一种抗根肿病大白菜的育种方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201611006288.9 (22)申请日 2016.11.16 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 106508669 A (43)申请公布日 2017.03.22 (73)专利权人 青岛市农业科学研究院 地址 266000 山东省青岛市李沧区万年泉 路168号 (72)发明人 杨晓云 张清霞 张淑霞 司朝光 王媛 李剑 (74)专利代理机构 北京高沃律师事务所 11569 代理人 王加贵 (51)Int.Cl. A01H 1/02(2006.01) A01H 1。

2、/04(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) 审查员 姜岚 (54)发明名称 一种抗根肿病大白菜的育种方法 (57)摘要 本发明提供了一种抗根肿病大白菜的育种 方法， 包括以下步骤： 1)将拟转育亲本A与转育源 亲本B杂交得到F1代种子； 2)将F1代种子的幼胚 催芽和春化后进行播种培养； 3)将F1代植株与拟 转育亲本A回交， 得到BC1代种子； 4)对所述BC1代 种子的幼胚进行催芽和春化后播种培养； 5)利用 分子标记对BC1代植株进行筛选得到BC1代抗病 单株； 6)将BC1代抗病单株与拟转育亲本A回交， 得到BC2代种子； 7)以BC2代种子的幼胚为处理对 象，。

3、 重复所述步骤4)步骤6)中的催芽、 春化、 播 种、 筛选和回交4次得到BC6代种子； 8)BC6代植株 自交得到BC6代自交后代， 利用分子标记筛选得 到根肿病抗性纯合的转育单株。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 106508669 B 2018.11.30 CN 106508669 B 1.一种抗根肿病大白菜的育种方法， 包括以下步骤： 1)将根肿病抗性基因为rr的拟转育亲本A与根肿病抗性基因为RR的转育源亲本B杂交 得到F1代种子， 所述F1代种子的根肿病抗性基因为Rr； 2)将所述F1代种子的幼胚催芽和春化后进行播种培养， 获得F1代植株； 3)将所述F1代植株与拟转育亲。

4、本A回交， 得到BC1代种子； 4)对所述BC1代种子的幼胚进行催芽和春化后播种培养， 获得BC1代植株； 5)利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC1代植株进行抗性鉴定， 筛选得到根肿 病抗性基因为Rr的BC1代抗病单株； 6)将所述BC1代抗病单株与拟转育亲本A回交， 得到BC2代种子； 7)以所述BC2代种子的幼胚为处理对象， 重复所述步骤4)中的催芽、 春化和播种， 所述 步骤5)中的鉴定和筛选以及所述步骤6)中的回交4次得到BC6代种子； 8)播种所述BC6代种子获得BC6代植株， 将所述BC6代植株自交得到BC6代自交后代， 利 用抗根肿病分子标记KBrH129J18。

5、R对所述BC6代自交后代进行抗性鉴定， 筛选获得根肿病抗 性纯合的转育单株； 所述F1种子为授粉后2025天的未成熟种子； 所述步骤2)、 步骤4)和步骤7)中幼胚催芽的温度独立地为2426； 所述幼胚催芽的时间独立地为57天； 所述幼胚催芽至胚根长为510mm、 根毛长为13mm时进行春化； 所述春化的温度为46， 所述春化的时间为34周。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述幼胚催芽和春化后进行播种培养的环 境温度为2325， 湿度为6570。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述幼胚催芽和春化后进行播种培养的时 间为4050天， 培养过程全天光照。 4.根据权。

6、利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述抗性鉴定使用的植株DNA为播种后2 3周的植株DNA。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述拟转育亲本A在回交前与幼胚同时进 行催芽、 春化和播种。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106508669 B 2 一种抗根肿病大白菜的育种方法 技术领域 0001 本发明涉及植物育种技术领域， 尤其涉及一种抗根肿病大白菜的育种方法。 背景技术 0002 十字花科根肿病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassica Woronin)侵染引起 的一种世界性病害， 芸薹根肿菌的寄主范围很广， 包括白菜、 甘蓝、 萝 卜、 花椰。

