姜黄素在抗肝纤维化药物中的应用及制备方法
技术领域
本发明涉及一种姜黄素在药物中的应用，具体是姜黄素及其制剂 在抗肝纤维化药物中的用途。
背景技术
肝纤维化是大多数慢性肝病所共有的病理特征，也是慢性肝炎 肝硬化等进一步发展、恶化的重要中间环节。主要是在各种损伤因素 作用下，肝星状细胞激活、增殖、合成并分泌大量的细胞外基质，降 解减少沉积增多，形成肝纤维化。引起肝纤维化的病因很多，在国外， 尤其是欧美国家，以酒精中毒占多数(约50％～80％)，在我国导致 肝纤维化的主要原因是感染肝炎病毒。在HBV感染者中，有10％～ 15％的患者可发展为慢性HBV感染，其中25％～40％的病例最终发 展为肝硬化乃至肝癌。丙型肝炎病毒感染者更易引起慢性化，约75 ％～80％的急性丙肝患者转为慢性感染，而慢性HCV感染者20％～ 25％发展为肝纤维化、肝硬化。
现有的研究结果表明，在肝纤维化形成过程中，各种类型的肝损 伤，均可激活肝贮脂细胞，并增殖和转化成肌成纤维细胞，进而合成 大量的细胞外基质，而降解相对不足，过多的基质沉质在肝内而形成 肝纤维化。近年来研究证实肝纤维化在未进入肝硬化之前，尚有逆转 可能，这为肝纤维化的有效治疗带来新的希望，但临床仍缺乏高效、 无明显毒副作用的药物。
当前抗肝纤维化药物研究的热点主要有两个方面：(1)以现代医 学理论为基础，针对病因和发病机制的某一环节寻找抗肝纤维化药 物，包括钙通道阻断剂维拉帕米、抗病毒药物γ-干扰素、秋水仙碱、 维生素A等，这些抗肝纤维化药物大多数处于实验研究阶段，用于 临床很少，且疗效有限，长期应用都有明显的毒副作用，因而很不理 想；(2)国内抗肝纤维化药物研究的特点以祖国医学理论为基础，以 活血化淤、调理肝脾等法，如复方丹参滴丸、强肝软坚汤等。中医药 抗肝纤维化无疑显示出一定潜在价值和优势，但由于生药产地及成分 的复杂性，故疗效欠确实、重现性差。
发明内容
本发明的目的是开发一种高效、无明显毒副作用的抗肝纤维化药 物。
为实现上述目的，本发明公开了姜黄素在抗肝纤维化药物中的应 用，其特征在于：所述抗肝纤维化药物的主要有效成份为姜黄素，其 结构式如下：
姜黄素抗肝纤维化药物还可以含有药学可接受的载体，如赋形剂 和添加剂、香味剂制成各种剂型，包括散剂、片剂、微丸、胶囊、微 囊、颗粒剂、液体制剂。
本发明的优点是：姜黄素具有较强的抗肝纤维化作用，且无明显 毒副作用，具有优良的的预防和治疗由各种因素引起的肝纤维化症状 的作用。本发明的制剂，特别是采用缓释剂型的制剂，易制成每日服 用一次的制剂，具有更少的不良反应。且姜黄在我国资源丰富，姜黄 素的提取简单易行。
为了更好的理解本发明的实质，下面将用姜黄素进行的药理试验 及药效学试验结果来说明其在制备抗肝纤维化药物中的应用。
附图说明：
图1为采用DMN诱导大鼠肝纤维化模型组图片；
图2为用姜黄素200mg/kg治疗后肝小叶切片对照组图片。
具体实施方式
姜黄素在抗肝纤维化药物中应用时，以姜黄素为药物组合物的主 要有效成份，其结构时如下：
给药剂量可根据临床上患者的年龄、体重及病情选择合适剂量， 口服给药剂量可为：成年人200-2000mg/天，一般多为300-500mg/ 天，优选剂量为400mg/天。
姜黄素抗肝纤维化药物还可以含有药学可接受的载体，如赋形剂 和添加剂、香味剂制成各种剂型。本发明的制剂可以是任何可服用的 剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、 胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、糖浆剂、口含剂、颗粒剂、 冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、 软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂、缓释制剂、控释制剂。 优选的是口服制剂，这些口服制剂可以是片剂、胶囊剂、口服液、颗 粒剂、混悬剂、粉剂、缓释微丸制剂、丸剂。
本发明的制剂，其口服给药的片剂和胶囊通常为一种单位剂量， 并含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑 剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，可对片剂进行包衣。
适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。 适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙 酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的 湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进 行反复混合可使活性成分分布在整个使用大量填充剂的那些组合物 中。
口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、 糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复 配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例 如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、 硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一 油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁 油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂， 例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可 含有常规的香味剂或着色剂。
