一种治疗银屑病的药物及其制备方法.pdf

《一种治疗银屑病的药物及其制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种治疗银屑病的药物及其制备方法.pdf（13页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)授权公告号 CN 102274328 B (45)授权公告日 2013.08.07 CN 102274328 B *CN102274328B* (21)申请号 201010195806.2 (22)申请日 2010.06.09 A61K 9/06(2006.01) (73)专利权人 新疆医科大学附属中医医院 地址 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐黄 河路 116 号 (72)发明人 聂继红 王萍 (74)专利代理机构 北京中恒高博知识产权代理 有限公司 11249 代理人 夏晏平 张立新等 . 普连膏在银屑病治疗中的应 用 .中医外治杂志 .2000,( 第 05 期 ), 闫柏。

2、琴等 . 双黄解毒乳膏微生物限度检查方 法验证 .中华中医药杂志 .2007,( 第 08 期 ), 曾祖平等 . 正交试验优选芩柏软膏提取工 艺 .中国医院药学杂志 .2005,( 第 10 期 ), 李小红等 . 芩柏乳膏质量标准的研究 .新 疆中医药 .2007,( 第 05 期 ), 赵小伟等 . 芩柏软膏中黄芩提取工艺的考 察 .中国中医药信息杂志 .2006,( 第 09 期 ), (54) 发明名称 一种治疗银屑病的药物及其制备方法 (57) 摘要 一种治疗银屑病的药物， 由以下重量份配比 的原料制成 ： 黄芩 100 500 份、 关黄柏或黄柏 60 400 份、 硬脂酸 10。

3、0 150 份、 硬脂醇 60 100份、 白凡士林100 200 份、 三乙醇胺10 20 份、 甘油 40 60 份、 十二烷基硫酸钠 8 12 份、 月桂氮卓酮 30 50 份、 羟苯乙酯 0.5 1.5 份、 亚硫酸氢钠 0.5 1.5 份。该药物的制备方法， 包括黄芩预处理、 关黄柏或黄柏预处理、 油相的配 制、 水相的配制、 乳化步骤。本发明的治疗银屑病 的药物易吸收、 疗效高、 毒副作用小、 便于患者使 用和贮存。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 程诚 权利要求书 1 页 说明书 11 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 。

4、说明书11页 (10)授权公告号 CN 102274328 B CN 102274328 B *CN102274328B* 1/1 页 2 1. 一种治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤 : a、 黄芩预处理 : 将黄芩加水煎煮 1 3 次后， 合并煎液， 过滤、 滤液减压浓缩至每 2m1 药液中含原药材 1g， 再用乙醇溶液精制至每 lml 药液中含原药材 1g ； b、 关黄柏或黄柏预处理 : 将关黄柏或黄柏用乙醇溶液回流提取 1 3 次后， 过滤， 滤液 减压浓缩至每 lml 药液中含原药材 1g ； c、 油相的配制 : 将硬脂酸、 硬脂醇和白凡士林加热熔融后， 作。

5、为油相 ； d、 水相的配制 : 将三乙醇胺和甘油水浴加热至 90作为水相， 将十二烷基硫酸钠、 月 桂氮卓酮、 轻苯乙酷和亚硫酸氢钠加热溶解后加入水相中 ； e、 乳化 : 在温度 80 90左右时， 将预处理过的关黄柏或黄柏、 黄芩和水相溶液加入 到油相中， 边加边搅拌， 使乳化完全， 并充分搅拌均匀即可 ； 所述原料的重量份配比 ： 黄芩 100 500 份、 关黄柏或黄柏 60 400 份、 硬脂酸 100 150 份、 硬脂醇 60 100 份、 白凡士林 100 200 份、 三乙醇胺 10 20 份、 甘油 40 60 份、 十二烷基硫酸钠 8 12 份、 月桂氮卓酮 30 50。

6、 份、 羟苯乙酯 0.5 1.5 份、 亚硫酸氢 钠 0.5 1.5 份。 2.根据权利要求1所述的治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 步骤a中所述的 乙醇精制为 : 向减压浓缩后的黄芩煎液中加入乙醇溶液使含醇量达 60vt%， 搅拌均匀后静 置 24 小时， 再于压力 0.08MPa, 温度 60条件下减压浓缩。 3.根据权利要求1所述的治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 步骤a中所述的 煎煮加水量为黄芩质量的 8 倍， 煎煮时间为每次 1 小时。 4.根据权利要求1所述的治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 步骤a中或步骤 b 中所述的减压浓缩的压力为 0.08MPa。

7、, 温度 60。 5.根据权利要求1所述的治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 步骤b中所述的 对关黄柏或黄柏乙醇回流提取所用的乙醇溶液浓度为 75vt%， 用量为关黄柏或黄柏质量的 8 倍， 每次提取 1 小时。 6.根据权利要求1所述的治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 步骤c中所述的 加热温度为 90。 7.根据权利要求1所述的治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 步骤e中所述的 温度为 85。 8. 根据权利要求 1 所述的治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 所述原料的重 量份配比 ： 黄芩 200 300 份、 关黄柏或黄柏 100 320 份、 硬脂酸 。

