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1、(10)申请公布号 CN 103040884 A (43)申请公布日 2013.04.17 CN 103040884 A *CN103040884A* (21)申请号 201110306904.3 (22)申请日 2011.10.11 A61K 36/23(2006.01) A61P 17/00(2006.01) (71)申请人 上海现代制药股份有限公司 地址 200137 上海市浦东新区建陆路 378 号 (72)发明人 杨国红 王曙光 杨婷婷 陈解春 林梦感 (74)专利代理机构 上海金盛协力知识产权代理 有限公司 31242 代理人 解文霞 (54) 发明名称 积雪草总苷及其相关成分在预。
2、防和 / 或治疗 白癜风药中的应用 (57) 摘要 本发明涉及积雪草提取物的应用领域。本发 明所说的积雪草总苷或者积雪草苷、 羟基积雪草 苷、 积雪草苷 B 对于白癜风的治疗有着独特的功 效， 其有着良好的免疫抑制作用及促进黑色素细 胞修复、 增殖、 移行， 对黑色素代谢调控系统如黑 色素细胞刺激素、 角朊细胞等细胞因子等作用有 关。本发明提供的新的白癜风药对白癜风的治疗 疗效独特， 使白癜风患者病情能够得到控制或痊 愈。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 。
3、1. 积雪草总苷、 积雪草苷、 羟基积雪草苷或积雪草苷 B 在制备预防或治疗白癜风药物 中的应用。 权 利 要 求 书 CN 103040884 A 2 1/4 页 3 积雪草总苷及其相关成分在预防和 / 或治疗白癜风药中的 应用 技术领域 0001 本发明涉及积雪草总苷及其相关成分在制药领域中的应用。 背景技术 0002 白癜风 (vitiligo) 是一种常见的原发性、 局限性或泛发性色素脱失性皮肤病， 是 由于皮肤和毛囊的黑素细胞内酪氨酸酶系统的功能减退、 丧失引起的， 病理上则主要表现 为黑素细胞的减少或消失。 0003 白癜风的发病率随地区和人种肤色而有不同， 一般肤色越浅的人发病率。
4、越高， 如 丹麦人为 0.38， 美国白人约为 1， 黄种人的发病率介于白种人与黑种人之间， 国内患病 率为 0.09 -2.7。患病人群上千万。受遗传因素影响， 大部分患者发病年龄小于 30 岁， 且男女没有显著性差异。白癜风的损害可发生于全身任何部位的皮肤、 粘膜， 包括口腔粘 膜、 鼻腔粘膜、 生殖器及肛门部位的粘膜以及视网膜等， 生长于白斑区的毛发通常也呈现为 灰白色。由于白癜风的皮损， 特别是位于体表暴露部位的白斑， 往往会影响到患者的容貌、 形象及自我评价， 进而在很大程度上改变了患者正常的精神状态、 社会交往以及生活和学 习。因此， 开展对白癜风的研究， 寻求有价值的治疗手段和药。
5、物， 是医学的一大难题。 0004 白癜风发病原因复杂， 目前存在几种假说认为主要与自身免疫有关， 神经化学因 子作用， 黑素细胞自身破坏， 黑素细胞生长因子缺乏， 遗传因素等， 但其真正的病因尚不清 楚， 治疗方法多种多样， 疗效亦不确切。而祖国医学对此病有独特认识 ： 多数学者认为白癜 风的发生是由于七情内伤， 肝气郁结， 气血不畅， 复感风寒， 风邪搏于肌肤， 气血失和， 血不 养肤所致。 近几年采用中医中药治疗也取得了一定进展， 但是机理不清， 基础研究的薄弱已 成为制约中医药治疗白癜风研究发展的瓶颈， 只有瓶颈突破， 疗效才能提高。同 时， 一些能够有效治疗白癜风的单味中药及有效单体。