对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性成分配方和 无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的 制备通常是通过将活性成分溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜 的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防 腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装 入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。
用基本相同的方式制备胃肠外悬浮液，除了是将活性化合物悬浮 在载体而不是将其溶解，而且在将其悬浮于无菌载体之前，用环氧乙 烷对其进行消毒。表面活性剂或湿润剂可包括在此组合物中，以利于 这种活性化合物的均匀分布。
本发明的制剂，在制备成制剂时可选择性的加入适合的药物可接 受的载体(辅料)，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、 焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、 蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、 醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯 化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、 甘氨酸、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤 维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、 琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环 糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明的药物制剂可以采用以下方法制备：
片剂：将处方量的姜黄素和医用淀粉混合，制软材，制湿颗粒， 在80-100度干燥4小时，冷却后加入硬脂酸镁，预胶化淀粉混合， 整粒，压片，包薄膜衣，包装，即得片剂。
缓释片剂和缓释胶囊，如此的缓释制剂可以通过缓释微丸制得， 缓释微丸含姜黄素以及制成缓释制剂所需得高分子化合物及辅料。该 缓释微丸可以制成胶囊，也可以制成片剂。如此，肝纤维化病人可以 每日只服一次或两次。
本发明优选的是微丸制剂，可用以下方法制备：
将姜黄素过4#筛，按比率和淀粉混合好，以0.6％羧甲基纤维素 钠(溶剂为酒精∶水＝50∶50)为粘合剂，起母和放大。
起母：投料量为400g，将喷浆速度调到30r/min，1min后调 到20r/min，主机转速：100～250r/min，鼓风21/min，喷气减压： 0.1Mpa。等到出现初始丸核后，马上停止喷浆和喷气，主机再滚转 2min，停止主机转速，取出丸核，干燥，过筛。将24～80目的初始 丸核放大。
放大：制备的粒径在24～40目和40～80目的初始丸核分别拿来 放大，粘合剂为0.6％羧甲基纤维素钠(溶剂为酒精∶水＝50∶50) 溶液，放大速度要慢，喷浆速度在15r/min左右，供粉加入速度在 25r/min左右，因为物料很容易形成粒子，所以填充剂加入的速度 要高于喷浆速度，但是要经常观察微丸大小，主机转速：150r/min， 鼓风：21/min，喷气减压：0.1Mpa，微丸大小差不多时，停止喷浆， 主机滚转1min左右取出微丸，干燥。
微丸包衣：将干燥的微丸(18～24目)先称量，放到离心包衣 造粒机内，然后按比率称量扑尔敏的量(因为粘合剂的量很少，所以 暂时可以忽略不计)，主机转速100r/min，喷浆转速小于5r/min， 鼓风20左右，进风温度37℃左右。包衣溶液为普通胃溶型包衣粉， 包衣液浓度6％，包衣过程时刻监视，防止喷浆过多，导致微丸粘连， 发生粘连时将喷浆关闭，其余不变，过会儿等到微丸干燥时再开喷浆。 包衣增重约10％。颜色均匀，过筛，将18～24目微丸干燥。检测含 量后灌装胶囊。
以下是本发明药物制剂实施例，但本发明的范围不限于实施例：
实施例1：普通片剂
姜黄素400mg
将1000倍处方量的姜黄素和500g医用淀粉混合，制软材，制湿 颗粒，在80-100度干燥4小时，冷却后加入50g硬脂酸镁，50g预 胶化淀粉混合，整粒，压片，包薄膜衣，包装，即得1000片剂。
实施例2：普通胶囊剂
姜黄素400mg
将1000倍处方量的姜黄素和500g医用淀粉混合，制软材，制湿 颗粒，在80-100度干燥4小时，冷却后加入50g硬脂酸镁，50g预 胶化淀粉混合，整粒，装胶囊，包装，即得1000粒胶囊。
实施例3：口服液
姜黄素400mg
将1000倍处方量的姜黄素和200g蔗糖混合，加入助溶剂，防腐 剂和水到10000ml，混合均匀，灌装到10ml玻璃安瓶中，灭菌，包 装。得到1000瓶口服液。