8、110 130 份、 硬脂醇 70 90 份、 白凡士林 140 160 份、 三乙醇胺 14 16 份、 甘油 45 55 份、 十二烷基硫酸 钠 9 11 份、 月桂氮卓酮 35 45 份、 羟苯乙酯 0.8 1.2 份、 亚硫酸氢钠 0.8 1.2 份。 9. 根据权利要求 8 所述的治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 所述原料的重 量份配比 ： 黄芩240份、 关黄柏或黄柏160份、 硬脂酸120份、 硬脂醇80份、 白凡士林150份、 三乙醇胺 15 份、 甘油 50 份、 十二烷基硫酸钠 10 份、 月桂氮卓酮 40 份、 羟苯乙酯 1 份、 亚硫 酸氢钠 1 份。 10.。

9、 一种治疗银屑病的药物， 其特征在于， 所述治疗银屑病的药物是依权利要求 1 9 任一所述的制备方法制得。 权 利 要 求 书 CN 102274328 B 2 1/11 页 3 一种治疗银屑病的药物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及药物及其制备方法， 尤其涉及一种治疗银屑病的药物及其制备方法。 背景技术 0002 银屑病属于慢性、 反复发作的难治性皮肤病， 是一种原因不明而常见的无传染性 红斑鳞屑性皮肤病， 又称牛皮癣， 分为寻常性、 关节病型、 红皮症型和脓疮型四型， 以寻常性 最常见。祖国医学称之为 “白庀” 、“庀风” 、“松皮癣” 等， 中医认为本病多因七情内伤， 气机壅 。

10、滞， 郁久化火， 热毒蕴伏营血 ； 病久或反复发作， 阴血耗劫， 气血失和， 化燥失风， 以致血燥。 治疗以清热凉血、 滋阴养血、 活血化瘀为主。西医则认为本病与遗传、 感染、 代谢障碍、 免疫 功能失调有关。 病理表现系渗出增生性炎性过程， 表皮角化过度， 角化不全， 棘细胞增厚， 角 质层内有中性多形核白细胞堆积， 形成 Monro 小脓疡。表皮突呈规则性向下延伸， 乳头延长 水肿， 呈杆状。 真皮毛细血管扩张， 有血管周围浸润， 浸润成分主要为小园淋巴细胞， 结缔组 织细胞及少数多形核白细胞。 0003 银屑病是当前皮肤科领域内重点研究的疾病之一， 其发病率有逐年增高的趋势。 目前西医治。

11、疗该病一般使用皮质类固醇激素、 焦油类、 维生素 A 衍生物、 维生素 D 衍生物、 蒽林、 甲氨蝶呤、 环孢素等， 由于这些药物只是分别针对银屑病复杂发病机制环节中的一部 分， 所以治疗难以彻底， 同时， 多数药物本身对患者机体都有一定毒副作用， 而且银屑病的 治疗一般需要 2 3 个月的时间， 使其不良反应几乎难以避免。 0004 而中医药治疗银屑病方法众多， 方药丰富， 给药途径灵活多样， 疗效较高且副作用 小， 显示了中医 “辨证论治” 之特色和优势， 并已取得了显著成绩。目前对银屑病的复发问 题尚不能有效解决， 而用中药治愈者， 则可延缓复发时间。 0005 现代医学认为银屑病的特征。

12、性变化为角质形成细胞的过度增殖、 异常角化和炎细 胞的浸润， 清热解毒药能抑制表皮细胞的过度增殖、 促进表皮颗粒层形成， 防止皮损部位的 继发感染， 发挥综合作用而达到治疗效果。 0006 寻常型银屑病中医一般分为血热、 血虚、 血燥、 血瘀等证候， 临床上中医治疗本病 除遵循辨证施治原则外， 选用现代医学实验室已证实有很好抑制表皮增生、 清热解毒止痒 的中药外用是提高银屑病治愈率的重要手段。外用药物虽不能完全达到根治效果， 但在内 服中药的基础上合理的配合外用药物治疗能使病情获得近期或长期的缓解， 在一定程度上 改善患者的心理或社会生活质量， 达到控制病情、 延长缓解期、 减少药物的不良反应。

13、的效 果。 0007 在银屑病的治疗过程中， 虽常用内外兼治的方法， 但外用药在其中起到了很重要 的作用， 配合内服中药能收到事半功倍的效果， 其作用机理有待于进一步研究。 但由于原制 剂用中药材粉碎后直接配制， 工艺粗糙， 不易吸收， 致敏性较高， 患者在使用过程中容易弄 脏衣服， 给患者的使用带来诸多不便。 发明内容 说 明 书 CN 102274328 B 3 2/11 页 4 0008 本发明旨在克服现有技术的不足， 提供一种治疗银屑病的药物 ( 又称双黄解毒乳 膏 ) 及其制备方法， 以期降低此药物的致敏性， 增强疗效， 并且方便患者的使用。 0009 本发明所述的治疗银屑病的药物，。

