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1、(10)申请公布号 CN 102657698 A (43)申请公布日 2012.09.12 CN 102657698 A *CN102657698A* (21)申请号 201210174265.4 (22)申请日 2012.05.31 A61K 36/53(2006.01) A61P 11/04(2006.01) (71)申请人 南京中医药大学 地址 210046 江苏省南京市栖霞区仙林大道 138 号 (72)发明人 程建明 葛婷婷 林瑛 倪荷芳 帅维维 朱丹凤 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 代理人 楼高潮 (54) 发明名称 荔枝草总黄酮提取物的提取方法。
2、和用途 (57) 摘要 一种荔枝草总黄酮提取物的提取方法， 包括 步骤 ： 荔枝草地上部分粉碎后， 用水煎煮， 浓缩获 得荔枝草浓缩液， 将荔枝草浓缩液通过预处理的 聚酰胺 ； 水洗聚酰胺柱， 然后用洗脱液洗脱， 收集 洗脱后溶液， 浓缩至干， 得到荔枝草总黄酮提取 物， 本发明提供的制备荔枝草中的总黄酮方法， 与 现有提取方法相比较， 具有明显优势， 首先， 聚酰 胺树脂具有专属性强的特点， 它能有效吸附并除 去提取液中酚酸类和皂苷类成分， 而大孔树脂则 不能 ； 其次用提取溶剂水来代替乙醇， 不仅操作 简单， 而且有效节约能源 ； 第三， 提取的总黄酮含 量高达 80% 以上。本发明提取的。
3、荔枝草总黄酮提 取物具有显著的抗炎、 抑菌作用， 对急性咽炎模型 大鼠有一定的治疗作用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种荔枝草总黄酮提取物的提取方法， 其特征在于提取步骤如下 ： 1） 取300-500克荔枝草地上部分粉碎后， 用药材量1012倍的水煎煮3次， 过滤后把 滤液浓缩得荔枝草浓缩液 ； 2） 将上述的荔枝草浓缩液通过预处理的聚酰胺柱 ； 3） 水洗上述聚酰胺柱， 然后用洗脱液洗脱， 收集洗脱后溶液， 并浓缩至干， 得到荔枝草 总黄酮。
4、提取物。 2.根据权利要求1所述的荔枝草总黄酮提取物的提取方法， 其特征在于步骤2） 中所述 的聚酰胺为 3060 目。 3.根据权利要求1所述的荔枝草总黄酮提取物的提取方法， 其特征在于步骤3） 中所述 的洗脱液为醇液或酮液， 洗脱液的浓度是 2075%。 4.根据权利要求1所述的荔枝草总黄酮提取物的提取方法， 其特征在于步骤3） 所述水 洗的流速是 57BV/h， 所述洗脱液的流速是 27BV/h。 5. 如权利要求 1 所述的荔枝草总黄酮提取物在制备治疗慢性咽炎疾病药物中的应 用。 权 利 要 求 书 CN 102657698 A 2 1/4 页 3 荔枝草总黄酮提取物的提取方法和用途 。
5、0001 一、 技术领域 ： 本发明涉及中草药的提取技术领域， 更具体地说是涉及荔枝草总黄酮提取技术领域， 特别是指荔枝草总黄酮提取物的提取方法和用途， 其具有明显的治疗咽炎的作用。 0002 二、 背景技术 ： 慢性咽炎是一种常见疾病， 多发病， 主要表现为咽黏膜慢性炎症， 弥漫性炎症等症状， 常为上呼吸道慢性炎症的一部分， 局限性炎症则多伴有咽淋巴样组织的炎症。慢性咽炎的 病因不能笼统而论， 但和下列因素有着十分直接的关系 : 用嗓过度会使咽喉部分肿胀发 炎， 久而久之就会成为慢性咽炎和顽固性咽炎， 教师、 话务员和交警等人群的职业病就是这 种原因造成的 ； 外界刺激也是导致慢性咽炎的重要。
