应归类为 治愈。通过ANOVA法，使用用于Windows的SAS测定肿瘤生长抑制的 统计学显著性，其中用Dunnett检验评价关于治疗组之间的差别的p- 值。在大量的治愈(在治疗后＞120天无肿瘤)的实验中，通过使用用于 Windows的SAS对差异进行Kruskal-Wallis非参数分析而测定统计学 显著性，并通过使用Sigmastat v2.0进行Dunn′s试验而测定治疗和 对照组之间的差异。通过使用Sigmastat进行线性回归而确定剂量- 反应曲线的斜率和标准误差，并将DMF(剂量校正系数)计算为含有 DMXAA的斜率/不含DMXAA的斜率。
肿瘤血流抑制：使用在药物治疗后不同的时间静脉内给药的荧光 灌注标记物Hoechst 33342(8mg/ml，在盐水中)评价肿瘤血流。2分 钟后处死小鼠，并制备来自各肿瘤的远侧、中央和近侧区域的冷冻切 片(14μm)。用10×放大的Nikon落射荧光显微镜，使用UV-1A滤块(激 发波长365nm，阻挡滤片400nm，分色镜400nm)检查切片。使用含 81个正方形(100×100μm)的网格对染色进行点计分。对各切片的全区 域进行计分以避免外周和中央区域(灌注不够充分)的偏差。排除正常 组织，但坏死区域包括在内。使用不对称t检验(Sigma Stat，版本- 2.0；Jandel Scientific Limited)讨论组间差异的显著性。
药代动力学：给长有MDAH-Mca-4肿瘤(0.5-0.7g)的雌性C3H/HeN 小鼠腹膜内注射卡铂(316μmol/kg)、DMXAA(80μmol/kg)或同时接受相 同剂量的卡铂和DMXAA。在不同的时间将来自麻醉小鼠的眼眶窦的血液 收集到肝素化管中，离心分离血浆。快速地切开肿瘤并在-80℃下冷 冻。对于各时间点使用2-5只小鼠的试验组。
ICP-MS(感应耦合等离子体-质谱)分析铂：使用以下先前公开的 ICP-MS方法测定血浆和肿瘤中的铂浓度。将肿瘤称重，置于含有1ml 70％硝酸(Riedel-de-Haen，Seelze，Germany)的15ml螺帽管中，并 在室温下静置过夜。第二天，在90℃下在配置通风橱的装填沙土的电 子煎锅中将肿瘤蒸煮2小时。冷却后，用Milli-Q水使增溶的肿瘤组 织成为10ml容量烧瓶中的内容物，然后引入到ICP-MS中。通过甲醇 沉淀血浆蛋白制备用于分析的血浆。将血浆加到等体积的冰冷的甲醇 中，混合并在-20℃下静置18小时。将样品离心并用0.1％硝酸将一份 上清液稀释(1∶40)，然后引入ICP-MS中。
ICP-MS系统包括保持在2℃下的Hewlett Packard HP 4500 ICP-MS和镍取样锥体、Babington(v-槽)喷雾器和Scott双通道喷雾 室。在195amu下读取铂，其中停留时间为100ms而重复时间为 6000ms。
校准曲线在宽范围内(0.5-5000ng/ml)是线性的(r2＞0.98)。测 定内和测定间差异和回收率在允许极限内。数量界限是12.5pg铂/ml 血浆和10ng铂/g肿瘤组织。
HPLC分析DMXAA：如下测定血浆中DMXAA的浓度。用1ml冰冷的 乙腈∶甲醇(3∶1v/v)处理等分试样的血浆(50μl)，离心，并用Speed- Vac溶剂浓缩器(Savant Instruments，NY)蒸发所得的上清液。将残 余物溶于200μl 10mM乙酸铵缓冲液(pH5)，并使用带二极管阵列检 测器(278nm)和荧光检测器的HP1100系统进行HPLC分析。所用的柱 为3.2mm×150mm C85μm柱(Alltima Associates Inc.，Deerfield， IL)，且流速为0.7ml/min，流动相为在10mM乙酸铵缓冲液(pH5) 中的16％乙腈(v/v)。DMXAA的保留时间为7.3分。对照血浆的掺加表 明测定线性为0.1-100μM(r2＝0.999)。批内和批间精密度和准确度提 供的变异系数＜7％％，而平均回收率为70％％。荧光检测(信噪比为3)的灵 敏度下限为0.1μM。