14、 其特点是， 由以下重量份配比的原料制成 ： 黄芩 100 500 份、 关黄柏或黄柏 60 400 份、 硬脂酸 100 150 份、 硬脂醇 60 100 份、 白凡 士林 100 200 份、 三乙醇胺 10 20 份、 甘油 40 60 份、 十二烷基硫酸钠 8 12 份、 月 桂氮卓酮 30 50 份、 羟苯乙酯 0.5 1.5 份、 亚硫酸氢钠 0.5 1.5 份。 0010 优选配方为 ： 黄芩 230 250 份、 关黄柏或黄柏 150 170 份、 硬脂酸 110 130 份、 硬脂醇 70 90 份、 白凡士林 140 160 份、 三乙醇胺 14 16 份、 甘油 45 。

15、55 份、 十二 烷基硫酸钠 9 11 份、 月桂氮卓酮 35 45 份、 羟苯乙酯 0.8 1.2 份、 亚硫酸氢钠 0.8 1.2 份。 0011 最优配方为 ： 黄芩 240 份、 关黄柏或黄柏 160 份、 硬脂酸 120 份、 硬脂醇 80 份、 白凡 士林 150 份、 三乙醇胺 15 份、 甘油 50 份、 十二烷基硫酸钠 10 份、 月桂氮卓酮 40 份、 羟苯乙 酯 1 份、 亚硫酸氢钠 1 份。 0012 本发明所述的治疗银屑病的药物的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： 0013 a、 黄芩预处理 ： 将黄芩加水煎煮 1 3 次后， 合并煎液， 过滤、 滤液减压浓缩。

16、至每 2ml 药液中含原药材 1g， 再用乙醇溶液精制至每 1ml 药液中含原药材 1g ； 0014 b、 关黄柏或黄柏预处理 ： 将关黄柏或黄柏用乙醇溶液回流提取 1 3 次后， 过滤， 滤液减压浓缩至每 1ml 药液中含原药材 1g ； 0015 c、 油相的配制 ： 将硬脂酸、 硬脂醇和白凡士林加热熔融后， 作为油相 ； 0016 d、 水相的配制 ： 将三乙醇胺和甘油水浴加热至 90作为水相， 将十二烷基硫酸 钠、 月桂氮卓酮、 羟苯乙酯和亚硫酸氢钠加热溶解后加入水相中 ； 0017 e、 乳化 ： 在温度 80 90左右时， 将预处理后的关黄柏或黄柏、 黄芩和水相溶液 加入到油相中。

17、， 边加边搅拌， 使乳化完全， 并充分搅拌均匀即可。 0018 步骤 a 中所述的乙醇精制为 ： 向减压浓缩后的黄芩煎液中加入乙醇溶液使含醇量 达 60vt (vt 体积百分比， 下同 )， 搅拌均匀后静置 24 小时， 再于压力 0.08MPa， 温度 60 条件下减压浓缩。 。 0019 步骤 a 中所述的煎煮加水量为黄芩质量的 8 倍， 煎煮时间为每次 1 小时。 0020 步骤 a 中或步骤 b 中所述的减压浓缩的压力为 0.08MPa， 温度 60。 0021 步骤 b 中所述的对关黄柏或黄柏乙醇回流提取加入的乙醇溶液浓度为 75vt， 加 入量为关黄柏或黄柏质量的 8 倍， 每次提。

18、取 1 小时。 0022 步骤 c 中所述的加热温度为 90。 0023 步骤 e 中所述的温度为 85。 0024 本发明所述的治疗银屑病的药物疗效高、 毒副作用小、 便于患者使用和贮存。 通过 制剂学、 药效学、 毒理学和质量控制、 稳定性等方面的研究， 证明本乳膏剂具有明显的吸收 快、 质量稳定、 安全、 有效、 方便。 0025 本发明所述的治疗银屑病的药物的制备方法工艺精细， 所制备出的治疗银屑病的 药物易吸收、 疗效高、 毒副作用小、 便于患者使用和贮存。 0026 双黄解毒乳膏处方主要由黄芩、 黄柏二味药组成， 方中黄芩味苦性寒， 归肺、 大小 肠、 脾、 胆经， 具清热解毒， 。