6、原因之一， 如长时间的吸烟喝酒， 过多地 吃辣椒等刺激性食物， 在有害的工作环境下长期工作学习等 ； 气管炎和支气管炎等慢性病 的长期发作， 如果不及时护养咽喉部位， 也会是其感染病变成为慢性咽炎。 0003 治疗慢性咽炎的方法有针灸手术治疗、 激光焦化治疗、 热气雾化物理治疗和中西 药物治疗等。针灸手术治疗和激光治疗往往是损伤人体的生理器官为代价进行的， 如摘除 扁桃体、 对病变部位进行焦化处理等方法， 手术风险大且容易留下隐患 ； 热气雾化等物理治 疗只起到很小辅助作用， 效果不佳甚至没有效果 ； 西医用药主要是消毒药和抗生素， 这种治 疗和用药只能在一定程度上减轻病症， 难以治愈该病， 。
7、且抗生素不宜长期服用。 0004 三、 发明内容 ： 本发明的目的是提供一种荔枝草总黄柄提取物的提取方法， 该提取物是治疗慢性咽炎 有良好功效的中药， 为患有慢性咽炎的患者带来福音。该荔枝草总黄酮提取物中总黄酮的 含量高， 其具有显著的治疗咽炎的作用。 0005 本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的 ： 一种荔枝草总黄酮提取物的提取方法， 其特征在于提取步骤如下 ： 1） 取300-500克荔枝草地上部分粉碎后， 用药材量1012倍的水煎煮3次， 过滤后把 滤液浓缩得荔枝草浓缩液 ； 2） 将上述的荔枝草浓缩液通过预处理的聚酰胺柱 ； 3） 水洗上述聚酰胺柱， 然后用洗脱液洗脱， 收集洗脱。
8、后溶液， 并浓缩至干， 得到荔枝草 总黄酮提取物。 0006 所述的荔枝草总黄酮提取物的提取方法， 其特征在于步骤 2） 中所述的聚酰胺为 3060 目。 0007 所述的荔枝草总黄酮提取物的提取方法， 其特征在于步骤 3） 中所述的洗脱液为醇 液或酮液， 洗脱液的浓度是 2075%。 0008 所述的荔枝草总黄酮提取物的提取方法， 其特征在于步骤 3） 所述水洗的流速是 57BV/h， 所述洗脱液的流速是 27BV/h。 0009 所述的荔枝草总黄酮提取物在制备治疗慢性咽炎疾病药物中的应用。 0010 荔枝草为唇形科鼠尾草属植物荔枝草Salvia plebeia R.Brown 的全草， 别。
9、名雪 见草、 癞子草、 癞团草、 蛤蟆草、 皱皮草等， 生于湿地上， 除新疆、 甘肃、 青海、 西藏外， 几乎分 说 明 书 CN 102657698 A 3 2/4 页 4 布于全国各地。 本品味苦、 辛、 性凉， 归肺、 胃、 肾经， 具有清热解毒， 利尿消肿， 凉血止血等功 效。 临床用于治疗急性扁桃体炎、 慢性支气管炎、 阴道炎、 宫颈糜烂， 其复方还可用治疗急性 尿路感染等。 近年来， 医药科学工作者对其药理作用、 化学成分进行研究较多， 结果表明， 荔 枝草具有抑菌、 止咳平喘、 祛痰及抗组胺、 抗肝损等作用， 其化学成分为黄酮类、 贴类和咖啡 酸等， 黄酮类化学成分为其主要成分，。
10、 黄酮类包括高车前苷及其苷元、 泽兰黄酮、 假荆芥属 苷、 半齿泽兰素等。 另据报道， 荔枝草提取物对动植物油脂有明显的抗氧化作用 ； 高车前素、 泽兰黄酮具有抗炎作用。 0011 本发明的有益效果具体如下 ： 1、 本发明采用水对粉碎的荔枝草的上部分进行多次提取， 过滤浓缩后， 聚酰胺吸附， 再用洗脱液洗脱， 收集洗脱后溶液， 干燥得到荔枝草总黄酮提取物， 经测定， 其中的总黄酮 含量大于 80% 以上， 设备投资少， 生产周期短， 制备高效、 操作简单、 安全、 成本低、 易于工业 化生产 ； 2、 本发明得到的荔枝草总黄酮提取物， 药理学实验证明其具有显著的治疗慢性咽炎 的功效， 为荔枝。