药代动力学模拟：使用Mode lMaker 4.0版(Cherwell Scientific Limited，The Magdalen Centre，Oxford Science Park，Oxford OX4 4GA，United Kingdom)完成药代动力学数据的模拟。使用以下的药代 动力学参数：Kabs，吸收到中央区室的一级速率常数；Cl，体内总清除 率；Clinter，区室间清除率；Vd，中央区室分布的表现体积；Vd2，第二 区室分布的表观体积；Km，Michaelis-Menten常数；Vmax，理论最大 速率；AUC，浓度-时间曲线下面积。对于所有的化合物，假设所有的 给药剂量将到达中央区室(即100％生物利用度)。用F-检验比较整条曲 线来测试治疗组之间的差异，而且如果差异显著(即p≤0.05)的话， 使用双尾t检验来测定两组的各个独立的模型参数的评估值。将血浆 和肿瘤中的游离铂和总铂的浓度与假设为线性药代动力学的单室开放 模型进行拟合。使用单室开放模型和可饱和的(Michaelis-Menten)消 除动力学对血浆DMXAA浓度进行拟合。
结果
DMXAA+化学治疗药的抗MDAH-Mca-4肿瘤的活性。如图1所示，通 过以下方法评价DMXAA/细胞毒性药物组合的抗肿瘤活性和宿主毒性： 将化学治疗药的剂量改变直至毒性极限，同时服用固定剂量的 DMXAA(80μmol/kg，ca.80％的MTD)，并评价所引起的肿瘤生长延迟。 在所研究的7种药物中，四种(多柔比星、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺和顺 铂)表现出明显的抗这种肿瘤的活性，如剂量-反应关系所示，它通过 线性回归提供相当大的斜率，并在它们的MTDs处提供约10天的高度 显著的生长延迟(如表1记录)。其它三种化合物(卡铂、依托泊苷和长 春新碱)基本上无活性，且各治疗组没有表现出明显的活性(虽然卡铂 通过线性回归而提供弱的正剂量反应)。
单独的DMXAA在80μmol/kg时作为单一药剂时表现出显著的活 性，在3.5-8.3天的范围内(总平均6.6±0.6天)提供暂时的消退作 用和平均肿瘤生长延迟。此剂量的DMXAA的共同给药增加多柔比星的 宿主毒性，而组合物中化学治疗药的MTD降低一个剂量水平(1∶33 倍)(表1)。对于其它化合物，DMXAA的共同给药没有改变正式的MTD， 虽然该组合引起的较大的体重损失表明某些附加的毒性是明显的。
与这种对宿主毒性的小作用相比，DMXAA的共同给药导致肿瘤生长 延迟的大幅增长(表1)。通过线性回归确定各剂量反应曲线的斜率来评 价DMXAA的贡献，并将DMXAA的DMF计算为含有和不含有DMXAA的斜 率的比率。通过这种标准，协同作用依以下顺序减小：长春新碱＞(卡 铂、顺铂、环磷酰胺、依托泊苷、多柔比星)＞5-氟尿嘧啶。对于这 些化合物中的每一种，除了后者，DMF明显大于1。作为另一个可选择 的标准，在组合的MTD处可实现的最大肿瘤生长延迟再次表明所有化 合物均有协同作用，其中生长延迟的范围为15-30天。
DMXAA和卡铂的药代动力学：进行研究以推断是否药代动力学相互 作用是DMXAA和卡铂之间的协同治疗相互作用的基础。所述研究在长 有与治疗研究中的尺寸相同的MDAH-Mca-4肿瘤的C3H小鼠上。在施用 卡铂(316μmol/Kg，腹膜内注射)之后，血浆Pt的清除率(在脱蛋白之 后通过ICP-MS测定)是二相性的，并不受DMXAA的共同给药影响(图 2)。肿瘤中的总Pt也显示出二相性动力学，不受DMXAA共同给药影响。 通过将具有肿瘤药代动力学的血浆模拟成具有线性药代动力学的二室 开放模型，证实了DMXAA没有影响，得到表2的模型参数并表明不存 在显著的DMXAA作用。
此研究试验了以下设想，即，抗血管试剂如DMXAA有可能与常规 的细胞毒素试剂协同组合用于治疗实体肿瘤。用于此比较研究的早期 传代哺乳动物肿瘤MDAH-Mca-4中度地耐受大部分受试的细胞毒性药 物(使用单一药物剂量)，但它对多柔比星、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺和 顺铂表现出显著反应。DMXAA本身显示出作为单一试剂的一致活性，其 大小与这四种试剂相近，但化学治疗药和DMXAA都没有提供长期的消 退或治愈作用。
但是，DMXAA与细胞毒性药物的共同给药导致反应显著增加(图 1)。根据在加入DMXAA时细胞毒性药物剂量反应曲线的斜率增大，可 以将这种相互作用归类为协同(超加合)作用。以DMF(含有和不含有 DMXAA的线性回归斜率的比率)定量的相互作用对于除5-氟尿嘧啶外 的所有药物都明显大于1。值得注意的是，与DMXAA的相互作用导致许 多并不表现出单一试剂活性的化合物具有相当大的活性。
