技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及朝鲜槐提取物及其提取方法和用途， 具体涉及朝鲜槐提取物及其提取方法和在制备雌激素类药物中的应用。
背景技术：
朝鲜槐(Maackia amurensis Rupr.et Maxim.)又名山槐、高丽槐、怀 槐，为豆科马鞍树属植物。朝鲜槐全株含多种黄酮类成分化合物芒柄花 黄素(formoononetin)、染料木素(genistein)、阿夫罗摩辛(afromosin)、 大豆黄素(afromosin)、鸢尾种苷元、葛花亭等及其苷类，是少数几种含 4种异黄酮(植物雌激素)的植物之一。
异黄酮具有弱雌激素活性，可与雌激素受体结合，依个体激素状态， 可发挥雌激素样或抗雌激素活性，表现出对人体雌激素水平的双向调节 作用。现在已发现的雌激素受体主要有两种：α-雌激素受体和β-雌激素 受体。其中α-雌激素受体主要分布于乳腺、子宫和卵巢中，β-雌激素受 体则常见于前列腺、骨和血管组织。植物雌激素尽管比内源性或合成性 激素作用小，但可与β-雌激素受体结合，而产生有益作用，同时对乳腺 和卵巢无不良影响。
异黄酮类植物雌激素主要包括染料木素异黄酮和大豆黄素，大豆黄 素在大肠内由细菌代谢形成有雌激素作用的雌马酚(equo1)或无雌激素 作用的去甲安哥拉紫檀素，染料木素则代谢为无雌激素活性的对乙基酚。 植物中的异黄酮大多数与糖结合形成异黄酮苷，苷元只占很小一部分， 但是主要起生理活性的是异黄酮苷元。生理条件下，异黄酮苷在肠道菌 群的作用下，脱掉糖苷而成为具有生物活性的非结合形式的异黄酮苷元， 经过不同的活化代谢途径，产生不同的代谢产物，来发挥雌激素或抗雌 激素样作用。
现代研究证实，朝鲜槐中提取得到的异黄酮类化合物具有弱雌激素 样作用，对于预防乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、改善骨质疏松和改善妇 女更年期症状等均有一定的作用。但是朝鲜槐中异黄酮苷元含量较低， 不到1％(重量)，主要以异黄酮苷的形式存在，因此把朝鲜槐异黄酮苷 转化成苷元形式，是提高其生物利用度的前提。
目前还未见有市售的朝鲜槐提取物，因此开发一种简单可行的方法 获得朝鲜槐提取物，用于制备雌激素性药物可以填补本领域关于朝鲜槐 提取及应用方面的空白。
发明内容：
本发明的目的是提供一种朝鲜槐提取物及其提取方法和用途。
本发明所述的朝鲜槐总异黄酮提取物，含有对药理活性起作用的主 要化合物，具体是芒柄花黄素、染料木素、阿夫罗摩辛、大豆黄素等， 它可以通过如下方法制得，该方法包括下列步骤：
(1) 用甲醇或乙醇提取朝鲜槐的心材、根皮、茎皮、枝皮、叶、 叶梗、花、果实和/或种子；
(2)过滤该提取液并浓缩干燥成浸膏或干粉；
(3)用无机酸或有机酸或酶催化水解浸膏或干粉；
(4)用脂肪族的酯类或二氯甲烷或三氯甲烷萃取酸水解物或酶
水解物；
(5)有机相浓缩至干，获得朝鲜槐提取物。
优选实现本发明的方法是用甲醇或乙醇进行第一次提取(步骤(1))， 所用甲醇或乙醇浓度在5％到95％范围内，优选浓度为50％～70％，药材 与溶剂的质量体积比在1:2到1:25的范围内，优选为1:10到1:20 的范围内，温度在室温到溶剂的回流范围内，优选在50～100℃，提取方 式为超声振荡提取、回流提取、浸渍提取，优选回流提取。
用于步骤(1)的药材为朝鲜槐的心材、根皮、茎皮、枝皮、叶、叶 梗、花、果实和/或种子，优选为茎皮。
用于步骤(3)的无机酸为盐酸、硫酸，优选为盐酸。
用于步骤(3)的有机酸为甲酸、乙酸，优选为乙酸。
用于步骤(3)的酶为α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶，优选β-葡萄糖 苷酶。
用于步骤(4)的脂肪族的酯类为乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯， 优选乙酸乙酯。