11、草的进一步开发利用提供基础。 0012 四、 具体实施方式 下面结合具体实施例， 进一步阐述发明。 应理解， 这些实施例仅用于说明本发明而不用 于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件或按 照制造厂商所建议的条件。除非另有说明， 否则所有的百分比和份数按重量计。 0013 除非另行定义， 文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意 义相同。此外， 任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文 中所述的较佳实施方法与材料仅作示范用。 0014 实施例 1 称取 500 g 荔枝草地上部分， 干燥、 粉碎后， 加入 5600 m。
12、L 的水提取 3 次， 每次 2 h。合 并提取液， 过滤， 减压浓缩上聚酰胺柱 ； 取一定预处理好的3060目聚酰胺， 装入内径为5.4 cm的玻璃柱中， 使其床体积为600 mL， 以 3 BV/h 的流速使荔枝草过滤液缓慢通过聚酰胺柱 ； 然后 1200 mL 的水洗去柱中残留 的溶液， 再用浓度为 75% 的乙醇溶液以 3.5 BV/h 的流速通过树脂柱， 收集 0.53BV 间的洗 脱后溶液， 加压浓缩至干， 减压干燥后得到 10.5 g 的棕褐色的粉末， 收率为 3.5%（生药计） 荔枝草总黄酮提取物， 其总黄酮含量为 89.3%。 0015 实施例 2 称取 500 g 荔枝草地。
13、上部分， 干燥、 粉碎后， 加入 5600 mL 的水提取 3 次， 每次 2 h。合 并提取液， 过滤， 减压浓缩或者不浓缩直接上聚酰胺柱。 0016 取一定预处理好的 3060 目聚酰胺， 装入内径为 4.6 cm 的玻璃柱中， 使其床体积 为600 mL， 以3 BV/h的流速使荔枝草过滤液缓慢通过聚酰胺柱。 然后1200 mL的水洗去柱 中残留的溶液， 再用浓度为 75% 的乙醇溶液以 3.5 BV/h 的流速通过树脂柱， 收集 0.53BV 间的洗脱后溶液， 加压浓缩至干， 减压干燥后得到 10.5 g 的棕褐色的粉末， 收率为 3.5% （生 药计） 荔枝草总黄酮提取物， 其总黄酮。
14、含量为 85.5%。 0017 上述实施例中所得到的荔枝草总黄酮提取物， 其中含有的总黄酮的含量测定是采 用 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 络合物比色法进行测定的， 以芦丁为外标， 发现其中总黄酮的含量 说 明 书 CN 102657698 A 4 3/4 页 5 不低于 80%。 0018 实施例 3 药理试验结果 1 材料与试剂 实施例 1 获得的荔枝草总黄酮提取物 ； 咽炎含片 （安徽济人药液有限公司， 批号 ： 110402） ； 氨水 （南京化学试剂有限公司， 批号 ： 11062430380） ； SD 大鼠 60 只， 雄性 （浙江省 实验动物中心） 。 0019 2 。
15、实验方法 取 60 只 SD 大鼠分成 6 组， 全雄， 随机分组。即正常对照组、 模型组、 阳性对照组 （咽炎 含片） 和荔枝草总黄酮提取物高、 中、 低三个剂量组。手抓背部固定大鼠， 拉出舌并下压， 在 咽喉喷雾装置中装入15%氨水， 将喷头伸入大鼠口腔至咽部， 迅速按压喷雾开关， 连续3次， 使咽部黏膜因急性刺激而充血肿胀， 形成急性咽炎。空白组用蒸馏水代替氨水。造模 24 h 后， 将药物充分溶于蒸馏水中， 用灌胃针灌胃给药， 模型对照组及空白对照组给予蒸馏水， 1 次 /d， 连续 3 d， 每天观察并记录造模后各大鼠活动情况、 饮食饮水情况及咽部黏膜肉眼所 见等。末次给药次日， 各。