实施例4：微丸
姜黄素微丸处方：
姜黄素 400g
淀粉 320g-480g，以400g为好，
羧甲基纤维素钠： 适量
制成微丸包衣后，套胶囊1000粒。
工艺：先将姜黄素过4#筛，按比率和淀粉混合好，以0.6％羧甲 基纤维素钠(溶剂为酒精∶水＝50∶50)为粘合剂，起母和放大。
起母：投料量为400g，将喷浆速度调到30r/min，1min后调 到20r/min，主机转速：100～250r/min，鼓风21/min，喷气减压： 0.1Mpa。等到出现初始丸核后，马上停止喷浆和喷气，主机再滚转 2min，停止主机转速，取出丸核，干燥，过筛。将24～80目的初始 丸核放大。
放大：制备的粒径在24～40目和40～80目的初始丸核分别拿来 放大，粘合剂为0.6％羧甲基纤维素钠(溶剂为酒精∶水＝50∶50) 溶液，放大速度要慢，喷浆速度在15r/min左右，供粉加入速度在 25r/min左右，因为物料很容易形成粒子，所以填充剂加入的速度 要高于喷浆速度，但是要经常观察微丸大小，主机转速：150r/min， 鼓风：21/min，喷气减压：0.1Mpa，微丸大小差不多时，停止喷浆， 主机滚转1min左右取出微丸，干燥。
微丸包衣：将干燥的微丸(18～24目)先称量，放到离心包衣造 粒机内，然后按比率称量扑尔敏的量(因为粘合剂的量很少，所以暂 时可以忽略不计)，主机转速100r/min，喷浆转速小于5r/min，鼓 风20左右，进风温度37℃左右。包衣溶液为普通胃溶型包衣粉，包衣 液浓度6％，包衣过程时刻监视，防止喷浆过多，导致微丸粘连，发 生粘连时将喷浆关闭，其余不变，过会儿等到微丸干燥时再开喷浆。 包衣增重约10％。颜色均匀，过筛，将18～24目微丸干燥。检测含量 后灌装胶囊。
姜黄素长期毒性实验：
分姜黄素高、低2个剂量组，连续给药80天，部分动物停药后 继续观察2周。经一般状况观察及血液生化指标检测，大体解剖及病 理学观察，结果显示姜黄素高剂量组(500mg/kg/天)、低剂量组 (100mg/kg/天)各项指标与正常对照组比较，均无显著差异，提示了 姜黄素具有较好的安全性。
姜黄素对CCl4诱导的中毒性肝纤维化的治疗作用实验：
方法：雄性SD大鼠60只，随机分为6组：正常对照组、阴性对 照组、高中低3个剂量姜黄素组和阳性药对照组，除正常对照组不注 射CCl4外，其余各组皮下注射CCl45ml/kg，后注射20％CCl43ml/kg， 2次/周，共12周。造模6周后开始给药，姜黄素和阳性对照药均用 0.05％羧甲基纤维酸钠为载体，正常对照组、阴性对照组灌胃给予羧 甲基纤维酸钠10ml/kg/天，姜黄素组灌胃分别给予50、100、 200mg/kg/天，阳性对照药组灌胃给予马洛替酯90mg/kg/天。造模12 周后，取肝组织做病理观察，取血清测定血液谷丙氨酸转移酶ALT、 谷草氨酸转移梅AST含量(南京建成生物有限公司试剂盒)。实验结 果如下：
表1姜黄素对CCl4诱导的肝纤维化大鼠的ALT、AST的影响
组别 动物数 剂量 (mg/kg) ALT (U/L) AST (U/L) 正常对照 组 阴性对照 组 姜黄素组 10 9 8 8 8 50 100 200 58.5±20.1 811.4±130 629±111.4* 549.0±132.1* 235.1±40.5* 98.9±19.0 883.6±190.4 740.0±87.1* 600.7±147.9* 266.1±64.1* 阳性对照 组 9 90 149.8±45.4* 188.1±36.2*
*与阴性对照组相比，P＜0.05
病理学检测显示阴性对照组肝细胞脂质变性，主要集中在小叶周 边，并可见假小叶的形成。姜黄素高剂量组肝细胞脂质变性，肝小叶 形态好转，周围形成的纤维间隔较阴性对照组明显减轻，汇管区可见 少量细胞浸润。姜黄素中低剂量组与阴性对照组相比改变不显著。
姜黄素对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化形成的影响 实验
方法：肝纤维化是肝损伤持续存在、组织发生修复反应时因细胞 外基质合成、降解与沉积不平衡而引起的病理过程，是慢性肝病重要 的病理特征，也是进一步向肝硬化发展的主要中心环节。选择与各种 原因所致人类慢性肝病相似的肝纤维化动物模型不仅是深入研究肝 纤维化发病机制的重要基础，也是临床筛选防治肝纤维化药物的有效 手段。本发明采用腹下注射二甲基亚硝胺10mg/kg造成大鼠肝损害和 纤维化模型。采用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化，期间给予灌服姜 黄素(50，100，200mg/kg)并设马洛替酯组(90mg/kg)作对照，给 药4周后，测定血清谷丙氨转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、总蛋白 (TP)和白蛋白(ALB)含量及肝匀浆中SOD、MDA、GSH-Px含量并用放射 免疫分析法检测透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)含量；光镜观察肝细 胞结构和肝纤维化程度。结果：姜黄素预防给药，明显降低肝纤维化 大鼠血清ALT、AKP活性，给药组肝组织内SOD、GSH-Px较模型组明显 提高，而MDA较模型组明显降低；给药后也可明显降低血清HA和LN含 量。病理学观察结果，姜黄素预防组大鼠胶原纤维沉积明显减轻，假 小叶结构明显减少。
结论：姜黄素预防给药，可抑制DMN诱导的大鼠肝纤维化形成。