7、菜、 油菜等100 多种栽培的和野生的十字花科植物。 大白菜是根肿病危害最严重的十字花科蔬菜之一， 近 年来， 我国沿海地区、 云贵川、 东北部分地区以及西部地区等全国大部分地区都有根肿病发 生， 发生面积急剧增加并逐年加重， 根肿病已经成为大白菜主产区的主要病害。 0003 由于根肿病菌休眠孢子抗逆性强， 在土壤中可存活10年以上， 化学防治极为困难。 抗病品种的选育和应用是解决根肿病危害的根本途径。 我国主栽优良大白菜品种普遍不抗 根肿病， 在根肿病发病区优良品种存在着不能继续生产应用的问题。 对当前生产上主栽优 良品种的抗根肿病性状改良是生产上迫切的需求， 但是抗根肿病性状转育和回交改良。

8、是一 个漫长的过程， 要经过一次杂交转育、 5-6代回交选择、 2-3代的自交纯化， 现有技术每年最 多可以实现2代转育， 目标材料转育完成需9-10个世代， 需时为5年以上； 并且现有技术通过 根肿病菌接种鉴定的方法筛选抗病单株， 存在着病菌污染扩散的风险。 因此如何实现优良 大白菜育种材料的抗根肿病性状快速安全转育， 对改良优良品种具有重要意义。 发明内容 0004 有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种快速安全抗根肿病大白菜的育种方法。 0005 为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技术方案： 0006 一种抗根肿病大白菜的育种方法， 包括以下步骤： 0007 1)将根肿病抗性基因为rr。

9、的拟转育亲本A与根肿病抗性基因为RR的转育源亲本B 杂交得到F1代种子， 所述F1代种子的根肿病抗性基因为Rr； 0008 2)将所述F1代种子的幼胚催芽和春化后进行播种培养， 获得F1代植株； 0009 3)将所述F1代植株与拟转育亲本A回交， 得到BC1代种子； 0010 4)对所述BC1代种子的幼胚进行催芽和春化后播种培养， 获得BC1代植株； 0011 5)利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC1代植株进行抗性鉴定， 筛选得到 根肿病抗性基因为Rr的BC1代抗病单株； 0012 6)将所述BC1代抗病单株与拟转育亲本A回交， 得到BC2代种子； 0013 7)以所述BC2。

10、代种子的幼胚为处理对象， 重复所述步骤4)中的催芽、 春化和播种， 所述步骤5)中的鉴定和筛选以及所述步骤6)中的回交4次得到BC6代种子； 0014 8)播种所述BC6代种子获得BC6代植株， 将所述BC6代植株自交得到BC6代自交后 代， 利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC6代自交后代进行抗性鉴定， 筛选获得根 肿病抗性纯合的转育单株。 0015 优选的， 所述种子为授粉后2025天的种子。 说 明 书 1/6 页 3 CN 106508669 B 3 0016 优选的， 所述步骤2)、 步骤4)和步骤7)中幼胚催芽的温度独立地为2426。 0017 优选的， 所述幼胚催。

11、芽的时间独立地为57天。 0018 优选的， 所述幼胚催芽至胚根长为510mm、 根毛长为13mm时进行春化。 0019 优选的， 所述春化的温度为46， 所述春化的时间为34周。 0020 优选的， 所述幼胚催芽和春化后进行播种培养的环境温度为2325， 湿度为65 70。 0021 优选的， 所述幼胚催芽和春化后进行播种培养的时间为4050天， 培养过程全天 光照。 0022 优选的， 所述抗性鉴定使用的植株DNA为播种后23周的植株DNA。 0023 优选的， 所述拟转育亲本A在回交前与幼胚同时进行催芽、 春化和播种。 0024 本发明的有益效果： 本发明提供的育种方法通过对未成熟种子的。

12、幼胚培养， 从幼 胚到下一代幼胚， 需要90100天， 每年可转育3代以上， 目标亲本2年即可转育成功， 大大地 缩短了育种周期； 另外本发明采用分子标记方法筛选抗病单株， 可快速筛选抗病基因型， 避 免人工接种鉴定造成的病菌传播。 附图说明 0025 图1为剥取的幼胚； 0026 图2为催芽后的幼胚； 0027 图3为春化中的幼胚； 0028 图4为人工气候箱中培养的植株； 0029 图5为开花的植株； 0030 图6为授粉后的植株。 具体实施方式 0031 本发明提供了一种抗根肿病大白菜的育种方法， 包括以下步骤： 1)将根肿病抗性 基因为rr的拟转育亲本A与根肿病抗性基因为RR的转育源亲。