表1DMXAA对宿主毒性和化学治疗药抗MDAH-Mca-4肿瘤的抗肿瘤 活性的影响。将药物与DMXAA通过腹膜内注射共同给药。
化学治疗药 DMXAA (μmol/kg) MTD (μmol/kg) ％第4天的体 重变化 剂量/反应斜率 (天/μmo l/kg) DMF 5-氟尿嘧啶 - 80 1780 1780 -8.5±0.8 -14.1±1.5 0.0051±0.0001a 0.0027±0.001 0.5±0.2 卡铂 - 80 316 316 -5.6±1.5 -8.5±1.4 0.0094±0.0035 0.032±0.010 3.4±2.3 顺铂 - 80 42.1 42.1 -9.5±1.4 -14.4±2.3 0.19±0.06 0.35±0.12 1.8±1.2 环磷酰胺 - 80 ≥1335 ≥1335 -0.8±1.3 -9.2±1.4 0.0062±0.0001 0.0167±0.0013 2.7±0.3 依托泊苷 - 80 ≥75 75(1d) -2.0±1.7 -6.5±3.3 0.030±0.010 0.14±0.04 4.7±2.9 长春新碱 - 80 1.0 1.0 -7.0±1.2 -10.0±1.4 -0.0±1.3 14.1±5.4 ＞7c 多柔比星 - 80 23.7 17.8 -3.9±0.6 -5.5±1.2 0.42±0.10 1.04±0.23 2.5±1.1
a斜率的标准误差
c利用单独的化学治疗药的斜率的上限误差估计值进行评价
表2长有MDAH-Mca-4肿瘤(约0.7g)的雌性C3H/HeN小鼠的血浆 和肿瘤中的卡铂(316μmol/kg)和DMXAA(80μmol/kg)的药代动力学参 数。括号内的数字为％CV。
参数 血浆 肿瘤 卡铂 DMXAA 卡铂 Kabs(hr-1) 12.6(266) 9.3(39) 14.0(286) Km - 220(9.2) - Vmax(μMhr-1) - 63(6.1) - Cl(1hr-1kg-1) 1.9(41) - 0.28(31) Clinter(1hr-1kg-1) 0.41(99) - 2.3(24) Vd(1kg-1) 1.0(49) 0.17(1.2) 2.7(19) Vd(1kg-1)(共同给药) - - - Vd2(1kg-1) 7.4(227) - 11.3(1163) AUC(μM.hr)a 112b 3628c 416b AUC(μM.hr)a(共同给药) 118b，c 3136c 475b，c
a使用线性梯形规则计算AUC
b0-24小时
c与DMXAA共同给药
d0-8小时
e0-30小时
实施例2
材料和方法
通过在雌性MF1裸鼠的右胁腹皮下注射5×106细胞而实现人肿瘤 异种移植(PSN1)。PSN1是胰腺癌。使肿瘤生长至直径为6-8mm(体积 大约为0.15cm3)，然后进行治疗。随机分配治疗组以使治疗当天各组 的平均体积在统计学上没有差别。用盐水稀释DMXAA和吉西他滨(Eli Lilly & Company，Indiana)的储备溶液，并通过后尾静脉将其静脉 内注射到长有肿瘤的裸鼠。对于联合治疗，通过依次注射两根后尾静 脉而施用两种药物。对照小鼠不治疗。
每周2-3次测定肿瘤的三个正交尺寸，并将体积表示为相对于治 疗当天的体积的肿瘤体积。测定肿瘤直至它们至少体积增至3倍。终 点是肿瘤体积增至三倍的时间。
结果
下表显示，标题为“平均”的栏是用含有和不含有DMXAA的吉西 他滨治疗的PSN1胰腺肿瘤异种移植物的肿瘤体积增至3倍的平均时 间。标题为“治疗-对照”的栏表示治疗组与对照增至3倍的时间之差， 即药物或药物组合优于未治疗的肿瘤之处。
已将吉西他滨数据作为体积翻倍的时间和增至三倍的时间进行分 析。在这两种情况下，二种药物组合都是增效的，组合的治疗组与对 照之差大于各单独给药药物的总和。
PSN1体积增至三倍的时间(天)
吉西他滨加DMXAA
治疗 平均 治疗-对照 对照 4.9 20mg/kg DMXAA 6.0 1.1 240mg/kg吉西他滨 13.9 9.0 240mg/kg吉西他滨+20mg/kg DMXAA ＞17 ＞12
PSN1体积翻倍的时间(天)
吉西他滨加DMXAA
治疗 平均 治疗-对照 对照 3.2 20mg/kg DMXAA 3.6 0.4 240mg/kg吉西他滨 9.7 7.5 240mg/kg吉西他滨+20mg/kg DMXAA 15.4 12.2