6、方面的开发， 也成为一条有价值的途 径， 得到医药工作者的重视。 0005 白癜风在临床上分进展期白癜风和成熟期白癜风两大类来治疗。 0006 进展期白癜风分为寻常型和节段型 ； 其临床治疗也是按照不同的分型， 采取不同 的治疗方法。 寻常型 ： 局限型主要是外用糖皮质激素或其他免疫抑制剂， 免疫调节剂(转 移因子， 胸腺肽等 ) 或者局部光疗 ： 窄谱中波紫外线、 准分子激光、 准分子光等， 中医中药。 散在型、 泛发型和肢端型则主要采用中医中药， 免疫调节剂 ( 转移因子， 胸腺肽等 )， 系统 用糖皮质激素， 光疗 ： 窄谱中波紫外线、 准分子激光、 准分子光等， 局部外用药治疗 ( 参。
7、考进 展期局限型 )。节段型白癜风的治疗方法也主要参考进展期局限型治疗。 0007 成熟期白癜风也是按照寻常型和节段型来治疗的， 寻常型 ： 局限型主要是外用 补骨脂素类药物、 糖皮质激素、 氮芥等， 自体表皮移植， 局部光疗或光化学疗法 ： 窄谱中波紫 外线、 准分子激光及准分子光等， 中医中药。散在型、 泛发型和肢端型 ： 中医中药， 光疗或 光化学疗法 ： 窄谱中波紫外线， 准分子激光、 准分子光、 PUVA 等 . 自体表皮移植 ( 暴露部位 或患者要求的部位)， 局部外用药治疗(参考稳定期局限型)。 节段型 ： 自体表皮移植 ； 其他 说 明 书 CN 103040884 A 3 2。
8、/4 页 4 参考稳定期局限型治疗。 0008 目前白癜风的临床治疗方法虽很多， 但临床疗效由于个体的不同存在很大的差 异。西药治疗方法虽然简单， 多采用手术疗法， 但是由于不良反应多见或者难于完全康复 等 ； 有些患者采用传统疗法， 时间虽然长， 但是药物的不良反应少。 0009 本专利所说的积雪草总苷或其相关各单体成分， 如积雪草苷、 羟基积雪草苷及积 雪草苷 B 等为积雪草提取物， 采用制药领域中提取工艺方法制备。所说的积雪草， 拉丁名 ： Centella asiatica(L.)Urban， 别名 ： 崩大碗、 缺碗草、 马蹄草、 连线草、 地线草、 崩口碗等， 药用部位 ： 干燥全。
9、草或带根全草。 0010 积雪草总苷、 积雪草苷、 羟基积雪草苷、 积雪草苷 B 在现有的文献资料中， 有记载 其具有较好的抗氧化、 创伤愈合功效。积雪草总苷有用作外科用药， 用于治疗瘢痕及硬皮 病。 发明内容 0011 本发明的目的就在于提供一种积雪草总苷或其相关各单体成分的新用途， 同时克 服了现有预防或治疗白癜风药物的不足之处。 0012 积雪草总苷、 积雪草苷、 羟基积雪草苷或积雪草苷 B 在制备预防或治疗白癜风药 物中的应用。 0013 在制备预防和 / 或治疗白癜风的药物时加入积雪草总苷或者积雪草苷、 羟基积雪 草苷、 积雪草苷 B 或其任意混合物， 对于治疗寻常型白癜风效果明显。。