13、本B杂交得到F1代种子， 所述F1 代种子的根肿病抗性基因为Rr； 2)将F1代种子的幼胚催芽和春化后进行播种培养， 获得F1 代植株； 3)将所述F1代植株与拟转育亲本A回交， 得到BC1代种子； 4)对所述BC1代种子的幼 胚进行催芽和春化后播种培养， 获得BC1代植株； 5)利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对 所述BC1代植株进行抗性鉴定， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC1代抗病单株； 6)将所 述BC1代抗病单株与拟转育亲本A回交， 得到BC2代种子； 7)以所述BC2代种子的幼胚为处理 对象， 重复所述步骤4)步骤6)中的催芽、 春化、 播种、 筛选和回交， 得到BC。

14、3代种子， 以此类 推， 重复4次得到BC6代种子； 8)播种所述BC6代种子获得BC6代植株， 将所述BC6代植株自交 得到BC6代自交后代， 利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC6代自交后代进行抗性 鉴定， 筛选获得根肿病抗性纯合的转育单株。 0032 本发明中， 所述转育源亲本B是抗根肿病DH(Double Haploid)系， 是指通过单倍体 培养获得的染色体自然加倍双单倍体， 抗根肿病基因是纯合的， 为RR。 在本发明中， 所述拟 转育亲本A是常规的不抗根肿病的大白菜植株， 由于根肿病抗性基因为显性基因， 不抗根肿 病的拟转育亲本A的基因型必然是rr。 说 明 书 2。

15、/6 页 4 CN 106508669 B 4 0033 本发明首先将根肿病抗性基因为rr的拟转育亲本A与根肿病抗性基因为RR的转育 源亲本B杂交得到F1代种子， 根据拟转育亲本A与转育源亲本B的基因型， 可以确定杂交得到 的F1代种子的基因型为Rr。 由于F1代种子的根肿病抗性基因为Rr， 表现抗病， 因此F1代不需 要经过抗病性鉴定， 可以省去一次分子标记鉴定或接种鉴定筛选的工作。 0034 本发明在杂交授粉完成后， 优选的在2025天摘取种荚， 得到F1代种子， 更优选的 在杂交授粉完成后2124天摘取种荚； 本发明在摘取种荚后， 剥出F1代种子的幼胚， 本发明 采用F1代种子的幼胚， 。

16、而不是成熟的胚， 所述剥取后的幼胚的形态如附图1所示， 更容易发 芽， 可以大大的缩短世代培养的时间， 加快育种进程。 0035 本发明在得到F1代种子的幼胚后， 对所述幼胚进行催芽。 在本发明中， 所述幼胚催 芽的环境温度优选的为2426， 更优选的为25； 所述幼胚催芽的时间优选的为57天， 更优选的为6天。 在本发明中， 所述的催芽优选的在铺有湿润滤纸的培养皿中进行， 催芽过 程的幼胚如图2所示， 可以看到2片子叶。 0036 所述催芽后， 本发明将萌发的幼胚进行春化。 本发明优选在幼胚催芽至胚根长为5 10mm、 根毛长为13mm进行春化， 更优选的至胚根长68mm、 根毛长2mm。 。

17、在本发明中， 所 述的春化优选的在低温箱中进行， 所述春化的温度优选的为46， 更优选的为5， 所述 春化的时间优选的为34周， 更优选的为3.5周， 春化中的幼胚的形态如图3所示， 可以看出 春化中的幼胚2片子叶已经展开。 在本发明中， 如果F1代种子是转育冬性强的材料(即耐抽 薹育种材料)春化时间优选的延长至3540天。 0037 本发明在F1代种子的幼胚春化后， 将得到的F1代种子的幼胚播种培养， 得到F1代 植株。 在本发明中， 所述播种培养的环境温度优选的为2325， 更优选的为24； 所述播 种培养的湿度优选的为6570， 更优选的为6668； 所述播种培养的时间优选的为40 50。