19、燥湿止痒作用， 为君药 ； 黄柏味苦性寒， 归肾、 膀胱经， 苦能燥湿， 说 明 书 CN 102274328 B 4 3/11 页 5 寒能清热， 配合君药加强清热燥湿解毒之功效， 为臣药。全方施于体表皮肤， 直接作用于皮 损处， 以更好地发挥清热解毒、 祛风止痒的作用。同时配合白庀病的不同中医证候， 内服清 热、 凉血、 解毒之中药， 使内外热毒去、 湿热清， 则红斑变暗变淡， 鳞屑减退， 从而获得满意疗 效。 根据双黄解毒乳膏的处方组成、 药理试验结果以及原医院制剂的应用经验， 拟定本制剂 在临床用于寻常型银屑病血热型者。 0027 本制剂所述的双黄解毒乳膏性质温和， 刺激性小， 相对不。

20、易激惹刺激新发皮疹， 避 免了目前上市外用药物容易激发皮疹的副作用。 0028 本发明中所述的双黄解毒乳膏的使用方法为 ： 外用， 将患处用温水清洗干净后涂 抹适量， 一日 1 2 次。拟定疗程为 6 周。 具体实施方式 0029 实施例 1 0030 取黄芩 240g 加 8 倍量水煎煮三次， 每次 1 小时， 合并煎液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 2ml 药液中含原药材 1g， 加乙醇使含醇量达 60vt， 搅匀， 静置 24 小时， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 1ml 药液中含原药材 1g， 备用。取关黄 柏 160g 加 8。

21、 倍量 75vt乙醇回流提取三次， 每次 1 小时， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 1ml 药液中含原药材 1g， 备用。取硬脂酸 120g、 硬脂醇 80g、 白凡士林 150g， 水浴加热至 90熔融， 作为油相 ； 另取三乙醇胺 15g、 甘油 50g， 水浴加热至 90作为 水相 ； 将十二烷基硫酸钠10g、 月桂氮卓酮40g、 羟苯乙酯1g和亚硫酸氢钠1g于水中加热溶 解后加入水相中。在温度接近 85时， 依次将水相、 关黄柏和黄芩浓缩液缓缓加入油相中， 边加边搅拌， 使乳化完全， 并充分搅拌均匀， 制成 1000g， 即得。 0031 实施。

22、例 2 0032 取黄芩 210g 加 8 倍量水煎煮三次， 每次 1 小时， 合并煎液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 2ml 药液中含原药材 1g， 加乙醇使含醇量达 60vt， 搅匀， 静置 24 小 时， 滤过， 滤液减压浓缩(0.08MPa， 60)至每1ml药液中含原药材1g， 备用。 取黄柏130g加 8 倍量 75vt乙醇回流提取三次， 每次 1 小时， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 1ml 药液中含原药材 1g， 备用。取硬脂酸 110g、 硬脂醇 70g、 白凡士林 110g， 水 浴加热至 90熔融， 。

23、作为油相 ； 另取三乙醇胺 11g、 甘油 45g， 水浴加热至 90作为水相 ； 将 十二烷基硫酸钠 9g、 月桂氮卓酮 35g、 羟苯乙酯 0.6g 和亚硫酸氢钠 0.6g 于水中加热溶解后 加入水相中。在温度接近 85时， 依次将水相、 黄柏和黄芩浓缩液缓缓加入油相中， 边加边 搅拌， 使乳化完全， 并充分搅拌均匀， 制成 1000g， 即得。 0033 实施例 3 0034 取黄芩 290g 加 8 倍量水煎煮三次， 每次 1 小时， 合并煎液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 2ml 药液中含原药材 1g， 加乙醇使含醇量达 60vt， 搅匀， 静置 24 。

24、小 时， 滤过， 滤液减压浓缩(0.08MPa， 60)至每1ml药液中含原药材1g， 备用。 取黄柏230g加 8 倍量 75vt乙醇回流提取三次， 每次 1 小时， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 1ml 药液中含原药材 1g， 备用。取硬脂酸 140g、 硬脂醇 90g、 白凡士林 190g， 水 浴加热至 90熔融， 作为油相 ； 另取三乙醇胺 19g、 甘油 55g， 水浴加热至 90作为水相 ； 将 十二烷基硫酸钠 11g、 月桂氮卓酮 45g、 羟苯乙酯 1.4g 和亚硫酸氢钠 1.4g 于水中加热溶解 说 明 书 CN 102274328。

25、 B 5 4/11 页 6 后加入水相中。在温度接近 85时， 依次将水相、 黄柏和黄芩浓缩液缓缓加入油相中， 边加 边搅拌， 使乳化完全， 并充分搅拌均匀， 制成 1000g， 即得。 0035 实施例 4 0036 取黄芩 120g 加 8 倍量水煎煮三次， 每次 1 小时， 合并煎液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 2ml 药液中含原药材 1g， 加乙醇使含醇量达 60vt， 搅匀， 静置 24 小 时， 滤过， 滤液减压浓缩(0.08MPa， 60)至每1ml药液中含原药材1g， 备用。 取黄柏350g加 8 倍量 75vt乙醇回流提取三次， 每次 1 小时。