10、 0014 在制备预防和 / 或治疗白癜风的药物时， 积雪草总苷、 积雪草苷、 羟基积雪草苷、 积雪草苷 B 或其任意的组合物可与药学上可接受的任何载体， 以任意的重量比混合， 制成 任何一种药学上可接受的剂型。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、 赋形剂、 粘合剂、 崩解剂、 湿润剂、 润滑剂、 表面活性剂等， 如 ： 淀粉、 蔗糖、 糊精、 乳糖、 硬脂酸镁、 纤维素类及 其衍生物、 明胶、 聚乙烯吡咯烷酮、 卡波姆等。 所述制剂， 如 ： 乳膏、 软膏剂、 乳液、 凝胶、 片剂、 颗粒剂、 丸剂、 胶囊、 注射液、 口服液等。也可制成注射剂， 如 ： 水针、 冻干粉针、 无菌粉针、 输 。
11、液等。 0015 本发明的有益效果 ： 0016 积雪草总苷或者积雪草苷、 羟基积雪草苷和积雪草苷 B， 在现有的文献资料中， 有 记载其具有较好的抗氧化、 创伤愈合功效。 本申请人在实际研究中发现， 积雪草总苷或者积 雪草苷、 羟基积雪草苷、 积雪草苷 B 对于白癜风也有着独特的功效， 其有着良好的免疫抑制 作用及促进黑色素细胞修复、 增殖、 移行， 对黑色素代谢调控系统如黑色素细胞刺激素、 角 朊细胞等细胞因子等作用有关。 0017 通过实际应用， 本申请人利用积雪草总苷、 积雪草苷、 羟基积雪草苷或者积雪草苷 B 制作的积雪苷霜软膏对白癜风的治疗中疗效独特， 对白癜风患者病情能够得到控制。
12、或痊 愈。 0018 本发明为日后的市场产品开发、 制剂开发、 临床研究等奠定了基础。 突破了中医药 治疗白癜风机理不清， 基础研究薄弱的 “瓶颈” 。 具体实施方式 说 明 书 CN 103040884 A 4 3/4 页 5 0019 为了更好证明本发明对预防和 / 或治疗白癜风的作用， 下面通过体内、 体外药效 试验及临床观察实施例解释和验证本发明的药效机理及临床治疗作用。 0020 实施例 1 0021 按照药学常用方法， 制备积雪苷霜软膏剂(以积雪草总苷计， 10g0.25g)和积雪 苷凝胶 ( 以积雪草总苷计， 10g 0.25g)。 0022 ( 一 ) 化学脱色剂制备豚鼠白癜风。
13、模型 0023 制备白癜风动物模型 ： 取黑色或黑花毛 ( 黑色皮肤 ) 豚鼠 70 只， 用硫化钠脱去背 部黑毛约 44cm2。随机分成 7 组， 0024 (1) 正常对照组 ： 赋形剂 0025 (2) 模型对照组 ： 赋形剂 0026 (3) 阳性药对照组 ： 0027 (4) 药物高 1 剂量组 ( 中剂量组的 1 倍 ) ： 0028 (5) 药物高 2 剂量组 ( 中剂量组的 1/2 倍 ) ： 0029 (6) 药物中剂量组 ： 0030 (7) 药物低剂量组 ： 0031 用8的硫化钠脱毛， 每4天1次， 除正常组涂蒸馏水外， 其余各组在脱毛区每天涂 5的氢醌 0.5ml 两。
14、次， 第 11d 开始各组分别每天在涂抹氢醌过后 1 小时按剂量分别涂药， 其中 (1)、 (2) 组涂相同剂量的赋形剂， 每天一次， 连续 40d， 共 50d。末次药后 2h， 取血， 测 酪氨酸酶、 单胺氧化酶、 胆碱酯酶。并采用组织病理学观察， 表皮基底细胞黑素分布及黑色 素毛囊数等。 0032 试验结果 ： 本发明药物对于白癜风豚鼠表皮损伤区黑素细胞有明显的修复作用， 同时本发明药物两个高剂量组和中剂量组可使白癜风豚鼠血液中酪氨酸酶含量增加， 单胺 氧化酶活力降低， 与正常组豚鼠相比无显著性差别。 0033 实施例 2 0034 准备积雪草总苷、 积雪草苷、 羟基积雪草苷和积雪草苷 。