18、天， 更优选的为4248天。 本发明中的F1代植株在培养过程全天光照； 本发明在实验室 试验中播种用的容器优选的为72孔穴盘中， 实验室试验中培养优选的在人工气候箱中进 行。 0038 本发明在得到F1代植株后， 将所述F1代植株与拟转育亲本A进行回交， 得到BC1代 种子。 本发明为了保证F1代植株与拟转育亲本A在相同的生长期回交， 在对F1代种子的幼胚 进行催化、 春化和播种培养的同时， 对回交亲本， 即拟转育亲本A在相同的条件下进行催芽、 春化和播种。 本发明中所述回交的具体操作优选的包括： 取F1代植株单株开花前13天的 花蕾， 用拟转育亲本A当天开花的鲜花粉授粉； 优选的将所述花蕾剥。

19、开， 露出柱头， 所述剥开 花蕾使用的工具优选的为尖头镊子。 0039 本发明在获得BC1代种子后， 对获得的BC1代种子的幼胚进行催芽和春化后播种培 养， 获得BC1代植株。 本发明独立地选择上述技术方案所述对F1代种子的幼胚催芽、 春化和 播种培养的条件， 在此不再赘述。 0040 本发明在获得BC1代植株后， 利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC1代植 株进行抗性鉴定， 筛选得到根肿病抗性基因为Rr的BC1代抗病单株。 本发明优选的在所述的 BC1代植株培养23周后， 提取BC1代单株的全基因组DNA， 所述全基因组DNA的提取方法采 用本领域常规的植物组织DNA的提取方。

20、法即可， 对此本发明没有特殊限定。 本发明在获得 BC1代单株的全基因组DNA后， 利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC1代植株的全基 因组DNA进行PCR扩增； 本发明中所述的抗根肿病分子标记KBrH129J18R的具体序列参见参 说 明 书 3/6 页 5 CN 106508669 B 5 考文献 大白菜抗根肿病基因位点CRa和CRb的分子标记鉴定 华北农学报， 2015， 30(2)： 87- 92。 本发明所述的KBrH129J18R为共显性分子标记， 扩增产物目标片段为254bp的抗病带和 194bp的感病带， 根据各单株电泳条带， 筛选具有245bp条带的单株。 由。

21、于F1代和各回交世代 均为抗病性杂合世代， 因此具有抗、 感两个条带的单株即为抗病单株。 0041 本发明在获得基因型为Rr的BC1代抗病单株后， 对获得的BC1代抗病单株和拟转育 亲本A同时进行培养， 并进行回交授粉， 此处所述的培养方法、 回交授粉的操作独立地选择 与上述技术方案F1代的培养方法及回交授粉操作相同的范围， 回交授粉后获得BC2代种子。 0042 本发明在获得BC2代种子后， 以BC2代种子的幼胚为处理对象， 重复所述步骤4) 步骤6)中的催芽、 春化、 播种、 筛选和回交， 得到BC3代种子， 以此类推， 重复4次得到BC6代种 子； 所述的BC6代种子， 从理论来说已经有。

22、99.72接近拟转育亲本A。 0043 本发明获得BC6代种子后， 播种所述BC6代种子获得BC6代植株， 将所述BC6代植株 自交得到BC6代自交后代， 利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC6代自交后代进行 抗性鉴定， 筛选获得根肿病抗性纯合的， 即根肿病抗性基因为RR的大白菜植株。 0044 本发明的方法从上一代的幼胚到下一代幼胚， 需要90100天， 每年可转育3代以 上， 根肿病抗性基因为RR的植株2年即可培育成功。 0045 下面结合实施例对本发明提供的抗根肿病大白菜的育种方法进行详细的说明， 但 是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。 0046 实施例1 004。

23、7 2014年4月中旬， 转育目标亲本Y1(根肿病抗性基因型rr)和转育源CRA-2(DH系， 根 肿病抗性基因型RR)杂交得到F1代种子。 0048 5月上旬摘取F1的种荚， 剥取幼胚于铺有湿润滤纸的培养皿中(见图1)， 24培养 箱中催芽， 发芽后的幼胚(见图2)于4冷藏培养箱中(SANYO MEDICALCOOL)弱光培养春化 (见图3)， 6月播种， 于人工气候箱中培养(见图4)， 培养温度24， 湿度69， 24小时光照， 7 月回交授粉获得BC1代种子， 8月BC1代种子剥胚、 25催芽6天。 0049 BC1代催芽后的幼胚经过5春化3周， 9月播种， 10月进行KBrH129J1。