26、， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 1ml 药液中含原药材 1g， 备用。取硬脂酸 140g、 硬脂醇 90g、 白凡士林 190g， 水 浴加热至 90熔融， 作为油相 ； 另取三乙醇胺 19g、 甘油 55g， 水浴加热至 90作为水相 ； 将 十二烷基硫酸钠 11g、 月桂氮卓酮 45g、 羟苯乙酯 1.4g 和亚硫酸氢钠 1.4g 于水中加热溶解 后加入水相中。在温度接近 85时， 依次将水相、 黄柏和黄芩浓缩液缓缓加入油相中， 边加 边搅拌， 使乳化完全， 并充分搅拌均匀， 制成 1000g， 即得。 0037 实施例 5 0038 取黄芩 4。

27、50g 加 8 倍量水煎煮三次， 每次 1 小时， 合并煎液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 2ml 药液中含原药材 1g， 加乙醇使含醇量达 60vt， 搅匀， 静置 24 小时， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 1ml 药液中含原药材 1g， 备用。取关黄 柏 100g 加 8 倍量 75vt乙醇回流提取三次， 每次 1 小时， 合并提取液， 滤过， 滤液减压浓缩 (0.08MPa， 60 ) 至每 1ml 药液中含原药材 1g， 备用。取硬脂酸 140g、 硬脂醇 90g、 白凡士林 190g， 水浴加热至 90熔融， 作为油相 ； 。

28、另取三乙醇胺 19g、 甘油 55g， 水浴加热至 90作为 水相 ； 将十二烷基硫酸钠11g、 月桂氮卓酮45g、 羟苯乙酯1.4g和亚硫酸氢钠1.4g于水中加 热溶解后加入水相中。 在温度接近85时， 依次将水相、 关黄柏和黄芩浓缩液缓缓加入油相 中， 边加边搅拌， 使乳化完全， 并充分搅拌均匀， 制成 1000g， 即得。 0039 一、 动物实验 0040 ( 一 ) 主要药效学实验 0041 双黄解毒乳膏， 具有清热除湿， 解毒止痒之功， 用于治疗白庀， 湿疮， 湿毒， 顽癣等。 我们选择的动物模型和药效指标， 主要针对其病理损害特征和其疾病的炎性渗出与增生过 程。 0042 第一个。

29、模型 ： 盐酸普萘洛尔涂抹豚鼠耳廓引起耳廓皮肤银屑病样病变 ： 表皮过度 角化， 角化不全， 棘细胞增厚， 角质内有淋巴细胞、 多形核白细胞浸润， 偶有小脓疡， 可能与 普萘洛尔可减少细胞内 cAMP 有关。 0043 第二个模型 ： ip 雌激素， 造成雌性小鼠阴道上皮细胞处于 ( 雌激素期 ) 有丝分裂 期， 细胞有丝分裂代表细胞增殖功能， 若此功能过度则与皮肤银屑病变有关。 观察双黄解毒 乳膏对阴道上皮细胞有丝分裂的抑制作用， 有助于说明双黄解毒乳膏的作用和部分原理。 0044 第三个模型 ： 小鼠尾部皮肤表皮颗粒层形成情况， 用双黄解毒乳膏后， 观察对颗 粒层形成的影响， 若有促进表皮。

30、颗粒层形成的作用， 促进皮肤正常角化， 则有利于银屑病治 疗。 0045 第四个模型 ： 角叉菜胶致大鼠足跖肿、 大鼠腋下棉球肉芽肿和小鼠腹部毛血管通 透性试验， 分别代表急性、 慢性炎型模型和毛血管渗出状况观察模型。列为药效指标， 目的 是观察双黄解毒乳膏对炎症、 毛血管通透性的作用， 因为银屑病全过程都有急慢性炎症的 说 明 书 CN 102274328 B 6 5/11 页 7 问题， 此项药效研究对银屑病既有对症意义亦有对因治疗意义。 0046 阳性对照药选用丙酸氯倍他索软膏(2mg/10g)， 为国药准字号药物。 选择原因有两 个 ： 此药在银屑病治疗中， 广泛应用， 对症治疗疗效确。

31、切 ； 银屑病纯中药治疗外用制剂， 尚 无国家准字号药。 0047 1、 对小鼠雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂的影响 0048 取健康雌性小鼠50只， 体重26.21.4g， 腹腔注射已烯雌酚0.2mg/只， 每日1次， 连续 3d， 使其处于雌激素期， 然后依体重均衡随机分 5 组， 每组 10 只， 即 ： 基质对照组、 阳性 对照药丙酸氯倍他索软膏组 (0.02 )、 双黄解毒乳膏小、 中、 大 ( 浓度为 0.2、 0.4、 0.8g 生 药 /g 乳膏 ) 三个剂量组， 每日涂抹阴道两次， 间隔 4 小时， 每次 50l/20g， 连续 3d， 末次给 药后 1h， 腹腔注射秋水仙碱 。