所述酯类或二氯甲烷或三氯甲烷溶剂用体积比1:1到1:10范围， 优选为1:5。最好用新的等份溶剂重复进行提取，一般至少3次。
影响本提取工艺的因素有原料的质量及加工过程中的实际操作情 况，原料的质量差异取决于收集该植物材料的时间及处理干燥的方式。
按上述方法所得的朝鲜槐提取物中含总异黄酮苷元的含量在 15～85％(重量)，与总提取物相比，该提取物在药理活性初步实验中显 示出高活性，并且不需要进一步的特殊处理，且随时间的推移活性保持 稳定。
附图说明
图1.实施例4中朝鲜槐总异黄酮对3周龄雌性幼鼠子宫和卵巢的作 用。(平均值+SD，n＝10，*＝P<0.05vs.雌激素)
具体实施方式：
实施例1：
取朝鲜槐干燥茎皮1Kg，粉碎，过20目筛。加60％乙醇15L于90℃ 回流提取3次，每次1.5小时。提取液滤过，滤液减压浓缩成粘稠浸膏状 (130g)。用300ml 4M盐酸混悬浸膏，于90℃水解4小时。向水解产物 中加入300ml乙酸乙酯进行萃取，分取乙酸乙酯层，重复上述操作3次， 合并乙酸乙酯层。将乙酸乙酯层减压浓缩至干，得到朝鲜槐总异黄酮提 取物，其中总异黄酮苷元的含量为31.2％。
实施例2：
取朝鲜槐干燥茎皮1Kg，粉碎，过20目筛。加80％乙醇20L室温浸 泡提取3次，每次3天。提取液滤过，滤液减压浓缩成粘稠浸膏状(100g)。 用300ml 4M乙酸混悬浸膏，于80℃水解6小时。向水解产物中加入300ml 二氯甲烷进行萃取，分取二氯甲烷层，重复上述操作3次，合并二氯甲 烷层。将二氯甲烷层减压浓缩至干，得到朝鲜槐总异黄酮提取物，其中 总异黄酮苷元的含量为26.4％。
实施例3：
取朝鲜槐干燥茎皮1Kg，粉碎，过20目筛。加60％乙醇15L于90℃ 回流提取3次，每次1.5小时。提取液滤过，滤液减压浓缩成粘稠浸膏状 (130g)。用400ml pH6的磷酸钾缓冲液混悬浸膏，加入800U/g的β-葡 萄糖苷酶，于36℃搅拌、水解3小时。向水解产物中加入400ml乙酸乙 酯进行萃取，分取乙酸乙酯层，重复上述操作3次，合并乙酸乙酯层。 将乙酸乙酯层减压浓缩至干，得到朝鲜槐总异黄酮提取物，其中总异黄 酮苷元的含量为35.7％。
实施例4：
本发明通过体内实验初步验证了朝鲜槐总异黄酮作为雌激素类药物 的药理活性。具体实施方式如下：
取出生21天左右的雌性幼鼠，分为空白对照组，阳性药物(雌激素) 对照组，朝鲜槐总异黄酮75mg/kg剂量组、30mg/kg剂量组、10mg/kg剂 量组和5mg/kg剂量组，饲养5日后，早晚给药(阳性药物剂量)，连续 四天。末次给药后，于第二天早上脱颈处死，取其子宫、卵巢称重并按 下列公式计算卵巢系数和子宫系数。卵巢系数＝卵巢湿重/体重×100％， 子宫系数＝子宫湿重/体重×100％。
实验结果见图1。
连续给予朝鲜槐总异黄酮四天后，与阳性对照组相比，高剂量朝鲜 槐总异黄酮能够显著促进雌性幼鼠子宫的生长，但对卵巢生长的促进作 用与阳性药物基本一致，同时中、低剂量朝鲜槐总异黄酮均显示一定的 促子宫发育的趋势。这些发现表明，朝鲜槐总异黄酮具有较强的雌激素 样作用，且其活性要优于雌激素，同时对不同器官具有一定的选择性。
本发明还提供了一种应用朝鲜槐提取物作为植物雌激素类药物，用 来预防乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和防治骨质疏松、更年期综合症。
下面以实施例说明该发明的应用，但不应理解为对本发明的限制。
实施例5：
朝鲜槐提取物 10.6g
淀粉 10.6g
微粉硅胶 318mg
羧甲基淀粉钠 318mg
将以上成分混匀，制粒，灌装胶囊，制得的胶囊剂主要用于补充雌 激素、防治更年期综合症、骨质疏松症和乳腺癌
上述配比中朝鲜槐提取物按照发明内容的制备方法制备，其中含朝 鲜槐总黄酮20％～65％，微粉硅胶、淀粉和羧甲基淀粉钠为本领域专业人 员所熟知的制药辅料，主要用作填充剂、膨胀剂和崩解剂。