24、8R分子标记鉴 定， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC1代抗病单株， 11月BC1代抗病单株与目标亲本Y1 回交， 获得BC2代种子， 12月对BC2代种子剥胚、 26催芽7天。 0050 BC2代催芽后的幼胚经过4春化4周， 2015年1 月播种(见图5) ， 2月进行 KBrH129J18R分子标记筛选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC2代抗病单株， 3月BC2代 抗病单株与目标亲本Y1回交(见图6)， 获得BC3代种子， 4月对BC3代种子剥胚、 25催芽6天。 0051 BC3代催芽后的幼胚5月4春化4周， 6月播种， 7月进行KBrH129J18R分子标记筛 选， 从中筛选。

25、出根肿病抗性基因为Rr的BC3代抗病单株， 8月BC3代抗病单株与目标亲本Y1回 交， 获得BC4代种子， 9月对BC4代种子剥胚、 26催芽7天。 0052 BC4代幼胚经过4春化3周， 9月底播种， 10月中下旬进行KBrH129J18R分子标记筛 选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC4代抗病单株， 11月中旬BC4代抗病单株与目标亲 本Y1回交， 获得BC5代种子， 12月中旬对BC5代种子剥胚、 25催芽6天。 0053 BC5代幼胚经过4春化3周， 2016年1月中旬播种， 2月中旬进行KBrH129J18R分子 标记筛选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC5代抗病单株， 。

26、3月上旬BC5代抗病单株与目 标亲本Y1回交， 获得BC6代种子， 4月初对BC6代种子进行剥胚， 25催芽6天。 说 明 书 4/6 页 6 CN 106508669 B 6 0054 BC6代幼胚经4春化3.5周， 5月上旬播种， 6月初进行KBrH129J18R分子标记筛选 抗病株， 6月下旬筛选到的抗病株自交授粉， 得到BC6代自交后代， 7月底至8月初收获自交后 代种子， 利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC6代自交后代进行抗性鉴定经抗根肿 病分子标记鉴定， 筛选出纯合抗病基因型(RR)单株， 经秋季田间性状鉴定， 获得CRY1， 根肿 病抗性基因为RR的大白菜植株。。

27、 0055 上述方案的全程培养时间是为95天。 0056 实施例2 0057 2014年4月中旬， 转育目标亲本Y1(根肿病抗性基因型rr)和转育源CRA-2(DH系， 根 肿病抗性基因型RR)杂交得到F1代种子。 0058 5月上旬摘取F1的种荚， 剥取幼胚于铺有湿润滤纸的培养皿中24培养箱中催芽， 发芽后的幼胚于4-5冷藏培养箱中(SANYO MEDICALCOOL)弱光培养春化， 6月播种， 于人工 气候箱中培养， 培养温度24， 湿度66， 24小时光照， 7月回交授粉获得BC1代种子， 8月BC1 代种子剥胚、 25催芽6天。 0059 BC1代催芽后的幼胚经过5春化3周， 9月播种。

28、， 10月进行KBrH129J18R分子标记鉴 定， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC1代抗病单株， 11月BC1代抗病单株与目标亲本Y1 回交， 获得BC2代种子， 12月对BC2代种子剥胚、 25催芽7天。 0060 BC2代催芽后的幼胚经过4春化4周， 2015年1月播种， 2月进行KBrH129J18R分子 标记筛选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC2代抗病单株， 3月BC2代抗病单株与目标亲 本Y1回交， 获得BC3代种子， 4月对BC3代种子剥胚、 25催芽7天。 0061 BC3代催芽后的幼胚5月4春化4周， 6月播种， 7月进行KBrH129J18R分子标记筛 选， 。

29、从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC3代抗病单株， 8月BC3代抗病单株与目标亲本Y1回 交， 获得BC4代种子， 9月对BC4代种子剥胚、 26催芽7天。 0062 BC4代幼胚经过4春化3周， 9月底播种， 10月中下旬进行KBrH129J18R分子标记筛 选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC4代抗病单株， 11月中旬BC4代抗病单株与目标亲 本Y1回交， 获得BC5代种子， 12月中旬对BC5代种子剥胚、 25催芽6天。 0063 BC5代幼胚经过4春化3周， 2016年1月中旬播种， 2月中旬进行KBrH129J18R分子 标记筛选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC5代抗病。