32、2mg/kg， 6h 后处死小鼠， 取其阴道组织， 用 10福尔马林固定， 石蜡包埋， HE 染色， 光镜下计数 300 个阴道上皮基底细胞的有丝分裂数， 其百分率为有丝分 裂指数。 0049 表 1 双黄解毒乳膏对小鼠雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂的影响 (n 10) 0050 0051 注 ： 与基质对照组比较 *P 0.05。 0052 结果， 双黄解毒乳膏中、 大剂量和阳性对照药可显著降低小鼠阴道上皮细胞有丝 分裂指数 ( 见表 1)。 0053 2、 对小鼠尾部表皮颗粒层形成的影响 0054 取健康小鼠 50 只， 19.71.3g， 雌雄各半， 依性别、 体重均衡随机分为 5 组， 。

33、每组 10 只， 分基质对照组， 阳性对照药丙酸氯倍他索软膏组 (0.02 )， 双黄解毒乳膏小、 中、 大 ( 浓度为 0.2、 0.4、 0.8g 生药 /g 乳膏， 每次 4、 8、 16mg 生药 /cm2) 三个剂量组， 每日两次涂 抹鼠尾， 间隔 4 小时， 20mg 乳膏 /cm2， 连续 15d， 末次给药 2h 后处死全部小鼠， 取距鼠尾根 部1.8cm尾背部皮肤一长条， 用10福尔马林固定， 石蜡包埋， 常规制片， HE染色， 于光镜下 (400X) 观测鼠尾表皮颗粒层形成情况。 0055 表 2 双黄解毒乳膏对小鼠尾部表皮颗粒层形成的影响 (n 10) 0056 说 明 。

34、书 CN 102274328 B 7 6/11 页 8 0057 注 ： 与基质对照组比较 *P 0.05。 0058 结果， 双黄解毒乳膏中、 大剂量和阳性对照药可显著促进小鼠尾部表皮颗粒层形 成 ( 见表 2)。 0059 3、 对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响 0060 取大鼠 50 只， 体重 144.27.1g， 雌雄兼用， 按体重、 性别随机均衡分为基质对照 组， 阳性对照药丙酸氯倍他索软膏组 (0.02 )， 双黄解毒乳膏小、 中、 大 (0.2、 0.4、 0.8g 生 药/g乳膏， 每次4、 8、 16mg生药/cm2)三个剂量组。 各组大鼠右后足涂抹给药， 约2cm2， 20。

35、mg 乳膏 /cm2， 每天 2 次， 连续五天。末次给药 30min 后， 测量右后足跖厚度， 然后每鼠右后足跖 注射 1角叉菜胶溶液 50l， 注射后用千分卡尺测量 1h、 2h、 3h、 5h、 7h 各组大鼠右后足跖 厚度， 依其致炎前后足跖厚度差值表示肿胀度。 0061 表 3 双黄解毒乳膏对大鼠角叉菜胶致右后足跖肿的影响 0062 0063 说 明 书 CN 102274328 B 8 7/11 页 9 0064 注 ： 与基质对照组比较 *P 0.05， 括号内为抑制率 ( ) 0065 结果， 双黄解毒乳膏和阳性对照药外用对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀均有一定抑制 作用， 双黄解毒乳。

36、膏中、 大剂量在前 3 小时作用更显著 ( 表 3)。 0066 4、 对大鼠棉球肉芽肿的影响 0067 取健康Wistar大鼠50只， 雌雄各半， 体重158.19.9g。 依体重性别均衡随机分为 基质对照组、 阳性对照药丙酸氯倍他索组、 三个不同剂量的双黄解毒乳膏组 ( 浓度为 0.2、 0.4、 0.8g 生药 /g 乳膏， 每次 4、 8、 16mg 生药 /cm2)， 每组 10 只。另取棉球 201mg， 高压灭 菌， 加入氨苄青霉素 (10mg/ml)0.1ml/ 个， 50烘干。在乙醚浅麻醉下， 无菌操作， 于大鼠两 前肢腋下切一小口， 将两个灭菌棉球分别植入两侧腋窝部皮下， 。

37、缝合皮肤。给药方法 ： 术后 当天各给药组开始腋下涂抹给药， 20mg 乳膏 /cm2( 约 4-5cm2)， 每天 2 次， 连续 7 天。末次 给药 2 小时后拉颈椎处死大鼠， 打开原切口， 将棉球及周围结缔组织一起取出， 剔去脂肪组 织， 经 60烘干至恒重， 减去原棉球重， 即为肉芽肿重。计算各组肉芽肿重量， 做统计学分 析。并计算药物对肉芽肿形成的抑制率 ( )。 0068 表 4 双黄解毒乳膏对大鼠棉球肉芽肿的影响 (n 10) 0069 0070 注 ： 与基质组比较 *P 0.05 0071 结果， 双黄解毒乳膏大剂量和阳性对照药可显著抑制大鼠棉球肉芽肿的形成 ( 见 表 4)。