16、组大鼠腹腔注射 10% 水合氯醛麻醉 （麻醉前禁食 12 h） ， 仰卧固定， 暴露咽腔， 取咽壁组织 0.5 cm0.5 cm， 生理盐水冲洗后常规制片， 上述组织器官经 10% 福 尔马林固定， 常规石蜡包埋， 切片厚 4 5m， HE 染色， 病理专业人员阅片， 根据病变轻重程 度， 依次半定量为轻度 “+” ， 中度 “+” ， 重度 “+” ， 无病变组织标记为 “-” 。 0020 3 实验结果 表 1 大鼠咽壁病理切片镜检情况 表 1 结果表明， 正常对照组咽粘膜表被复层扁平上皮， 上皮下有疏松结缔组织， 粘膜上 皮细胞无变性、 坏死。粘膜上皮下组织无充血、 水肿， 可见散在个别。
17、炎细胞浸润， 粘液性腺 体清晰可见 ； 模型组大鼠 5/10 例咽粘膜上皮细胞变性 （+） ， 粘膜下疏松结缔组织充血、 水肿 （+） ， 炎细胞浸润 （+） ， 余 5/10 例咽粘膜粘膜上皮下疏松结缔组织充血、 水肿 （+） ， 炎细胞 浸润 （+） ； 荔枝草总黄酮提取物各剂量组的咽黏膜充血、 水肿、 炎性细胞侵润情况均有不同 程度减轻。 0021 结论 ： 大鼠氨水造模后， 均出现咽粘膜充血、 水肿， 炎细胞浸润， 而大鼠给予荔枝草 总黄酮提取物后， 上述症状明显降低， 以荔枝草总黄酮高剂量组尤为明显。 0022 实施例 4 药理试验 1 材料与试剂 实施例 2 获得的荔枝草总黄酮提取。
18、物 ； 阿司匹林肠溶片 （拜耳医药保健有限公司， 批 说 明 书 CN 102657698 A 5 4/4 页 6 号 ： BJ02895） ； ICR 大小鼠 50 只， 雄性 （扬州大学比较医学中心） 。 0023 2 实验方法 ICR 小鼠 50 只， 随机分为 5 组， 没组 10 只， 即正常对照组、 模型组、 阳性对照组 （阿司匹 林肠溶片） 和荔枝草总黄酮提取物高、 中、 低三个剂量组。以上各组灌胃给药 （正常对照组用 蒸馏水代替） ， 1 次 /d， 连续 6 d， 末次给药 1 h 后， 将二甲苯 50 L/ 只涂于小鼠右耳两面， 左耳不涂作为对照， 致炎 30 min 后将。
19、小鼠脱颈椎处死， 沿耳廓基线剪下两耳， 用直径 9 mm 的打孔器分别在左、 右耳同一部位打下圆耳片， 称重， 求左、 右两耳重量之差， 作为肿胀度， 在按下式计算肿胀率 ： 耳肿胀率 =（右耳重量 - 左耳重量） / 左耳重量 100% 耳肿胀抑制率 %=（空白组平均耳肿胀度一给药组平均耳肿胀度） 空白组平均耳肿胀 度 100% 3 实验结果 与正常对照组比较各给药组肿胀率有下降趋势， 且阿司匹林肠溶片、 荔枝草总黄酮高 剂量组、 荔枝草总黄酮中剂量组 （P0.01， P0.05） 见表 2 表 2 对小鼠耳片重量差值结果 （XSD) 组别剂量 （g/kg）肿胀度 /mg 生理盐水-16.06.2082 阿司匹林0.0336.544.1121* 荔枝草高剂量组208.871.6545* 荔枝草中剂量组109.234.5453* 荔枝草低剂量组513.86.0531 与正常对照组比较， *P0.01， *P0.05 结论 ： 阿司匹林肠溶片、 荔枝草总黄酮高剂量组、 荔枝草总黄酮中剂量组有降低小鼠二 甲苯所致耳肿胀的肿胀率作用， 即它们具有抗炎作用。 0024 综上所述， 本发明的荔枝草总黄酮提取物中总黄酮含量高， 具有显著的治疗咽炎 作用， 且具有一定的抗炎作用， 制备高效、 操作简单、 安全、 成本低、 易于工业化生产。 说 明 书 CN 102657698 A 6 。