30、单株， 3月上旬BC5代抗病单株与目 标亲本Y1回交， 获得BC6代种子， 4月初对BC6代种子进行剥胚， 25催芽6天。 0064 BC6代幼胚经4春化3.5周， 5月上旬播种， 6月初进行KBrH129J18R分子标记筛选 抗病株， 6月下旬筛选到的抗病株自交授粉， 得到BC6代自交后代， 7月底至8月初收获自交后 代种子， 利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC6代自交后代进行抗性鉴定经抗根肿 病分子标记鉴定， 筛选出纯合抗病基因型(RR)单株， 经秋季田间性状鉴定， 获得CRY1， 根肿 病抗性基因为RR的大白菜植株。 0065 上述方案的全程培养时间是为90天。 006。

31、6 实施例3 0067 2014年4月中旬， 转育目标亲本Y1(根肿病抗性基因型rr)和转育源CRA-2(DH系， 根 肿病抗性基因型RR)杂交得到F1代种子。 0068 5月上旬摘取F1的种荚， 剥取幼胚于铺有湿润滤纸的培养皿中24培养箱中催芽， 发芽后的幼胚于5冷藏培养箱中(SANYO MEDICALCOOL)弱光培养春化， 6月播种， 于人工气 说 明 书 5/6 页 7 CN 106508669 B 7 候箱中培养， 培养温度24， 湿度68， 24小时光照， 7月回交授粉获得BC1代种子， 8月BC1代 种子剥胚、 25催芽6天。 0069 BC1代催芽后的幼胚经过5春化3周， 9月。

32、播种， 10月进行KBrH129J18R分子标记鉴 定， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC1代抗病单株， 11月BC1代抗病单株与目标亲本Y1 回交， 获得BC2代种子， 12月对BC2代种子剥胚、 26催芽6天。 0070 BC2代催芽后的幼胚经过4春化3.5周， 2015年1月播种， 2月进行KBrH129J18R分 子标记筛选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC2代抗病单株， 3月BC2代抗病单株与目标 亲本Y1回交， 获得BC3代种子， 4月对BC3代种子剥胚、 25催芽5天。 0071 BC3代催芽后的幼胚5月4春化4周， 6月播种， 7月进行KBrH129J18R分子标记筛。

33、 选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC3代抗病单株， 8月BC3代抗病单株与目标亲本Y1回 交， 获得BC4代种子， 9月对BC4代种子剥胚、 26催芽6天。 0072 BC4代幼胚经过4春化3周， 9月底播种， 10月中下旬进行KBrH129J18R分子标记筛 选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC4代抗病单株， 11月中旬BC4代抗病单株与目标亲 本Y1回交， 获得BC5代种子， 12月中旬对BC5代种子剥胚、 25催芽6天。 0073 BC5代幼胚经过4春化3周， 2016年1月中旬播种， 2月中旬进行KBrH129J18R分子 标记筛选， 从中筛选出根肿病抗性基因为Rr的BC。

34、5代抗病单株， 3月上旬BC5代抗病单株与目 标亲本Y1回交， 获得BC6代种子， 4月初对BC6代种子进行剥胚， 25催芽6天。 0074 BC6代幼胚经4春化3.5周， 5月上旬播种， 6月初进行KBrH129J18R分子标记筛选 抗病株， 6月下旬筛选到的抗病株自交授粉， 得到BC6代自交后代， 7月底至8月初收获自交后 代种子， 利用抗根肿病分子标记KBrH129J18R对所述BC6代自交后代进行抗性鉴定经抗根肿 病分子标记鉴定， 筛选出纯合抗病基因型(RR)单株， 经秋季田间性状鉴定， 获得CRY1， 根肿 病抗性基因为RR的大白菜植株。 0075 上述方案的全程培养时间是为97天。。

35、 0076 由以上实施例可知， 本发明通过对未成熟的幼胚培养， 从幼胚到下一代幼胚， 需要 90100天， 每年可转育3代以上， 根肿病抗性植株2年即可转育成功， 大大地缩短了育种周 期； 另外本发明采用分子标记方法筛选抗病单株， 可快速筛选抗病基因型， 避免人工接种鉴 定造成的病菌传播。 0077 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。 说 明 书 6/6 页 8 CN 106508669 B 8 图1 图2 图3 说 明 书 附 图 1/2 页 9 CN 106508669 B 9 图4 图5 图6 说 明 书 附 图 2/2 页 10 CN 106508669 B 10 。