38、。 0072 5、 双黄解毒乳膏对盐酸普萘洛尔致豚鼠耳廓皮肤银屑样皮损模型的影响 0073 盐酸普萘洛尔乳擦剂的制备 ： 取盐酸普萘洛尔 5g 加 50vt乙醇使其溶解， 加入 Azone- 丙二醇 5ml 作为复合促进剂， 加入 PVP-K305g 为成模材料， 补加 50乙醇至 100ml， 即可。 0074 造模取健康白色豚鼠 55 只， 雌雄兼用， 每只豚鼠用上述 5盐酸普萘洛尔乳擦剂 涂抹两侧耳廓皮肤 (0.1ml/cm2) 每日两次， 连续两周。另取 10 只健康白色豚鼠为空白组。 说 明 书 CN 102274328 B 9 8/11 页 10 末次给药后杀死空白组和模型组各 5。

39、 只， 分别取双侧耳廓皮肤标本， 10甲醛溶液固定， 常 规制片， HE 染色， 光镜下观察以此评价造模质量。 0075 取银屑病成模豚鼠 50 只， 体重 412.833.8g， 雌雄兼用， 依体重性别随机分为模 型组， 阳性对照药 (0.02丙酸氯倍他索 ) 组， 双黄解毒乳膏 ( 浓度为 0.2、 0.4、 0.8g 生药 / g 乳膏， 每次 4、 8、 16mg 生药 /cm2)， 每组 10 只。模型组不用任何药物， 作为皮肤损害模型自 然恢复组。其余各组 20mg 乳膏 /cm2( 约 4-5cm2) 耳廓涂抹， 每日给药 2 次， 右侧涂抹基质， 左侧抹药。用药 2 周后， 处。

40、死动物， 取豚鼠两侧耳廓皮肤用 10甲醛固定， 常规制片， HE 染 色， 做病理组织学检查。 观察耳部皮肤角化层、 颗粒层、 棘细胞层、 基底细胞层及固有层的变 化。 0076 结果， 模型组豚鼠耳廓有类似人银屑病的组织病理学改变， 表皮角质层过度角化， 广泛或灶状角化不全， 棘层变厚， 钉突延长， 角质层内有小脓肿， 真皮层中 - 重度炎细胞浸 润， 并有血管炎表现。双黄解毒乳膏对此模型有治疗作用， 以大剂量作用为佳。 0077 6、 双黄解毒乳膏对二甲苯致小鼠皮肤毛细血管通透性的影响 0078 取健康小鼠 60 只， 雌雄兼用， 体重 19.91.5g。依体重性别均衡随机分为基质 对照组。

41、、 阳性对照药丙酸氯倍他索组、 三个不同剂量的双黄解毒乳膏组 ( 浓度为 0.2、 0.4、 0.8g 生药 /g 乳膏， 每次 4、 8、 16mg 生药 /cm2)， 每组 12 只。腹部去毛 ( 面积为 2cm2cm)， 涂抹药物 20mg 乳膏 /cm2， 每天两次， 连续 5d。末次给药 1h 后， 小鼠尾静脉注射 0.5伊文 思兰生理盐水溶液 0.1ml/10g， 立即于小鼠腹部正中部位去毛皮肤上滴二甲苯 0.03ml/ 只， 20分钟后处死， 剥下腹部皮肤， 在滴二甲苯处用打孔器打下相同面积的皮肤(1.0cm孔径)， 每块皮肤蓝斑用手术剪剪碎投入具塞试管内， 倒入丙酮 - 硫酸钠。

42、提取液 ( 精密称取无水硫 酸钠1.5g溶于蒸馏水中成150ml， 再缓缓向硫酸钠溶液中加入丙酮350ml， 即成)10ml， 置暗 处放置。每日轻轻摇动试管 2-3 次， 3 日后 3000r/min 离心 15min， 取上清液于 590nm 比色 测定其吸收值。 0079 表 5 双黄解毒乳膏对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响 0080 0081 注 ： 与基质对照组比较 *P 0.05， *P 0.01 0082 结果， 双黄解毒乳膏和阳性对照药外用抑制二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性 的增加 ( 表 5)。 0083 从实验结果可以看出， 双黄解毒乳膏局部外用对小鼠雌激素期阴道上皮细胞的。

43、有 丝分裂有抑制作用， 中、 大剂量与基质对照组比较有显著性差异(P0.05)。 对小鼠尾部颗 粒层形成有促进作用， 中、 大剂量与基质对照组比较有显著性差异(P0.05)。 说明双黄解 说 明 书 CN 102274328 B 10 9/11 页 11 毒乳膏有抑制表皮细胞过度增生并诱导表皮颗粒细胞生成， 抑制表皮过度角化， 提示可能 有抗银屑病作用。双黄解毒乳膏还能抑制二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性的增加， 从 而减轻急性炎症期的炎性渗出。减少大鼠棉球肉芽肿的重量， 能够抑制角叉菜胶诱发的足 趾肿胀， 提示该药对急慢性炎症均有抑制作用。对盐酸普萘洛尔所致豚鼠耳廓皮肤银屑样 模型， 双黄解。