15、B 溶液。 0035 ( 一 ) 本发明药物对于体外表皮黑色素细胞的迁移和粘附作用 0036 将传代(第二代)人表皮黑色素细胞计数接种于培养瓶中， 确保每瓶细胞数相同， 药物试验浓度分别为 10、 50、 100、 150、 200g/ml、 及空白对照组， 培养 3d。 0037 采用氢氧化钠裂解法， 测定黑素含量， 黑素细胞增值率， 微孔滤膜法测定细胞迁移 情况， 黑素细胞迁移率。 0038 试验结果表明， 本发明药物对于黑素细胞增殖没有太大影响， 但是其对于黑素细 胞迁移率相对于对照组存在一定差异。药物浓度在 10、 50g/ml 时， 无显著性差异， 其余 各组浓度下检验， 有显著性差。
16、异。积雪草总苷、 积雪草苷、 羟基积雪草苷和积雪草苷 B 在 150g/ml 与 200g/ml 组相比较， 均有明显的作用， 但是也存在显著性差异， 表明药物浓 度越高对黑素细胞迁移促进作用越明显， 有量效关系。 0039 ( 二 ) 本发明药物对角质形成细胞的作用 0040 购买人永生化角质形成细胞株， 复苏后用含有 10胎牛血清的 DMEM 培养基在 37， 5 CO2培养箱中培养、 传代， 选择对数生长期的细胞进行实验。用不同浓度药物作用 后的角质形成细胞的培养上清液， 检测角质形成细胞的培养上清液中细胞因子 SCF、 bFGF 说 明 书 CN 103040884 A 5 4/4 页。
17、 6 的分泌量， 并检测角质形成细胞的增殖情况。 0041 试验结果 ： ELISA 法检测不同浓度的本发明药物对于角质细胞增殖存在一定的剂 量效应关系， 且随着剂量增加， 角质细胞增殖率也增加， 同时相应的细胞因子也增加， 也说 明本发明药物对于角质细胞分泌细胞因子功能有明显的促进作用， 可改善白癜风患者皮肤 微环境， 从而间接改善黑素细胞的增殖和增加其黑素的转运功能。 0042 实施例 3 0043 按照药学常用方法， 本发明药物制备成常用外用制剂软膏。本实施例中的软膏分 别采用积雪草总苷、 积雪草苷、 羟基积雪草苷和积雪草苷 B 作为药用成分。 0044 筛选泛发型进行期白癜风病例， 随。
18、机选取三部位 ( 同时选取曝光或非曝光部位 )， 采用随机、 对照、 双盲法进行 60 例的临床观察， 分别使用本发明药物积雪草总苷软膏、 积雪 草苷软膏、 羟基积雪草苷软膏和积雪草苷B软膏、 激素及基质对照， 平均2周观察一次， 每次 照相， 共观察 3 个月。 0045 疗效标准 ： 痊愈 ： 皮损完全消退。显效 ： 白斑部分消退或缩小， 恢复正常肤色的面 积是原皮损面积的50以上， 含50。 好转 ： 白斑部分消退或缩小。 无效 ： 白斑元色素再生 或范围扩大。 0046 统计方法 ： 有效率计算 ： 痊愈数 + 显效数 / 治疗数 100。 0047 治疗效果 ： 本发明药物积雪草总苷软膏、 积雪草苷软膏、 羟基积雪草苷软膏、 积雪 草苷 B 软膏激素显示出较明显的治疗效果， 无不良反应出现。但激素对照组 4 例于皮损涂 药区出现轻度刺激症状， 停药后刺激症状逐渐消失。 0048 3 个月后随访无异常。 0049 本发明药物对于损伤性黑素细胞存在一定的修复作用， 另外其可增加角质细胞的 增殖和相关细胞因子的作用， 说明其对于白癜风患者体内微环境等也有一定的调节作用。 本发明药物能有效减轻白癜风患者的痛苦甚至达到治愈的效果， 对于传统中医药的发展及 顽症白癜风的治愈都是一大突破。 说 明 书 CN 103040884 A 6 。