44、毒乳膏对其病理有改善和逆转作用。上述实验结果为双黄解毒乳膏临床治疗 白庀提供实验依据。 0084 ( 二 ) 急性毒性试验 0085 试验依据依 中药、 天然药物急性毒性研究指导原则 (ZGPT2-1， 2005) 进行。 用新西兰种白色家兔， 雌雄各半， 分为基质对照组， 双黄解毒乳膏小、 大两个剂量组 ( 浓度 0.4g 生药 /g 乳膏、 1.2g 生药 /g 乳膏 )， 每组家兔 10 只。各剂量组又分完整皮肤和破损皮 肤组。脊柱两侧剪毛 150cm2。涂敷不同浓度的双黄解毒乳膏、 基质均为 2.0g， 记录观察给 药后 24h 和 14 天内动物情况。 0086 结果， 无一只家兔死。

45、亡， 各组家兔外观、 精神状态、 摄食、 饮水、 毛皮、 呼吸均无异 常， 口眼鼻耳未见分泌物， 大、 小便也无异常。给药组与基质组比较， 完整皮肤、 破损皮肤均 无红斑、 水肿及皮肤颜色变化， 病理学检查给药皮肤局部未见病理学改变。依判断标准， 未 见用药局部皮肤和全身任何毒性反应。 0087 ( 三 ) 长期毒性试验 0088 Wistar 大鼠 120 只， 雌雄各半， 6-8 周龄， 依体重、 性别均衡分成基质对照组， 小、 中、 大三个双黄解毒乳膏组 ( 分别为 100、 200、 300mg 生药 /cm2.d， 分别相当于成人每日每 cm2用量的 12.5、 25.0、 37.5。

46、 倍 )， 皮肤去毛区外涂给药， 用 0.4、 0.8、 1.2g 生药 /g 乳膏三个 浓度， 每次 125mg 乳膏 /cm2， 每日 2 次。连续给药 6 个月。观察每日大鼠精神状态、 粪便、 皮毛情况 ； 每周测体重、 进水量。给药 6 个月及停药四周后检查体重、 脏器系数、 血常规 (13 项 )、 血生化指标 (15 项 )， 并做主要脏器病理检查 (30 种脏器， 包括给药局部皮肤 )。 0089 双黄解毒乳膏三个剂量， 100、 200、 300mg生药/cm2 d， 每日2次， 每次用1/2量(分 别相当于成人每日每 cm2用量的 12.5、 25.0、 37.5 倍 )， 。

47、皮肤给药， 每天分上、 下午各 1 次， 连 续 6 个月。双黄解毒乳膏各给药组大鼠与基质对照组大鼠比较， 摄食量、 摄水量、 脏器系数 均明显无差异， 雌性大鼠体重与基质对照组大鼠比较显统计学差异。给药组大鼠血常规的 MCH、 MCV、 HCT、 MCHC、 RET 等指标与基质对照组大鼠比较显统计学差异， 给药组大鼠血生化 指标 CK、 TP、 ALP、 BUN、 Cl、 GOT、 GPT、 TBI、 ALB、 TRI、 CRE 与基质对照组大鼠比较显统计学差 异， 但无量效关系， 提示在临床研究中注意观察。给药剂量组大鼠其余各血常规、 血生化指 标与基质对照组大鼠比较未见统计学差异。 病。

48、理组织学检查未见与药物作用有关的病理改 变 ( 病理报告及照片附后 )。故认为双黄解毒乳膏皮肤外用在规定剂量与时限内对大鼠无 明显毒性。 0090 毒理试验结果表明 ： 双黄解毒乳膏药效起效剂量为 8mg 生药 /cm2.d， 与临床拟用 量 (4mg 生药 /cm2， 每日两次 ) 剂量相同。六个月长毒试验结果 ： 初步提供大鼠安全用量为 300mg/cm2， 为临床人拟用量的 37.5 倍。病理组织学检查对给药局部皮肤未造成病理性损 伤。故可以认为双黄解毒乳膏皮肤外用在规定剂量与时限内对大鼠无明显毒性。 0091 ( 四 ) 过敏性和局部刺激性试验 0092 4.1 过敏性试验 ( 主动过敏试验 ) 说 明 书 CN 102274328 B 11 10/11 页 12 0093 白色豚鼠， 雌雄各半， 分为基质对照组、 2.4- 二硝基氯苯阳性对照组， 双黄解毒乳 膏小、 大两个剂量组 ( 浓度为 0.4g 生药 /g 乳膏、 0.8g 生药 /g 乳膏 )， 每组 10 只。皮肤接 触致敏， 基质与双黄解毒乳膏每次 0。